Изследване на ефекта на Cistanche върху свободните радикали

За повече информация:Ali.ma@wecistanche.com

Втора облачна гора An Old Zhang Hongjing

Понастоящем се смята, че намаляването на имунната функция на машината е свързано със стареенето. Въз основа на проучването, коетоЦистанчеможе да подобри хуморалните и клетъчните имунни функции на мишки и да се бори срещу модела на стареене, причинен от d-галактоза, ние допълнително проучихме ефекта на лекарството върху мишки. Вдишване на озон<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">свободни радикалив тялото. Степента на експресия на хемилуминесценция на мишките в групата на лекарството се увеличава, SOD Повишена жизненост "Съдържанието на липидни пероксиди в плазмата, коленичещите и бедрените тъкани и MAOB жизнеността на коридорните тъкани намалява; има връзка доза-ефект между различните дозови групи. Анти -ефектът на стареене на мишки срещу подостро стареене е в съответствие с изследването наЦистанчеподобряване на имунната функция при мишки.Цистанчеможе да подобри имунната функция, да подобри антистрес способността на организма и е подходящо да получи или индиректно да елиминира увреждането насвободни радикаликъм тялото. , Потискат жизнеността на 1WMAO-B. Така че да се постигне ефект на забавяне на стареенето. Този експеримент осигурява експерименталната основа за прилагането наЦистанчепротив стареене и лечение на някои старчески заболявания.

Click to cistanche ползи и странични ефекти за свободните радикали

1 Материал и методи

1.1 Материал

1.1.1 Лекарство и реактиви:Цистанчеdeserticola YC Ma се отварява във вода 3 пъти, отварите се смесват, концентрират се до подходящ обем и се добавя определено количество етанол. След като престои 24 часа се прецежда. Филтратът се изпарява до липса на алкохол. Пригответе с вода на пара, преди да използвате 0.25 процента ~0.5 процента концентрация. ml съдържа сурови лекарства около lg). Luminol (luminol), ®National E Merck company products Huang Howling Oxidation 88 (HO), Hypochromatic Howling (HX), стандартен тетра етокси пропан, всички са Sigma Продуктът на компанията, сол, бензалконий, Changzhou Guangming Biochemical Research Institute; циклохексан, продукт от Shanghai Reagent No. 1; Тиобарбитурова киселина, продукт от Shanghai Reagent No. 2, LuzhanСупероксидДисмутаза, Китайска академия на науките в Шанхай Продукти на Института по биохимични продукти.

Цистанче

1.1. 2 Инструмент Beckman LS-98OO33 само течно сцинтилационно броене, Shimadzu RF-540 флуоресцентен спектрофотометър, 752 ултравиолетови решетки спектрофотометър-G1-20Високоскоростна хладилна центрофуга, CPS-1A ултразвуков пулверизатор.

1.1.3 Животински ICR мишки, на възраст 2 месеца, с тегло 20±2 g, предоставени от Jiangsu Experimental Animal Center.

1.2 метод

Мишките бяха разделени на контролна (не влизат в Q среда), моделна и медикаментозна група, всяка с 10 мишки, които ядат бързо вода без ограничения. Лекарствената група беше разделена на две дозови групи, том 2, брой 7, 1994 г., китайски вестник на китайската материя медикаЦистанчеекстракт 100 и 200 mg/kg (еквивалент на сурови лекарства 20 и 4Qg/kg) бяха хранени съответно. Контролната група и моделната група получават равен обем нормален физиологичен разтвор всеки ден. Групата за администриране и моделната група получиха О, среда (0.9 X 10-^Oaft степен), непрекъснато 2. Ден. Тестът на всяко разтягане на пръста беше извършен на 21-ия ден от експеримента.

1. 2.1 Тест за издръжливост Поставете мишките във всяка от горните групи във вода с дълбочина 40 cm и 12±l. В контейнера с Water®L започнете да измервате времето, докато потъне на дъното и не се движи, което е времето за плуване на мишките.

   
   

1.2.2 Тест за устойчивост на топлина Мишката първо се настройва на 15. Плувайте във водата за 2 минути и след това влезте във фризер 15P, за да наблюдавате пълното време на замразяване.

1.2.3 Тест за поносимост към атмосферна хипоксия Поставете малкия глутен в бутилка с широко гърло от 250 ml, пълна с натриев вар и запишете времето за оцеляване на мишките във всяка група след запечатване.

1.2.4 Определяне на мозъчен тип В моноаминооксидаза (MACXB) Според литературния орален метод, вземете целия мозък на мишка, добавете подходящо количество предварително охладен 0.2mol/L фосфатен буфер (PH7.4 ), хомогенизирайте и ултразвук (24kC) Смачкайте 3 пъти, общо два пъти, с интервал от 30sr1000r/min, 0C за 30 минути, вземете супернатанта при 17000r/min, 4°C за 30 минути, изхвърлете супернатанта и вземете утайката и използвайте подходящо количество. .2mo(/L PH7.4) Киселината се буферира и ресуспендира, за да се получи суров ферментационен разтвор. Вземете подходящо количество суров ферментационен разтвор, добавете 16 mmol/L бензамидин 0,3 ml, използвайте горния фосфатен буфер, за да направите 3 ml, и използвайте варел с фосфорна киселина, 3 ml буферен разтвор се използва като празна епруветка. Всички епруветки се поставят при 37. Разклатете на водна баня в продължение на 3 часа, извадете я, добавете 6 процента перокси киселина, за да прекратите реакцията, след това добавете 3m [циклохексан, разклатете за смесване, центрофугирайте при 1000r/min за 1 Omin, и го вземете. Абсорбцията на бистрия разтвор се измерва при 242 nm и празната епруветка трябва да се поддържа топла, преди да се добави китайски амин. Мътността на протеина се определя по метода на Фолин-фенол, като стандартният протеин е телешки серумен албумин. Една единица ензимна активност и една единица ензимна активност се определят като 37P произвежда количеството ензим с промяна в абсорбцията от 0,01/3h.'

1. 2. 5 Серумсупероксиддисмутаза(SOD) определяне на активността (5 muI, миши серум 10M, добавен към луминесцентната смес (смесена с 0, 1 mmol/L луминол и 0,1 mmol/L хипоксантин) В 980", съхраняване в инкубатор при 37°C за 20 минути.След като го извадите, добавете Huang Guanyin oxidase, за да започне реакцията.В течната светкавична среда Beckman LS~98OO броят на луминесценцията в края на 1 минута се изчислява въз основа на степента на еднофотонно откриване. Com се използва като единица. Степента на инхибиране на луминесценцията се изчислява с по-ниската серумна група като празна. В допълнение, стандартътсупероксиддисмутацияконцентрацията (абсцисата) и скоростта на инхибиране на луминесценцията (координата) се използват като стандартно определяне на протеиновото съдържание, както преди. 1. 2.6 Определяне на липиден пероксид (LPO) в плазма, мозък и черен дроб ④ Вземете 50 кутии миша плазма, хомогенизирайте черния дроб и мозъка (използвайте 0.2mol/L фосфатен буфер pH7,4 , в хомогенизатор Направено в 10 процентна концентрация) на всеки 50 предци, добавете l/24mol/L сярна киселина 4ml, 1% фосфорна киселина 0,5ml, смесени и поставени за 5 минути, центрофугирани при 1000r/mm за 10 минути, и аспирира супернатантата. Добавете 2 ml l/24 mol/L сярна киселина и 0,3 ml 10 процента калциев фосфат към утайката, разбъркайте добре, центрофугирайте при 1000 r/min и добавете 1 ml резистентна страхлива вода към утайката, разбъркайте добре, за да образувате суспензия, добавете счупен реагент барбитална киселина 1 ml, при 95. След охлаждане за 14°С в маслена баня, добавете 5 ml n-бутанол, разбъркайте добре *100Or/min центрофугиране 10mtn, вземете n-бутаноловата фаза и измерете интензитета на флуоресценция на RF{{ 33}}OS спектрофотометър (дължина на вълната на възбуждане 515 mn, дължина на емисия 553 nm), в допълнение използвайте стандартен тетра етокси пропан и относителен интензитет на флуоресценция като стандартна крива.

   
   

2. 

2 резултата

2.1 Въздействието върху теста за издръжливост на мишки, увредени от свободни радикали

Времето за плуване на мишки в моделната група беше значително по-кратко от това на контролната група, докато времето за плуване на групата на администриране продължи по-дълго, а групата с висока доза беше подобна на контролната група (Таблица 1).

Таблица 1: Ефектът отЦистанчепри тест за издръжливост при плуване на модел на мишка с нараняване в свободна гробница

2.2 Влияние върху способността за поддържане на топлина

Мишките в моделната група замръзват бързо при ниски температури и времето е по-кратко от това на контролната група, докато времето на замразяване на групите с две дози отЦистанчее не само по-дълъг от моделната група, но и по-дълъг от контролната група, което показва, чеЦистанчене само има ефект на увреждане от свободните радикали, но има и очевидни ефекти. Увеличете способността за запазване на топлината от студа (Таблица 2).

Таблица 2: Ефектът отЦистанчевърху способността на Senhan при мишки модел на свободно добро нараняване

2.3 Влияние върху способността за издържане на хипоксия при атмосферно налягане

След прилагане наЦистанче, мишките оцеляват при нормално налягане и хипоксия.ЦистанчеЕфектът върху способността на мишия модел Senhan със свободни наранявания е значително по-дълъг от този на моделната група и също по-висок от този на контролната група, което показва, чеЦистанчеможе да увеличи толерантността на мишките към хипоксия. Сила (Таблица 3)

Таблица 3:Цистанче's миши модел на увреждане от свободните радикали

2.4 Въздействие върху жизнеността на MAO-B

След вдишване на O, активността на MAO-B в мозъчната тъкан на моделната група е значително по-висока от тази на другата група и повишаването на активността на MAO-B на групата на приложение е значително инхибирано

Таблица 4: Ефектът отЦистанчевърху активността на 1SB тип моноаминооксидна лоза (MAO~B) в модел на мишка с нараняване в свободна гробница

2. 5 Въздействие върху жизнеността на SOD

Степента на инхибиране на хемилуминесценцията на серума в моделната група беше значително по-ниска от тази на другите групи и активността на SOD беше значително намалена. Активността на SOD на лекарствената група беше значително повишена, а групата с висока доза беше по-висока от тази на контролната група (вижте таблица 5 по-долу)

Таблица 5: Моделен серумсупероксидактивността на дисмутазата (SOD) е най-силна2.6 Ефект върху съдържанието на липиден пероксид (ZLPO)

2.6 Съдържанието на липиден пероксид (LFO) в плазмата, черния дроб и мозъчната тъкан на моделната група е значително повишено, а съдържанието на LPO е значително намалено след прилагане. Групата с голяма доза и доза е намалила LPO в мозъчната тъкан до нивото на контролната група (Таблица 6).

Таблица 6: Ефектът на месото Axun върху нивата на плазмата, черния дроб и липидния пероксид (LPO) в миши модел на увреждане от свободните радикали

3 Дискусия

Стареенето е положително явление в процеса на живот. Традиционната медицина на родината е натрупала богат опит и лечебни източници в годините против стареене. През последните години местните учени се фокусираха върху намирането на ефективни лекарства против стареене от традиционната китайска медицина. В момента все повече се разглежда теорията за свободните радикали за стареенето на тялото. Макар чесвободни радикалисе генерират в тялото при нормални условия, тъканните клетки са защитени поради непрекъснатото отстраняване на SOD и други ензимни системи против кислородна токсичност. Oa е силен окислител. , Може да започне реакцията на свободните радикали в тялото. Прекомерното вдишване на кислород причинява генериране насвободни радикалив тялото, което надвишава способността за почистване на анти-толерантната стела система на тялото, причинявайки увреждане на нуклеинови киселини, протеини, аминокиселини, въглехидрати и липидни съединения, като по този начин уврежда образуването и функцията на клетките и води до стареене ⑶. Този експеримент показва, че след вдишване на кислород7 физическата сила на мишките, способността да се затоплят и толерантността към хипоксия са намалени, подобно на изпълнението на физиологичния спад на функциите на старите животни. Това показва, че младите мишки могат да причинят модел на стареене след получаване на d стимулация.Цистанчезначително подобри промените в горните показатели.

Супероксидсвободни радикалисъществуват в тялото за кратко време и се елиминират главно чрез SOD. Обикновено нивото на или се отразява чрез измерване на активността на SOD. Различните антиоксиданти в тялото на естествено стареещите мишки и мишките, увредени от свободните радикали, са намалени. Активността на копката намалява, като по този начин се намалява способността за изчистванесвободни радикали, което води до повишаване на съдържанието на липидни пероксиди. Активността на моноаминооксидазата тип B (MA0-B) в мозъка нараства с възрастта. MAOB е основният контрол на стареещия биологичен часовник в централния хипоталамус Часовниковият механизъм е тясно свързан със стареенето. ⑴. Активността на MA0-B в мозъците на мишки в тази експериментална моделна група е повишена, показвайки биохимични промени, съответстващи на тези на стареещите животни.