Изследване на полизахаридите Cistanche, извличащи свободните радикали

За повече информация:ali.ma@wecistanche.com

Wang Guowei Zhao Fang

(Училище по химия и химическо инженерство, Shihezi University, Beisi Road, Shihezi City, Xinjiang 832000)

Ключови думи: Cistanche; Cistanche полизахарид,полизахаридот цистанче; свободен радикал

Тялото непрекъснато произвежда различни реактивни кислородни радикали (ROS) в процеса на окислителен метаболизъм на жизнените дейности, които са междинни продукти, произведени от редокс реакцията на аеробния метаболизъм на човешкото тяло. Проучванията са установили, че излишъкътсвободни радикалище атакува жизнените макромолекулни вещества и различни органели, причинявайки различни увреждания на тялото на молекулярно, клетъчно и тъканно ниво, ускорявайки процеса на стареене на тялото и предизвиквайки кръвни съсиреци, диабет и атеросклероза. , Тумори и други заболявания [1]. Тъй като химически синтезираните антиоксиданти са токсични за човешкото тяло, търсенето на естествени антиоксиданти с висока ефективност и ниска токсичност, които могат да поглъщат свободните кислородни радикали, се превърна в гореща точка в областта на медицината, храните и химическото инженерство през последните години.

Цистанче [Cistanche deserticola (YC Ma.)]най-вече паразитира върху корените на Tamarisk, Nitraria и Haloxylon ammodendron. Това е рядко китайско лекарство в моята страна и е известно като"пустинен женшен"[2]. Полизахаридът Cistanche Cistanche е един от основните биологично функционални активни компоненти нацистанче, но не се съобщава далицистанчен полизахарид има ефект на улавяне на свободните радикали. В тази статия за определяне е използван методът на спектралния анализочистващият ефект на полизахарида Cistanche върху свободните радикали на супероксидния анион, свободните хидроксилни радикали, D PPH радикалите и свободните радикали на синглетния кислород, така чеза оценка на неговата антиоксидантна активност. Използвайте пълноценно този природен ресурс, за да осигурите научна основа.

Кликнете върху стеблото на Cistanche за свободен радикал

Това изследване проучваCistanche полизахаридинвитроантиоксидантдейност. Вземайки аскорбинова киселина като контрола, реакцията, подобна на Fenton, произвежда свободни хидроксилни радикали, автоокислението на допамин произвежда супероксиден анионсвободни радикали, реакцията на натриев хипохлорит и водороден пероксид за получаване на синглетен кислород, дифенил горчиви хидразинови радикали като експериментален модел, използвайки ултравиолетова 2Видима спектрофотометрия и метод за анализ на хемилуминесценция, за първи път за определяне на прочистващия ефект наЦистанче полизахаридe върху свободните радикали на супероксидния анион, свободни хидроксилни радикали, D PPH ·свободни радикали(дифенил хидразино радикали) и синглетен кислород.Резултатите показват, че полизахаридите на Cistanche имат очевидни очистващи ефекти върху гореспоменатите свободни радикали и тези очистващи ефекти са корелирани положително с концентрацията на полизахаридите.

Апаратура и реактиви: UV 22401 ултравиолетово видим спектрофотометър (Shimadzu Corporation, Япония); Lum at LB9507 ултра-чувствителен тръбен луминометър (Berthold Technologies, Германия); R E252CS ротационен изпарител (Shanghai Yarong Biochemical Co., Ltd.) Instrument Factory); HW 2SY електронен съд за водна баня с постоянна температура (Jintan Xinhang Instrument Factory); pH S23C измервател на киселинността (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); D ZF26020 вакуумна сушилня (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.).

Екстракт от цистанчее закупен от Kuitun Medicinal Materials Corporation. Луминол (Luminol, Sigma, САЩ), допамин (Китайски национален институт за контрол на фармацевтични и биологични продукти), FeSO 4, ED TA, витамин C, H 2O 2, NaClO, Na2CO 3, NaHCO 3 и др. Това е домашен аналитичен реагент. Експерименталната вода е йонообменна дестилирана вода.

Theextraction метод наCistanche полизахариди: Вземете 30грцистанче на прахи го поставете в 500mL ерленмайерова колба и накиснете в петролев етер (60-90 градуса), етер и обемна част от 80 процента горещ разтвор на етанол (30 градуса) за 6 часа и остатъкът ще се изпари до сухо. . Филтърният остатък се накисва във вода при съотношение твърдо вещество-течност 1:10 за 24 часа и се нагрява при 30 градуса за екстрахиране 100 минути. След завършване на екстракцията, супернатантата се получава чрез центрофугиране. Супернатантът се концентрира при понижено налягане и след това се утаява чрез добавяне на 3 пъти обема на 95 процента етанол, стои 24 часа при 4 градуса, събира се утайката след центрофугиране и се изсушава под вакуум, за да се получи суровият полизахарид Cistanche cistanche. Претеглете 1,00 g суров полизахарид, разтворете го във вода и разредете в мерителна колба от 50 ml и оставете настрана за тестване.

Тестът на цистанчен полизахарид върху супероксидния свободен радикал (O) очистваща способност: използването на автоокисление на допамин за получаване на супероксиден тест за свободни радикалиcistanche полизахарид върху супероксидно освобождаване на свободни радикалиспособност [3]. Добавете 0.1 mm olöL pH=10.12 към сухата и градуирана епруветка последователно, 3.0mL карбонатен буфер, 3.0mL вода, и 0.5mL разтвор на полизахаридна проба с различни концентрации и го поставете във водна баня от 30 градуса за предварително загряване за 5 минути. Добавете 1.0mL от 2.0mm olöL допамин, предварително загрят на водна баня при 30 градуса, разбъркайте го незабавно, задръжте реакцията при 30 градуса за 5 минути и веднага спрете реакцията с 2 капки 10 molöL HCl. Използвайте буфер като еталон, измерете абсорбцията при 221 nm (Проба A), празната група замества пробата с 0,5 mL вода (A празна проба), а контролната група замества пробата с 0,5 mL аскорбинова киселина. Всяка проба се тества паралелно 3 пъти и се взема нейната средна стойност. Скорост на отстраняване на супероксидни радикали (проценти)=(Празна проба-А) öА празна × 100 процента.

Експеримент върху способността за пречистване на полизахарида Cistanche върху ·OH свободен радикал

Системата EDTA 2Fe (Ê) 2 метиленово синьо 2H 2O 2 беше използвана за тестване на способността наCistanche полизахаридза отстраняване на свободните хидроксилни радикали. Принципът е, че Feton-подобната реакция между ED TA 2Fe(Ê) и водороден пероксид произвежда ·OH радикали, което намалява характерния пик на абсорбция на разтвора на метиленово синьо при 660nm. В серия от 10mL епруветки със запушалки добавете 5 mm oLöL FeSO 4 разтвор 1.{{20}}mL, 5 mm oLöL EDTA разтвор 1,2 mL, 0.{ {29}}3 mol N aH 2 PO 4 2N a2H PO 4 (pH=7.4) буферен разтвор 2,0 ml, 20 mm olöL разтвор на водороден пероксид 1,3 ml, след разклащане добавете 0,2 mm olöL метилен син разтвор 0,7 ml и след това добавете различни концентрации на тестовия разтвор, витамин С 1,0 ml и разредете с вода до 10. 00 ml, след смесване, инкубирайте при 37 градуса за 30 минути, измерете абсорбцията на всеки разтвор при 660 n и заменете разтвора на пробата с вода в празната група. Всяка проба се тества 3 пъти паралелно и се взема средната стойност. Степента на улавяне на ОН радикали (проценти)=[(A 2-A 1) ö(A 0-A 1) × 100 процента. Във формулата: A 0 - стойност на абсорбцията на неповредената тръба; A 1 - стойност на абсорбцията на повредената тръба; Стойност на абсорбция 2 - след добавяне на пробата.

Експериментирайте със способността за пречистване на полизахарида Cistanche върху D PPH свободен радикал

Вземете {{0}}.1 mL разтвор на полизахарид Cistanche deserticola и го добавете към 5.0 mL D PPH · разтвор, разбъркайте бързо и след като престоите 10 минути на стайна температура, измерва се промяната на абсорбцията при дължина на вълната 517 nm [4]. Всяка проба се тества 3 пъти паралелно и се взема средната стойност. Степента на изчистване на пробата от D PPH · (проценти)=1- [(AB) öA 0] × 100 процента.

Във формулата: A 0 - стойност на абсорбция на D PPH без добавяне на проба (1,9 ml D PPH плюс 0.1 ml 50 процента етанол); А - стойност на абсорбцията след реакцията между пробата и D PPH; Б - празно Стойността на абсорбцията на пробата (проба 0.1mL плюс 1.9mL 50 процента етанол).

Тест за поглъщане на синглетен кислород 1O 2 от полизахарид Cistanche

Синглетният кислород (1O 2) се получава чрез химическа реакция между NaClO и H 2O 2 при 37 градуса [5]. Разтворът, използван за определяне на 1O 2 е 100L 2. 8 mm olöL разтвор на NaClO, 400L 5 mm olöL разтвор на NaOH, 300L 10 mm olöL разтвори на H 2O 2, 50L 1 mm olöL разтвор на Luminol. По време на реакцията реакционният разтвор се добавя към разтвора на пробата и хемилуминесцентният анализатор автоматично записва реакционния процес в същото време. Вземете NaClO 2H 2O 2 2N NaOH 2 Luminol като празна контрола. Стартирайте реакцията и добавете реакционния разтвор от резервоара на хемилуминесцентния инструмент към епруветката с пробата според количеството, зададено от програмата. Впоследствие интензитетът на хемилуминесценцията на реакционната смес се записва на записващата хартия на всеки 5 s и всяка проба се измерва паралелно 3 пъти и се взема средната стойност. Процентът на клирънс се изчислява по следната формула: процент на клирънс (проценти)=(контролен светлинен интензитет – примерен светлинен интензитет) ö контролен светлинен интензитет × 100 процента 3.

Почистващият ефект на цистанховите полизахариди върху супероксидните свободни радикали

Химическата природа на супероксидните свободни радикали е активна, което може да накара мастните киселини върху биофилма да произвеждат пероксиди, които от своя страна разрушават клетките [6]. В тази статия допаминовият метод е използван за определяне на способността за пречистване на супероксидните свободни радикали. Вижте фигура 1 заспособността на Cistanche да почиства свободните супероксидни радикали.Резултатите показаха, че:Полизахаридите Cistanche могат да инхибират произведените супероксидни свободни радикаличрез автоокисление на допамин и в рамките на измерената концентрация (0-8m gömL), тя се увеличава с увеличаване на концентрацията, но способността за изчистване е по-ниска от тази на аскорбиновата киселина.

Почистващ ефект на свободния радикал на полизахарид OH супероксид от цистанх

OH супероксидният радикал е един от най-активните свободни от кислород радикали в активния кислород. Той може да реагира с почти всяка биологична макромолекула в живите клетки, което може да доведе до липидна пероксидация на телесните тъкани, полимеризация и деполимеризация на протеини, фрагментация на нуклеинова киселина и т.н. Биохимичният процес предизвиква патология на тъканните клетки, което води до появата на различни заболявания и ускоряване на стареенето на организма [7]. Фигура 2 показва способността за пречистване на полизахаридите от цистанх върху ОН супероксидни свободни радикали. Експерименталните резултати показват товаполизахаридът на Cistanche има добър очистващ ефект върху ·OHсвободни радикали,и се увеличава с увеличаване на концентрацията.

Почистващата способност на полизахарида Cistanche cistanche върху D PPH свободния радикал

D PPH радикал (дифенил-горчив хидразино радикал) е стабилен свободен радикал, който е лилав в органични разтворители и има силна абсорбция близо до 517nm. След добавяне на антиоксиданти, част от свободните радикали ще бъдат елиминирани и абсорбцията ще бъде отслабена, което може да се използва за оценка на антиоксидантната активност на веществото [8]. Способността за пречистване на полизахаридите Cistanche върху D PPH свободните радикали е показана на Фигура 3. Експерименталните резултати показват, че способността за пречистване на полизахарида Cistanche deserticola от D PPH свободните радикали е в положителна корелация с неговата концентрация и способността за пречистване е по-голяма от тази на аскорбинова киселина.

Способността на цистанховите полизахариди да улавят 1O 2 свободни радикали

Синглетният кислород е възбуден молекулярен кислород с активни химични свойства. Тъй като несдвоените електрони имат тенденция да се сдвояват, свободните радикали показват по-активни химични свойства [9]. Фигура 4 показва способността за пречистване на полизахарида Cistanche deserticola върху 1O 2 свободни радикали. Експерименталните резултати показват, че способността наCistanche полизахаридиза отстраняване на синглетния кислород е по-нисък от този на аскорбиновата киселина в диапазона от {{0}}.0m gömL. Когато концентрацията е по-голяма от 4,0m gömL, способността за отстраняване на полизахаридите на Cistanche cistanche е по-голяма от тази на аскорбиновата киселина.

В заключение: чрез различни реактивни безкислородни радикални системи, in vitro антиоксидантната активност на Cistanche полизахарид е изследвана в детайли. Може да се види от експерименталните резултати, че в диапазона на тестовата концентрация екстрактът от полизахарид Cistanche има ефекти на отстраняване на супероксидни свободни радикали O, OH супероксидни свободни радикали, D PPH свободни радикали и 1 O 2 свободни радикали. Ефектите не са същите. Резултатите показват, че полизахаридът Cistanche е ефективен екзогенен естествен антиоксидант, който заслужава по-нататъшни изследвания, разработки и цялостно използване.

препратки

[1] Линг Гуантин. Антиоксидантна храна и здраве [M]. Пекин: Chemical Industry Press, 2004. 1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei и др. Алкална екстракция и химичен анализ на полизахариди на Cistanche deserticola [J]. Земеделие Хранителна наука и технологии, 2008, 2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Автоокисляване на допамин [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997, 21(4): 387-389.

[4] Zhang Zhiqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Изследване на антиоксидантната активност на радикс полизахаридите [J]. Китайска Materia Medica, 2008, 31(2): 268-271.

[5] Ли Хайпин, Джан Шухай, Джан Чуншенг. Изследване на антиоксидантната активност на полизахарид от Pleurotus ostreatus [J]. Изследване и развитие на храните, 2008, 29(4): 56-60.

[6] Мо Джиан. Въведение в биологията на медицинските свободни радикали [M]. Пекин: Народно медицинско издателство, 1989. 21-25.

[7] F Фредерик V L. Свободни радикали [J]. Клинична химия, 1993, 65 (12): 374—377.

[8] M at suda M, N agaham a Y, Sato T et al. DM Y е специфичен ген на DM домейн, необходим за развитието на мъжките в рибата Medaka [J]. Nature, 2002, 30: 559—563.

[9] Kanofsky J R. Производство на синглетен кислород чрез L актопероксидаза [J]. Journal of Biological Chemistry, 1983, 258 (10): 5991—5993.