Разтворимият екстракт от перли осигурява ефективно изсветляване на кожата чрез антагонизиране на ендотелина

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Jing Wang MD1|Zhixiong Chen MSc2|Яоджия Лу BSc2|Лихуа Джан BSc3|Jiahuan Mo BSc2|Fumin Cao BSc2|Мин Сие BSc3|Xinzhong Shen BSc3|Anquan Yang BSc3

Резюме

Заден план:Честотата на нарушенията на пигментацията на кожата нараства в световен мащаб. Това изисква по-безопасни и по-ефективни продукти за локално изсветляване на кожата и премахване на лунички. В това проучване ние предположихме, чеРазтворим екстракт от перли(SPE) може да притежава ендотелин антагонизиращи съединения с добра кожаизбелванеефекти.

Цели: (а) Да се ​​определи ефектът и механизмите наSPEвърху ET-1-третирани меланомни клетки B16. (b) Да се ​​изследват цитотоксичните ефекти на SPE върху B16 меланомни клетки.

Методи:Анализът CCK-8 беше извършен, за да се определи как SPE и ET-1 влияят върху скоростта на пролиферация на меланомни клетки В16, анализът за лизис на NaOH беше проведен за количествено определяне на съдържанието на меланин, докато активността на тирозиназата беше определена чрез окисление на DOPA тест. Нивата на експресия на mRNA и протеин на TYR и TRP-1 бяха определени съответно чрез qRT-PCR анализ и Western blot анализ.

Резултати:Открихме товаSPEпри концентрации от 0.1 и 1 ug/mL няма ефект върху пролиферацията на клетките и 10 nmol/L ET-1 насърчава пролиферацията на B16 меланомни клетки. По-специално, В16 меланомни клетки, третирани с 10 nmol/L ET-1, показват значително по-висок синтез на меланин, тирозиназна активност, нива на експресия на TYR и TRP-1 иРНК в сравнение с нетретираните клетки. Трябва да се отбележи, че ефектите от лечението с 10 nmol/L ET-1 бяха премахнати с SPE в зависимост от дозата.

Изводи:SPE инхибира ендотелина, като по този начин безопасно и ефективно изсветлява изсветлява кожата чрез антагонизиране на ендотелина. Освен това SPE е безопасен и ефективен.

КЛЮЧОВИ ДУМИ:B16 меланомни клетки, ендотелин-1, разтворим екстракт от перли,избелване

Cistanche herbaе съставка за избелване на кожата.

1|ВЪВЕДЕНИЕ

През последните години по-нова и ефективна кожаизбелванепусната е на пазара козметика за външна употреба. Това се дължи на икономическото развитие и променящия се начин на живот на хората от всички поколения. Използваната в момента кожаизбелванеагенти включват хидрохинон, коджикова киселина, фосфолипаза D1, плацента и витамин А. Нарушенията на пигментацията на кожата са свързани главно с производството на меланин. Той се синтезира чрез процес, иницииран от превръщането на тирозин в допа, катализирано от тирозиназа. Dopa инициира серия от сложни биохимични реакции, водещи до синтеза на меланин. Избелващият механизъм на дихидро аспержовата киселина,1 хидрохинона и коджиковата киселина включва инхибиране на активността на тирозиназата, която е ензимът, ограничаващ скоростта в синтеза на меланин.2 По този начин тези агенти намаляват производството на меланин, което води до избелване на кожата. 3 Обратно, фосфолипазата D1, плацентата и ретиноевата киселина действат, като намаляват количеството на синтеза на тирозиназа. 4 Въпреки че тези агенти постигат известно ниво на избелване на кожата, техните избелващи механизми не са ясни. Освен това те са токсични и отнема повече време, за да причинят избелване на кожата.

Ето защо е наложително да се намери по-безопасна и по-ефективна кожаизбелванеагенти. Изследванията върху избелването на кожата обърнаха голямо внимание на взаимодействието между цитокини и меланоцити като начин за разработване на ефективни средства за избелване на кожата. Кератиноцитите отделят цитокини като ендотелин (ЕТ), когато са изложени на ултравиолетова радиация. Тези цитокини влияят върху миграцията на меланоцитите, развитието на дендритите и производството на меланин.5 По този начин антагонизирането на местата на действие на тези цитокини ще доведе до по-бяла кожа.6 Shi et al (2011) съобщават, че ресвератролът, нов ендотелинов антагонист, избелва кожата. кожата чрез механизъм, включващ инхибиране на активността на тирозиназата в меланоцитите B16.7 Yang et al (2000) установиха, че ресвератролът е насочен към меланоцитната мембрана. Това означава, че тя преминава само през мембраната на меланоцита и мембраната на меланозомата, за да достигне места, където инхибира производството на меланин.8 Тирозиназата се намира в меланозомата и по този начин нейните инхибитори трябва да преминат през четири слоя (роговия слой, дълбокия епидермис, меланоцитната мембрана и меланозомната мембрана), за да блокира ефекта му.9 Ресвератролът надминава само два слоя (роговия слой и дълбокия епидермис), за да инхибира активността на тирозиназата.10 Това скъсява периода на избелване.

Харли (1993) установи, че перлите в шотландската сладка вода, австралийската и шриланкската морска вода са направени с подобен химичен състав, тоест калциев карбонат, 91,72 процента, органична материя, 5,94 процента, вода, 2,23 процента, и други вещества, {{ 7}}.11 процента .11 На друго място Zhang et al (2018) установиха, че екстрактите от перли придават значителни антиоксидантни ефекти in vitro.12,13 Yang et al (2016) установиха, че екстрактите от перли могат да инхибират активността на тирозиназата в клетките B16F10, като по този начин намаляват производство на меланин.14 Това показва, че екстрактът от перли може да притежава кожатаизбелванеефекти, но участващият механизъм не е проучен. Тук постулирахме товаSPEантагонизира ендотелина, променяйки синтеза на меланин и тирозиназната активност на B16 меланомните клетки. Нашите резултати показват, че разтворимите перлени екстракти антагонизират ендотелина, причинявайки избелване на кожата.

2|МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

2.1|Приготвяне и анализ на състава на разтворим екстракт от перли (SPE)

Перленият прах се разтваря в млечна киселина и pH на сместа се коригира до 7.{1}} с PBS. Ензимната хидролиза се инициира с добавяне на протеаза и екстрактът се филтрува с 10 μm качествена филтърна хартия. Супернатантата се получава и лиофилизира, за да се получи разтворим перлен екстракт.

2.2|Анализ на състава на лиофилизирания прах

Накратко съдържанието на влага вSPEбеше измерено с метода на атмосферно изсушаване. Определено количество от пробата се нагрява в сушилня при 95-105 градуса за 3 часа и се претегля. Пробите се изсушават многократно, за да се получи постоянно тегло. Съдържанието на влага се определя като разликата в масата преди и след нагряване. Пробата е изгорена, което води до образуването на неорганично вещество, наречено пепел. За измерване на качеството на пепелта беше използван методът на претегляне при изгаряне, при който разликата в качеството преди и след изгарянето се считаше за съдържание на пепел. Методът на Kjeldahl беше използван за определяне на протеиновото съдържание на SPE. Съдържанието на пептид се оценява, както е описано по-горе.15 Съдържанието на полизахариди се определя с помощта на метода на антранон-сярна киселина.

цистанчеекстракт

2.3|Клетъчна култура

Миши меланомни клетки В16 (любезно предоставени от Банката за стволови клетки, Китайската академия на науките) бяха култивирани в модифицирана Eagle среда на Dulbecco (DMEM), съдържаща 10 процента фетален говежди серум и 1 процент пеницилин/стрептомицин в инкубатор (BB150 Thermo Fisher Scientific), настроен на 37 градуса и 5 процента CO2. След 3 дни култивиране, клетките бяха в почти слято състояние и основно се разпространиха из цялата чиния. Клетките се промиват с фосфатен буферен физиологичен разтвор (PBS) и се прекарват чрез смилане с 0,25 процента трипсин. Клетките се преброяват с помощта на плоча за броене на клетки и клетъчни суспензии, приготвени в подходящи концентрации. Клетъчните суспензии се култивират в клетъчен инкубатор за последващи експерименти

2.4|Откриване на клетъчна пролиферация след третиране със SPE и ET-1 чрез CCK-8 анализ

Клетките в логаритмична фаза на растеж се култивират в {{0}}плаки с ямки при концентрация от 1 × 104 клетки/mL в инкубатор, настроен на 37 градуса и 5 процента CO2 за 24 часа . След това към ямките се добавят различни концентрации на SPE ({{10}}, 0,01, 0,1, 1 и 10 ug/mL) и се оставят да престоят 24 часа. 10 процента от реагента на комплекта за броене на клетки-8 (CCK-8) (Jian Cheng Bioengineering Co.) се добавят към всяка ямка за измерване на скоростта на пролиферация на клетките. Абсорбцията на всяка ямка се отчита при дължина на вълната 490 nm с помощта на четец на микроплаки. Всяка група беше тествана като три повторения. Ефектът на ET-1 (0,1, 1, 10 и 100 nmoL) върху клетъчната пролиферация беше оценен по същия протокол. След това клетките бяха разделени на три групи: контролна група (не е приложено лечение), групата ET-1 (клетките бяха третирани с 10 nmoL ET-1 за 24 часа) иSPEгрупа (клетките бяха третирани с 10 nmoL ET-1 за 24 часа и след това третирани с 0,1, 1 ug/mL SPE за 24 часа).

цистанче тубулозае инхибитор на тирозиназата

2.5|Тест за тирозиназна активност

10 μL клетки (различно третирани) се посяват във всяка ямка на 96-плака с ямки при клетъчна плътност (5-10) × 104 клетки/mL и 100 μL от растежната среда се добавят към всеки кладенец. След това клетките бяха предварително култивирани в инкубатор, настроен на 37 градуса и 5 процента CO2 за 24 часа. Плаките се центрофугират при 2000 оборота в минута за 2 минути и супернатантата се изхвърля. След това клетките се промиват три пъти с PBS и към всяка ямка се добавят 50 μL от 1% разтвор на Triton X-100 (Jian Cheng Bioengineering Co.). Клетките веднага се съхраняват при -80 градуса за 30 минути и след това се размразяват при стайна температура, за да се постигне пълно разкъсване на клетките. След това клетките се загряват предварително при 37 градуса за 5 минути и се добавят 10 μL от 1% разтвор на L-DOPA. Клетките бяха оставени да престоят при 37 градуса за 2 часа и абсорбцията на плаката беше измерена при дължина на вълната от 490 nm с помощта на четец на микроплаки.

2.6|Тест за съдържание на меланин

Клетките се култивират в {{0}}плаки с ямки при плътност от (5-10) ×104 на ямка. Всяка ямка съдържа 2 mL среда за растеж. Клетките се инкубират в продължение на 24 часа в инкубатор, настроен на 37 градуса и 5 процента CO2. Супернатантата се изхвърля и меланоцитите се третират с 0,25 процента трипсин в продължение на 3 минути. След това се добавят 2 mL 10 процента FBS-съдържаща DMEM среда, за да се спре реакцията. Меланоцитите се събират в 15 mL центрофужна епруветка, центрофугират се при 1000 оборота в минута за 5 минути и супернатантата се изхвърля. Меланоцитите се промиват с PBS и се поставят в епруветки, съдържащи 500 μL разтвор на етанол/етер, смесени в съотношение 1:1 и се смесват добре чрез разклащане. Сместа се оставя да престои при стайна температура в продължение на 30 минути и след това се центрофугира при 3000 оборота в минута в продължение на 5 минути. Супернатантата се изхвърля и към клетките се добавят 300 μL 1N NaOH (съдържащ 10 процента DMSO). Тази смес се оставя да реагира във водна баня, настроена на 80 градуса за 40 минути, за да се разтвори напълно меланинът. След това 200 μL от разтворения меланин се прехвърлят в 96-плака с ямки и абсорбцията се измерва при дължина на вълната 405 nm с помощта на четец на микроплаки.

2.7|Количествен PCR анализ в реално време (qRT-PCR).

Общата РНК беше извлечена от клетки от трите групи (контролна, ET-1 иSPEгрупи), използвайки комплекта RNAiso Plus (TaKaRa Bio) и обратно транскрибиран в cDNA, използвайки комплекта реагент PrimeScript™ RT (TaKaRa Bio). qRT-PCR анализът беше извършен за откриване на експресията на -актин във всяка проба. Това беше направено с помощта на зелената боя SYBR. Използваните праймерни последователности16 (TaKaRa Bio) са показани в таблица 1. Условията на PCR са първоначална температура на денатурация, зададена на 95 градуса за 30 секунди, 40 цикъла на денатурация, температура на отгряване, настроена на 95 градуса за 5 секунди и 60 градуса за 34 секунди, съответно. Това беше извършено в система StepOne плюс PCR в реално време (Applied Biosystems). Резултатите от qRT-PCR бяха анализирани и изразени като относителна експресия на иРНК въз основа на стойности на CT (прагов цикъл), които по-късно бяха преобразувани в промени на пъти.

2.8|Western blot анализ

Общите протеини бяха извлечени от клетките с помощта на радиоимунопреципитационен анализ (RIPA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Концентрацията на протеиновите екстракти се определя с комплекта за анализ на бицинхонинова киселина (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). След това протеините се разделят чрез електрофореза с натриев додецилсулфат и полиакриламиден гел (SDS-PAGE) и получените ленти се прехвърлят електрофоретично върху мембрана от поливинилиден флуорид (PVDF). След това мембраната се блокира с 5 процента обезмаслено мляко на прах и се инкубира с антитела срещу TYR, TRP-1 и -актин (Santa Cruz Biotechnology) при 4 градуса за 24 часа. След това мембраната се инкубира с вторичното антитяло (козе анти-миши IgG Abmart) за 1 час при стайна температура. Протеиновите ленти бяха открити с помощта на подобрена хемилуминесценция (ECL) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Анализът на сканиране на лентата беше извършен с помощта на система за анализ на Image J. -Актинът беше използван като вътрешна референция в анализа на протеиновата експресия. Пробите бяха проведени като независими повторения, повторени три пъти за всяка група.

2.9|Статистически анализ

Статистическите анализи бяха проведени с помощта на софтуер GraphPad prism8. Груповите разлики бяха сравнени с помощта на еднопосочен анализ на дисперсията (ANOVA) и резултатите са представени като средни стойности ± SD P<.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche за продажба: cistanche е избелващ серум

3|РЕЗУЛТАТИ

3.1|Композиционен анализ на SPE

Химическата характеристика показа товаSPEсъдържа съдържание на влага от 6.03 ± 0.16 процента, съдържание на пепел от 1,55 ± {{10}}.11 процента, съдържание на пептид от 7,52 ± {{16 }}.03 процента, съдържание на протеин от 54,12 ± 0,18 процента и съдържание на полизахариди от 0,09 ± 0,005 процента. Тези резултати показват, че протеините са най-разпространени в органичната материя на SPE.

3.2|Ефект на SPE върху пролиферацията на В16 меланомни клетки

След като клетките на меланома B16 бяха третирани с различни концентрации (0, 0.01, 0.1, 1 и 10 ug/mL) SPE за 24 часа, клетъчната пролиферация беше оценена чрез CCK-8 анализ (Фигура 1А). Установихме, че пролиферацията на В16 меланомни клетки, третирани с 0,01 ug/mL SPE, е по-висока от тази на празната група (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">SPEе използван в следващите експерименти. Въз основа на съображения за безопасност, като естествен компонент наизбелванекозметика, SPE не е токсичен за клетките при тези две концентрации; по този начин е безопасно до известна степен.

3.3|Ефект на ET-1 върху пролиферацията на меланомни клетки В16

В16 меланомните клетки бяха третирани с различни концентрации на ET-1 в продължение на 24 часа и пролиферацията на клетките беше оценена чрез CCK-8 анализ. Трябва да се отбележи, че лечението на меланомни клетки B16 с 0.1, 1 и 10 nmol/L ET-1 насърчава пролиферацията по зависим от концентрацията начин с 10 nmol/L ET{{12} } произвеждащ най-висока скорост на разпространение (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">

3.4|SPE инхибира активността на тирозиназата в меланомни клетки B16

За по-нататъшно изследване на инхибиторния механизъм наSPEвърху синтеза на меланин, анализирахме ефекта му върху ограничаващия скоростта ензим (тирозиназа) в процеса на синтеза на меланин. Активността на тирозиназата в клетките се открива чрез метода на L-dopa окисление. B16 меланомни клетки, третирани с 10 nmol/L ET-1 показват значително по-висока вътреклетъчна тирозиназна активност в сравнение с нетретираните клетки (P <.01). въпреки="" това,="" тирозиназната="" активност="" в="" клетките,="" третирани="" с="" 0,1="" ug/ml="" и="" 1="" ug/ml="" spe="" лечение,="" е="" по-ниска,="" отколкото="" в="" нетретираните="" клетки="" (p=""><.05, p=""><.01). тези="" резултати="" показват,="" че="" spe="" инхибира="" активността="" на="" тирозиназата="" по="" начин,="" зависим="" от="" концентрацията="" (фигура="">

3.5|SPE инхибира синтеза на меланин в B16 меланомни клетки

Допълнително тествахме дали ефектите на SPE върху производството на меланин в клетките на меланома B16 са медиирани от ET-1, използвайки метода за лизис на NaOH. Резултатите показват, че съдържанието на меланин в клетките на меланома B16 е значително повишено след лечение с 10 nmol/L ET-1 в сравнение с контролната група (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">SPEвърху производството на меланин са зависими от дозата. Ефектите на SPE върху съдържанието на меланин и тирозиназната активност са сходни (Фигура 2В). Като се има предвид, че 0.1 ug/mL и 1 ug/mL SPE не променя пролиферацията на B16 меланомни клетки, намаляването на съдържанието на меланин при тези две концентрации може да възникне по неизвестни механизми.

3.6|Ефект на SPE върху нивата на TYR и TRP-1 иРНК

Механизмът, чрез който SPE променя ефектите на ET-1 върху B16 меланомни клетки, се определя чрез измерване на нивата на иРНК на TYR и TRP-1 в клетки, които са получили различно лечение. Нивата на иРНК на TYR и TRP-1 в B16 меланомни клетки са значително по-високи (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">SPEинхибира нивата на експресия на TYR и TRP-1 иРНК по зависим от концентрацията начин.

3.7|Ефект на SPE върху нивата на протеини TYR и TRP-1 в меланомни клетки B16

Протеиновата експресия на TYR и TRP-1 в B16 меланомни клетки беше открита чрез Western blot. Открихме по-високи протеинови нива на TYR и TRP-1 в B16 меланомни клетки, третирани с 10 nmoL ET- 1 в сравнение с контролната група (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">SPEза 24 часа) има значително по-ниски протеинови нива на TYR и TRP-1 (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">

4|ДИСКУСИЯ

Ендотелинът (ЕТ) е естествен биоактивен пептид, синтезиран от ендотелните клетки в човешкото тяло. Състои се от три изомера: ET{{0}}, ET-2 и ET-3, които сигнализират чрез три ET рецептора: ETA, ETB и ETC.17 ETA и ETB са основни рецептори, експресирани в човешката ЕТ система.18 ЕТ се освобождава от кератиноцитите, когато е изложен на ултравиолетово лъчение B (UVB) облъчване. Когато ЕТ се свързва с меланоцитните рецептори, той стимулира синтеза на ДНК и повишава тирозиназната активност. Това насърчава бързата пролиферация на меланоцити и синтеза на меланин.19 ET-l насърчава пролиферацията на меланоцити, образуването на дендрити, адхезията и миграцията.20 Тук установихме, че 0,1, 1, 10 и 100 nmol/L ET-1 значително насърчава клетъчната пролиферация. Пролиферацията е най-висока при 10 nmol/L ET-1, което е в съответствие с резултатите, докладвани от Geng et al (2011), които установяват, че ET-1 повишава пролиферацията и синтеза на меланин на култивирани меланоцити от кожата на алпака. 21 TYR и TRP-1 гени играят роля в производството на меланин. Наистина, предишно проучване установи, че ефектите на ендотелин-1 върху активността на тирозиназата се медиират от ETA рецептори.22 10 nmol/L от лечението с ET-1 в меланомни клетки B16 повишава активността на тирозиназата и съдържанието на меланин . Резултатите от qRT-PCR разкриха, че нивата на иРНК на TYR и TRP-1 в клетките, третирани с 10 nmol/L ET-1, са по-високи, отколкото в контролната група. Това потвърждава, че ET-1 насърчава производството на меланин.

В допълнение,SPEинхибира ефектите на ендотелин върху В16 меланомни клетки. При концентрация от 1 0 ug/mL той проявява токсични ефекти и следователно инхибира пролиферацията на B16 меланомни клетки. SPE обаче не променя пролиферацията на клетките при концентрации от 0.1 и 1 ug/mL. Въпреки това, при концентрация от {{10}}.01 ug/mL, той значително насърчава клетъчната пролиферация в сравнение с контролната група. Тези резултати предполагат, че SPE е безопасно при концентрации под 1 ug/mL. SPE инхибира ET-1-индуцираното производство на меланин при концентрации от 0,1 и 1 ug/mL по дозозависим начин. Освен това, лечението с 0,1 и 1 ug/mL SPE води до по-ниски нива на TYR и TRP-1 иРНК в сравнение с контролната група. Освен това инхибиторният ефект на SPE е зависим от концентрацията. Western blot анализът разкрива сходни ефекти на SPE при двете концентрации (0,1 и 1 ug/mL) върху протеиновите нива на TYR и TRP-1.

В меланоцитите ET-1 се свързва с рецептора на ендотелиновия рецептор тип В (EDNRB), което води до активиране на фосфолипаза С (PLC).23 Това допълнително хидролизира фосфатидилинозитол дифосфат (PIP2) и активира протеин киназа С (PKC), като по този начин променя пропускливостта на йонните канали.24 Промяната в пропускливостта води до активиране на зависими от напрежение Ca2 плюс канали и фосфолипаза А (PLA).25 В крайна сметка това активира синтеза на меланин.26 Тук механизмът, чрез който SPE антагонизира ET{{ 8}} за инхибиране на производството на меланин е проучено само предварително. Като такава, експресията на EDNRB рецептора, както и други аспекти на синтеза на меланин, като PKC, PKA и KIT27, заслужава допълнително изследване.

Основните химически компоненти в перления прах са калциев карбонат и протеини, докато други като порфирин и таурин са по-малко изобилни.28 Водният екстракт от перлен прах съдържа главно протеини. Твърдият кератин е основният протеин във водния екстракт. Въпреки това, водният екстракт може да съдържа и малък брой микроелементи.29 Съвременните фармакологични изследвания показват, че перлата може да стимулира метаболизма на човешкото тяло, да увеличи жизнеспособността на епидермалните клетки, да забави стареенето на клетките и да инхибира производството на меланин като както и други фармакологични ефекти като избелване на лунички и детоксикация.30 Химическата характеристика разкри, че протеините са най-разпространените биомолекули в съдържанието на органична материя на SPE. По този начин предположихме, чеSPEсъщо би имализбелванеефекти върху В16 меланомни клетки. Нашите резултати потвърдиха тази хипотеза.

Това сацистанчетаблетки заизбелване на кожата. Моля, щракнете върху снимката и получете подробности.

5|ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ПЕРСПЕКТИВА

ET{{0}} насърчава пролиферацията на меланомни клетки B16 и синтеза на меланин чрез активиране на сигналните пътища TYR и TRP-1. SPE в концентрации от 0,1 и 1 ug/mL инхибира синтеза на меланин, като по този начин противодейства на ефектите на ET-1 без никакви цитотоксични ефекти върху B16 меланомни клетки. Като такъв,SPEе потенциален ендотелинов антагонист, който може да се използва като безопасно и ефективно средство за изсветляване на кожата.

ПРЕПРАТКИ

1. Venditti A, Mandrone M, Serrilli M, et al. Дихидроаспарагузова киселина: антиоксидантна и инхибиторна активност на тирозиназата и подобрен синтез. J Agric Food Chem. 2013;61(28):6848-6855.

2. Жан-Пол О. Фотозащитни свойства на кожния меланин. Brit J Dermatol. 2002;146(61):7-10.

3. Maeda K, Fukuda M. Invitro ефективност на няколко избелващи козметични компонента в човешки меланоцити. J Soc Cosmet Chem. 1991;42(6):361-368.

4. Sato K, Morita M, Ichikawa C, Takahashi H, Toriyama M. Депигментиращи механизми на изцяло транс ретиноева киселина и ретинол върху В16 меланомни клетки. J Biosci Biotech Bioch. 2014;72(10):2589-2597.

5. Ching-Shuang W, Chia-Li Y, Chieh-Shan W, Lan Cheng-Che E, Hsin-Su Y. Теснолентовият ултравиолет-B стимулира пролиферацията и миграцията на култивирани меланоцити. J Exp Dermatol. 2004;13(12):755-763.

6. von Koschembahr AM, Swope VB, Starner RJ, Abdel-Malek ZA. Ендотелин-1 предпазва човешките меланоцити от UV-индуцирано увреждане на ДНК чрез активиране на JNK и p38 сигнални пътища. J Exp Dermatol. 2015; 24 (4): 269-274.

7. Shi XM, Yan ZM, Xie JH, Zhou HF, He HX, Duan MX. Предварително изследване на избелващия ефект на ресвератрол. J Flavor Fragrance Cosmetics. 2011;10(05):37-39.

8. Yang LC, Wang F, Liu M, et al. Антиендотелиновите -1 ефекти на Cissus assamica. Китайски нови лекарства J. 2000;12(07):455-458.

9. Serre C, Busuttil V, Botto JM. Вътрешна и външна регулация на меланогенезата и пигментацията на човешката кожа. Int J Cosmet Sci. 2018;40(4):328-347.

10. Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojic acid, козметичен агент за избелване на кожата, е бавно свързващ инхибитор на катехолазната активност на тирозиназата. J Pharm Pharmaco. 1994;46(12):982-985.

11. Kun GF, Stevenson CH. Книгата на перлата. Ню Йорк: Dover Publications; 1993:13-125.

12. Zhang LH, Shen YQ, Yang AQ, Mo JH, Chen ZX, Wang J. Проучване на in vitro антиоксидантна активност на лиофилизиран прах от перлен екстракт. J Flav Frag Cosm. 2018;13(04):26-29.

13. Yang YL, Chang CH, Huang CC, Liu HW. Противовъзпалителни и антиапоптозни ефекти на гел от перлен екстракт върху UVB облъчване HaCaT клетки. J Biomed Mater. 2015; 26 (Допълнение 1): S139-S145.

14. Yang AQ, Wang J, Zhang LH, Mo JH, Chen ZX, Shen YQ. Светлинният ефект на екстракта от перла върху меланоцитите in vitro. J Pharma Biotechnol. 2016; 23 (2): 146-149.

15. Lu W, Ren GP, ​​Song JM. Определяне съдържанието на пептиди в протеинови хидролизати. J Food Sci. 2005;12(07):169-171.

16. Chia-Hua L. Ov-16 [4-(3,4-дихидроксибензоилоксиметил)фенил-О- -D-глюкопиранозид] инхибира синтеза на меланин чрез регулиране на експресията на меланогенезата- регулиран ген и протеин. J Exp Dermatol. 2011;20(9):743-748.

17. Yanagisawa M, Kurihara H, Kimura S, et al. Нов мощен вазоконстрикт или пептид, произведен от васкуларни ендотелни клетки. J Природа. 1988;332:411-415.

18. Hou L, Pavan WJ, Shin MK и др. Клетъчно-автономна и клетъчно-неавтономна сигнализация чрез ендотелинов рецептор В по време на развитието на меланоцитите. J Разработете. 2004;131(14):3239-3247.

19. Imokawa G, Yada Y, Miyagishi M. Ендотелините, секретирани от човешки кератиноцити, са присъщи митогени за човешки меланоцити. J Biol Chem. 1992; 267 (34): 24675-24680.

20. Tada A, Suzuki I, Im S и др. Ендотелин-1 е паракринен растежен фактор, който модулира меланогенезата на човешките меланоцити и участва в отговорите им на ултравиолетово лъчение. J Разлика в клетъчния растеж. 1998; 9 (7): 575-584.

21. Geng JJ, Zhang J, Mu XL и др. Ефект на ET-1 върху пролиферацията и синтеза на меланин на меланоцитите от кожата на алпака in vitro. Китайски J Animal Veter Sci. 2011;42(07):932-938.

22. Monji A, Inoue H, Oshima H, et al. Индуциране и инактивиране на тирозиназа в нормални култивирани човешки меланоцити от ендотелин-1. J Int J Tissue React. 2005;27(2):41-49.

23. Takeshi S, Masashi Y, Tomoh M. Молекулярна характеристика на ендотелиновите рецептори. J Съвети. 1992; 13 (3): 103-108.

24. Джорджия К, Али Б, Бу ДГ, Сривастава АК. Модулираща роля на азотен оксид/cGMP система в ендотелин-1-индуцирани сигнални реакции в васкуларни гладкомускулни клетки. J Curr Cardiol Rev. 2010; 6 (4): 247-254.

25. Sp H, Angela C. Ендотелинова сигнализация в сърдечния миоцит и нейното патофизиологично значение. J Curr Vasc Pharmacol. 2005;3(4):343-351.

26. Clouthier DE, Hosoda K, Richardson JA, et al. Дефекти на черепния и сърдечния нервен гребен при мишки с дефицит на ендотелин-А рецептор. J Разработете. 1998; 125 (5): 813-824.

27. Imokawa G, Yada Y, Kimura M, et al. Сигнални механизми на ендотелин-индуцирана митогенеза и меланогенеза в човешки меланоцити. Biochem J. 1996;314(Pt 1):305-312.

28. Zhang C, Xie LP, Huang J, et al. Ново семейство матрични протеини, участващи във формирането на рамката на призматичния слой на перлената стрида. Pinctada fucata. Biochem Bioph Res Co. 2006;344(3):735-740.

29. Wu WL, Zhang LP, Yang ZJ и др. Компоненти и ултраструктура с нейното образуване на круша. J Mater Rep. 2011;025(021):79-85.

30. Shao DZ, Wang CK, Wang HJ и др. Резюмета: сравнение на хидратация, резистентност към тирозиназа и антиоксидантно активиране в три вида перлени прахове. Int J Cosmet Sci. 2010;32(5):396.