Проучване за подобряване на ефектите на екстракт от фенилетаноидни гликозиди от Rouchongrong (Cistanche Deserticola) върху липидния метаболизъм в черния дроб на ApoE - / - мишки с диета с високо съдържание на мазнини, базирано на регулиране на ACOX1 - CPT2 експресии

РЕЗЮМЕ Цел:За да изследватеефектите на екстракта от фенилетаноидни гликозидиотCistanche deserticola(PGCD) върху метаболизма на липидите в черния дроб на ApoE-/- мишки, индуциран от диета с високо съдържание на мазнини. Методи: 70 мъжки ApoE-/- мишки, хранени с диета с високо съдържание на мазнини, бяха разделени на 5 групи, моделна (MOD) група, положителна контролна група мишки получиха аторвастатин [20 mg/(kg·d)] + езетимиб [20 mg/(kg) ·d)](A + E), бяха дадени PGCD групи с ниска, средна и висока дозаPGCD[250, 500, 1000 mg/(kg·d)]; други 14 мъжки C57BL/6J мишки с achow диета бяха определени като нормална контролна (CON) група. На 12-ия уикенд съдържанието на TG и активността на ALT и AST в серума и чернодробната тъкан бяха открити съгласно инструкциите за работа. Прясна чернодробна тъкан беше хомогенизирана и съдържанието на синтаза на мастни киселини (FAS), дълговерижна ацил - CoA дехидрогеназа (LCAD) и глутатион пероксидаза (GSH - Px),супероксид дисмутаза (SOD)активностите са тествани с метод ELISA, междувременно съдържанието на малондиалдехид (MDA) и липиден пероксид (LPO) е открито с kidmethods. Експресиите на иРНК на ацил-коензим А оксидаза 1 (ACOX1) и карнитин палмитоилтрансфераза 2 (CPT2) бяха открити чрез RT-PCR експерименти.

НАТИСНЕТЕ ТУК, ЗА ДА ЗНАЕТЕ 80%ФЕНИЛЕТАНОИДНИ ГЛИКОЗИДИНАТУРАЛЕН ОРГАНИЧЕН ЕКСТРАКТ ОТ ЦИСТАНША

Поддържаща услуга на Wecistanche-най-големият износител на cistanche в Китай:

Имейл:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/телефон:+86 15292862950

Пазарувайте за повече подробности за спецификациите:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Резултати:За разлика от моделната група,три дози PGCD намаляват нивата на TGв черния дроб и серума по дозозависим начин и понижава активността на ALT и AST в серума. Всички три дози PGCD намаляват съдържанието на FAS по дозозависим начин и повишават значително съдържанието на LCAD в черния дроб.PGCD популяризиранактивността на GSH - Px и SOD и значително намалява съдържанието на MDA и LPO в черния дроб. Експериментите с RT-PCR показват, че PGCD повишава нивата на mRNA на ACOX1 и CPT2 в чернодробната тъкан.

Заключение:PGCD може да подобри липидния метаболизъм и реакцията на оксидативен стрес и да намали отлагането на липиди в чернодробната тъкан чрез регулиране на mRNA експресиите на ACOX1 и CPT2.

Ключови думи:Фенилетаноидни гликозиди екстракт от Cistanche deserticola; ACOX1; CPT2;липиден метаболизъм;оксидативен стрес; ApoE-/- мишки

Неалкохолна мастна чернодробна болест(NAFLD) е едно от най-разпространените чернодробни заболявания в света, с разпространение от близо 30% в общата популация. Затлъстяването на черния дроб в Китай нараства с годишен темп от 0,594% [1]. Появата и развитието на NAFLD са тясно свързани с прекомерния калориен прием на тялото. Диетата с високо съдържание на мазнини води до прекомерно натрупване на мазнини в черния дроб и индуцира NAFLD [2], а началната стъпка в нейната патогенеза е отлагането на триацилглицерол (TG) в чернодробните клетки [2] 3]. Към днешна дата няма специфични терапевтични лекарства, насочени към патогенезата на NAFLD. Намирането на безопасни, ефективни лекарства с ясни механизми за превенция и лечение на NAFLD се превърна във важна задача за изследователите. Cistanche deserticola YC Ma е паразитно растение от род Cistanche от семейство Orobanchaceae. Неговият основен компонент, фенилетаноидни гликозиди, има функциите за подобряване на имунната функция на тялото, анти-стареене, анти-радиация, антиоксидант и хепатопротектор, както и други ефекти [4-5]. Това проучване има за цел да проведе предварително проучване на механизма наФенилетаноидни гликозиди от Cistanche deserticola(PGCD) за подобряване на липидния метаболизъм.

1 Експериментални материали

1.1 Експериментални лекарства

Месестите стъбла на Cistanche deserticola (съдържание на влага 8,5%) са закупени от Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; фенилетаноидните гликозиди (основни компоненти вербаскозид и ехинацеазид) референтни вещества (и двете чистота > 98%) са закупени от Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Аторвастатин: Pfizer Shanghai; Езетимиб: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Опитни животни

Мъжки C57BL/6J мишки и ApoE-/- мишки на възраст от 6 до 8 седмици, телесно тегло (20 ± 2) g, закупени от Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., номер на лиценза: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 h / 12 h светлинен цикъл, температура (22 ± 1) градуса, влажност 50% ~ 60%, свободен прием на храна и вода. Преди експеримента мишките са хранени със стандартна диета в продължение на 1 седмица, за да се адаптират. Всички грижи за животни и експерименти следват разпоредбите на Комитета по етика на експерименталните животни към Първия медицински университет в Шандонг (Етичен номер: W202107080303).

1.3 Експериментална реагенти

Фураж с високо съдържание на мазнини: Harlan Teklad; TG, ALT, AST комплекти: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; FAS, LCAD комплекти: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; GSH-Px комплект: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; SOD, MDA, LPO, BCA комплекти: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Тризол комплект: Invitrogen, Карлсбад, Калифорния; Праймери ACOX1 и CPT2: проектирани от Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 експериментални инструмента Hei - VAP Expert Ротационен изпарител: Германия

Хайдолф; Многофункционален четец на микроплаки Varioskan LUX: ThermoFisher; FD8508 вакуумна сушилня чрез замразяване: Ilshin, Южна Корея; F6/10 хомогенизатор: Shanghai Fluoroco; Agilent1260 високоефективен течен хроматограф, спектрофотометър Cary 3500 UV: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - PCR инструмент: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Телесна маса и чернодробен индекс

В края на 12-та седмица, мишките бяха гладни и претеглени. Мишките се анестезират с натриев пентобарбитал и се умъртвяват. Черният дроб се събира за изчисляване на чернодробния индекс.

2.3.2 Откриване на серумен индикатор

Вземете серума и открийте активността на серумната аспартат аминотрансфераза (AST) и аланин аминотрансфераза (ALT) в последователност според работата на комплекта; BCA определя съдържанието на протеин в серума и открива съдържанието на TG.

2.3.3 Откриване на фактори, свързани с липидния метаболизъм в чернодробната тъкан

При условия на 4 градуса претеглете подходящо количество пресен черен дроб и го хомогенизирайте в PBS, центрофугирайте (радиус на центрофугата 7,5 cm, 3 000 r/min) хомогената за 1 минута, вземете супернатантата и измерете протеиновото съдържание на чернодробна тъкан чрез BCA. Съдържание на TG в тъкан, ELISA метод за откриване на съдържание на синтаза на мастни киселини (FAS) и дълговерижна ацил-CoA дехидрогеназа (LCAD) в чернодробната тъкан.

2.3.4 Откриване на окислителни фактори, свързани с чернодробната тъкан

При условия на 4 градуса претеглете подходящо количество пресен черен дроб и го хомогенизирайте в PBS, центрофугирайте хомогената (центрофугален радиус 7,5 cm, 3 000 r/min) за 15 минути, вземете супернатантата и измерете протеиновото съдържание на чернодробна тъкан с BCA. Следвайте реагентите Инструкциите на кутията откриват активностите на супероксид дисмутаза (SOD) и глутатион пероксидаза (GSH-Px) и едновременно с това откриват нивата на малондиалдехид (MDA) и липиден пероксид (LPO).

2. 3. 5 RT-PCR откриване

ACOX1/CPT2 mRNA експресия в чернодробна тъкан: Вземете подходящо количество прясна чернодробна тъкан, използвайте комплект Trizol за извличане на обща mRNA на чернодробна тъкан, използвайте MuLV обратна транскриптаза за синтезиране на cDNA и използвайте cDNA като шаблон за извършване на количествена флуоресценция в реално време PCR (Qpcr) откриване. реакционните условия са: предварително денатуриране при 95 градуса за 2 минути; денатурация при 95 градуса за 10 секунди, отгряване: 60 градуса за 30 секунди, удължаване при 72 градуса за 35 секунди, 34 цикъла и накрая удължаване при 72 градуса за 5 минути и количествено определяне в реално време от автоматичен анализатор. ACOX1 и CPT2 mRNA експресия. Rotor-gene Q софтуер. 1.7 (Qiagen) беше използван за анализ на данни и методът 2-△△Ct беше използван за преброяване на относителните нива на mRNA и GAPDH. Всяка група от експерименти се провежда паралелно > 3 пъти. Праймерните последователности са както следва: GAPDH, нагоре: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', надолу по веригата: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, нагоре: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' надолу по течението: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, нагоре: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' надолу по течението: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Статистически методи

За анализ на данните беше използван статистически софтуер SPSS 20.0. Данните от измерването бяха изразени като (x ± s). За сравнение между групите беше използван еднопосочен дисперсионен анализ. P <0,05 се счита за статистически значима разлика.