Изследване на антиоксидантната активност на фенилетаноидни гликозиди от Cistanche Deserticola

Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Централна лаборатория на Чанчун Нормален университет, Чанчун, Джилин 130032)

Резюме[Цел] Изследването имаше за цел да проучи систематично антиоксидантната активност на фенилетаноидни гликозиди отЦистанчеdeserticola. [Метод] Две моделни системи, тестът за свободен радикал 2,2-дифенил-1-пикрилхидразил (DPPH ') и фотохемилуминесцентният (PCL) анализ, бяха използвани за измерване на антиоксидантната активност на екстракта от C. deserticola, актеозид, изоактеозид и ехинакозид. [Резултат] Резултатите показват, че общото фенолно съдържание (TPC) в ехинакозид, актеозид, изоактеозид и 80 процента етанолов екстракт от C. deserticola е 753,95, 659,94, 356,14 и 14,73 mg галова киселина/g проба. Екстрактът от C. deserticola показа силна антиоксидантна активност в PCL експеримента, последван от ехинакозид, актеозид и изоактеозид. Въпреки това, ехинакозидът показва силна антиоксидантна активност в експеримента с DPPH, последван от актеозид, изоактеозид и екстракт от C. deserticola.

[ Заключение ]Това изследване може да предостави справки за изследване на фармакологията и биологичната активност на фенилетаноидни гликозиди от C. deserticola.

Ключови думи Cistanche deserticola ; актеозид; изоактеозид; Ехинакозид ; Антиоксидантна активност; DPPH ; PCL

Цистанче (Cistanche deserticolaYC Ma.) е растение отЦистанчерод (Oro-banehaeeeae) наЦистанчерод (Цистанче). Изсушено месесто стъбло на цистанче с люспести листа. Голям брой изследвания са установили, че основните активни съставки на растенията Cistanche са гликозидни съединения на фенетилов алкохол. . Фенилетанол гликозидното съединение принадлежи към вид полифенолно съединение, което е широко разпространено в много видове растения. Фармакологичните тестови проучвания показват, че тези съединения имат широк спектър от фармакологични и биологични активности, като анти-хепатотоксин, противовъзпалителни, аналгетични и антиоксидантни активности. Сред тях най-впечатляващото е, че съединението феноксиетанол гликозид има много добра антиоксидантна активност. Авторът основно провежда систематичен анализ на антиоксидантната активност на гликозидните съединения на фенетилов алкохол вЦистанче, като се използват два метода за in vitro оценка на антиоксиданти, а именно Photoehemilumineseence (PCL) и 2,2-diphenyl-1-pieryl-hydroxyl (DPPH') Две различни системи бяха използвани за измерване на антиоксидантната активност на 80 процент етанолов екстракт отЦистанче, ергостерозид, изоергозид, иехинакозид.

1 Материал и методи

1.1 Проби и реактиви

Цистанче (Cistanche deserticola)медицинските материали са закупени от аптеката Beijing Tongrentang.Ергостерозид, изоергозид,ехинакозид, Фолин. Реагент Ciocalteu, галова киселина, 2,2-дифенил-1-пикрилхидразил (DPPH.) и др. бяха закупени от SigmaChemicalCo. Компания (Сейнт Луис, Мисури). Разтворителят, използван за PCL анализ, беше предоставен от Analytik Jena AG (Берлин, Германия). Всички други реагенти са аналитични реагенти (произведени от Пекинския химически завод). Водата е свръхчиста (18,2 nPa).

1.2 Извличане на проба

Претеглете точно 2,0005 g отЦистанчепроба на прах, използвайте 50rnl 80 процента етанол за ултразвукова екстракция при стайна температура за 0,5 часа, екстрахирайте два пъти, филтрирайте разтвора на пробата, изпарете на ротационен изпарител до сухо (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Определяне на общото съдържание на полифеноли в пробата

Общото съдържание на фенол в пробата се определя с помощта на метода F{{0}}lin-Ciocaheu и резултатът се изразява като милиграми галова киселина на грам екстракт. Вземете разтвор на проба с определена концентрация 0.2rnI (за да накарате абсорбцията да падне върху стандартната крива), добавете 1 ml реагент на Folin-Ciocaheu с концентрация 0.5mol/L и след това добавете 0.8 ml разтвор на натриев карбонат с концентрация от 7,5 процента, за да се смеси добре, Поставя се на стайна температура за 0.5h и след това се измерва абсорбцията при 765 nm (ултравиолетов видим спектрофотометър: DU800, Beckman Couher, Inc. САЩ). Използвайте разтвор на галова киселина (обхватът на масовата концентрация е 0.02-0.20me,/m1), за да направите стандартната крива и всички тестове се повтарят два пъти.

1.4 Антиоксидантна активност in vitro анализ

1.4.1 Определяне на метода PCL.

Тестът използва ултра-бърз автоматичен анализатор на антиоксиданти и свободни радикали Photochem@(Берлин, Германия). Принципът е да се генерират свободни радикали чрез фотохимичен метод и да се използва хемилуминесцентният метод за откриване на свободни радикали. В експеримента беше използван фотосенсибилизатор с фотохимичен ефект на възбуждане за възбуждане на реакционните молекули, така че под действието на ултравиолетовата лампа реакцията на окисление се случи 1000 пъти по-бързо от нормалните условия и свободните радикали се генерират бързо." Изберете метода PCL-ACW-Kit Измерете антиоксидантната активност на водоразтворимите компоненти на подпробите от псилиум. Пипетирайте 1.0ml реакционен буфер (включително концентрацията на 0.1mol/L натриев карбонат, pH стойност от 10.5 и концентрация на 0.1mmol/LNA, един EDTA, 1.5ml ACW-разредител (вода ), концентрация 1 mmol/LLumino1) действа като фотосенсибилизатор за възбуждане на реакционните молекули, така че свободните радикали да се генерират бързо, и в същото време като фотохемилуминесцентно вещество. Както пробата, така и стандартът са 10 "l. Чрез измерване на различни концентрации (0,5, 1,0, 2,0 и 3,0 nmol/L) на L. Уравнението на стандартната крива за аскорбинова киселина е Y=24.640Ox плюс 2.9311, R²=0.9969. Необходимо е пробата или стандартният разтвор да се разреди в теста, така че интервалът от време на забавяне да попадне в линейния диапазон на стандартната крива. Photochem генерира стандартната крива и автоматично тества антиоксидантната активност на пробата, а антиоксидантната активност на пробата е еквивалентна на L． Изчислено по броя наномоли аскорбинова киселина.

1.4.2 Определяне на метода DPPH.

Дифенилпикрилхидразино радикалът [DPPH ·] е стабилен азотно-центриран радикал с максимална абсорбция при дължина на вълната 515 nm. Разтворът на [DPPH ·] метанол е лилав и концентрацията му има линейна връзка с абсорбцията." След добавяне на антиоксиданти към разтвора на [DPPH ·] метанол, антиоксидантите могат да се комбинират с [DPPH ·] свободни радикали или да ги заменят, за да направят [DPPH ·] ] Броят на свободните радикали намалява и цветът на разтвора става по-светъл, което се проявява чрез непрекъснато намаляване на абсорбцията при дължина на вълната от 515 nm, докато достигне стабилност." В теста е използван етанол вместо метанол. Претеглете точно [DPPH ·] и конфигурирайте концентрацията на 0. [DPPH ·] етанолов разтвор на 0.040 76mg/ml, получава се стандартната крива на [DPPH ·]: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Методът за измерване на остатъчната скорост на свободните радикали се позовава на литературата [16]. Използвайки етанол като разтворител, пригответе различни концентрации на проба и стандартен разтвор, вземете съответно 0,1 ml проба или стандартен разтвор и добавете 3,9 ml [DPPH·] стандартен разтвор с масова концентрация 2,5 mg/L (използва се в момента)), заменете разтвора на пробата с етанол като празна проба. Разклатете смесения разтвор, използвайте кювета, за да измерите неговата абсорбция в различно време при дължина на вълната от 515 n и го преобразувайте в масовата концентрация на [DPPH·] според стандартната крива, за да изчислите остатъчната скорост на [DPPH·]. Според остатъчната скорост на [DPPH ·] и съответното количество добавена проба може да се начертае крива за отстраняване на [DPPH -] свободни радикали от пробата. Според кривата на връзката между масовата концентрация на [DPPH ·] и абсорбцията, абсорбцията, измерена след добавянето на уловителя на свободните радикали, може да се преобразува в масовата концентрация на [DPPH ·], за да се изчисли [DPPH ·] след добавяне на уловителя на свободните радикали. Формулата за изчисляване на остатъчната скорост е както следва: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 процента, където [DPPH·] е масовата концентрация на DPPH · в определен момент от процеса на улавяне на свободните радикали, [DPPH·]:. Това е първоначалната масова концентрация на DPPH·. Според броя на добавените антиоксиданти и остатъчната скорост на [DPPH ·] се прави кривата на връзката между двете и регресионното уравнение може да се получи чрез линеен регресионен анализ. Съгласно регресионното уравнение може да се изчисли антиоксидантната доза, когато остатъчното ниво на [DPPH ·] е 50 процента. Половин инхибиране. Съгласно [DPPH·] кривата на улавяне на свободните радикали на различни концентрации на проби или стандарти, изчислете количеството EC на пробата, когато първоначалната масова концентрация на [DPPH·] се намали до 50 процента (стационарно състояние). Колкото по-малък е EC, толкова по-силна е способността за улавяне на свободните радикали". Тествайте 3 пъти паралелно.

цистанче

2 Резултати и анализ

2.1 Определяне на общото съдържание на полифеноли в пробата При определянето на общото съдържание на полифеноли, общото съдържание на полифеноли вехинакозиде най-високата, която е 753,95 mg галова киселина/g. Следвани от ергостероидни гликозиди, изоергостероидни гликозиди и сурови екстракти отЦистанче, които са съответно 468.3, 356.14 и 14.73 mg галова киселина/g.

2.2 Определяне на антиоксидантната активност на пробата

2.2.1 Резултати от определяне на метода PCL-ACW. В антиоксидантния тест PCL-ACW, антиоксидантният капацитет от 1txgЦистанчелекарственият материал е еквивалентен на антиоксидантния капацитет на 15,68 nmol L-аскорбинова киселина; 1 грехинакозиде еквивалентен на антиоксидантния капацитет на 14.03nmol аскорбинова киселина Активност: 1txgергостерозиде еквивалентен на 11.44nmolL антиоксидантен капацитет на аскорбиновата киселина; 1Ixg изомергостерозид е еквивалентен на антиоксидантната активност на 8,24nmol аскорбинова киселина.

2.2.2 Резултати от измерване по метода DPPH. От таблица 1 се вижда, че е изчистен. Редът на способността на свободните радикали еергостерозид, ехинакозид, изоергозид и суровият екстракт отЦистанче, сред които ерго страна иехинакозидимат основно същия антиоксидантен капацитет в DPPH теста. От това се вижда. Тъй като за измерване на проби се използват различни in vitro системи за антиоксидантни тестове, механизмът на антиоксидантните ефекти е различен и резултатите може да са противоречиви. Това също е потвърдено в теста. Следователно е необходимо да се изберат други системи за антиоксидантен анализ за по-нататъшна проверка.

ехинакозия

препратки

[1] Янг Куйпин, Су Уейвей. Напредък на изследването на месната супа[J]·Chinese Medicinals Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Напредък на изследванията върху химическите съставки на растенията Cistanche [J].Chinese Herbal Medicine, 2003,34(5):473 -476.

[3] ХИРОМИ КОБАЯШИ, ХИРОКО КАРАСАВА ДЖОШИО МИЯСЕ. Изследвания на съставките Cistanchis Herba. здрасти Изолиране и структури на нови фенилпропаноидни гликозиди, цистанозиди A и B [J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4] LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG и др. Изолиране и пречистване на фенилетаноидни гликозиди отCistanche deserticolaчрез високоскоростна противотокова хроматография [J]. Химия на храните, 2008, 1(^:702-710.

[5] LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ и др. Изолиране и пречистване на актек^ид и изоактеозид от Plantago psyllium L. чрез високоскоростна противотокова хроматография [J]. Journal of Chromatography A, 2005, 1063: 161-169.

[6] RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Фенолни съединения от Plantago Asiatica [J]. Фитохимия, 1990, 29: 3627-3631.

[7] TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Фенолни гликозиди от болни корени на Rehmannia gluiinosa var. пурпура [J]. Фитохимия, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya и др. Cistanche cistanche тотални гликозиди in Vitro, извличащи свободните радикали и защитни ефекти върху увреждането на ДНК, предизвикано от OH [J]. Китайски фармацевтичен вестник, 2001, 36(1): 29-31.

[9] XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y и др. Хепатопротективна активност на фенилетаноиди отCistanche deserticola[J ]. Planta Med, 1998, 64:120.

[10] SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG и др. Противовъзпалителни и антиноцицептивни действия на екстракти и изолирани съединения от Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Защита на фенилпропаноидни гликозиди от Pedicularies срещу окислителна хемолиза in vitro [J]. Planta Med, 1993, 59:315—317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX и др. Антиоксидантна активност на фенилетаноидни гликозиди от рак на Brandisia [J]. Ethnopharmacology, 2000, 71: 483-486.

[13] XIONG Q, KADOTA S, TANI T и др. Антиоксидантни ефекти на фенилетаноида отCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996, 19: 1580-1585.

[14] TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Кои полифенолни съединения допринасят за общата антиоксидантна активност на ябълката? [J]. J Agric Food Chem, 2005, 53: 4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Хиотохемилуминесцентно откриване на антирадикална активност: U. тестване на неензимни водоразтворими антиоксиданти [J]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16] BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Използване на метод на свободни радикали за оценка на антиоксидантната активност [J]. Lebensm Wiss Technol, 1995, 28: 25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. DPPH метод за определяне на способността на проантоцианидините от гроздови семена да улавят свободните радикали [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Оценка на антиоксидантната активност чрез използване на различни in vitro методи [J]. Free Radical Research, 2002, 36 (2): 177-187.