SLC37A2, молекула, свързана с фосфора, увеличава броя на клетките на гладката мускулатура в калцираната аорта Ⅱ

Резултати

Търсене на кандидат молекули вфосфатно-индуциран калцифициранAoSMC. За търсене на молекули, чиято експресия се увеличава в калцифицирани AoSMC, беше извършен анализ на ДНК микрочипове на около 26 000 гена с помощта на калцифицирани AoSMC и некалцифицирани AoSMC иРНК. Фигура 1 показва HeatMap на различни гени, експресирани между AoSMC, които не са култивирани с 2,6 mM, и тези, култивирани с 2,6 mM P за 12 дни. Общо 3066 гена са се увеличили повече от два пъти при култивирани спрямо некултивирани AoSMC. Гените с повишена експресия са молекули, свързани с образуването на остеобласти, като остеопонтин, периостинов остеобласт-специфичен фактор (POSTN), Wnt3, интерлевкин-6 (IL-6) ирастежен фактор на фибробластите23 (FGF23), както и няколко молекули в суперсемейството на SLC (Таблица 1). Сред тези молекули се фокусирахме върху SLC37A2, за която иРНК се увеличи около 3,1 пъти върху AoSMC, култивиран с 2,6 mM P за 12 дни, в сравнение с AoSMC, който не се култивира с 2,6 mM P. Съобщава се, че SLC37A2 е свързан с регулирането на P, но подробната му функция е неизвестен ефект на възпаление при експресия на SLC37A2.Съдова калцификациясе съобщава, че се насърчава от възпаление, така че ние изследвахме дали SLC37A2 иРНК е засегната от възпалителен отговор. На 24-ия час след лечението с LPS, IL-6 значително се повишава в сравнение с AoSMC, нелекуван с LPS (фиг. 2A). Тези резултати се наблюдават и 72 часа след лечението с LPS. Няма значителни разлики между групите в експресията на SLC37A2mRNA (Фигура 2B).

НАТИСНЕТЕ ТУК, ЗА ДА ВЗЕМЕТЕ НАТУРАЛЕН ОРГАНИЧЕН ЕКСТРАКТ ОТ ЦИСТАНША С 25% ЕХИНАКОЗИД И 9% АКТЕОЗИД ЗА БЪБРЕЧНАТА ФУНКЦИЯ

Поддържаща услуга на Wecistanche-най-големият износител на cistanche в Китай:

Имейл:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/телефон:+86 15292862950

Пазарувайте за повече подробности за спецификациите:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Експресия на SLC37A2 в индуциран от фосфат калцифициран AoSMC. За да определим дали SLC37A2 участва в калцификацията, ние изследвахме експресията на SLC37A2 mRNA върху некалцифициран и калцифициран AoSMC (фиг.3). Калцификация се наблюдава в AoSMC, култивирана с 2,6 mM P в продължение на 6 дни, и по-напреднала калцификация се наблюдава в AoSMC, култивирана с 2,6 mM P в продължение на 12 дни (Фиг. 3A). Runx2 mRNA значително се увеличава при калцифициран AoSMC в сравнение с некалцифициран AoSMC (Фиг. 3B). SLC37A2 mRNA значително започва да се увеличава на ден 3 в калцифициран AoSMC, а на ден 9 калцираният AoSMC значително се увеличава около два пъти в сравнение с некалцифициран AoSMC (Фиг. 3C). Експресията на SLC37A2 протеин се увеличава значително около два пъти на ден 6 в калцифициран AoSMC в сравнение с некалцифициран AoSMC (фиг. 3D).

Експресия на SLC37A2 в плъхове модел на CKD.

За да разкрием дали SLC37A2 участва в съдова калцификация in vivo, ние изследвахме експресията на SLC37A2 mRNA върху съдове на индуцирани от аденин плъхове с ХБН. Индуцирани от аденин CKD плъхове са създадени съгласно протокола, показан на Фиг. 4А. Таблица 2 показва телесно тегло и биохимични данни в деня на умъртвяването. Телесното тегло наиндуцирана от аденин ХБНплъхове е значително по-нисък в сравнение с плъхове без ХБЗ. В сравнение с групата без ХБЗ, групите с ХБЗ имат по-високи плазмени нива на P и Cr и по-ниски плазмени нива на Ca и 24-часова екскреция на P, Ca и Cr в урината. Освен това, тези резултати са по-забележими в групата с CKD-HP, както се вижда в предишни проучвания.37,39) По този начин бъбречната функция намалява в групата с CKD, особено в групата с CKD-HP. Изследвахме експресията на иРНК в аортните съдове на плъхове с ХБН (фиг. 4). Въпреки че няма значителни разлики в експресията на Runx2 mRNA, транскрипционен фактор, който се движи рано в механизма на васкуларна калцификация, между групите (фиг. 4B) експресията на osteopontin mRNA значително се повишава в групата с CKD-HP в сравнение с не- CKD група иCKD-LP група(Фигура 4C). Експресията на SLC37A2 mRNA също беше значително увеличена в групата на CK D-HP в сравнение с групата без CKD и групата с CKD-LP (Фигура 4D). Тъй като имаше големи индивидуални разлики при тези плъхове, ние изследвахме корелацията между остеопонтин и SLC37A2 mRNA и открихме значителна корелация между тези молекули (фиг. 4E). Хистологичното изследване на торакоабдоминалната аорта разкрива медиална калцификация само в аортата на групата CKD-HP (фиг. 5A). За да изследваме мястото на експресия на SLC37A2 върху аортата, ние проведохме имунооцветяване на аортата на CKD-HPrats. SLC37A2 беше силно експресиран в областта, къдетосъдова калцификациянастъпи (фиг. 5B).

Фигура 1. HeatMap на различно експресирани гени между AoSMC, некултивирани с 2,6 mM P и AoSMC, култивирани с 2,6 mM P. Червеното представлява гени с високо ниво на сигнала, а зеленото представлява гени с ниско ниво на сигнала. Гладкомускулни клетки на аортата AOSMC. Вижте фигурата в онлайн версията.

Дискусия

Изследвахме кандидат P-свързани молекули, участващи в съдова калцификация. Нашите резултати показаха, че SLC37A2 е една от молекулите, които се увеличават ссъдова калцификацияin vitro и in vivo.

Семейството SLC37 принадлежи към суперсемейството на SLC и включва протеини: SLC37A 1-440) Семейството SLC37 съдържа трансмембранни протеини в мембраната на ендоплазмения ретикулум и има последователност, хомоложна на бактериалния органофосфатфосфатен антипортер. (41) SLC37A4 е по-известен катопреносител на глюкозо6-фосфат.(2-44 Въпреки това, има малко доклади за SLC37A2 и подробностите за неговата функция не са напълно разбрани. SLC37A2, известен също като SPX2, се експресира изобилно в миши макрофаги, далак, тимус и бяла мастна тъкан (WAT ) на модели на генетично затлъстели мишки и подобни на остеокласти клетки, получени от Raw264.7 клетки. (45.6) Протеинът SLC37A2 транспортира както глюкозо-6-фосфат/фосфат, така и фосфат/фосфатен обмен. (4) Наскоро доклади показват връзка между SLC37A2 със заболяване по животните. (47-49) Дефект SLC37A2 причинявакраниомандибуларна остеопатия(CMO), самоограничаващо се пролиферативно заболяване на костите при породите териер. (47) При млекодайните говеда SLC37A2 хомозиготна мутация е отговорна за ембрионалната смърт. (8.9) Освен това. SLC37A2 се счита за цел за целевите гени на витамин D. (така) Потенциалът на таргетния ген на фосфор-Ser294 прогестероновия рецептор при прогресирането на рак на гърдата също е бил взет под внимание (1) Съобщава се, че възпалението може както да причини, така и да влоши съдовата калцификация. (2s26) Освен това. SLC37A2 се експресира в изобилие в макрофаги и WAT, които са засегнати от инфилтрация на макрофаги. (s) Следователно. считахме, че SLC37A2 може да е молекула, експресирана по време на възпаление. Въпреки това, нашите открития не показват увеличение на експресията на SLC37A2 в AoSMC, изложени на възпалителен отговор, тази молекула не изглежда да бъде пряко засегната от възпалителна стимулация. SLC37A2 може да участва в съдова калцификация чрез механизъм, различен от възпаление.

Съобщава се, че SLC37A2 действа като P-свързанантипортиер. (41) Освен това се съобщава, че SLC37A2 е целеви ген за витамин D, а генът SLC37A2 съдържа основно място за свързване на витамин Dreceptor (ss2). Систематично корелирани промени в експресията на SLC37A2 гени и циркулиращи форми на витамин D. е наблюдаван в човешки мононуклеарни клетки от периферна кръв. (50) Рецепторите на витамин D се свързват с 1а, 25-дихидрокси витамин D, който е метаболит на витамин D, и регулират генната експресия. ето, 25дихидроксивитамин D, участва в абсорбцията на Ca и P в червата, мобилизацията на Ca в костите и реабсорбцията на Cain в бъбреците. (3) Има доклад, че при плъхове модел на аденин-индуцирана ХБН, серумният la, 25-дихидрокси витамин D е бил значително по-висок при плъхове с висок прием на p диета, с напреднала съдова калцификация, в сравнение с плъхове с нисък прием -p диетичен прием.39) SLC37A2 може да е свързан с регулирането на P чрез витамин D. Необходими са допълнителни изследвания, за да се изясни, че витамин D влияе върху експресията на SLC37A2 in vitro и vivo.

Доказано е, че механизмът на съдова калцификация е подобен на този на образуването на кост. Дефицитът на SLC37A2, причинен от CMO, е клинично сравним с човешката инфантилна кортикална хиперостоза, известна също като болест на Caffey.7 Освен това има съобщения, че SLC37A2 се експресира в костния мозък и остеокластите. o Hytone et al. (7 предполагат, че дисфункция на SLC37A2 би причинил дисбаланс във функцията на образуване на остеобластна и остеокластична кост и в резултат на това би довел до хиперостоза.

Runx2 е основен транскрипционен фактор за съдова калцификация. Също така се съобщава, че Runx2 е транскрипционен фактор на остеобластна диференциация, експресиран в развиващите се епителни клетки на гърдата. (s435) Runx2 изглежда е необходим за регулирането на целевите гени на фосфор-Ser294 прогестерон, които са свързани с прогресията на рака на гърдата. SLC37A2 се счита за кандидат-мишенен ген за фосфор-Ser294 прогестеронов рецептор. (s1) Следователно се счита, че Runx2 може да регулира SLC37A2 В настоящото изследване, експресията на SLC37A2 mRNA в аортата на CkD плъхове е свързана с osteopontin mRNA, който е насочен към гена на Runx2.