Роман Анти-стареене Бензохинон деривати от Оношма Bracteatum стена част 2

Моля, свържете се сoscar.xiao@wecistanche.comза повече информация

2.3. Дейност против стареене в K6001 щам на дрожди

Анти-стареене дейности на изолирани бензохинони (1-5) са оценени чрез използване на K6001 дрожди репликативна система lifespan bioassay. Ресвератрол (Res), добре познат анти-стареене вещество, е бил използван като положителен контрол за проверка на надеждността на системата за биоанализ. Най-ефективната концентрация на Res е 10 μM в дрождите репликативна система lifespan bioassay, както е съобщено в предишните ни публикации 【4-6】.цистанш билкаКакто е показано на фигура 4, аломикрофилон(1)при 3 μM, ehretiquinone (2) и ехретхинон C(4) при 1 и 3 μM, и ehretiquinone D (5) при 1 μM, проявяват значително увеличение на репликативния живот на щама дрожди K6001, докато ехретихинон B (3) е неактивен. Този резултат посочи потенциала против стареене на бензохиноните (1, 2, 4, и 5), изолиран от O. bracteatum.

3. Дискусия

В контекста на глобалното стареене, изследванията и развитието на лекарства против стареене за подобряване на качеството на живот на възрастните хора и намаляване на разпространението на заболявания, свързани с възрастта, са от голямо значение.растеж на пениса на cistancheТова проучване отчита изолацията, структура елюцитация, биологична активност, и кратко ПРОУЧВАНЕ SAR на анти-стареене бензохинон производни от O.bracteatum1.

Моля, кликнете тук, за да научите повече

В това проучване, две известни(1 и 2) и три роман (3-5) бензохинонови производни са били изолирани от етилацетат слой проби от O.bracteatum под ръководството на K6001 дрожди репликативен живот живот биоанализ. Структурите на роман бензохинони (3-5)бяха елюцирани чрез обширен спектроскопски анализ. Известните бензохинони, аломикрофилон(1), и ehretiquinone(2) са пречистени и идентифицирани чрез сравняване на спектроскопски данни с тези, докладвани в литературата [17-19]. Преди това и двете съединения са докладвани да имат анти-алергична и противовъзпалителна активност, съответно[17,19]. До най-доброто от нашите знания, не е докладвано проучване, свързано с против стареенето, за тези съединения. Тези изолирани съединения споделиха един и същ бензохинонов скелет и различията им бяха в модификациите на Позиции С-11 и С-11.

Cistanche може да анти-стареене

Оценката на биологичните дейности е извършена за изследване на отношенията структура-активност.cistanche салса обезщетенияРезултатите във фигура 4 показват, че изолираният аломикрофилон (1), ехретихинон(2), и ехретхинони C-D (4-5) значително удължават репликативния живот на дрожди. Въпреки това, ehretiquinone B (3)който притежаваше един и същ бензохинон скелет но различните модификации са неактивни. Според проучването на връзката структура-активност (SAR) в рамките на тези изолирани съединения Сметната палата заключи, че наличието на метилови и екзометиленови групи при C-9'е важно за активността против стареене, както при ehretiquinone (2) и ehretiquinone C(4). Модификацията като хидроксилиране на групата С-11/метил, както при ехретихинон В (3) доведе до загуба на активност. Освен това сравнението на ехретихинон (2) и ехретихинон C(4)с по-добра активност от тези на аломикрофилон (1) и ехретихинон D (5)показа, че наличието на групата на екзометилен в C-9' играе важна роля в анти-стареене дейност за тези молекули. Ehretiquinone C(4) проявява по-добра анти-стареене дейност от тази на ресвератрол защото средната стойност на продължителността на живота на 4 при 1 uMis е сравнима с ресвератрол в 10 uM което показа същата стойност.цистанш тубулоза доза redditСледователно, ehretiquinone C(4)може да се счита за обещаващо оловно съединение, и му анти-стареене механизъм на действие трябва да бъдат допълнително интензивно проучени. В допълнение, тези резултати също предоставят важна структурна информация за проектиране и синтезиране на роман анти-стареене лекарства. Това проучване ще допринесе за профилактиката и лечението на заболявания, свързани с възрастта. Резултатите също така предполагат, че O.bracteatum обогатен със съставки против стареене може да се използва като лекарство или като хранителна добавка.

4. Материали и методи

4.1.Общи положения

За измервания на оптичното завъртане е използван цифров поляриметър JASCO P-1030. Използвана е подготвителна високоефективна течна хроматография (HPLC) със система, оборудвана с помпи ELITE P-230 и UV детектор. Масови спектри с висока разделителна способност(HR-ESI-TOF-MS)са получени с agilent Technologies 6224A точна маса TOF LC/MS система. NMR спектри са наблюдавани със спектрометър Bruker AVII-500 и NMR химически смени inδ(ppm)са били посочени към върховете на разтворителите от BC 77.0 и6H7.26 за CDCl. Колона хроматография е извършена чрез използване на силикагел (200-300 мрежа, Институт за изследвания на химическата промишленост Yantai, Yantai, Китай) или обратна фаза C18 (Октадецилсилил, ODS) силикагел(Cosmosil 75C18-OPN, Nacalai Tesque, Киото, Япония).

4.2. Растителен материал

Растителният материал е закупен от Mansehra, Khyber Pakhtunkhwa, Пакистан, и идентифициран като Onosma bracteatum стена от д-р Zafar Ulah Zafar, доцент, Институт по чиста и приложна биология, Бахауддин Захария университет, Мултан, Пакистан. Образецът на ваучера (20170220) на завода е депозиран в Института по Материя Медика, Университет Джъдзян.

4.3. Екстракция1 и Изолация1

Изсушен растителен материал(1,5 kg)беше смлян на прах и извлечен с метанол (CH3OH) в продължение на 3 дни заедно с непрекъснато разклащане при стайна температура. Полученият суров екстракт (120 g)е бил преграден между етилацетат (EtOAc) и вода(H,O). Активната проба от етилацетатния слой (30 g)е хроматографиран върху отворена колона от силикагел и елуиран с n-хексан/CH,Cl(100:0,80:20, 50:50,0:100) и CH,Cl/CH3OH (98:2,95:5,90:10 и 0:100). Получени са шест фракции. Fraction4 (8g), която е елуирана с CH,Cl,/CH3OH (95:5, 90:10) е допълнително обработена от ODSopen колона. CH3OH/H,O(40:60,50:50,55:45,60:40,70:30,90:10 и 100:0)е използван като разтворител. От седемте фракции (Fr.1-Fr.7), получени, Fr.2-Fr.4, бяха допълнително разделени, както следва:

Fr.4 (500 mg) е разделен със силикагел отворена колона и елюиран с CH2Cl2/CH3OH (100:0, 99:1,98:2,97:3,95:5,90:10 и0:100). Получени са девет проби (Fr.4-1-Fr.4-9). Проба Fr.4-3 е допълнително пречистена от HPLC【C30-UG-5(φ10× 250 mm, Nomura Chemical), мобилна фаза∶ ацетонитрил (CH3CN)/H2O(40:60), дебит:3 mL/min, и детектор:210nm] и добив съединение (1) (65 mg, tR =21.2 мин).

Fr.3(113 mg) е разделена чрез използване на отворена колона ODS и елюирана с CH;OH/H2O(40:60, 45:55,50,55:45,60:40,80:20 и 100:0). Получени са десет фракции(Fr.3-1-Fr.3-10), а Fr.3-7 е допълнително пречистен от HPLC【C30-UG-5(φ10×250 mm, Nomura Chemical), мобилна фаза∶метанол (CH3OH)/HO(68:32), дебит: 3 mL/min, и детектор:210nm] и добивно съединение (2) (20 mg, IR =20,3 мин).

Fr.2(450 mg) беше подложен на отворена колона силикагел и елюиран с CH2Cl2:CH3OH (100:0, 99:1,98:2,97:3,95:5,90:10,0:100). Получени са девет фракции (Fr.2-1-Fr.2-9)и Fr.2-4(20 mg)е подложен на ODS отворена колонна хроматография с CH3OH/H2O(30:70, 32:68,35:65,40:60 и 100∶O),а петата фракция (6,5 mg)е пречистена от HPLC 【C30-UG-5(φ10×250 mm, Nomura Chemical), мобилна фаза:ацетонитрил(CH3CN)/H,O(35:65), дебит: 3 mL/min, и детектор:210 nm] за добив съединение (3)(3.5 мг, t = 31,0). Fr.2-5(70 mg) е разделен от ODS отворена колона с помощта на CH3OH/H2O(25:75,27:73,30:70, 32:68,34:66,36:64,40:60 и 100:0) и седмата фракция (11 mg)е пречистена от HPLC 【C30-UG-5(φ10×250 mm, Nomura Chemical), мобилна фаза∶ацетонитрил (CH,CN)/HO(32:68), дебит:3 mL/min, и детектор: 210 nm] за добив съединение (4)(2.1 мг, tg=43.3). Fr.2-8(75 mg)е разделен от ODS отворена колона с помощта на CH3OH/H2O(20:80, 22:78.24:76.25:75.26:74,30:Z0.35:65.40:60 и 100:0) и седмата фракция(10 mg) е пречистена от HPLC 【C30-UG-5 (φ10×250 мм, Nomura Chemical),подвижна фаза∶ ацетонитрил(CH3CN)/H2O (30:70),дебит:3 mL/min,и детектор: 210 nml да вилде съединение (5)(4.3 мг, tn=22.3). Аломикрофилон (1). Жълт прах; [α]6+0,02 (c 0,57, CHCl3); ЕСИ-ТОФ-МС с висока разделителна способност m/z 389.1359, изчислена за C2H22O5Na (M+ Na)+ 389.1359;" H NMR (500 MHz, CDCl3)∶bμ=6,83 (1H,d.I=10,5 Hz,H-5^),6,61(1H,d,J=8,6 Hz,H-6),6,56(1H,d, J=2,8Hz,H-3),6,51(1H, дд, J=2,8, 8,6 Hz,H-5),6,51(1H,d, J=10,5 Hz, H-6'),5,76(1H, d,J=15,9 Hz,H-8'),5,67 (1H, d, J=15,9 Hz, H-7),5,65(1H,d,J=7,1Hz, H-8),3,77(1H,d,J=7,1Hz,H-7),2,73(1H,d, J=19,2Hz,Hb-10),2,50 (1H,d,J=19,2 Hz,Ha-10),1,69 (3H,s, H-11),1,22(6H,s, H-10'& H-11');13CNMR(125 MHz,CDCl3):6c=195.8 (C-1'),193.1(C-4'),150.0(C-4),145.0(C-1),143.3(C-8'),145.0(C-1),143.3(C-8'),145.0 139.4(C-5'),138.6(C-6'),131.8(C-9), 127.7(C-2), 122.5(C-8),122.0(C-7"), 117.6(C-6),114.9(C-5),114.4(C-3),80.7(C-3'),71.0(C-9),54.9 (C -2'),39.1(C-7), 36.2(C-10),29.8(C-10'),29.8(C-11'),22.6(C-11). Структурата е идентифицирана чрез сравнение на МС, "H NMR и 13C NMR спектри, както и специфична ротация с литератури [17,18]. Ехретхинон (2). Червен прах; [α]16+1.01(c 0.12, CH3OH); с висока разделителна способност ESI-TOF-MS m/z 371.1254, изчислена за C2. H20OANa (M+ Na)+ 371,1252;lH NMR(500MHz, CDCl3)∶δμ=6,83 (1H,d,J=10,5Hz,H-5'),6,62(1H,d, J=8,6Hz,H-6),6,58(1H,d,J=2,2 Hz,H-3),6,53(1H,m,H-5), 6,52(1H,d, J=10,5 Hz,H-6'),6,25(1H,d,J=16,0Hz,H-8),5,65(1H,d,J=6,2Hz,H-8),5,50(1H,d, J=16,0Hz,H-7),5,04(1H, s,Hb-10),4,97(1H,s,Ha-10'),3,83(1H,d, J=6,2Hz,H-7),2,78(1H,d, I=19,1Hz,Hb-10),2,52(1H,d,J=19,1 Hz,Ha-10),1,73(3H,s,H -11'),1,70(3H,s,H-11);13CNMR (125MHz,CDCl):6c=195,4(C-1),193.2(C-4),150.0(C-4),145.1(C-1),140.8(C-9),139.2(() C-5),138.8 (C-6'),137.5(C-8'),131.9(C-9),127.7(C-2), 124.1(C-7'),122.7(C-8),119.3(C-10'),117.6(C-6),114.9 (C-5),114.4(C-1 3),80,7(C-3'),55,3(C-2'),39,4(C-7),36,3(C-10),22,7(C-11),18,3(C-11). Структурата е идентифицирана чрез сравнение на MS,'H NMR и 13C NMR спектри, както и специфична ротация с литература [19].

Ехретхинон B (3). Червен прах; [α|6+0,99(c 0,31, CH3OH); ЕСИ-ТОФ-МС с висока резолюция m/z 387.1208, изчислена за C22H20OsNa (M+ Na)+ 387.1203; Данните за 1H NMR и 13C NMR са описани съответно в таблици 1 и 2.

Ехретихинон C(4). Червен прах; [α] 16+0,37 (c 0,12, CH,OH); ЕСИ-ТОФ-МС с висока резолюция m/z 387.1174, изчислена за C2H20O; Na (M+ Na)+ 387.1174; Данните за 1H NMR и 13C NMR са описани съответно в таблици 1 и 2.

Ехретихинон D (5). Жълт прах; [αl5+0,51(c 0,41, CHCl3); еЗИ-TOF-MS с висока разделителна способност m/z 405.1300,изчислени за C2,H,O,Na (M+Na)+405.1300;Данните за HNMR и 13CNMR са описани съответно в таблици 1 и 2.

4.4. Продължителност на живота AsSay/

Методът на биоанализ, използван за изследването против стареене, е описан преди това [4]. K6001 щам на дрожди е бил култивиран на YPGalactose или YPGlucose среда. YPGalactose среда е приготвена с 3% галактоза, 2% хиполипептон и 1% екстракт от дрожди, докато YPGlucose среда, съдържа 2%глюкоза вместо галактоза.цистанш แอ ม เว ย์За приготвяне на агар плочи,2% агар е добавен към средата. За да се оценят пробите чрез биоасея, Щамът на дрожди K6001 е инокулиран и инкубиран за 24 ч в средата на маята пептон галактоза заедно с разклащане. След24 ч средата, съдържаща щама на дрожди, е центрофугирала. Получените дрождови пелети са измити с фосфатен буферен разтвор (PBS) три пъти и се разреждат. След разреждането клетките са изчислени с хемоцитометър, а около 4000 клетки са инокулирани върху плочи от агар, съдържащи проби с различни концентрации. След това плочите са поставени в инкубатор при 28°C в продължение на 2 дни. Дрожди клетки в агар плоча са наблюдавани под микроскоп след 48 ч. Общо 40 микроколонии от всяка чиния са избрани произволно, а броят на дъщерите клетки е преброен и анализиран.

4.5. Статистически анализ

Значителните разлики сред групите бяха определени от еднопосочна ANOVA с множествения тест за сравнение на Dunnett. Използван е софтуер GraphPad Prism 5.0. Ap стойност на<0.05 was="" considered="" statistically="">

5. Заключения

Три нови и две известни бензохинони са изолирани и характеризирани от O. bracteatum под ръководството на K6001 дрожди репликативен живот assay. Структурата на новите бензохинони (3-5) е елюцирана чрез спектроскопски анализ, а известните (1-2) са идентифицирани чрез сравняване на спектроскопските данни с тези в литературата. Всички изолирани бензохинони са оценени за анти-стареене дейност от дрожди репликативен живот assay и 1,2,4 и 5 проявява значителна анти-стареене дейност.колко цистанш да се взематEhretiquinone C(4) показа най-обещаващата активност против стареене и по този начин може да се счита за потенциално оловно съединение. Неговият механизъм против стареене трябва да бъде допълнително проучен.

Допълнителни материали:1D и 2D NMR спектрите се предлагат онлайн на http://www.mdpi.com/1420-3049/24/7/1428/s1.

Автор Принос:U.F. извърши химическото изследване и изготви ръкописа. YP извърши репликативните животоспасителни асайта. D.D.участва в идентифицирането на съединения. J.Q.проектира и наблюдава това проучване и ревизира ръкописа.

Финансиране:Тази работа беше финансово подкрепена от Националната ключова R&D програма на Китай [No.2017YFE0117200]и NSFC [Грант No.21661140001,21877098, и 21572204].

Благодарности:Благодарни сме на Майкъл Бридженбах от Залцбургския университет, Австрия за подаръка на щама S. cerevisiae дрожди K6001. U.F. също така признава подкрепата за докторско обучение от Комисията за висше образование Пакистан.

Конфликти на интереси:Авторите не обявяват конфликт на интереси.

Тази статия е извлечена от Молекули 2019, 24, 1428; doi:10.3390/молекули24071428 www.mdpi.com/journal/molecules