Част 1: Актеозидът противодейства на индуцираните от интерлевкин-1 -катаболни процеси чрез модулиране на митоген-активирани протеин кинази и NFκB клетъчния сигнален път

Актеозидът противодейства на предизвиканите от интерлевкин-1 -катаболни процеси чрез модулиране на митоген-активираните протеин кинази и NFκB клетъчния сигнален път

HyangI Lim, 1 Do Kyung Kim, 1 Tae-Hyeon Kim, 1 Kyeong-Rok Kang, 1 Jeong-Yeon Seo, 1,2 Seung Sik Cho, 3 Younghee Yun, 4,5 Ye-yong Choi, 4,5 Jungtae Leem ,4,5 Hyoun-Woo Kim ,6 Geon-Ung Jo ,6

Chan-Jin Oh, 6 Deuk-Sil Oh, 6 Hong-Sung Chun, 2 и Jae-Sung Kim 1

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com

1 Институт по дентална наука, Университет Чосун, Куанджу 61452, Република Корея

2 Департамента по биомедицински науки, Chosun University, Gwangju 61452, Република Корея

3 Департамент по биомедицина, здравеопазване и конвергентни науки за живота, BK21 Four, Колеж по фармация, Национален университет Мокпо,

Jeonnam 58554, Република Корея

4 Медицински институт Chung-Yeon, Gwangju 61949, Република Корея

5 Институт за изследване и развитие, CY Pharma Co., Сеул 06224, Република Корея

6Jeollanamdo Forest Resources Institute, Naju, Jeollanamdo, 58213, Република Корея

Кореспонденцията трябва да бъде адресирана до Jae-Sung Kim; js_kim@chosun.ac.kr

Получено на 2 юли 2020 г.; Ревизиран на 15 февруари 2021 г.; Приет на 6 март 2021 г.; Публикувано на 25 март 2021 г

Академичен редактор: Joël R. Drevet

Авторско право © 2021 HyangI Lim и др. Това е статия с отворен достъп, разпространявана под CreativeCommonsAttributionLicense,

което позволява неограничено използване, разпространение,и възпроизвеждане във всеки носител, при условие че оригиналното произведение е правилно цитирано.

цистанче може да лекува бъбречно заболяване подобрява бъбречната функция

Остеоартритът (ОА) е най-честата дегенеративна ставна болест с хронична ставна болка, причинена от прогресивна дегенерация на ставния хрущял в синовиалните стави.Актеозид, кафеоилфенилетаноиден гликозид, има различни биологични активности като антимикробно, противовъзпалително, противораково, антиоксидантно, цитопротективно и невропротективно действие. Освен това, перорално приложение наактеозидпри високи дози не предизвиква генотоксичност. Следователно, целта на настоящото изследване е да се проверят антикатаболните ефекти наактеозидсрещу остеоартрит и неговия антикатаболен сигнален път.Актеозидне намалява жизнеспособността на миши фибробластни L929 клетки, използвани като нормални клетки и първични хондроцити на плъх.Актеозидпротиводейства на индуцираната от IL-1 -загуба на протеогликан в хондроцитите и ставния хрущял чрез потискане на експресията и активирането на ензими, разграждащи хрущяла, като матриксна металопротеиназа- (MMP-) 13, MMP-1 и MMP{{ 6}}. Освен това,актеозидпотискат експресията на възпалителни медиатори като индуцируема азотен оксид синтаза, циклооксигеназа -2, азотен оксид и простагландин Е2 в първичните хондроцити на плъхове, третирани с IL-1. Впоследствие експресията на провъзпалителни цитокини е намалена сактеозидв първичните хондроцити на плъх, третирани с IL-1. Нещо повече, актеозидът потиска не само фосфорилирането на митоген-активирани протеин кинази в първични хондроцити на плъх, третирани с IL-1, но също и транслокацията на NFκB от цитозола към ядрото чрез потискане на неговото фосфорилиране. Пероралното приложение на 5 и 10 mg/kg актеозид отслабва прогресивната дегенерация на ставния хрущял в миши модел с остеоартрит, генериран от дестабилизиране на медиалния менискус. Нашите открития показват, че актеозидът е обещаващ потенциален антикатаболен агент или добавка за намаляване или предотвратяване на прогресивна дегенерация на ставния хрущял.

Моля, щракнете тук за част 2

1. Въведение

Остеоартритът (ОА) е най-честата дегенеративна ставна болест с хронична ставна болка, причинена от прогресивна дегенерация на ставния хрущял в синовиалните стави [1].

Поради увеличаването на продължителността на живота, разпространението на ОА със загуба на подвижност и хронична болка в ставите, причинена от прогресивна дегенерация на ставния хрущял в синовиалните стави, се оценява съответно на 18 процента и 9,6 процента при жени след менопауза и при мъже [2]. ]. Въпреки че разпространението на ОА в световен мащаб нараства всяка година, патофизиологичната етиология на ОА все още не е известна. Може да бъде причинено от много сложни и многофакторни рискови фактори като стареене, пол, генетично наследство, травматично увреждане на ставите и тежко механично натоварване на ставите. Освен това невропатологичните връзки между прогресивната дегенерация на ставния хрущял и развитието на хронична болка в ставите са неизвестни [3]. Следователно, целта на клиничното лечение на пациенти с ОА е поддържането на подвижността на тялото и механичната функция на ставите чрез облекчаване на хроничната болка в ставите, като се използват фармакологични и нефармакологични подходи и хирургия за смяна на стави. Нараства търсенето на разработване на ефективна интервенция или добавки, с дългосрочна биологична безопасност, за предотвратяване или смекчаване на ОА, за да се поддържа качеството на живот чрез поддържане на функцията на механичните стави при по-възрастното население.

Както е показано на фигура 1,актеозид(CAS № 61276-17-3; C29H36O15) е кафеоилфенилетаноиден гликозид, изолиран от няколко билкови растения като Verbascum chlorides [4], Buddleja globosa [5] и Plantago australis [6]. Актеоидът има различни биологични активности като антимикробно [5], противовъзпалително [7], противораково [8], антиоксидантно [9], цитопротективно [9] и невропротективно действие [10]. Освен това, перорално приложение наактеозидпри висока доза не предизвиква генотоксичност[11].

Следователно, ние предположихме, че актеозидът с противовъзпалителна биологична безопасност има антикатаболни ефекти, свързани със защитата на ставния хрущял срещу прогресивна дегенерация на ставния хрущял чрез потискане на катаболни фактори като провъзпалителни цитокини, възпалителни медиатори и ензими, разграждащи хрущяла в синовиалните стави . Следователно целта на това проучване беше да се проучиактеозид-индуцирани антикатаболни ефекти и неговия клетъчен сигнален път както in vitro, използвайки първични хондроцити, изолирани от ставния хрущял на колянна става на плъх, така и in vivo, използвайки животински модел на ОА, генериран чрез хирургическа дестабилизация на медиалния менискус в колянната става на мишки.

актеозидвцистанчемогаподобрявамимунитет

2. Методи

2.1. Клетъчна култура.

Първичните плъши хондроцити бяха изолирани от ставния хрущял на коленни стави на плъх (5-дневна възраст; Sprague–Dawley) в съответствие с протокола (CIA-CUC2019-A0027), одобрен от Institutional Комитет за грижа и използване на животните към университета Chosun, Gwangju, Република Корея. Изолирани първични хондроцити на плъх се поддържат в модифицирана среда на Dulbecco Eagle/хранителна смес F-12 (DMEM/F12) (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA), допълнена с 10 процента фетален говежди серум (FBS) (Life Technologies , Гранд Айлънд, Ню Йорк, САЩ), антибиотици (50U/mL пеницилин и 50ug/mL стрептомицин) и 50ug/mL аскорбинова киселина. Клетъчната линия на нормалните миши фибробласти L-929 е закупена от American Type Culture Collection (ATCC). Съгласно инструкциите, предоставени от ATCC, L-929 клетките се култивират в минималната основна среда на Eagle, съдържаща 10 процента FBS, и се отглеждат в овлажнен инкубатор при 37 градуса с 5 процента CO2.

2.2. Анализ на клетъчната жизнеспособност.

Анализът на диметил тиазолил дифенил тетразолиева сол (МТТ) беше извършен за оценка на жизнеспособността на миши фибробластни клетъчни клетки L929, използвани като нормални клетки и първични хондроцити на плъх, третирани с актеозид. Накратко, L929 клетки и първични хондроцити на плъх се култивират при клетъчна плътност от 8 × 105 клетки/mL в култивационни плаки за 24 часа и след това се третират с 2,5, 5, 10, 25, 50 и 100 μMактеозидза 24ч. След третиране с МТТ разтвор, както клетките L929, така и хондроцитите бяха допълнително култивирани в продължение на 4 часа. След инкубиране, образуваните МТТ кристали се суспендират напълно в диметил сулфоксид и се измерва абсорбцията при 570 nm с помощта на спектрометър (Епох спектрофотометър с микроплака, BioTek®, Winooski, VT, USA), за да се оцени клетъчната жизнеспособност.

2.3. Анализ на живи/мъртви клетки.

Клетъчното оцеляване се извършва с помощта на комплект за анализ Cell Live/Dead (Molecular Probes, Carlsbad, CA, USA), който се състои от зелен калцеин-AM за маркиране на живи клетки (със зелена флуоресценция) и етидиев хомодимер-1 за маркиране на мъртви клетки (с червена флуоресценция). Накратко, клетките L929 и първичните хондроцити на плъх се култивират при клетъчна плътност 8 × 105 клетки/mL върху предметни стъкла (Nunc® Lab-Tek® Chamber Slide™ система; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) в продължение на 24 часа и след това се третират с 50 и 100 μM актеозид за 24 часа. След култивиране беше извършен анализ за клетъчно оцеляване съгласно инструкциите на производителя. След това оцветените клетки се изобразяват с помощта на флуоресцентен микроскоп (Eclipse TE200; Nikon Instruments, Melville, NY).

2.4. Анализ на диметилметиленово синьо (DMMB).

Беше извършен DMMB анализ за оценка на промяната на съдържанието на протеогликан в първични хондроцити на плъх, третирани с актеозид в продължение на 21 дни в присъствието или отсъствието на IL-1. За да се запазят характеристиките на първичните хондроцити на плъх в продължение на 21 дни, първичните хондроцити на плъх (2 × 106 клетки) се суспендират в 1 mL 1,2 процента алгинат и след това се капсулират чрез накапване на клетъчната/алгинатната суспензия в разтвор от 105 mM CaCl2. Първичните хондроцити на плъх, капсулирани в алгинат, се култивират в продължение на 24 часа в DMEM/F12 (съдържащ 10 процента FBS, 50U/mL пеницилин, 50ug/mL стрептомицин и 50ug/mL аскорбинова киселина) и след това се адаптират за 24 часа в DMEM/F12, съдържащ 1 процент мини-инсулин-трансферин-селен (mini-ITS) и 50ug/mL аскорбинова киселина. Впоследствие хондроцитите бяха третирани с 50 или 100 μMактеозидв присъствието или отсъствието на 1 ng/mL IL-1 за 21 дни. На 21-ия ден първичните хондроцити на плъх бяха събрани за оценка на съдържанието на протеогликан с помощта на DMMB анализ, както е описано по-рано [12]. В допълнение, за количествено определяне на съдържанието на протеогликан на клетка и оценка на пролиферацията на първични хондроцити на плъх, броят на клетките се измерва чрез ДНК анализ с помощта на PicoGreen (Molecular Probes, Carlsbad, СА), съгласно инструкциите на производителя. наличие или отсъствие на 10 ng/mL IL-1 за 7 дни. В края на периода на култивиране, пробите се събират и фиксират в 4 процента параформалдехид за 72 часа за хистологичен анализ.

2.6. Хистологичен анализ.

Извършен е хистологичен анализ с използване на сафранин-О и бързо зелено оцветяване, за да се потвърди загубата на протеогликан в ставния хрущял, третиран със 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 7 дни. Накратко, фиксирани проби от ставен хрущял бяха декалцифицирани в етилендиаминтетраоцетна киселина и след това поставени в парафин. След това подготвените парафинови блокове, съдържащи ставен хрущял, бяха серийно нарязани на 5 μm дебелина и поставени върху предметни стъкла. Впоследствие са извършени Safranin-O и бързо зелено оцветяване, за да се оцени загубата на протеогликан в основното вещество на ставния хрущял. Освен това се извършва оцветяване с хематоксилин и еозин, за да се наблюдава общата морфология на ставния хрущял.

2.7. Western blotting.

Беше извършен Western blotting за изследване на експресията на катаболни фактори, включително MMP-13, MMP-1, MMP-3, индуцируема азотен оксид синтаза (iNOS) и циклооксигеназа-2 (COX -2) и промяната на клетъчни сигнални молекули като митоген-активирани протеин кинази и ядрен фактор капа B (NFκB). Накратко, първичните хондроцити на плъхове бяха третирани с 50 или 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това първичните хондроцити на плъх се събират чрез центрофугиране и се лизират с помощта на лизисен буфер (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) съгласно инструкциите на производителя. В допълнение, за да се провери ядрената транслокация на NFκB, първичните хондроцити на плъх се третират с 50 или 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това цитозолните и ядрените фракции се екстрахират с помощта на реагенти за ядрена и цитоплазмена екстракция NE-PER™ (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) съгласно инструкциите на производителя. Концентрацията на общия протеин, извлечен от първични хондроцити на плъх, се определя с помощта на комплект за анализ на протеин на бицинхонинова киселина (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) съгласно инструкциите на производителя. В допълнение, кондиционираната среда беше събрана, за да се открият нивата на ензими, разграждащи хрущяла, секретирани от хондроцитите. Равни количества протеин и кондиционирана среда се подлагат на електрофореза върху електрофореза с натриев додецилсулфат-полиакриламиден гел (SDS-PAGE) и след това се прехвърлят върху нитроцелулозни мембрани. След това беше извършено уестърн блотинг с използване на насочени първични антитела срещу MMP-13, MMP-1, MMP-3, iNOS, COX-2, фосфо-ERK1/2, общо -ERK1/2, фосфо-p38, общ p38, фосфо-JNK, общ JNK, фосфо-NFkB, общ NFkB, -актин и ламин В. Имунореактивните ленти се визуализират с помощта на подобрена хемилуминесцентна система (Thermo Scientific, Rockford , IL, САЩ) съгласно инструкциите на производителя и след това изобразени от устройство Microchemi (DNR Bioimaging Systems, Йерусалим, Израел).

2.8. Количествена полимеразна верижна реакция (qPCR) и количествена PCR в реално време (qRT-PCR).

Първичните хондроцити на плъх се третират с 50 или 100 μMактеозидв присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това общата РНК се изолира от първичните хондроцити на плъх, като се използва TRIzol реагент (Invitrogen, Carlsbad, СА, САЩ) съгласно инструкциите на производителя. Общата концентрация на РНК се измерва с помощта на NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). За да се синтезира сДНК, 1 ug РНК се транскрибира обратно, като се използва ThermoScript система за обратна транскрипция-PCR (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, САЩ) съгласно инструкциите на производителя. qPCR на cDNA се извършва с помощта на 2 × TOPsimple™ DyeMIX-Taq (Enzynomics, Сеул, Република Корея) и специфични праймери на TaKaRa PCR Thermal Cycler Device (TaKaRa Bio Inc., Shiga, Japan). След това PCR продуктите се подлагат на електрофореза върху агарозен гел, за да се определят нивата на експресия на целевите гени. Глицералдехид 3-фосфат дехидрогеназа (GAPDH) се използва като ендогенна контрола. В допълнение, за qRT-PCR, cDNA беше амплифицирана с помощта на Eco™ Real-Time PCR система (illumine Inc., Сан Диего, Калифорния, САЩ). -Актинът беше използван като ендогенна контрола. Последователностите на праймерите, използвани в qPCR и qRT-PCR, са обобщени съответно в таблици 1 и 2.

2.9. Желатинова зимография.

Беше извършена желатинова зимография, за да се оцени активирането на ММР в първични хондроцити на плъх. Накратко, първичните хондроцити на плъх бяха третирани с 50 или 100μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10ng/mL IL-1 за 24 часа. След това равен обем кондиционирана среда се подлага на електрофореза върху 10 процента полиакриламиден гел, съполимеризиран с 0,2 процента (1 mg/mL) желатин от свинска кожа. След електрофореза гелът се инкубира в буфер за ренатуриране на зимограма (50 mM Tris-HCl (рН 7,6), 10 mM CaCl2, 50 mM NaCl и 0,05 процента Brij-35) при 37 градуса за 72 часа. След ренатурирането на MMPs, гелът се оцветява с 0,1 процента Coomassie Brilliant Blue R250. Желатинолитичните ленти се разкриват като ясни ленти на фон, равномерно оцветен в светло синьо и след това се изобразяват с помощта на цифрова камера.

2.10. Измерване на азотен оксид (NO).

Първичните хондроцити на плъх се третират с 50 или 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това 50 μL от кондиционираната среда реагира с по 50 μL сулфаниламид и N-1-нафтил етилендиамин дихидрохлорид. След това се измерва абсорбцията при 540 nm дължина на вълната с помощта на спектрофотометър (Epoch Spectrophotometer, BioTek, Winooski, VT, USA).

2.11. Анализ на простагландин Е2 (PGE2).

Първичните хондроцити на плъх се третират с 50 или 100 μMактеозидв присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това концентрацията на PGE2 беше измерена с помощта на комплект за анализ на параметрите на PGE2 (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA) съгласно инструкциите на производителя.

2.12. Цитокинов масив.

Първичните хондроцити на плъх се третират с 50 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това общите протеини бяха извлечени и количествено определени, както е описано по-горе [13]. След това беше извършен цитокинов масив, за да се изследва промяната в производството на цитокини, съгласно инструкциите на производителя (RayBiotech, Inc., Norcross, GA, USA).

2.13. Тест за ядрена транслокация.

Първичните хондроцити на плъх се третират с 50 и 100 ug/mLактеозидв присъствието на 10ng/mL IL-1. След 30 минути първичните хондроцити на плъх се фиксират с 1% параформалдехид, пермеабилизират се в 0,2% Triton X-100 и обилно се промиват с фосфатно-буфериран физиологичен разтвор. Неспецифичните сигнали бяха блокирани с нормален кози серум. След множество промивания хондроцитите се инкубират със заешки анти-NFkB антитела, последвано от инкубиране с FITC-конюгиран кози анти-заешки IgG (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) за една нощ при 4 градуса. След това оцветените клетки бяха изобразени с помощта на лазерна конфокална сканираща микроскопска система (Leica Microsystems, Wetzlar, Германия) в клона Gwangju на Корейския фундаментален научен институт (Gwangju, Република Корея).

2.14. Поколение на животни с остеоартрит.

За генериране на животни с остеоартрит, медиалният менискус (DMM) беше хирургично дестабилизиран в коленните стави на BALB/c мишки (средно телесно тегло 19:3±0:5g) в съответствие с насоките на IACUC (CIACUC{{4} }A0029). Индуцираните с ОА животни бяха третирани орално с 5 и 10 mg/kg актеозид, разтворен в 5 процента етанол (експериментална група; n =5) или носител (5 процента етанол) (DMM група; n =5) на всеки друг ден в продължение на 8 седмици. В края на периода на култивиране, коленните стави бяха дисектирани и фиксирани с помощта на 5 процента параформалдехид в продължение на 7 дни за извършване на хистологични оценки. След сафранин-О и бързо зелено оцветяване изобразените тъкани на ставния хрущял бяха изследвани в съответствие със степента на Mankin [14, 15].

2.15. Статистически анализ.

Експерименталните данни са представени като средна стойност ± стандартно отклонение и са сравнени с помощта на дисперсионен анализ, последван от post hoc множество сравнения (тест на Тюки) с помощта на SPSS софтуер версия 25 (IBM Corp.) Всички данни, с изключение на изследването върху животни, са получени от три независими експеримента.

актеозидвцистанче

3. Резултати

3.1. Актеозидът не засяга L929 клетката и жизнеспособността на първичните хондроцити на плъх.

Мишата фибробластна клетъчна линия L929, използвана като нормални клетки, се третира с 2,5, 5, 10, 25, 50 и 100 μM актеозид за 24 часа. След това беше извършен МТТ анализ за оценка на цитотоксичността на актеозид върху L929 клетки. Както е показано на фигура 2(a), относителната жизнеспособност на клетки L929 е определена като 94:8±8%, 93:6±7%, 100±5%, 103:9±5%, 126:1±8% и 122:7±4 процента при 2,5, 5, 10, 25, 50 и 100 μM актеозид, съответно, в сравнение с контролата (100:02 ± 3 процента). Освен това, за да се провери цитотоксичността на актеозид върху първични хондроцити на плъх, беше извършен МТТ анализ, както е показано на Фигура 2 (b). Жизнеспособността на първичните хондроцити на плъхове, третирани с 2,5, 5, 10, 25, 50 и 100 μM актеозид, е определена като 114 ± 4 процента, 117:8 ± 6 процента, 123: 9 ± 5 процента, 132: 6 ± 4 процента, 153:1±7 процента и 142:1±6 процента, съответно, в сравнение с контролата (100:4±5 процента). Освен това, за потвърждаване на ефекта на актеозид върху жизнеспособността както на клетките L929, така и на първичните хондроцити на плъхове, беше извършен анализ на живи/мъртви клетки, както е показано на фигура 2(c). Броят на мъртвите клетки, оцветени като червена флуоресценция, не се е увеличил както за L929 клетки, така и за първични хондроцити на плъх, третирани с 50 и 100 μM актеозид за 24 часа. Тези данни последователно показват, че определената дозировка наактеозидне повлиява жизнеспособността на L929 клетките и първичните хондроцити на плъх. По този начин, 50 μM актеозид и 100 μM актеозид, които са нетоксични дози както в L929 клетки, така и в първични хондроцити на плъхове, бяха използвани за проверка на неговите антикатаболни ефекти in vitro проучвания с използване на първични хондроцити на плъх.

3.2. Актеозидът противодейства на IL-1 -индуцираната загуба на протеогликан в първичните хондроцити на плъх.

Първични хондроцити на плъх, вградени в алгинатни перли, бяха третирани с 50 и 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 1 ng/mL IL- 1 за 21 дни. След това беше извършен DMMB анализ за оценка на промяната в съдържанието на протеогликан, както е показано на Фигура 3(а). Относителното съдържание на протеогликан се определя като 88:3±18:1% и 86:8±16:3% в първичните хондроцити на плъхове, третирани съответно с 50 и 100 μM актеозид, в сравнение с контролата (103:8± 32:3 процента). Въпреки че относителното съдържание на протеогликан е намалено от актеозид, тези резултати не са значими. Относителното съдържание на протеогликан обаче значително намалява с 37:1 ± 14:7 процента в първичните хондроцити на плъхове, третирани с 1 ng/mL IL-1, но 50 и 100 μM актеозид значително намалява съдържанието на протеогликан с 57 ± 12:4 процента и съответно 64 ± 14:5 процента в присъствието на 1 ng/mL IL-1. Впоследствие, за да се провери дали актеозидът потиска индуцираната от IL-1 - загуба на протеогликан, ставният хрущял, дисектиран от коленни стави на плъх, се третира със 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 в продължение на 7 дни. След това бяха извършени хистологични оценки с помощта на H&E оцветяване и сафранин-O и бързо зелено оцветяване, както е показано на Фигура 3 (b). Морфологичната промяна не се наблюдава при използване на H&E оцветяване; въпреки това, сафранин-О и бързото зелено оцветяване разкриват, че протеогликанът, оцветен в червено, не се променя в ставните хрущяли, третирани със 100 μM актеозид, в сравнение с този в контролата. Въпреки това, тежка загуба на протеогликан е предизвикана от 10 ng/mLIL-1 в ставния хрущял и 100 μM актеозид значително потиска загубата на протеогликан в ставния хрущял, третиран с 10ng/mL IL- 1. Взети заедно, тези данни последователно показват, че актеозидът има антикатаболен ефект, който забавя дегенерацията на ставния хрущял чрез противодействие на загубата на протеогликан, предизвикана от IL-1 -.

актеозидвцистанчеимат добри ефекти върхуантиоксидант

3.3. Актеозидът има антикатаболен ефект, който потиска експресията и активирането на MMP в първични хондроцити на плъхове, третирани с IL-1.

За да се изследва дали индуцираният от актеозид антикатаболен ефект е свързан с потискането на експресията и активирането на ММР, първичните хондроцити на плъх се третират с 50 и 100 μM актеозид в присъствието или отсъствието на 10 ng/mL IL-1 за 24 часа. След това промените в MMPs бяха изследвани. Както е показано на Фигура 4(a), въпреки че експресията на разграждащи хрущяла ензими като MMP-13, MMP-1 и MMP-3 е значително увеличена в кондиционираната среда на първичен плъх хондроцитите, третирани с 10 ng/mL IL-1, той е намален сактеозидпо дозозависим начин. Освен това резултатите както от qPCR (Фигура 4(b)), така и от qRT-PCR (Фигура 4(c)) разкриват, че IL-1 значително повишава нивата на mRNA на MMPs като MMP-13, MMP{ {6}} и MMP-3 в първичните хондроцити на плъх. Въпреки това, те намаляват в зависимост от дозата в първичните хондроцити на плъхове, третирани с 50 и 100 μM актеозид. Освен това, 50 и 100 μM актеозид ефективно потискат активирането на ММР в първичните хондроцити на плъхове, третирани с 10 ng/mL IL-1 (Фигура 4(d)). Взети заедно, тези данни последователно показват, че актеозидът има антикатаболен ефект, който потиска експресията и активирането на ензими, разграждащи хрущяла.