ЧАСТ 1 Фенилетанол гликозидният липозом инхибира PDGF-индуцираното HSC активиране чрез регулиране на FAK/PI3K/Akt сигналния път
Mar 06, 2022
Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye и Tao Liu 1,*
1 Катедра по токсикология, Училище по обществено здраве, Синдзян Медицински университет, Синдзян Уйгурски автономен регион, Xinyi Road No.393, Урумчи 830011, Китай
2 Ключова лаборатория за уйгурска медицина, Институт по материя медика на Синдзян, Синдзян-уйгурски автономен регион, област Тяншан, Синхуа Южен път № 140, Урумчи 830004, Китай
За повече информация моля свържете се с:Joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche deserticola има много ефекти, щракнете тук, за да научите повече
Резюме: Cistanche tubulosaе традиционно китайско билково лекарство, което се използва широко за регулиране на имунитета ифенилетаноидни гликозиди(CPhGs) са сред основните компоненти, отговорни за тази дейност. Въпреки това, прилагането на CPhGs е отрицателно повлияно от тяхната слаба абсорбция и ниско орално използване. Целевата доставка на лекарства е важна посока за развитие на фармацевтиката. Предишни проучвания показват, че CPhG могат да блокират провеждането на сигналните пътища в TGF-p1/smad и да инхибират активирането на чернодробни звездовидни клетки (HSC). Целта на това проучване е да се оцени антихепаталният фиброзен ефект на CPhG липозоми чрез инхибиране на активирането на HSC, насърчаване на апоптоза, блокиране на клетъчния цикъл, потискане на провеждането на сигнални пътища във фокална адхезионна киназа (FAK)/фосфатидилинозитол-3- киназа (PI3K)/протеин киназа B (Akt) и определяне на тяхната in vitro хепатопротективна активност. Проучванията за освобождаване in vitro показват, че CPhG липозомите имат ефект на продължително освобождаване в сравнение с лекарствените CPhG. Пролиферацията на HSC се инхибира след третиране с CPhG липозоми (29.45, 14.72, 7.36 ^g/mL), със стойности на IC50 от 42.54 Rg/mL при МТТ анализ. Различни концентрации на CPhG липозоми могат да инхибират пролиферацията на HSC, да насърчат апоптозата и да блокират клетъчния цикъл. Методът МТТ показва очевидно инхибиране на пролиферацията на HSC след третиране с CPhG липозома и рекомбинантен растежен фактор-BB(rrPDGF-BB), получен от тромбоцити на плъх. Нивата на колаген -1, инхибитор на металопептидаза 1 (TIMP-1), гладкомускулен актин (a-SMA) и фосфорилиран PI3K/Akt бяха регулирани надолу и матриксната металопротеиназа-1 (MMP{ {23}}) се регулира нагоре чрез предварителна обработка с различни концентрации на CPhG липозоми. Освен това, 29,45 Rg/mL CPhG липозоми може да намали експресията на FAK протеина и фосфорилирания PI3K и Akt протеин след FAK чрез свръхекспресия на FAK гена. Този експеримент предполага, че CPhG липозомите могат да инхибират активирането на HSCs чрез инхибиране на FAK и след това намаляване на експресията на фосфорилиран Akt/PI3K, като по този начин предоставят нови прозрения за приложението на CPhGs за чернодробна фиброза.
Ключови думи: фенилетаноидни гликозидилипозома; чернодробни звездовидни клетки; пролиферация; апоптоза; клетъчен цикъл; FAK/PI3K/Akt,
фактори, като TGF-p1, алкохол, токсини и стеатоза, могат да доведат до активиране на HSC. PDGF може също да доведе до активиране на HSC [4]. Понастоящем терапевтичните стратегии, насочени към HSCs за предотвратяване на чернодробна фиброза, включват инхибиране на HSCs активиране, пролиферация и клетъчен цикъл, както и стимулиране на HSCs апоптоза [5].
Cistanche tubulosa(семейство Orobanchaceae), паразитно растение, се отглежда широко в южния район на Синдзян в Китай.C. tubulosaдоказано е, че представя различни дейности, включително повишаване на имунитета на организма, подобряване на издръжливостта на организма, подхранване на бъбреците, лечение на импотентност и повишаване на интелигентността;
1. Въведение
също така има свойства против окисляване и стареене [6]. Това растение съдържа фенилетаноидни гликозиди (CPhG), иридоиди и полизахариди, от които CPhG са някои от основните активни биоактивни видове [7]. В предишно проучване открихме, че CPhG могат да блокират провеждането на сигналните пътища в TGF-p1/smad, да инхибират активирането на HSCs и да упражняват превантивни ефекти върху индуцираната от говежди серумен албумин чернодробна фиброза при плъхове [7,8]. Въпреки това, CPhG имат добра разтворимост във вода и лоша разтворимост в липиди и се влияят от външни фактори като киселинност и ензими на разлагане, които намаляват стабилността и ефективността на CPhG [9]. След интрагастрално приложение, CPhGs са нестабилни в стомашно-чревния тракт на плъхове и лесно може да настъпи хидролиза на гликозидни връзки. Оралната бионаличност на плъхове е само 0.83 процента, така че е трудно да се определи терапевтичната му роля [10]. Следователно, ние трябва да намерим безопасно, ефективно, продължително и целево антифиброзно лекарство за HSC, за да подобрим тяхната терапевтична ефикасност. Системите за доставяне на лекарства от наночастици осигуряват алтернативна стратегия за преодоляване на тези недостатъци поради техните предимства, включително висок капацитет за зареждане на лекарства и дълго кръвообращение [11]. Те имат силен афинитет към черния дроб и могат директно да доставят лекарства в клетките чрез ендоцитоза и сливане. Немодифицираните липозоми се разпределят главно в тъканите или органите, разработени от ретикулоендотелната система (RES) и имат функцията на пасивно насочване към черния дроб [12]. Следователно, CPhG липозомите се приготвят чрез мембранна дисперсия и вторично капсулиране, за да се осигури антифиброзен ефект. В това проучване ние имахме за цел да изследваме ефектите на CPhG липозомите върху пролиферацията на HSC, апоптозата и клетъчния цикъл, както и неговите механизми.
2. Резултати
2.1. Физични свойства на CPhG липозома
Физическите свойства на приготвените CPhG липозоми са както следва: Размерът на частиците е (216.7 ± 3.47) nm, Zeta потенциалът е (-55.6 ± 1.3) mV. Както е показано на фигура 1, частиците са кръгли, покрити с еднаква дебелина на повърхността и разпределението на размера на частиците е равномерно. Зареждането с лекарство и ефективността на капсулиране на CPhG липозомите бяха (3,71 ± 0.32) процента и (38,46 士 7,85) процента.
2.2. Освобождаване in vitro от CPhG липозоми и CPhGs
Изчислената кумулативна скорост на освобождаване беше изчислена и нанесена като функция на времето за CPhG липозомите и CPhGs (Фигура 2). В настоящото изследване; скоростта на освобождаване на CPhG след 12 часа се нормализира до 100 процента, докато тази на CPhG липозомите е близо до 100 процента след 24 часа, а скоростта на освобождаване на CPhG се увеличава с времето. Данните бяха анализирани чрез използване на различни модели за напасване за механизмите за контролирано освобождаване, включително уравненията от нулев ред, първи ред и Higuchi. Построените уравнения и коефициентите на корелация за трите модела на освобождаване са показани в таблица 1.
Най-добрият модел, подходящ за CPhGs и CPhG липозомите, са уравненията на Хигучи и от първи ред. Проучването за освобождаване in vitro на CPhG липозомите не показва ефект на взрив. Най-подходящата функция на разпределение беше избрана за изчисляване на параметрите на разтваряне Т50 (разтваряне 50 процента). Резултатите показват, че средното време на задържане на CPhG липозомите е по-дълго от това на CPhGs, а T50 на CPhG липозомите е 9,39 часа. В сравнение с 1,69 часа за CPhGs, CPhG липозомите проявяват очевиден ефект на продължително освобождаване (Таблица 2).
Първо изследвахме цитотоксичните ефекти на CPhG липозомите върху HSCs с МТТ анализ in vitro. HSC бяха изложени на различни концентрации на CPhG липозоми, вариращи от 0 до 117,79 卩g/mL за 24 часа. CPhG липозомите намаляват жизнеспособността на HSC по дозозависим начин и тяхната IC50 стойност е 42,535 (eg/mL. Ефектът на CPhG липозомите (29,45, 14,72 и 7,36 ^g/mL) върху клетките при 24, 48 и 72 h е показано на Фигура 3. След третиране с CPhG липозоми, пролиферацията на HSCs беше значително инхибирана в различни времеви точки (Фигура 3).
Освобождаването на лактат дехидрогеназа (LDH) на HSCs се открива след 24 часа лечение с различни концентрации на CPhG липозома. Резултатите са показани в таблица 3. HSCs, третирани с CPhG липозоми, нямат значителен ефект върху освобождаването на LDH.
2.4. CPhG липозомите индуцират HSC апоптоза и спират клетъчния цикъл
HSC бяха изложени на CPhG липозоми (29.45, 14.72, 7.36 卩g/mL) в продължение на 24 часа и беше извършено двойно оцветяване с анексин-V-FITC/PE за откриване на апоптоза чрез поточна цитометрия, както е показано на Фигура 4а. Общата апоптоза на клетките статистически се увеличава в сравнение с контролната група (p < 0.05).="" след="" 24="" часа="" лечение="" на="" hscs="" за="" всяка="" дозирана="" група,="" cphg="" липозомите="" (29.45="" ^g/ml)="" могат="" да="" индуцират="" късна="" апоптоза="" на="" hscs="" и="" процентът="" на="" късните="" апоптотични="" клетки="" е="" по-висок="" от="" този="" на="" ранните="" апоптотични="" клетки.="" делът="" на="" ранните="" апоптотични="" клетки="" беше="" много="" по-висок="" от="" късните="" апоптотични="" клетки="" в="" групите,="" третирани="" с="" cphg="" липозома="" (14,72="" и="" 7,36="" |^g/ml).="" тези="" резултати="" ясно="" показват,="" че="" cphg="" липозомите="" индуцират="" апоптоза="" на="" хепатоцитите,="" особено="" в="" късните="" стадии="" на="" hsc.="" в="" допълнение,="" общата="" апоптоза="" се="" увеличава="" с="" дозата="" на="" cphg="" липозомите.="" тези="" резултати="" предполагат,="" че="" cphg="" липозомите="" могат="" да="" инхибират="" активирането="" на="" hscs="" и="" чернодробната="" фиброза="" чрез="" индуциране="" на="" апоптоза="" на="">
За да се определи ефектът на CPhG липозомите върху клетъчния цикъл на HSCs, HSCs се третират с CPhG липозомите при концентрации от 29.45, 14.72 и 7.36 昭/mL за 24 часа и се анализират чрез поточна цитометрия (Фигура 4b). Резултатите показват, че делът на клетките във фазата G0/G1 е значително увеличен (p < {{10}}.05),="" докато="" процентът="" на="" клетките="" във="" фазата="" s="" е="" значително="" увеличен="" намалена="" (р=""><0,05). освен="" това,="" делът="" на="" клетките="" във="" фазата="" g2/m="" е="" значително="" намален="" в="" сравнение="" с="" контролната="" група=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">
2.5. Проучване върху механизма(ите) на действие на C PhG липозоми in vitro
2.5.1. CPhG липозомите инхибират пролиферацията на HSC чрез rrPDGF-BB стимулация
За по-нататъшно изследване на ефектите на CPhG липозомите върху пролиферацията, стимулирана от rrPDGF-BB на HSCs, беше извършен МТТ анализ за измерване на жизнеспособността на HSCs, които бяха третирани с предварително зададени концентрации на CPhG липозомите за 24, 48 и 72 часа ( Фигура 5).
След 24 часа лечение с HSCs, стимулирани от rrPDGF-BB и 29,45, 14,721 и 7,36 昭/mL от CPhG липозомите, нивата на преживяемост на клетките във всяка дозирана група са съответно 67,5 процента, 75,3 процента и 89,2 процента. След 48 часа степента на преживяемост е съответно 49,2 процента, 58,6 процента и 73,5 процента в клетките
от всяка група дози. След 72 часа лечение степента на преживяемост на клетките във всяка дозирана група е съответно 45,3 процента, 59,2 процента и 79,2 процента. Резултатите показват, че CPhG липозомите имат значителен инхибиторен ефект върху HSCs, стимулирани от rrPDGF-BB, и този инхибиторен ефект става по-очевиден с увеличаването на дозата. Предполага се, че инхибиторният ефект на CPhG липозомите върху HSCs допринася за антипролиферативната активност на CPhGliposomo.
2.5.2. CPhG липозомите инхибират HSC активирането in vitro
HSC в пространството на Disse произвеждат компоненти на ECM като колаген -1, (s-SMA и колаген III. Други фактори, които регулират развитието на ECM, като MMP и TIMP, също се произвеждат от HSC [5]. За по-нататъшно изследване на механизмите на rrPDGF-BB-индуцирани в HSCs, ние оценихме експресията на ECM-свързани протеини, включително колаген-1, Cosma, колаген III, MMP-1 и TIMP{{8} }. Фигура 6а показва, че групите CPhG липозоми (29.45, 14.72, 7.36 4g/mL) могат да намалят нивата на експресия на иРНК на колаген-1, a-SMA и TIMP{{18} } и повишава нивото на експресия на mRNA на MMP-1 повече от rrPDGF-BB групата.
Фигура 6. Ефекти на CPhG липозомите върху експресиите на колаген-1, a-SMA, TIMP-1 и MMP-1 в HSCs. (a ) Експресията на иРНК на колаген-1, a-SMA, TIMP-1 и MMP-1 в HSCs (RT-PCR анализ). (b) Протеиновата експресия на колаген{{10}} и a-SMA. А, контролната група; B, групата, лекувана с rrPDGF-BB; C, rrPDGF-BB плюс CPhG липозома 29,45 g/mL третирана група; D, rrPDGF-BB плюс CPhG липозома 14,72 (_ig/mL третирана група; E, rrPDGF-BB плюс CPhG липозома 7.3 6 卩g/m L третирана d група; Данните са изразени като средното 土 SD. ** p < 0.01,="" значително="" различно="" в="" сравнение="" с="" групата="" с="" rrpdgf-bb-активирани="" hscs.="" #="" p=""><0.05, значително="" различно="" съотношение="" в="" сравнение="" с="" контролната="" група.="" 6-актин="" се="" използва="" като="" вътрешен="">
CPhG липозомите също повишават нивата на иРНК на MMP-1. Нивата на a-SMA и колаген -1 бяха силно изразени в rrPDGF-BB-активирани HSC. Обратно, CPhG липозомите намаляват нивата на a-SMA и колаген -1 (Фигура 6b). Особено при висока концентрация (29,45 ^g/mL), липозомата CPhG намалява повишената експресия на колаген-1 и a-SMA чрез rrPDGF-BB.
2.53 CPhG липозомите инхибират PI3K/Akt сигналния път
PI3K/Akt е важен път на сигнална трансдукция, медииран от тирозин киназни рецептори. Сигналната пътека PI3K/Akt действа като сензор в отговор на извънклетъчни стимули и медиира клетъчните сигнали, като по този начин играе критична роля в клетъчната апоптоза и пролиферация чрез повлияване на активността на ефекторните молекули надолу по веригата [13]. За да се провери дали пътят на PI3K/Akt участва в антипролиферативните ефекти на CPhG липозомите върху HSCs, нивата на експресия и фосфорилиране на PI3K/Akt бяха изследвани чрез Western blot анализ. Резултатите показват, че нивата на p-PI3K и p-Akt последователно намаляват в HSCs след 24 часа лечение с CPhG липозоми, което показва, че антипролиферативните ефекти на CPhG липозомите срещу HSCs са свързани с деактивиране на PI3K/Akt пътя , както е показано на фигура 7.
2.5.4. CPhG лиипозомите могат да регулират надолу експресията на протеини на пътя на PI3K /Akt в HSCs на rrPDGF-BB-медиирания FAK свръхекспресионен плазмид
FAK е критичен ген, който регулира сигналния път на PI3K/Akt. Активираният FAK може да фосфорилира PI3K, което допълнително води до фосфорилиране на Akt. FAK медиира сигналната трансдукция на тирозин-протеин киназния рецептор, интегрин и други пътища към клетките, които са кръстовището и центърът на няколко вътреклетъчни пътища по време на активирането на HSC. Затова спекулирахме
че CPhG липозомите могат да потиснат активността на PI3K/Akt сигналния път чрез нарушаване на активирането на FAK. Впоследствие потвърдихме тази хипотеза, като демонстрирахме свръхекспресията на FAK гена.
(pEX{{0}}NC) плюс CPhG липозома 29,45 Lg/mL група намалява значително (p <0,01).
estern blotting със специфични първични антитела. ** p < 0.01,="" значително="" различно="" в="" сравнение="">
rrPDGF-BB стимулация плюс pEX-3-FAK група. плюс p < 0.05,="" значително="" различно="" в="" сравнение="" с="" групата,="" лекувана="" с="" rrpdgf-bb.="" &="" p=""><0.01, значително="" различно="" в="" сравнение="" с="" rrpdgf-bb="">
плюс pEX-3-NC група. -актинът се използва като вътрешен контрол.
цистанче може да противораково
3. Дискусия
Доказано е, че CPhG имат различни биологични активности, включително противовъзпалителна активност [14,15], антиостеопорозна активност [16,17], седативен ефект [18], активност против умора [19], невропротективен ефект [ 20], и хепатопротективна активност [21,22]. Yang и др. установи, че екстракт отC. tubulosaможе значително да забави прогреса на експерименталната химическа чернодробна фиброза чрез инхибиране на синтеза на колаген и намаляване на оксидативния стрес [22]. Въпреки това, ефикасността на CPhGs като
термозащитните средства са ограничени от тяхната слаба пропускливост и ниска бионаличност [23]. Следователно е необходимо да се разшири приложението на CPhG чрез разработване на ефективна система за доставка, за да се преодолеят тези неуспехи.
През последните години както изследванията на лекарствата, така и клиничните изследвания потвърдиха, че използването на наночастици като носители на лекарства може да подобри ефикасността на лекарствата in vivo. Липозомите са едни от най-важните наночастици [24].
Липозомите могат да се използват като носители на лекарства за успешно доставяне на противовъзпалителни лекарства, противоракови лекарства, антибиотици, противогъбични лекарства и други различни категории лекарства [25]. Липозомите могат също така да подобрят стабилността на лекарството, да увеличат разтворимостта на лекарството и да насърчат биосъвместимостта [26]. От друга страна, проучванията показват, че системата за доставяне на лекарства от твърди наночастици (в диапазона от 10-1000 nm) може да концентрира 80 процента от дозата на лекарството в черния дроб, което позволява на лекарството да навлезе чернодробните клетки [27]. Jing Zhu и др. установиха, че галанин-липозомите притежават добри ефекти върху черния дроб [28]. Следователно пасивният насочен ефект на нанокитайските лекарства може да се използва за лечение на чернодробни заболявания или други заболявания. Размерът на частиците на CPhG липозомите, получени в настоящото изследване, който има определена степен на насочване към черния дроб, е (216.7 ± 3.47) nm. Поведението при освобождаване на лекарства е важно свойство на системите за доставяне на нанолекарства. Тъй като CPhG имат добра разтворимост във вода, PBS буферен разтвор (pH=6.0) се използва като среда за освобождаване. От кривата на освобождаване може да се види, че преди 2 часа процентът на освобождаване на CPhG липозоми е бил по-малък от 40 процента, не е настъпило внезапно освобождаване и е имало известен ефект на продължително освобождаване в сравнение с освобождаването на CPhGs. От уравнението на монтираната крива на освобождаване освобождаването на CPhG липозомите във фосфатния буферен разтвор при pH=6.0 е в съответствие с уравнението на Higuchi.
цистанчемогаантиапоптоза
При хронични чернодробни заболявания непрекъснатото активиране на HSCs води до чернодробна фиброза [29]. Следователно, инхибирането на активирането, пролиферацията и клетъчния цикъл на HSC или индуцирането на HSC апоптоза може да бъде нова отправна точка за таргетната терапия на чернодробна фиброза [30-33]. Много проучвания са установили, че апоптозата е ключът към обръщане на чернодробната фиброза чрез насърчаване на апоптоза [34]. Развитието на чернодробна фиброза зависи от активирането на HSCs, което може да предложи потенциал за инхибиране на HSC активирането и индуциране на апоптоза за предотвратяване или лечение на чернодробна фиброза [35,36]. LDH е ензим в клетъчния цитозол, който се освобождава в хранителната среда, когато клетъчната мембрана е увредена. Поради тези причини, ние проведохме in vitro проучвания на нивата на клетъчна жизнеспособност, съдържанието на LDH в клетките и апоптозата и клетъчния цикъл на HSCs, изложени на CPhG липозоми. Резултатите показват, че CPhG липозомите силно инхибират жизнеспособността и пролиферацията на HSC и увеличават процента на апоптотичните клетки по начин, зависим от концентрацията. Освен това, резултатите от клетъчния цикъл показват, че CPhG липозомите могат да индуцират спиране на клетъчния цикъл във фазата G1. Резултатите показват, че ключът към CPhG липозомите за предотвратяване и лечение на чернодробна фиброза е да регулират клетъчната пролиферация, апоптозата и клетъчния цикъл. В сравнение с празната контролна група, съдържанието на LDH между всяка група има постепенно нарастваща тенденция. Въпреки това, няма значителна разлика (p > 0.05), което показва, че въпреки че активността намалява за HSCs, засегнати от CPhG липозомите, повечето от клетъчните мембрани остават непокътнати. Инхибирането на пролиферацията на HSCs от CPhG липозомите не се дължи на токсичността на лекарствата към клетките.
PDGF е най-критичният фактор, влияещ върху пролиферацията на HSC. PDGF-рецепторите (PDGF-Ra и -p) принадлежат към семейството на тирозин киназните рецептори. PDGF-AA се свързва изключително с PDGF-Ra, докато веригите на PDGF-B се свързват и димеризират както с PDGF-Ra, така и с -p [37]. След свързване на лиганда към PDGF-R, рецепторите се димеризират, което впоследствие води до фосфорилиране на вътрешен тирозинов остатък и до активиране на няколко сигнални пътя надолу по веригата, като в крайна сметка индуцира пролиферацията и миграцията на активирани HSC. Този процес води до прекомерно производство и отлагане на колаген и други ЕСМ, като по този начин насърчава развитието и прогресирането на чернодробна фиброза [38]. Брайткопф и др. показват, че чернодробната свръхекспресия на PDGF-BB води до пролиферация на HSC и чернодробна фиброза [39]. В нашето проучване ние използвахме rrPDGF-BB като стимулатор за активиране на HSCs и всяка дозирана CPhG липозомна група може да инхибира пролиферацията на HSCs и да представи очевидна връзка доза-ефект. Предполага се, че инхибиторният ефект на CPhG липозомите върху HSCs допринася за анти-пролиферативната активност на CPhG липозомите.
Активирането на HSCs е свързано с много промени в моделите на генна експресия на клетките. По-специално, промените в генната експресия на колаген -1 и a-SMA са в най-голяма корелация с фиброзните свойства на активираните HSC [40]. ММР са цинк-зависими ендопептидази, които играят важна роля в разграждането на всички протеинови компоненти на ECM при физиологични и патологични състояния. MMPs и TIMPs медиират съответно синтеза и разграждането на ECM. MMP могат да насърчат разграждането на ECM. Деликатният баланс между MMPs и TIMPs определя появата на чернодробна фиброза [29]. В сравнение с rrPDGF-BB групата, експресията на TIMP-1, a-SMA и колаген-1 в CPhG липозомните групи се повишава значително, докато експресията на MMP-9 намалява. Лечението с CPhG липозоми значително обръща анормалните експресии, индуцирани от rrPDGF-BB в HSCs. Тези данни показват, че CPhG липозомите вероятно инхибират генерирането на ECM чрез възстановяване на баланса между MMPs и TIMPs, като по този начин повишават нивата на MMP-1 и намаляват експресията на TIMP-1, a-SMA и колаген-1 и потенциално насърчаване на разграждането на извънклетъчния матрикс.
FAK е вид фокален адхезивен комплекс. PDGF може също да активира FAK чрез взаимодействие с ECM протеина чрез интегрин [41]. Фокалният адхезивен комплекс осигурява директен сензор за целостта на извънклетъчната среда. Активирането на FAK води до активиране на PI3K. Доказано е, че PI3K участва в пролиферацията на няколко типа клетки [42]. Неговата решаваща роля в HSCs беше показана чрез използването на PI3K-специфични инхибитори LY294002 и вортманин за блокиране на PDGF-индуцираната митогенеза и хемотаксис, без да се засяга автофосфорилирането на PDGF рецептора [43]. PI3K се набира в димеризирани фосфорилирани PDGF рецептори, които активират протеин киназа С (PKC), Akt и p70S6 кинази (p70S6K) [44]. Съобщава се, че доминантно-отрицателна FAK (Ad-FAKCD) е използвана за блокиране на активността на FAK и инхибиране на активирането на PI3K, индуцирано от пролиферацията на PDGF и HSCs след лечение с PDGF [45]. Следователно, ние предположихме, че пътят на FAK / PI3K / Akt е възможна цел за CPhG липозомите.
Нашите резултати показват, че в сравнение с rrPDGF-BB стимулацията плюс X-3-FAK групата, нивата на протеинова експресия на FAK, фосфорилиран PI3K и фосфорилиран Akt са регулирани надолу при rrPDGF-BB стимулация плюс X-3-FAK плюс CPhG липозомна 29,45 Lg/mL група. Тези резултати показват, че лечението с CPhG липозома 29,45 Lg/mL може да намали експресията на FAK протеина и фосфорилираните PI3K и Akt протеини след FAK.
Със задълбочаването на изследванията върху химията и фармакологията на традиционните китайски лекарства бяха открити и потвърдени все повече активни съставки на традиционните китайски лекарства. Паклитаксел, артемизинин и други лекарства са широко признати като лекарства от първа линия за лечение на свързани заболявания по целия свят. Въпреки това, в същото време е установено, че въпреки че in vitro фармакологичният ефект на много китайски медицински съставки е много силен, те имат лоша разтворимост във вода, кратък полуживот, слаба стабилност, ниска бионаличност, токсични странични ефекти и много други проблеми, които силно ограничават тяхното медицинско и клинично приложение. Системата за доставяне на нанолекарства е нова система за доставяне на лекарства с голям потенциал за развитие и е гореща точка в съвременните фармацевтични изследвания. Приложението му в изследването и разработването на нови форми на традиционни китайски лекарства не само подобрява традиционните форми на китайски лекарства, но също така подобрява лечебния ефект на традиционните китайски лекарства до известна степен и повишава стабилността на лекарствата in vivo. Освен това, немодифицираните липозоми се абсорбират най-вече от RES, в зависимост от техния размер на частиците, повърхностни свойства и други фактори. Те също са пасивно насочени към черния дроб. За да се подобри ефективността на насочване към черния дроб на обикновените липозоми, концентрацията на целевата тъкан може да бъде увеличена чрез свързване на специфични лиганди или специфични функционални групи.
Следователно в бъдещи изследвания трябва да отдадем значение на физичните и химичните свойства на екстракцията и пречистването на CPhG, като разтворимост, стабилност, киселинност и алкалност, както и изследването на биофармацевтиката и фармакокинетиката. Трябва да създадем уникална теория за проектиране на формулировката, технологична платформа за подготовка и метод за оценка на качеството за CPhGs и също така да разработим различни системи за зареждане с нанолекарства за CPhGs, за да гарантираме, че CPhGs се използват възможно най-пълноценно. Пълното използване на тези предимства ще бъде посоката на нашите бъдещи изследвания.
