Спонтанна гранулоцитна левкемия при мишка NOD/Shi-scid IL-2R null

Резюме:Тук докладваме случай на спонтанна гранулоцитна левкемия при 51-седмично мъжко NOD/Shi-СЦИДIL-2R нулева (NOG) мишка. Мишката показапрогресивна анемияигрубо дихателно движение. Макроскопски слезката е обезцветена и увеличена. Хистологично, костният мозък нагръдна кости бедрената кост беше силно клетъчна и почти изцяло изпълнена снеопластични клетки. Ядрата на неопластичните клетки са големи, с овална до леко неправилна форма и малък брой клетки иматбъбрек- или пръстеновидни ядра.Неопластични клеткиинфилтрира широко органите, като далакът и черният дроб са засегнати значително. Имунохистохимично, голяма популация от неопластични клетки в червената пулпа на далака и синусоида на черния дроб е положителна замиелопероксидаза. Въз основа на хистологичните характеристики този случай беше диагностициран сгранулоцитна левкемия. Тази нова информация заспонтанни тумориможе да бъде полезно за правилното използване на този щам мишка в по-нататъшни изследвания. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Ключови думи: гранулоцитна левкемия, мишка NOG, спонтанен тумор

НАТИСНЕТЕ ТУК, ЗА ДА ВЗЕМЕТЕ НАТУРАЛЕН ОРГАНИЧЕН ЕКСТРАКТ ОТ ЦИСТАНША С 25% ЕХИНАКОЗИД И 9% АКТЕОЗИД ЗА БЪБРЕЧНАТА ФУНКЦИЯ

Поддържаща услуга на Wecistanche-най-големият износител на cistanche в Китай:

Имейл:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/телефон:+86 15292862950

Пазарувайте за повече подробности за спецификациите:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Спонтанна гранулоцитна левкемиярядко се съобщава при няколко вида мишки, въпреки че химичните агенти и йонизиращото лъчение могат да увеличат честотата при някои видове мишки1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) мишки са тежкоживотни с имунен дефицит, и присъстват дефекти в Т-, В- и естествените клетки убийци, както и лошо функциониращи макрофаги и дендритни клетки чрез нокаут на IL-2 рецепторна верига (IL2R c) в NOD-scid щам3. Този щам на мишка се използва за неклинични тестове, като теста за туморогенност, за оценка на качеството и безопасността на биологични продукти за регенеративна медицина, използващи човешки клетки/тъкани, поради значително по-доброто присаждане на ксеногенни клетки4-6. Въпреки че имунодефицитното състояние и неговите последици за ксенотрансплантатите са добре проучени, има малко информация за спонтанни тумори, възникващи в този щам на мишка, като лимфом на тимуса,млечнажлеза аденом/аденокарцином, бронхиолоалвеоларен карцином, рабдомиосаркоми тератом7. Тук докладваме случай на гранулоцитна левкемия при 51-седмична мъжка мишка NOG.

Животното е получено от In-Vivo Science Inc. (Канагава, Япония) на възраст 6 седмици и е държано нетретирано. Животното беше индивидуално настанено в пластмасова клетка с индивидуално вентилирана клетка (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Токио, Япония) в помещение с контролирана от околната среда бариерна система, която се поддържаше при температура 22 ± 2 градуса с влажност от 50 ± 20% и 12-h цикъл светло/тъмно. Мишката беше хранена с автоклавирана гранулирана диета (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Токио, Япония) с автоклавирана чешмяна вода и либитум. Животното беше обработено съгласно протокола, одобрен от Комитета за институционална грижа и използване на животните на CMIC Pharma Science Co., Ltd., който е акредитиран от AAALAC International.

Тази мишка показва клинични признаци на отслабване, като анемия, груби дихателни движения и намаляване на телесното тегло между 49 и 51 седмична възраст. Животното е евтаназирано на 51-седмична възраст. При аутопсията далакът е обезцветен и увеличен. Не са наблюдавани очевидни необичайни груби находки в другите органи. Тимусът и лимфните възли са атрофични, подобни на тези на нормалните NOG мишки.

Всички органи и тъканни проби се събират рутинно, фиксират се в 10% неутрален буфериран формалин, вграждат се в парафин и се разделят на приблизително 3 μm. За неговото патологично изследване срезовете бяха оцветени с хематоксилин и еозин (HE). Срезове от далака и черния дроб бяха имунохистохимично оцветени за поликлонално антитяло на заек срещу човешка миелопероксидаза (MPO) (Dako Japan, Токио, Япония) като маркер на миелоидни клетки, моноклонално антитяло на заек срещу човек CD3 (Nichirei Biosciences Inc., Токио, Япония). ) като Т-клетъчен маркер и заешко анти-човешко Pax-5 моноклонално антитяло (Abcam Inc., Кеймбридж, Обединеното кралство) като В-клетъчен маркер8. Срезовете се инкубират с антителата при стайна температура в продължение на 1 час и се извършва имунооткриване с помощта на Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) с 3,3'-диаминобензидин/H2O2 като хромоген. Тогава бяха имунооцветени срезовеконтраоцветени с хематоксилин.

Хистопатологично, костният мозък на гръдната кост и бедрената кост е силно клетъчен и почти изцяло пълен с неопластични клетки (фиг. 1А). Мастната тъкан беше напълно изместена. Имаше случайни клетъчни огнища, състоящи се от еритроидни и мегакариоцитни елементи в костния мозък, които се считаха за остатъци отнормална хематопоеза. Повечето неопластични клетки показват бластичен вид, характеризиращ се с големи, овални до леко неправилно оформени ядра и с ретикуларен хроматин, съдържащ едно или повече изпъкнали нуклеоли. Имаше малък брой клетки с бъбрековидни или пръстеновидни ядра и също присъстваха няколко клетки с лобовидни ядра (фиг. 1В). Гранулите в цитоплазмата на неопластични клетки не бяха очевидни в срезовете, оцветени с HE. Бяха открити множество митотични фигури в костния мозък и случайни апоптотични тела също бяха наблюдавани. Неопластичните клетки значително нахлуха в периоста и околния скелетен мускул. Имаше обширна инфилтрация на неопластични клетки в други органи и тъкани, като далакът и черният дроб бяха силно засегнати. В далака се наблюдават неопластични клетки в червената пулпа (фиг. 2). Очевидна е капсулната инфилтрация на неопластични клетки. Наблюдавани са няколко развиващи се еритроидни серии и мегакариоцити. Понякога се наблюдават мегакариоцити, съдържащи една или няколко миелоидни клетки в цитоплазмата, което предполага емпериполеза. В черния дроб неопластични клетки дифузно инфилтрират капсулата на Glisson и чернодробните синусоиди (фиг. 3). Неопластични клетки с бъбречни или пръстеновидни ядра също се наблюдават в някои кръвоносни съдове. Някои хепатоцити в перипорталната област, с изразена неопластична клетъчна инфилтрация, показват дегенерация или некроза, докато нормалната структура на чернодробния лобул остава непокътната. Неопластична клетъчна инфилтрация се открива и в други органи, включително алвеоларната стена и периваскуларната област на белия дроб, интерстадиум в бъбрека, синусоид в надбъбречните жлези и мукоза и субмукоза в стомашния тракт (стомаха и червата). Имунохистохимично голяма популация от неопластични клетки в червената пулпа на далака (фиг. 4) и синусоида на черния дроб е положителна за MPO. CD3 и Pax-5 положителни клетки не бяха открити. Резултатите от имунооцветяването на CD3 и Pax-5 са подобни на тези от далака на нормални NOG мишки, които са хистологично хипопластични и не показват CD3 или Pax-5 положителни клетки.

Имунохистохимичното изследване разкри, че неопластичните клетки произхождат от миелоидните клетъчни линии. В някои от засегнатите области, особено далака и черния дроб, малък брой клетки имаха бъбречни, пръстеновидни или лобовидни форми, което е показателно за диференциране на миелоидните серии. Тези открития предполагат, че неопластичните клетки произлизат от незрели гранулоцити. Случаят на тежка миелопоеза може да бъде очевиден чрез наличието на всички видове развиващи се миелоидни серии, за разлика от доминирането на незрели клетки при левкемия. В допълнение, прогресивната анемия е често срещан клиничен признак на гранулоцитна левкемия, а повишенията на еритроидните и мегакариоцитните клетки са слаби1. Малката популация от гранулоцити с лобовидни ядра в засегнатата област без очевидно възпаление показва, че откритията в настоящия случай са неопластична, а не реактивна миелопоеза.

При гранулоцитна левкемия костният мозък може да бъде заменен от незрели и зрели миелоидни клетки. В предишен доклад за други видове мишки, тези неопластични клетки са инфилтрирали напълно черния дроб, далака, лимфните възли и т.н.2 и тези клетки в далака и черния дроб са разположени главно в червената пулпа и около капсулата на Glisson1. По този начин разпределението на левкемичните клетки в настоящия случай е идентично с това в предишния случай. Въз основа на морфологията на клетките, гранулоцитната левкемия при мишки се класифицира в два типа: ювенилен тип, който е сравним с човешката остра миелогенна левкемия, и зрелият тип с човешката хронична миелогенна левкемия1. В юношеския случай, неопластичните клетки в костния мозък, далака и черния дроб са доминирани от слабо диференцирани клетки, докато могат да се видят миелоидни елементи, представляващи различни степени на съзряване, а процентът на миелобластите е нисък в някои зрели случаи2, 9. В В настоящия случай левкемичните клетки са доминирани от незряла форма с големи ядра с овална до леко неправилна форма. В допълнение, като се имат предвид клиничните находки, че общото влошаване на здравето, включително прогресивна анемия и груби дихателни движения, се развиват остро; следователно настоящият случай се приема за младежки тип.

Фиг. 1. Хистологични изображения на костния мозък на бедрената кост. A: Неопластични клетки дифузно пролиферират, като по този начин заместват костния мозък. B: Ядрата са големи, с овална до леко неправилна форма. Малък брой клетки имат ядра с форма на бъбрек (жълта стрелка), пръстеновидна (зелена стрелка) или лоб (бяла стрелка). Митотичната фигура е обозначена с бяла стрелка. ТОЙ петна. Черна лента =50 μm (A), 10 μm (B).

В предишна публикация за мишки NOG, неопластични лезии като цяло са необичайни; въпреки това, тимусният лимфом е докладван при 0.82% във възрастовата група, варираща от 16 до 40 седмици7, 10. Доколкото ни е известно, спонтанна гранулоцитна левкемия не е докладвана преди това при мишки NOG. При няколко вида мишки, включително B6C3F1 и BALB/c, гранулоцитна левкемия се появява рядко2, 11 и не е докладвана в случай на тези мишки на възраст 12 месеца или по-млади. Настоящият случай развива гранулоцитна левкемия на 51-седмична възраст, което е сравнително млада възраст. Тази нова информация за спонтанни тумори може да бъде полезна за правилното използване на този щам на мишка в по-нататъшни изследвания.