Проучване върху влиянието на имунитета при мишки

За да научите повече информация, моля свържете сеdavid.wan@wecistanche.com

Двама от тридесет мъжеDBA/2NCrl(D2N) мишки, използвани като контролен щам при анализ на фонови данни наDBA/2N-MDXмишки, представени с абнормни находки, предполагащи инфекция. Случай 1: 4-седмична мъжка D2N мишка показа лезия с бяла плака в левия бъбрек (без клинични симптоми) и беше извършено патологично изследване на бъбрека. Наблюдавана е възпалителна клетъчна инфилтрация, главно неутрофили, в тубулите и интерстициума на левия бъбрек и Staphylococcus aureus (S.aureus) е открит от левия бъбречен сегмент. Следователно тази лезия на левия бъбрек е диагностицирана като гнойнатубулоинтерстициаленнефрит, причинен от инфекция с S. aureus. Случай 2: Ляв тортиколис със загуба на тегло е открит в 9-седмична мъжка D2N мишка. Хистологичната оценка разкрива ексудативно възпаление около фарингеалния отвор на евстахиевите тръби и гнойно възпаление на двете средни уши и лявото вътрешно ухо с образуване на абсцес и клъстери като грам-положителни микроколонии. S. aureus беше идентифициран от тампони от двата външни ушни канала. В резултат на това този случай на тортиколис е причинен от S. aureus-гноен отит и интернет. S. aureus е добре известен като опортюнистичен патоген с потенциал често да причинява гнойни заболявания при имунокомпетентни лабораторни животни. Въпреки това, доколкото ни е известно, този случай на инфекция с S. aureus, представена с тортиколис в D2N мишка, не е докладван.

Щракнете тук, за да научите повече за Cistanche

Метицилин-резистентен Staphylococcus aureus (MRSA) изолати се появяват в лабораторна мишка в Центъра за лабораторни животински науки на Националния медицински колеж по отбрана през 2018 г. иMRSAизолати бяха възстановени от мишки също и в другите помещения за мишки след това. На тези MRSA изолати е извършено молекулярно типизиране, като типизиране на мултилокусна последователност (MLST), типизиране на Staphylococcus aureus Protein A(spa), типизиране на SCCmec и типизиране на коагулаза за определяне на техните генотипове. Всички изолати разкриват идентични генотипове (ST1, spa t1784, SCCmec тип IV и коагулаза тип VII), което предполага, че изолатите са идентични клонове. Преди появата на MRSA през 2018 г. в това съоръжение не са изолирани изолати с такива генотипове, предполагаше се, че клонингът на MRSA е внесен в съоръжението чрез хора или лабораторни животни. STl1 е първият придобит в общността MRSA, възстановен от деца в Съединените щати, но в момента ST1 се възстановява от хора и животни по целия свят. В Япония щамове ST1 и SCCmec тип IV са изолирани от хора и котки, което предполага, че ST1 се предава между хора и животни. Щам MRSA с тези генотипове, но също и със spa tl784, е възстановен от хора. Понастоящем разграничението между MRSA, придобит в болница, MRSA, придобит в обществото, и MRSA, свързан с добитък, е по-неясно. Тези резултати предполагат, че мишките могат да действат като резервоари на MRSA.

При скорошната имунотерапия на рак активността на молекули като PD-1 се инхибира, за да се увеличи активността на имунните клетки срещу рак. Въпреки високия терапевтичен ефект, има случаи, при които при имунотерапия на рак се развива автоимунно заболяване. Тук създадохме система, която може да разгради PD-1 по специфичен за времето начин в култивирани клетки и мишки, използвайкиSMASh degron система. PD-1-SMASh слят протеин в Jurkat клетки и CD3 плюс спленоцити е намален с 1 ден след прилагане на Asunaprevir (ASV) или Grazoprevir (GRV), които са NS3/4A протеазни инхибитори. Растежът на MC-38 аденокарциномни клетки, инокулирани в PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) мишки с ASV, беше потиснат в сравнение с див тип (WT) и нетретирани KI мишки. Освен това, WT мишките, трансплантирани с KI клетки от костен мозък, след като са били облъчени със смъртоносна радиация, могат да отхвърлят MC-38 клетки с GRV. KI мишките изглеждат здрави и не показват признаци на автоимунно заболяване. Предполагаме, че се очаква използването на системата degron в живи организми да напредне не само в различни биологични изследвания, но и в лечението на заболявания.

Прогестеронът (P4) се секретира от плацентата, за да поддържа бременността и функционира като имунен регулатор. Друг е глюкокортикоидътимунорегулаторнистероид за регулиране на възпалението. В това проучване мононуклеарни клетки от човешка периферна кръв (PBMCs) бяха трансплантирани в NOG мишки, за да индуцират заболяване присадка срещу гостоприемник (GVHD) и използвани за сравнение между ефектите на P4 и кортизол (COR). PBMCs бяха стимулирани в присъствието на различни концентрации на P4 или COR и клетките бяха анализирани чрез поточна цитометрия (FCM). Аликвоти отPBMCsбяха трансплантирани в мишки NOG и P4 или COR бяха инжектирани в мишките два пъти седмично. След 28 дни бяха извършени FCM и имунохистохимични анализи. В резултат на това висока концентрация на Р4 инхибира активирането на Т клетки in vitro, докато инхибирането не продължава след отстраняването. Потискането на активирането на Т клетките е по-малко при лечение с COR в сравнение с P4 и изчерпването на Т клетките е по-забележимо. P4-инжектираните мишки носят повече спленоцити, особено CD8 Т клетки, в сравнение с контролните мишки. Въпреки това, по-ниската експресия на CD25, по-малко инфилтрация на човешки Т клетки в белия дроб и черния дроб и по-малкоGVHDса наблюдавани симптоми. От друга страна, броят на спленоцитите, особено Т клетките, в COR-инжектирани мишки е значително по-нисък и активираните/изтощените клетки са в изобилие. Тези резултати предполагат, че P4 предпочита да поддържа Т клетки в сравнение с COR in vitro.

Helicobacter hepaticus и Helicobacter bills са известни като патогени, които причиняват хепатит и колит при мишки. Съществуването на няколко положителни случая все още се потвърждава всяка година в съоръжения за експериментални животни в Япония. Най-добре е да използвате съдържанието на цекума или пресни изпражнения като проба за PCR тестване на H. hepaticus и H. bilis.

Напоследък реагенти за транспортиране и съхранение на ДНК и РНК се произвеждат от различни производители. Очаква се тези реактиви да бъдат отстранени проблемите при транспортирането на пробите, използвани за PCR тестове. Следователно, в това изследване полезността на реагента за съхранение на нуклеинова киселина беше изследвана чрез извършване на PCR тест на Helicobacter, използвайки съдържанието на цекума, запазено с помощта на реагента за съхранение на нуклеинова киселина. В резултат на това пробите, съхранявани в продължение на 7 дни, като се използва разтворът за консервиране, могат да открият Helicobacter на същото ниво като прясната проба. От горното се предполага, че при PCR теста за Helicobacter, Дори ако транспортирането отнема дни, е възможно да се извърши тестът с висока точност чрез транспортиране на пробата, потопена в реагента за съхранение на нуклеинова киселина, с хладилен полет.

Преди това сме разработили мутантни щамове на E.coli със значително подобрено прилепване към in vitro твърди повърхности чрез модифициране на гените, които реагират на хранителния глад. За да оценим взаимодействието между тези усилени с адхезия щамове на E. coli (AEE) и in vivo чревната среда, ние оценихме тяхната способност за колонизация в чревния тракт чрез инокулиране на мишки.

Преди експеримента за оценка ние трансформирахме AEEs с плазмид, експресиращ луцифераза за in vivo визуализиране. като бяха орално инокулирани в мишки на гладно и събрани изпражнения на всеки няколко дни. Броят на живитеAEEsсе оценява чрез измерване на CFU от събраните изпражнения.

В резултат на това, в сравнение с контролния щам, AEEs са по-изобилни във фекалиите за повече от една седмица, което показва засилена колонизация в чревния тракт. Чрез наблюдение на локализацията на луминесценцията на луцифераза чрез неинвазивно изобразяване с помощта на IVIS беше установено също, че AEEs са склонни да се колонизират в цекума и дебелото черво.

[Цел] В момента, [Pasteurella]пневмотропикае прекласифициран като нов род Rodentibacter. От тях R.pneumotropicus и R.Healy са основните цели за микробиологичен мониторинг при гризачи. Изолирахме редица Rodentibacter sp. които не могат да бъдат идентифицирани като видове от гризачи. В това проучване ние изследваме характеристиките на Rodentibacter sp. изолат, като се фокусира върху бактериалната вирулентност. [Методи] Rodentibacter sp. които са изолирани от трахеята на плъх, са използвани за изследването. Секвенирането на проект на геном беше извършено на секвенсор от следващо поколение и след това бяха предсказани гените, свързани с вирулентността. В експерименти с животни Rag2 мишки са използвани за Rodentibacter sp. инфекция.|Резултати| Чрез проектното секвениране на генома, уникален ген, кодиращ RTX токсин, е идентифициран в Rodentibacter sp. Протеиновата последователност на RTX токсина е по-хомоложна на тези, произведени от Enterobacteriaceae, отколкото от Pasteurellaceae. При експеримент с животни, почти всички заразени Rag 2 мишки бяха потвърдени с фатална пневмония или септицемия. Въпреки че изолатът не може да бъде идентифициран като R. pneumotropicus и R. heylii, този тясно свързан вид може да бъде летален за имунокомпрометирани животни в присъствието на вирулентни фактори като RTX токсин.

В Програмата за развитие на основна технология на NBRP (2018-2019) ние секвенирахме геномите на миши опортюнистични патогенни бактерии и извършихмеRNAseqна протозои в мишки, за да се разработят PCR анализи за тези организми. Използвахме тези резултати, за да анализираме Rodentibacter spp. и протозои при плъхове в сътрудничество с университета в Киото (NBRP Rat). Тук докладваме резултатите от тестовете в проби от плъхове. [Методи] Генните последователности на 16S rRNA от около 1,5 kbp бяха разчетени чрез PCR за шест изолата на плъх от Rodentibacter spp. и проектната последователност на генома на един изолат (#25) беше определена с помощта на Illumina HiSeq 2500. PCR на съдържанието на цекума на плъх беше определена извършено въз основа на резултати от RNAseq на миши протозои. [Резултати] Генните последователности на 16S rRNA на всички изолати бяха идентични и те бяха идентифицирани като Rodentibacter Ratti чрез OTU анализ. Повторното секвениране на изолат #25 също разкрива, че този щам е R. Ratti. PCR за миши протозои дава положителни резултати за амеба на плъх. Не са получени положителни резултати за TrichomonasPCRвърху екземпляри от плъхове. [Дискусия] Плъховите изолати на Rodentibacter spp. разгледани в този доклад бяха всички R. Ratti. Важно е да сте наясно с наличието на R. Ratti, когато извършвате тестове за Rodentibacter при плъхове. Някои фекални проби от плъхове са показали положителен PCR за амеба на мишка. Това е първата стъпка в развитието на PCR за откриване на протозои при плъхове.

Родентибактерните организми „Pasteurella pneumotropica“ са опортюнистична патогенна бактерия, която причинява респираторни заболявания при мишки и плъхове. Преди това те бяха класифицирани в рода Pasteurella и няколко щама бяха условно предложени като биотипове. През 2017 г. те бяха колективно реорганизирани в рода Rodentibacter. Щамовете MaM и MaR са изолирани съответно от мишки и плъхове около 80-те години на миналия век. В това проучване ние определихме геномните последователности на двата щама и ги сравнихме с тези от рода Rodentibacter, материали и методи. Щамовете MaM и MaR бяха получени от Националния институт по инфекциозни болести (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Фумио Ике). И двата щама бяха отгледани чрез течна култура за извличане на геномна ДНК и геномните последователности бяха определени с помощта на Illumina Hiseq 2500 и PacBio Sequel. [Резултати] Въз основа на генната последователност на 16S rRNA, щамът MaM беше идентифициран като R.pneumotropicus, а щамът MaR като Р. Рати. Освен това беше определена пълната геномна последователност (2 213 961 bp) на MaR щама (броят на rRNA опероните беше 6 и броят на гените беше оценен на 2 063). [Дискусия1 Щамовете MaM и MaR са използвани като стандарти за идентифициране на Pasteurella pneumotropica в Япония. От този анализ ние определихме видовете и на двата щама, както следва: щамът MaM е R.pneumotropicus, а щамът MaR е R.ratti. Забележително е, че тези резултати показват, че R. Ratti може да бъде изолиран от плъхове в Япония.

Clostridium pili for me (CP) е податлив на инфекция при различни лабораторни животни, включително плъхове и мишки, и показва асимптоматична инфекция, освен при имунокомпрометирани животни. Счита се за основна диференциална диагноза за поддържане на съоръжения за животни и е добре известно, че влияе върху експериментални данни от проучвания върху животни. Серодиагностиката (ELISA, IFA) и PCR обикновено се използват за диагностика на CP, тъй като изолирането в изкуствената хранителна среда е трудно за CP. Въпреки това, съществуването на неспецифично антитяло, показващо кръстосана реактивност с CP, използвайки серодиагностиката, се съобщава и често се разпознава в подобен случай в нашите съоръжения. Освен това PCR методът има ограничения като надежден диагностичен метод с периодичен мониторинг, тъй като CP е неоткриваем във фекалиите след нарастващия титър на антителата. Наскоро проучихме различен подход, запазвайки изпражненията от животните всеки месец. Приехме PCR теста за CP, който не се повлиява от влиянието на антителата, като по-надеждна диагностика, използвайки непрекъснато запазените изпражнения. В този доклад показваме скорошен случай. (неспецифично антитяло), за да доведе до проверка на потока, развиващ се в нашата компания.