Потенциални биомаркери на сълзи за диагностика на болестта на Паркинсон—пилотно проучванеⅡ

3. Резултати

3.1. Пациенти и клинични параметри

Между март 2019 г. и октомври 2019 г. 24 пациенти с iPD, трима симптоматични носители на мутацията E46K-SNCA и 27 субекта на CT бяха включени в това пилотно проучване, чиито общи характеристики са представени в таблица 1. Средната продължителност на заболяването при пациентите с PD беше 9,36 години и те са имали леко двустранно двигателно увреждане (UPDRS резултат) и резултати на Hoehn и Yahr, които предполагат леко до умерено двигателно увреждане. Характерно за пациентите с IPD е, че 40 процента от тях са имали лек до умерен блефарит.

3.2. Данни за nLC MS/MS Общо 560 слъзни протеини бяха идентифицирани в пробите, анализирани тук, чрез предишни протеомни изследвания на сълзи, и няколко специфични за групата промени в сълзния протеом бяха очевидни при пациенти с PD спрямо CTs. Протеини с различно изобилие с предишни протеомни изследвания на сълзите и няколко специфични за групата промени в протеома на сълзите са очевидни при пациенти с PD спрямо CT. Протеини с различно изобилие бяха открити и в двете групи, въпреки че повечето от дерегулираните протеини в слъзния протеом на пациенти с PD бяха свръхекспресирани. Извършен е анализ на мрежата STRING PPI, за да се оценят взаимодействията между протеини, които се различават значително при пациентите с PD и CTs (Фигура 1). Протеините, които са свръхекспресирани при пациенти с PD, са замесени в значително повече взаимодействия от очакваното, което показва g, че увеличенията на тези протеини имат някаква биологична връзка (Фигура 1A). Въпреки това се наблюдават по-слаби връзки между протеините, които са били регулирани надолу, представляващи диференциран клъстер (Фигура 1В). Повечето от диференциално експресираните протеини могат да бъдат локализирани или в извънклетъчните, или в вътреклетъчните отделения.

За по-добро разбиране на потенциалната роля на диференциално експресираните протеини в биологичен контекст бяха извършени функционални анотационни анализи с различни термини на генната онтология (GO). В резултат на това се наблюдава, че дерегулираните протеини участват в различни биологични процеси (Фигура 2): имунния отговор (липокалин 2—LCN 2, серпин В3—SPB3, секретиран от фоликуларни дендритни клетки пептид—FDSCP, кадхерин—MFGM и неутрофилна желатиназа- свързан липокалин—NGAL); апоптоза (олфактомедин-4—OLFM4, каспаза-14—CASPE и гама-глутамил циклотрансфераза—GGCT); възпаление (калпротектин-S100A8, S100A9); разграждане на колаген (миелобластен—PRTN3 и металопротеиназа 9—MMP9); протеинов синтез (хетерогенен ядрен рибонуклеопротеин A3—ROA3); кератиноцитна диференциация (калмодулин-подобен протеин 5—CALML5); липиден транспорт (аполипопротеин D—APOD, аполипопротеин А2—APOA2 и свързан с липопротеин с ниска плътност протеин 2—LRP2); и защита (миелопероксидаза—MPO, дефензин алфа 3—DEFA 3, глутатион пероксидаза 3—GPX3, хитиназа-3-подобен протеин 2—CH3L2 и лизозим C—LYSC).

Ако пациентите с PD се разглеждат заедно и поотделно като пациенти с iPD и пациенти с E46K-SNCA мутация, повишените слъзни протеини са очевидни и в трите от тези групи, като тяхната експресия варира във всяка (Фигура 3). Трябва да се отбележи, че са изследвани само трима пациенти, носещи мутация E46K-SNCA, и разсейването на данните оттогава е по-голямо. Същите протеини са по-силно експресирани в сълзите на пациенти с мутация E46K-SNCA, отколкото в сълзите на пациенти с iPD. Всички тези сравнения бяха направени на стойностите спрямо тези на пробите от КТ разкъсвания.

Таблица 2 показва протеините, които са били регулирани нагоре (кратно > 1,5) и понижени (кратно < 0.5) в групата с IPD с блефарит в сравнение с пациенти с IPD без блефарит. Пациентите с мутация E46K-SNCA не са развили блефарит.

Сред сълзните протеини, дерегулирани при пациенти с PD, се откроява група от шест протеина, пет от които са свръхекспресирани в групата с PD спрямо CTs (преламин A/C—LMNA, катепсин D—CATD, киселинна керамидаза—ASAH1, преходна ендоплазмена ретикулум ATPase—TERA и цитоплазмен динеин 1—DYHC1), докато един от тях е регулиран надолу (трипептидил-пептидаза 1—TPP1: Таблица 3). Тези протеини са свързани с невродегенеративни процеси, главно промени в лизозомната аутофагия, апоптоза, ретрограден аксонален транспорт и демиелинизиращи процеси. Интересно беше да се отбележи връзката на тези протеини с промените в лизозомната функция. От шестте протеина, три представиха добра способност за правилно класифициране на пациенти с PD и CT, както е отразено от стойностите на AUC на ROC кривите, и те бяха свързани с промени в лизозомната функция: CATD, ASAH1 и DYHC1.

Едномерният логистичен регресионен анализ идентифицира четири променливи със статистическа значимост при=0.05: възрастта на пациентите и кратната промяна в протеините CATD, ASAH1 и DYHC1 (Таблица 4).

Освен това се наблюдава, че протеините LMNA и DYHC1 имат статистическа значимост при=0.1. Установен е многовариантен логистичен регресионен модел чрез отчитане на възрастта и протеините с всяко ниво на значимост. Докато общият модел показа значимост само в случай на CATD протеин (Таблица 5), моделът вероятно е бил повлиян от малкия брой налични проби и увеличаването на броя на изследваните проби може да идентифицира други значими променливи.

4. Дискусия

Настоящото проучване е проведено за анализиране на протеини чрез нанотечна хроматография-масспектрометрия (nLC-MS/MS) и избор на тези, свързани с невродегенеративни заболявания, които имат по-висока дискриминационна сила между изследваните PD и TC групи. През последните години са извършени няколко търсения на кандидат биомаркери в сълзите на пациенти с ПД; заключението обаче беше, че са необходими допълнителни проучвания за валидиране, за да се намери най-добрият кандидат за диагностичен или прогностичен биомаркер за тази патология. Понастоящем диагнозата PD се основава на наличието на двигателни и немоторни симптоми, включително нарушения на съня или обонятелни дефицити. Моторните симптоми се появяват главно, когато загубата на допаминергични неврони достигне около 50-60 процента.

Щракнете за удължаване на живота цистанче за болестта на Паркинсон

Следователно постигането на ранна диагноза ще отвори пътя за промяна на хода на заболяването и да се надяваме да забави тежкото увреждане, причинено от тази патология. Този въпрос се превърна в ключов аспект в изследванията на PD, въпреки че липсата на валидни биомаркери представлява основна пречка, която предотвратява идентифицирането на пациенти в предклинични или продромални стадии, както и наблюдението на еволюцията на заболяването и ефектите от лечението.

Поради тази причина, настоящото проучване се стреми да търси надежден биомаркер на PD в неинвазивна течност, като сълзи. Окото има много невронни и съдови елементи, които се намират и в мозъка, което го прави идеално за откриването на нови биомаркери, които могат да се използват за диагностициране на PD или други невродегенеративни заболявания, както и при откриването на нови терапевтични цели. Тук сълзи от пациенти с PD и CT са получени през стъклени капиляри без предварителна анестезия и без докосване на очната повърхност. Предишни пилотни проучвания върху сълзи на пациенти са извършени с група сълзи на пациенти [19] и нашият анализ е първият индивидуален анализ на сълзи, който ще позволи идентифицирането на специфични индивидуални маркери. Чрез използване на капиляри за получаване на проби от сълзи, ние избягваме докосването на конюнктивалния епител, като по този начин разграничаваме протеините, открити в сълзата, от конюнктивалните протеини, както се случва при използването на лентите на Schirmer. В нашето проучване открихме значително дерегулирани протеини при пациенти с PD.

Тези протеини участват главно във възпалителни и невродегенеративни процеси, апоптоза и имунни отговори. Възпалението е повсеместно при невродегенеративни заболявания, включително PD, и скорошни проучвания установиха, че -syn-получените Т-клетъчни епитопи се разпознават преференциално при пациенти с PD, както и Т клетки в целевите региони на PD, което вероятно предполага автоимунен компонент на PD [20]. ]. Смята се, че невроните са защитени от автоимунна атака, но допаминергичните неврони са уязвими, защото имат протеини на клетъчната си повърхност, които помагат на имунната система да разпознава чужди вещества [21]. Т-клетките могат потенциално да объркат увредените от болестта неврони за чужди вещества и в резултат на това Sulzer et al. предложи модел, при който -syn-специфични Т клетки причиняват невронална смърт при невродегенеративни заболявания, свързани със специфично неправилно нагъване на този протеин. В нашето проучване групи от дерегулирани протеини, свързани с имунния отговор, като LCN2, SPB3 и FDSCP, наред с други, бяха наблюдавани в проби от сълзи. Въпреки това, някои имуноглобулини, участващи в имунния отговор, като IgA2, не показват статистически значими разлики между групата на PD и групата на CT.

Необходими са допълнителни проучвания, за да се изясни дали тази връзка между имунния отговор и протеините, открити в сълзите, е пряко свързана с PD. Невровъзпалението може да се дефинира като неспецифично възпалително събитие в мозъка, а цялата ЦНС има невровъзпалителен компонент, който е очевиден при заболявания като множествена склероза (МС), мозъчни аневризми и мозъчно-съдови инциденти, епилепсия, AD и PD и в които е замесена активността на ензими, разграждащи извънклетъчния матрикс (ECM) или металопротеази (MMP). MMPs участват в много физиологични и патологични процеси в мозъка и кръвта. Кръвно-мозъчната бариера (BBB) ​​се образува от ендотелните капиляри, които разделят кръвоснабдяването на мозъка, и нейната функция се намира в три структури, които са критични за нейната цялост: ендотелните клетки на мозъчните капиляри, плътните връзки (TJs ) между тези клетки и базалната мембрана. Ендотелът е бариера за малки хидрофилни съединения, тъй като TJ запечатват празнините между съседните ендотелни клетки, възпрепятствайки неконтролираното преминаване на разтворени вещества между тези клетки и превръщайки мозъчния ендотел в относително непропусклива бариера [22,23].

Основната мембрана обаче свързва тези ендотелни клетки с перицити и астроцити, за да образува невроваскуларната единица, която улеснява комуникацията между клетките. Тази мембрана е фундаментална за адекватното функциониране на BBB и, като такава, за мозъчната хомеостаза и общото му здраве. Предполага се, че MMP специфично разрушават TJs и те усвояват базалната мембрана на ендотела, като по този начин допринасят за някои мозъчни заболявания [24]. Въпреки че е технически трудно да се демонстрира активност на ММР in vivo, по-силната активност на ММР се свързва с по-голяма пропускливост на ВВВ след мозъчно-съдов инцидент и по време на реперфузия in vivo [25]. Увеличаване на MMP-2 и MMP-9 иРНК и активността е описано след реперфузия при хипертензивни плъхове с оклузия на медиалната церебрална артерия (MCAO) [26]. Освен това, изтичане на BBB също беше открито в пириформения кортекс на тези плъхове, във връзка с разрушаването на TJs, което показва, че тези MMPs променят целостта на BBB чрез разграждане на TJ протеини [26]. Като такива и въпреки техническите предизвикателства, има някои доказателства, че MMPs усвояват TJ и ECM протеини in vivo.

Експресията и активността на MMP-1, -2 и -9 са определени в постмортална мозъчна тъкан от пациенти с PD и въпреки че не са наблюдавани промени в MMP-1 и MMP -9 по отношение на контролите, съответстващи на възрастта, 50-процентно намаление на активността на MMP-2 е очевидно в SN на пациенти с PD [27]. Предполага се, че по-слабата активност на MMP 2 може да помогне на допаминергичните неврони и техните неврити да оцелеят в SN [27]. Освен това, MMP-3 също е изследван за PD, което потенциално може да бъде замесено в разцепването на -syn. MMP-3 разцепва пречистен -syn in vitro и агрегацията на -syn се увеличава в присъствието на MMP-3 агрегати, които биха били особено вредни за допаминергичните клетки при PD. Показателно е, че MMP-1, -2 и -9, и MT1-MMP също разцепват пречистен -syn, макар и по-малко ефективно от MMP-3 [28]. MMP-3 изглежда участва в допаминергичната невродегенерация, невровъзпалението и интегритета на BBB при PD; въпреки това ще са необходими допълнителни проучвания, за да се изясни ролята на всички тези MMPs при PD и дали тяхното специфично инхибиране може да представлява валидна терапевтична стратегия. Тук нивата на MMP-9 са по-високи в сълзата на пациенти с PD, както пациенти с iPD (2.8-кратно), така и тези, които носят E46K-SNCA мутация (3-кратно).

Последните пациенти с PD не са развили блефарит, което предполага, че повишаването на концентрациите на MMP-9 не е толкова силно свързано с блефарит, колкото с патологията на PD. Въпреки това, анализирайки групите на iPD поотделно, виждаме, че има по-силна свръхекспресия на MMP-9 при пациенти с IPD с блефарит, 3,08 пъти в сравнение с пациенти с IPD без блефарит. Преди това проучихме приноса на този MMP към разкъсването при пациенти с патологии на очната повърхност [29,30]. Въпреки това ще са необходими допълнителни проучвания, за да се определи дали увеличението на MMP-9 е пряко свързано с PD или патологии на очната повърхност, които биха могли да променят анализа на сълзите.

Натрупват се доказателства за важната роля на енергийния метаболизъм при невродегенеративните заболявания, включително PD. Анормалните липидни фракции и липидната пероксидация са оценени при пациенти с PD [31] и в резултат на това липидните фракции са предложени като възможни защитни биомаркери на PD. Скорошни епидемиологични проучвания върху проспективна кохорта или с дизайн на случай-контрола се опитаха да оценят връзките между липидните фракции и риска от PD [32–35]. Някои от тези проучвания имат малък размер на извадката, докато други изследват само специфични липидни фракции, главно холестерол, или контролират ограничен брой потенциални объркващи фактори. Въпреки че се наблюдава последователна връзка между по-високите нива на холестерола и по-ниския риск от PD, основната причина е неизвестна и трябва да се оцени дали подобни резултати се наблюдават за други липидни фракции. В пробите от сълзи, тествани тук, членовете на семейството на аполипопротеините (APO) изглежда са дерегулирани, семейство протеини, замесени в много невродегенеративни разстройства. Протеинът APOE участва в няколко мозъчни разстройства, включително AD, MS, травматични мозъчни лезии и болест на Creutzfeldt-Jakob [36–38], което повишава възможността ApoE също да играе важна роля в развитието на PD. Освен това, по-високи нива на холестерол бяха открити в мозъка на трансгенен миши модел на PD и тъй като APO участват в поддържането на холестеролова хомеостаза, може да съществува възможна връзка между APO и PD [39].

Въпреки това, малко проучвания са фокусирани върху ролята на APOs при PD. В ЦНС APOs се произвеждат от глиални клетки и се поемат от неврони, за да бъдат използвани в растежа на аксона и за синаптичната активност. Освен това се смята, че ApoE има невропротективна роля, предотвратявайки апоптозата на неврони и ганглийни клетки на ретината (RGC) [40]. Експресията на APO в човешкия мозък се влияе от вида на APO и възрастта на индивида. От различните APO, ApoE, ApoD и ApoJ са най-силно изразени в мозъка. Въпреки това, техните нива на експресия могат да се променят на различни етапи от живота и, например, има 50 процента повече ApoE в неонаталния мозък, отколкото в този на възрастен, докато има приблизително 10 пъти повече ApoD и ApoJ в мозъка на възрастен, отколкото в тази на ембриона. ApoD се експресира главно в мозъка, периферните нерви, плацентата, белите дробове, яйчниците и далака [41]. В нашите проби от сълзи ApoD изглежда свръхекспресиран при пациенти с PD. Глиалните клетки, близки до SN на пациенти с PD, имат повече ApoD, за което се смята, че е свързано с оксидативния стрес, тъй като ApoD предпазва клетките от оксидативен стрес и неговата повишена експресия инхибира липидната пероксидация [42].

Наистина, експресията на ApoD в мозъчния ствол изглежда предпазва от невродегенерация, а в увредените мозъци невроните не експресират ApoD [41]. По този начин ApoD в сълзата изисква допълнителни проучвания при пациенти с PD и такива с други невродегенеративни заболявания, за да се прецени дали има истински невропротективен ефект при такива пациенти. Сред другите протеини, за които е установено, че са дерегулирани в настоящото изследване, е избрана малка група поради тяхното участие в невродегенеративни процеси, по-специално в лизозомна аутофагия или невронален транспорт. Предполага се, че пътят на убиквитин-протеазома (UPP) играе ключова роля в разграждането на -syn [43]; обаче има все повече доказателства, че лизозомата може също да медиира разграждането на -syn [44,45]. Независимо от точния път на автофагия, по който -syn навлиза в лизозомата, се предполага, че той бързо се разгражда от "синуклеиназа" при нормални условия. В допаминергичните неврони има динамично равновесие между различните конформационни форми и олигомерни състояния на -syn протеина, което се модулира от фактори, които могат да ускорят или инхибират агрегацията и образуването на фибрили [46]. Идентифицирането и характеризирането на токсичните -syn видове все още са непълни и много изследвания са фокусирани върху различни състояния на протеинова агрегация.

Тези проучвания се опитват да определят дали токсичните видове съответстват на неразтворимите фибриларни протеини, открити главно в LBs или, обратно, на пре-фибриларните протеинови олигомери или протофибрили. Има все повече доказателства in vivo и in vitro, че олигомерните видове са най-патологично релевантните изоформи [47,48] и дори се предполага, че LB могат да бъдат защитни, представляващи форма на агресома. При физиологични обстоятелства -syn е активен в синапсите и участва в процеси като образуването, трафика и свързването на синаптичните везикули (SV). Също така се свързва с рециклирането на SVs и съхранението на допамин.

Фосфорилирането и дефосфорилирането на -syn задвижват активирането и дезактивирането на този протеин, който също се контролира от лизозомна аутофагия и разграждане на протеазома, задвижвано от убиквитинилиране [49]. При патологични състояния, провокирани от различни стимули, -syn претърпява неправилно сгъване, мутация или фосфорилиране, което води до неговата агрегация, засягайки образуването и свързването на лизозомни везикули, без да произвежда лизозомна аутофагия, и водещо до отлагането му в допаминергичните неврони, образуването на LBs и апоптоза [49]. Представените тук резултати показват, че сред протеините, дерегулирани в слъзната течност на пациенти с PD, както пациенти с iPD, така и носители на мутацията E46K-SNCA, има два протеина, свързани с лизозомна аутофагия: CATD и ASAH1. CATD е важна лизозомна аспартил протеаза и, което е интересно, дефицитът на CATD и неговото ензимно инактивиране при хора води до ранна поява на прогресивна и евентуално фатална невродегенерация, която се класифицира като един от няколкото синдрома на невронална цероидна липофусциноза (NCL) [50,51]. ]. In vitro, CATD произвежда частична протеолиза на рекомбинантен -syn [52] и способността на CATD да регулира -syn е оценена в див тип и мутантни допаминергични клетки в култура.

Освен това, мозъците на няколко CATD-дефицитни бозайници с NCL са изследвани, за да се оцени ендогенната -syn обработка и, следователно, се заключава, че ензимната активност на CATD играе важна роля в метаболизма на -syn. Протеинът ASAH1 е лизозомален ензим, който превръща лизозомния церамид в сфингозин. Инхибирането на ASAH1 повишава нивата на керамид, като също така намалява количеството на окисления -syn и този на убиквитинилирания протеин в допаминергичните неврони, получени от пациенти с PD. Намаляването на нивата на керамид поради повишена активност на ASAH1 може да допринесе за натрупването на вътреклетъчен -syn, тъй като променя лизозомната аутофагия, вероятно инхибирайки освобождаването на -syn към извънклетъчното пространство.

DYHC1 и LMNA са два други подходящи протеина, дерегулирани в сълзите на пациенти с PD. DYHC1 е протеин, участващ в движението на органелите в клетката и ретрограден транспорт в аксоните. Сред другите невродегенеративни заболявания, той е замесен в AD и PD. Промените в DYHC1 причиняват лош транспорт до нормалното му синаптично местоположение и лош протеинов клирънс, като този на лизозомната протеаза катепсин D [53]. Тази предложена последователност от събития би генерирала автокаталитична спирала, в която процесите, които водят до инхибиране на аксоналния транспорт и производството на фосфорилиран -syn, стават взаимно стимулиращи, осигурявайки рационално обяснение за ранната синаптична загуба в стриатума на пациенти с PD. И накрая, свръхекспресията на протеина LMNA в разкъсването на PD е замесена в демиелинизацията, но до момента това не е свързано с PD [54].

Това обаче е маршрут, който заслужава да бъде разгледан в бъдещи проучвания. Това проучване има някои ограничения, като малкия брой включени пациенти, така че трябва да се счита за пилотно проучване и това трябва да се вземе предвид при интерпретирането на резултатите. В допълнение, би било необходимо да се валидират кандидат протеините, не само в по-голяма кохорта, но и за да се провери дали се появяват в други телесни течности (т.е. кръв или цереброспинална течност). Също така е важно да се има предвид, че възможните механизми, предложени в тази статия, са само хипотези, които трябва да бъдат проверени в по-нататъшни проучвания. В допълнение, трябва да се отбележи, че тъй като търсенията в базата данни са взели предвид каноничните протеинови последователности, не е получена информация за протеоформите. Въпреки че това може да представлява ограничение в специфичността на резултатите, ние вярваме, че информацията, получена на ниво канонична последователност, все още е от голяма стойност и предоставя ценна представа за молекулярните характеристики на болестта.

Възможността обаче определена протеоформа(и) да е отговорна за анотираните резултати трябва да се има предвид при интерпретирането на данните.

5. Изводи

В това пилотно проучване протеомният анализ разкрива, че определени протеини са регулирани нагоре в сълзите на пациенти с PD, главно тези, които участват в лизозомната функция. Значението на това проучване при идентифицирането на протеини в разкъсването, участващи в невродегенерацията, трябва да се подчертае като тяхната връзка с пациенти с PD с фенотип на агресивно заболяване. Тъй като това е пилотно проучване, са изследвани само ограничен брой пациенти. Ограничение на проучването е разликата във възрастта между контролната група и групата с PD. Анализът с проби от сълзи при здрави индивиди без очни патологии е сложен, тъй като на определена възраст е трудно да се намерят доброволци без промени в слъзния филм. Бъдещите опити с по-големи кохорти пациенти ще ни позволят да идентифицираме специфични биомаркери за PD, които в идеалния случай биха помогнали да се предвиди началото на това заболяване.

Въпреки това, ние предоставяме доказателства тук, че протеомът на отделните пациенти може да бъде анализиран с помощта само на ограничено количество сълзи. С добро обучение, най-добрият начин за извличане на сълзи за протеомични изследвания е използването на стъклена капилярка, като по този начин се избягва клетъчното замърсяване, което може да възникне, когато се използват лентите на Ширмер. В бъдещи проучвания се надяваме да потвърдим представените тук резултати и да идентифицираме ендофенотипове на PD чрез протеомния профил на разкъсване, което може да послужи за постигане на ранна диагностика на PD.

Препратки

1 George, JM Синуклеините. Genome Biol. 2001, 3, 1–6. [CrossRef]

2. Love, S. Невропатологично изследване на деменция: Ръководство за невролози. J. Neurol. Неврохирург. Психиатрия 2005, 76 (Допълнение 5), v8–v14. [CrossRef]

3. Спилантини, MG; Schmidt, ML; Lee, VM-Y.; Трояновски, JQ; Джейкс, Р.; Goedert, M. - Синуклеин в тела на Lewy. Nature 1997, 388, 839–840. [CrossRef]

4. Атик, А.; Стюарт, Т.; Zhang, J. Алфа-синуклеин като биомаркер за болестта на Паркинсон. Мозъчен патол. 2016, 26, 410–418. [CrossRef] [PubMed]

5. Сатаке, В.; Nakabayashi, Y.; Мизута, И.; Хирота, Й.; Ito, C.; Кубо, М.; Кавагучи, Т.; Цунода, Т.; Уатанабе, М.; Такеда, А.; et al. Изследването на асоциациите в целия геном идентифицира общи варианти в четири локуса като генетични рискови фактори за болестта на Паркинсон. Нац. Женет. 2009, 41, 1303–1307. [CrossRef] [PubMed]

6. Полимеропулос, MH; Хигинс, JJ; Голбе, LI; Джонсън, WG; Иде, SE; Ди Йорио, Г.; Sanges, G.; Stenroos, ES; Pho, LT; Schaffer, AA; et al. Картиране на ген за болестта на Паркинсон към хромозома 4q21-q23. Наука 1996, 274, 1197–1199. [CrossRef] [PubMed]

7. Заранц, Джей Джей; Alegre, J.; Gomez-Esteban, JC; Лескано, Е.; Рос, Р.; Ампуеро, И.; Видал, Л.; Hoenicka, J.; Родригес, О.; Атарес, Б.; et al. Новата мутация, E46K, на -синуклеин причинява деменция на Паркинсон и телца на Леви. Ан. неврол. 2003, 55, 164–173. [CrossRef]

8. Арчибалд, Н.К.; Кларк, MP; Mosimann, UP; Burn, DJ Визуални симптоми при болестта на Паркинсон и деменция от болестта на Паркинсон. Мов. Разстройство. 2011, 26, 2387–2395. [CrossRef] [PubMed]

9. Сафранов, К.; Nowacka, B.; Lubi´nski, W.; Хончаренко, К.; Potemkowski, A. Офталмологични характеристики на болестта на Паркинсон. Med Sci. Монит. 2014, 20, 2243–2249. [CrossRef] [PubMed]

10. Чеснокова, Н.Б.; Павленко, Т.А.; Угрумов, М. В. Офталмологичните нарушения като проява на болестта на Паркинсон. Журнал неврологии и психиатрии имени С. С. Корсакова 2017, 117, 124–131. [CrossRef] [PubMed]

11. Муруета-Гойена, А.; Дел Пино, Р.; Галдос, М.; Арана, Б.; Acera, М.; Carmona-Abellán, M.; Фернандес-Вале, Т.; Tijero, B.; Лукас-Хименес, О.; Охеда, Н.; et al. Дебелината на ретината предсказва риска от когнитивен спад при болестта на Паркинсон. Ан. неврол. 2020 г., 89, 165–176. [CrossRef]

12. Накахара, Т.; Мори, А.; Kurauchi, Y.; Сакамото, К.; Ishii, K. Невроваскуларни взаимодействия в ретината: физиологични и патологични роли. J. Pharmacol. Sci. 2013, 123, 79–84.3. [CrossRef]

13. Лопатина, Е.В.; Penniyaynen, VA; Tsyrline, VA Влияние на норепинефрин и селективни 1 -адренорецепторни блокери върху растежа на експлантите на ретиналната тъкан. Бик. Exp. Biol. Med. 2012, 153, 48–50. [CrossRef] [PubMed]

14. Bowd, C.; Zangwill, LM; Weinreb, RN; Гиркин, Калифорния; Фазио, Масачузетс; Liebmann, JM; Belghith, A. Расови различия в скоростта на промяна на оптичната кохерентна томография на спектралния домейн – измерена минимална ширина на ръба и дебелина на слоя на нервните влакна на ретината. Am. J. Ophthalmol. 2018, 196, 154–164. [CrossRef] [PubMed] 15. Wisniewski, JR; Zougman, A.; Нагарадж, Н.; Mann, M. Универсален метод за подготовка на проби за анализ на протеоми. Нац. Методи 2009, 6, 359–362. [CrossRef]

16. Майер, Ф.; Geyer, PE; Зима, С.В.; Кокс, Дж.; Mann, M. Методът за придобиване на BoxCar позволява еднократна протеомика на дълбочина от 10 000 протеина за 100 минути. Нац. Методи 2018, 15, 440–448.3. [CrossRef] [PubMed]

17. Тянова, С.; Тему, Т.; Sinitcyn, P.; Карлсън, А.; Хайн, MY; Geiger, T.; Ман, М.; Кокс, Дж. Изчислителната платформа на Персей за цялостен анализ на (проте)омични данни. Нац. Методи 2016, 13, 731–740. [CrossRef] [PubMed]

18. Перес-Риверол, Й.; Csordas, A.; Bai, J.; Bernal-Llinares, M.; Hewapathirana, S.; Кунду, DJ; Инуганти, А.; Griss, J.; Mayer, G.; Айзенахер, М.; et al. Базата данни PRIDE и свързаните с нея инструменти и ресурси през 2019 г.: Подобряване на поддръжката за количествени данни. Nucleic Acids Res. 2019, 47, D442–D450. [CrossRef]

19. Бургер, М.; Funke, S.; Леха, А.; Roser, A.-E.; Wuestemann, A.-K.; Маас, Ф.; Bähr, M.; Grus, F.; Lingor, P. Протеомичен анализ на слъзната течност разкрива специфични за заболяването модели при пациенти с болестта на Паркинсон - пилотно проучване. Паркирайте. отн. Разстройство. 2019, 63, 3–9. [CrossRef]

20. Арлехамн, CSL; Гарети, Ф.; Sulzer, D.; Sette, A. Роли за адаптивната имунна система при болестите на Паркинсон и Алцхаймер. Curr. мнение Immunol. 2019, 59, 115–120. [CrossRef]

21. Sulzer, D.; Surmeier, DJ Невронна уязвимост, патогенеза и болестта на Паркинсон. Мов. Разстройство. 2013, 28, 715–724. [CrossRef]

22. Мартин, TA; Мансел, RE; Jiang, WG Антагонистичен ефект на NK4 върху индуцирани от HGF/SF промени в трансендотелната резистентност (TER) и парацелуларната пропускливост на човешки съдови ендотелни клетки. J. Cell. Physiol. 2002, 192, 268–275. [CrossRef]

23. Zlokovic, BV Кръвно-мозъчната бариера в здравето и хроничните невродегенеративни разстройства. Neuron 2008, 57, 178–201. [CrossRef]

24. Фън, С.; Cen, J.; Huang, Y.; Шен, Х.; Яо, Л.; Wang, Y.; Chen, Z. Matrix Metalloproteinase-2 и -9, секретирани от левкемични клетки, повишават пропускливостта на кръвно-мозъчната бариера чрез разрушаване на протеини с плътна връзка. PLoS ONE 2011, 6, e20599. [CrossRef]

25. Гу, Й.; Zheng, G.-Q.; Xu, M.; Li, Y.; Чен, X.; Zhu, W.; Тонг, Й.; Chung, SK; Liu, KJ; Shen, J. Caveolin -1 регулира активността на медиираната от азотен оксид матрична металопротеиназа и пропускливостта на кръвно-мозъчната бариера при фокална церебрална исхемия и реперфузионно увреждане. J. Neurochem. 2011, 120, 147–156. [CrossRef] [PubMed]

26. Янг, Й.; Естрада, EY; Томпсън, JF; Liu, W.; Rosenberg, GA Матрична металопротеиназа-медиирано разрушаване на плътни свързващи протеини в церебрални съдове се обръща от синтетичен матричен металопротеиназен инхибитор при фокална исхемия при плъх. J. Cereb. Метаб на кръвния поток. 2007, 27, 697–709. [CrossRef] [PubMed]

27. Лоренцъл, С.; Алберс, DS; Narr, S.; Chirichigno, J.; Beal, M. Експресия на MMP-2, MMP-9 и MMP-1 и техните ендогенни контрарегулатори TIMP-1 и TIMP-2 в постмортална мозъчна тъкан на Паркинсон болест. Exp. неврол. 2002, 178, 13–20. [CrossRef] [PubMed]

28. Ким, ST; Ким, Е.-М.; Чой, JH; Син, HJ; Ji, IJ; Джо, TH; Chung, SJ; Hwang, O. Матричната металопротеиназа -3 допринася за уязвимостта на черните допаминергични неврони. Neurochem. Вътр. 2010, 56, 161–167. [CrossRef]

29. Асера, А.; Vecino, E.; Duran, JA Tear MMP-9 Нива като маркер за възпаление на очната повърхност при конюнктивохалаза. разследване. Opthalmol. Vis. Sci. 2013, 54, 8285–8291. [CrossRef]

30. Recalde, JI; Дюран, JA; Родригес-Агирече, И.; Сория, J.; Санчес-Тена, MA; Перейро, X.; Суарес, Т.; Acera, A. Промени в нивата на биомаркера на разкъсване при кератоконус след омрежване на колаген на роговицата. Mol. Vis. 2019, 25, 12–21. [PubMed]

31. Декстър, DT; Картър, Си Джей; Уелс, Франция; Javoy-Agid, F.; Agid, Y.; Лийс, А.; Jenner, P.; Marsden, CD Основната липидна пероксидация в субстанция нигра се увеличава при болестта на Паркинсон. J. Neurochem. 1989, 52, 381–389. [CrossRef] [PubMed]

32. Хуанг, X.; Abbott, RD; Петрович, Х.; Пощальон, Р.Б.; Ross, GW Нисък LDL холестерол и повишен риск от болестта на Паркинсон: Проспективни резултати от проучване на стареенето в Хонолулу-Азия. Мов. Разстройство. 2008, 23, 1013–1018. [CrossRef] [PubMed]

33. Хуанг, X.; Алонсо, А.; Гуо, X.; Umbach, DM; Лихтенщайн, ML; Ballantyne, CM; Пощальон, Р.; Мозли, TH; Chen, H. Статини, плазмен холестерол и риск от болестта на Паркинсон: Проспективно проучване. Мов. Разстройство. 2015, 30, 552–559. [CrossRef]

34. Ма, ВР; Гуревич, Т.; Giladi, N.; Ел-Ад, Б.; Tsamir, J.; Хемо, Б.; Peretz, C. По-висок серумен холестерол и намален риск от болестта на Паркинсон: Кохортно проучване без статини. Мов. Разстройство. 2018, 33, 1298–1305.

35. Джан, Л.; Уанг, X.; Уанг, М.; Стърлинг, NW; Du, G.; Луис, ММ; Яо, Т.; Пощальон, Р.Б.; Ли, Р.; Huang, X. Нивата на циркулиращия холестерол могат да се свържат с факторите, влияещи върху риска от Паркинсон. Отпред. неврол. 2017, 8, 501. [CrossRef]

36. Тамам, Й.; Тасдемир, Н.; Ялман, М.; Tamam, B. Асоциация на аполипопротеин Е генотипове с прогноза при множествена склероза. Евро. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 2011, 15, 1122–1130.

37. Понсфорд, Дж.; Макларън, А.; Шьонбергер, М.; Бърк, Р.; Рудзки, Д.; Olver, J.; Понсфорд, М. Асоциацията между аполипопротеин Е и тежестта на травматичното мозъчно увреждане и функционалния резултат в проба за рехабилитация. J. Neurotrauma 2011, 28, 1683–1692. [CrossRef]

38. Амуел, П.; Френска изследователска група по епидемиология на човешки спонгиформни енцефалопатии; Видал, О.; Laplanche, J.-L.; Launay, J. Алелите на аполипопротеин Е като основни фактори на чувствителност към болестта на Кройцфелд-Якоб. Lancet 1994, 344, 1315–1318. [CrossRef]

39. Koob, AO; Убхи, К.; Paulsson, JF; Кели, Дж.; Rockenstein, E.; Манте, М.; Adame, A.; Masliah, E. Lovastatin подобрява натрупването и окисляването на синуклеин в трансгенни миши модели на -синуклеинопатии. Exp. неврол. 2010, 221, 267–274. [CrossRef]

40. Хаяши, Х.; Кампено, РБ; Ванс, Делавер; Vance, JE Apolipoprotein E-съдържащи липопротеини защитават невроните от апоптоза чрез сигнален път, включващ свързан с липопротеиновия рецептор протеин с ниска плътност-1. J. Neurosci. 2007, 27, 1933–1941. [CrossRef]

41. Наваро, А.; Мендес, Е.; Diaz, C.; дел Вале, Е.; Martinez-Pinilla, E.; Ordonez, C.; Tolivia, J. Експресия през целия живот на аполипопротеин D в човешкия мозъчен ствол: корелация с намалена невродегенерация, свързана с възрастта. PLoS ONE 2013, 8, e77852. [CrossRef] [PubMed]

42. Елиът, Да; Weickert, CS; Гарнър, Б. Аполипопротеини в мозъка: Последици за неврологични и психиатрични разстройства. Clin. Липидол. 2010, 5, 555–573. [CrossRef] [PubMed]

43. Лерой, Е.; Анастасопулос, Д.; Конициотис, С.; Lavedan, C.; Polymeropoulos, MH Делеции в гена на Parkin и генетична хетерогенност в гръцко семейство с ранно начало на болестта на Паркинсон. тананикам Женет. 1998, 103, 424–427. [CrossRef] [PubMed]

44. Шин, Й.; Klucken, J.; Патерсън, С.; Hyman, BT; McLean, PJ Ко-шаперонният карбоксилен край на Hsp70-взаимодействащ протеин (CHIP) медиира решенията за разграждане на алфа-синуклеин между протеазомните и лизозомните пътища. J. Biol. Chem. 2005, 280, 23727–23734. [CrossRef] [PubMed]

45. Webb, JL; Равикумар, Б.; Atkins, J.; Skepper, JN; Rubinsztein, DC Алфа-синуклеинът се разгражда както от автофагия, така и от протеазома. J. Biol. Chem. 2003, 278, 25009–25013. [CrossRef]

46. ​​Dehay, B.; Бурденкс, М.; Гори, П.; Пшедборски, С.; Вила, М.; Hunot, S.; Сингълтън, А.; Olanow, CW; Търговец, К.М.; Bezard, E.; et al. Насочване към алфа-синуклеин за лечение на болестта на Паркинсон: Механични и терапевтични съображения. Lancet Neurol. 2015, 14, 855–866. [CrossRef] 47. Bengoa-Vergniory, N.; Робъртс, RF; Уейд-Мартинс, Р.; Alegre-Abarrategui, J. Алфа-синуклеинови олигомери: Нова надежда. Acta Neuropathol. 2017, 134, 819–838. [CrossRef]

48. Рокенщайн, Е.; Нубер, С.; Overk, CR; Убхи, К.; Манте, М.; Патрик, C.; Adame, A.; Trejo-Morales, M.; Gerez, J.; Picotti, P.; et al. Натрупването на склонен към олигомер алфа-синуклеин изостря синаптичната и невронална дегенерация in vivo. Мозък 2014, 137, 1496–1513. [CrossRef]

49. Дата, И.; Ганапати, К.; Раздан, Р.; Bhonde, R. Местоположението и броят на астроцитите определят преживяемостта и функцията на допаминергичните неврони при 6-OHDA стрес, медииран чрез диференциално освобождаване на BDNF. Mol. Neurobiol. 2017, 55, 5505–5525. [CrossRef]

50. Партанен, С.; Haapanen, A.; Kielar, C.; Pontikis, C.; Александър, Н.; Инкинен, Т.; Saftig, P.; Gillingwater, TH; Купър, JD; Tyynela, J. Синаптични промени в таламокортикалната система на мишки с дефицит на катепсин D: Модел на човешка вродена невронална цероид-липофусциноза. J. Neuropathol. Exp. неврол. 2008, 67, 16–29. [CrossRef]

51. Сиинтола, Е.; Партанен, С.; Stromme, P.; Haapanen, A.; Халтия, М.; Maehlen, J.; Lehesjoki, AE; Tyynela, J. Дефицитът на катепсин D е в основата на вродената човешка невронална цероид-липофусциноза. Мозък 2006, 129, 1438–1445. [CrossRef] [PubMed]

52. Кълън, В.; Линдфорс, М.; Ng, J.; Паетау, А.; Суинтън, Е.; Kolodziej, P.; Бостън, Х.; Saftig, P.; Woulfe, J.; Feany, MB; et al. Нивото на експресия на катепсин D влияе върху обработката, агрегацията и токсичността на алфа-синуклеин in vivo. Mol. Brain 2009, 2, 5. [CrossRef] [PubMed]

53. Чу, Дж.; Томас, LM; Watkins, SC; Franchi, L.; Nunez, G.; Salter, RD Холестерол-зависимите цитолизини индуцират бързото освобождаване на зрял IL-1бета от миши макрофаги по NLRP3 инфламазома и катепсин B-зависим начин. J. Leukoc. Biol. 2009, 86, 1227–1238. [CrossRef]

54. Padiath, QS; Fu, YH Автозомно доминантна левкодистрофия, причинена от дублиране на ламин B1, клинично и молекулярно проучване на променена ядрена функция и заболяване. Методи Cell Biol. 2010, 98, 337–357.

за повече информация:ali.ma@wecistanche.com