Синергичен анти-кожа пигментационен ефект на цистаче фенилетаноидни гликозиди и глабридин
Jan 14, 2025
Резюме за изследване на синергичнияЕфект на CistancheФенил етанол страна (PHGs) и Glabridin (GLA) срещу кожната пигментация, съотношението на масата на PHGs и GLA се екранизира чрез in vitro тирозиназа експеримент с инхибиране, 1, 1- дифенил -2- тринитрофенилхидразин 2, 2- diazo-bis (3- етил-бензотиазол -6- сулфонова киселина диаммоний катион (ABTS+) Свободни радикални експерименти за почистване. индекси.
TheвъзпалителниМодел на HACAT клетки, индуциран от липополизахарид (LPS), и противовъзпалителният ефект на лекарството се оценява чрез инхибиране на освобождаването на интерлевкин -6 (IL -6) и фактор на тумор некроза- (TNF-). Оксидативният стрес модел на HACAT клетки, индуциран от азодисобуамидин хидрохлорид (AAPH), е допълнително установен и засилената активност на супероксид дисмутаза (SOD) и каталаза (CAT) се използва като индекси за оценка на антиоксидантния ефект на лекарството. Оптималното съотношение на масата на PHG и GLA се определя от горните три клетъчни модела. Резултатите показват, че водни разтвори на PHG/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) и PHGS/GLA (10∶1), приготвени с M (PHGs) ∶m (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1, показват добър инхибиторен и синергистичен ефект върху терозиназната активност и антиоксидантни активност. Скоростта на инхибиране на PHG/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) и PHGS/GLA (1 0 ∶1) водни разтвори с масова концентрация съответно 0,4 g/L са 94,37%, 92,93%и 88,06%. Степента на почистване на свободните радикали на DPPH е съответно 89,44%, 88,72,%и 88,10%.
Степента на почистване на ABTS+ свободните радикали е съответно 1 0 0,13%, 100,0,1%и 99,87%. Когато масовата концентрация на PHGs/GLA е 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) и PHGS/GLA (10∶1) водни разтвори не показват цитотоксичност към B16F10 и HACAT клетки. Инхибирането на активността на тирозиназа във водния разтвор на PHGS/GLA (1 ∶1) е по -силно (тирозиназна активност 23,80%), а съдържанието на меланин (30,90%) е значително намалено. Водният разтвор на PHGS/GLA (1∶1) показва най-добрия ефект на инхибиране върху IL -6 и освобождаване на TNF и способността за подобряване на активността на SOD и CAT. Комбинацията от PHGs и GLA показа добри синергични показатели, превъзходно A до едно лекарство и по -високо от PHG/ GLA (5∶1) и PHG/ GLA (10∶1) воден разтвор. Комбинацията от PHGs и GLA играе синергична роля за подобряване на кожната пигментация чрез инхибиране на производството на меланин и противовъзпалителни и антиоксидантни ефекти.
Ключови думи Cistanche фенилетаноидни гликозиди; Глабридин; синергични ефекти; пигментация против кожа; анти-окисляване; противовъзпалителни; лекарствени материали
Cistanche фенил етанол страна за избелване
Подкрепяща услуга на Wecistanche-най-големият износител на Cistanche в Китай:
Имейл: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/тел: +86 15292862950
За повече информация относно потенциалните отстъпки, моля, не се колебайте да се свържете с нашия екип за обслужване на клиенти. Те ще се радват да ви помогнат!
Кожната пигментация е кожно заболяване, причинено от фактори като нараняване, възпаление на кожата и ултравиолетово лъчение [1-2]. Тези фактори могат да доведат до ненормално увеличаване на меланин, което от своя страна причинява проблеми като хлоасма, лунички и след възпалителна хиперпигментация (PIH) [3-4], засягайки психическото състояние на хората и качеството на живот. Понастоящем лечението на кожната пигментация се фокусира главно върху инхибиране на тирозиназа, ключов ензим при образуването на меланин [5-6].
Последното изследване [7-8] показва, че кожната пигментация зависи от тясната връзка между кератиноцитите и меланоцитите в епидермиса. След като свободните радикали и възпалителните фактори, освободени от кератиноцитите, влязат в контакт с меланоцитите, те ще предизвикат увеличаване на активността на тирозиназата, което води до увеличаване на съдържанието на меланин. Те също ще ускорят транспорта на меланина и ще причинят отлагане на меланин върху повърхността на кожата. Следователно, лечението на кожната пигментация изисква различни мерки като инхибиране на производството на меланин, противовъзпалително и анти-окисляване.
Понастоящем, въпреки че традиционните лекарствени препарати, като хидрохинон и хидрохинон, имат определени ефекти при лечението на кожна пигментация, техните режими на действие са сравнително единични и могат да доведат до нежелани реакции [9-10]. За сравнение естествените лекарства са естествени и леки и са все по -разпознати и похвалени от потребителите [11-12]. По-специално, комбинацията от множество растителни екстракти [13-14] може не само да инхибира производството на меланин, но и има множество ефекти като противовъзпалителни и антиоксидантни ефекти, осигурявайки нови идеи и методи за лечение на кожна пигментация.
Cistanche Deserticola MA има уникална лечебна стойност и е известна като "пустинен женшен". Проучванията са установили, че характерната съставка фенилетаноидният гликозид, съдържащ се в цистаче, има добра антиоксидантна активност [15] и противовъзпалителни ефекти [16], а също така има определен инхибиторен ефект на тирозиназа [17]. Glycyrrhizin е флавоноиден компонент в Glycyrhiza glabra L., който има мощен избелващ ефект и е известен като "избелващо злато" [18]. Традиционната китайска медицина лечение на кожната пигментация обикновено започва да управлява далака и бъбреците, изчиствайки топлина и детоксикация и попълване на Qi и кръв [19].
Фенилетанолните гликозиди на Cistanche Deserticola могат да попълнят бъбречния ян и да се възползват от същността и кръвта, докато глицирхиза Глабра може да попълни далака и ци, изчистване на топлина и детоксикация. Двамата могат да работят заедно, за да се противопоставят на пигментацията. The combination ofphenylethanoidc glycosides of Cistanche deserticola and glabridin may resist skin pigmentation from multiple dimensions and targets, protect against ultraviolet rays in the whole band, synergistically inhibit tyrosinase activity and reduce melanin production, and can also reduce free radicals and inflammatory factors, reduce skin inflammation and oxidative stress, and regulate melanin production and transport. В литературата обаче има малко доклади за синергичното инхибиране на кожната пигментация от фенилетаноидните гликозиди на цистанча пустикола и глабридин.
Този документ възнамерява да проучи дали има синергичен ефект между pphenylethanoidglycosides of Cistanche desertycola (PHGs) и Glabridin (GLA) чрез in vitro биохимично експерименти и установяване на 3 клетъчни модела, nd получават оптималното съотношение на масата на съединението за синергистичен ефект. Очаква се да предостави теоретична подкрепа и практически насоки за развитието на естествените продукти за грижа за растенията и да помогне за насърчаване на индустрията за грижа за кожата да се развива в по -естествена, здравословна и ефективна посока.
Къде: Реакцията е абсорбцията на разтвора на пробата, разтвор на L-тирозин, PBS и тирозиназа разтвор; Реакционната контрола е абсорбцията на разтвора на пробата, L-тирозинов разтвор, N и PBS разтвор; Празна е абсорбцията на L-тирозин разтвор, разтвор на PBS и тирозиназа; Празно управление е абсорбцията на L-тирозин и PBS разтвори.
'
1.3.2 Определяне на способността за почистване на свободни радикали на DPPH
Първо, претегляйте точно {{0}}. 0 197 g (0. {0 5 mmol) от DPPH и го разтваряйте в 25 0 ml от anhydroy etanol, за да се подготви DPPH, работещ с работен разтвор с концентрация на 0. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. mmol/l. След това, PHGs и GLA се приготвят в разтвор на етанол на PHGS и разтвор на етанол GLA с масови концентрации 0. 0 01, 0.01, 0.1, 0.4, 0.8, 1,2, 1,6, 2.0 mg/ml съответно, използвайки 50% етанол, и разтворът на VC Ethanol се получава по същия начин. Then, PhGs ethanol solution and Gla ethanol solution were mixed evenly at m(PhGs solution) ∶ m(Gla solution)=40∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 to obtain 9 kinds of PhGs/Gla ethanol solutions with different mass ratios, which were recorded as PhGs/Gla (40∶1) ~ PHGs/GLA (1∶40) Етанолни разтвори. И накрая, добавете 100 μl различни пробни разтвори и 100 μL работен разтвор на DPPH към кладенеца 96-, разбъркайте добре и се държите далеч от светлината при стайна температура за 30 минути. Измерете абсорбцията при 517 nm с ензимен маркер. VC се използва като положителна контрола и всеки експеримент се повтаря 3 пъти. Изчислете скоростта на почистване на свободен радикал на DPPH (%) според формулата (2).
DPPH свободна радикална скорост на почистване/%=(1 −2 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2), където: A1 е абсорбцията на разтвора на пробата + DPPH работен разтвор; A2 е абсорбцията на 50% етанол по обем + DPPH работен разтвор; A3 е абсорбцията на разтвора на пробата + 50% етанол по обем.
1.3.3 Определяне на ABTS+ способност за почистване на свободни радикали
Първо, претегляйте 1 g (1,82 mmol) от ABTS и го разтворете в дейонизирана вода, за да приготвите ABT работещ разтвор с крайна концентрация от 7,4 mmol/L; претегляйте 0. 5 g калиев персулфат и го разтворете в дейонизирана вода, за да приготвите работен разтвор на калий персулфат с крайна концентрация 2,6 mmol/L; Смесете работния разтвор на ABTS и работния разтвор на калий персулфат в равни обеми и реагирайте в продължение на 12 часа на тъмно, за да подготвите ABTS+ работещия разтвор. След това, според метода в раздел 1.3.2, пригответе PHGS етанолов разтвор, разтвор на етанол GLA, N и VC етанол разтвор, както и PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) разтвор на етанол.
И накрая, добавете 40 μl различни проби разтвори и 160 μl ABTS+ работещ разтвор към плаката 96-, разбъркайте добре, реагирайте при стайна температура на тъмно в продължение на 6 минути и измерете абсорбцията на разтвора при 734 nm, използвайки четец на ELISA. Изчислете скоростта на почистване на ABTS+ свободен радикал (%) според формулата (3).
Къде: A1 е абсорбцията на разтвора на пробата + ABTS + работен разтвор; A2 е абсорбцията на дейонизирана вода + ABTS + работещ разтвор; A3 е абсорбцията на разтвора на пробата + дейонизирана вода.
1.4 Клетъчен експеримент
1.4.1 Клетъчна култура
След възраждането на B16F10 и HACAT клетките те се инокулират в DMEM високоглюкозна среда (съдържаща смес от 10% фетален говежди серум и 1% пеницилин-стрептомицин с масова фракция) и се култивират в инкубатор на 37 градуса, 5% фракция на обемния обем и 70% в продължение на 24 h. Състоянието на растеж на клетките се наблюдава при микроскоп и средата се заменя или субкултива според състоянието на растежа на клетките.
1.4.2 Експериментално групиране
B16F10 и HACAT клетките във фазата на растеж на логаритмията се инокулират в 96- плаки с подходящи клетъчни номера и се култивират в продължение на 24 часа, за да позволят на клетките да се придържат към стената. Пробните разтвори на различни масови концентрации се приготвят с помощта на DMEM културна среда. The normal group, model group, low-dose PhGs (125 ug/mL) group, medium-dose PhGs (250 ug/mL) group, high-dose PhGs (500 ug/mL) group, low-dose Gla (6.25 ug/mL) group, medium-dose Gla (12.5 ug/mL) group, high-dose Gla (25 ug/mL) group, and PhGs/Gla (1∶1) Група, PHGS/GLA (5∶1) група и PHGS/GLA (10∶1) културална средна група.
В UVB-индуцирания пигментационен модел B16F10, клетките на моделната група се добавят с 30 μl PBS (pH =7. 4) и се поставят 3 cm непосредствено под UVB облъчването за 110 s; Експерименталната група се обработва предварително със 100 μl проба разтвори с различни масови концентрации в продължение на 1 час, след това се добавя с 30 μl PBS и се поставя 3 cm директно под UVB облъчването в продължение на 110 s; Нормалната група винаги е използвала средата на културата на DMEM с висока глюкоза; Празната група не беше инокулирана с клетки, а вместо това с еднакво количество културна среда.
В индуцирания от LPS модел на възпаление на HACAT клетките, моделната група се култивира с PBS разтвор на LPS при концентрация 20 ug/ml в продължение на 24 h; Експерименталната група се обработва предварително със 100 μl проби разтвори с различни концентрации на маса в продължение на 24 часа и след това се добавя с 20 ug/ml LPS разтвор в продължение на 24 часа; Нормалната група винаги използваше DMEM среда с висока глюкоза; Празната група не беше инокулирана с клетки, а с еднакво количество културна среда.
В индуцирания от AAPH модел на оксидативен стрес на HACAT клетките, моделната група се култивира със 100 ml AAPH (2,5 mmol) разтвор при концентрация 25 mmol/L в продължение на 24 h; Експерименталната група се обработва предварително със 100 μl разтвори на проба с различни концентрации на маса в продължение на 24 часа и след това се добавя с AAPH разтвор при концентрация 25 мм/L в продължение на 24 часа; Нормалната група винаги използваше DMEM среда с висока глюкоза; Празната група не беше инокулирана с клетки, а с еднакво количество културна среда.
Всяка група беше създадена с 3 репликатни ямки и култивирана в инкубатор на 37 градуса, 5% обемна фракция на CO2 и 70% влажност.
1.4.3 Тест за цитотоксичност
Методът CCK8 се използва за определяне на цитотоксичността. B16F1 0 и HACAT клетките във фазата на растеж на логаритмията се усвояват с 0,25% трипсин в продължение на 3 минути. След прекратяване на храносмилането, културната среда се издухва многократно, за да се направи клетъчна суспензия с плътност 1 × 104 клетки/mL. Клетките бяха равномерно инокулирани в 96- ямка, 100 μl на ямка и PBS се добавя към кладенците около клетките. След като клетките, залепени към стената, се добавят различни масови концентрации на разтвор на пробата, 3 репликират ямки на група и се култивират в инкубатор на 37 градуса, 5% обемна фракция на CO2 и 70% влажност за 24, 48 и 72 h, след което разтворът се изхвърля. Всички групи се добавят със 100 μl пълна културална среда, съдържаща 10% CCK8 обемна фракция и се инкубират в продължение на 60 минути. Абсорбцията на разтвора при 450 nm се измерва с помощта на четец на ELISA. Клетъчната жизнеспособност (%) се изчислява съгласно формулата (4).
Къде: Експериментална група е абсорбцията на ямките, съдържащи клетки и разтвор на пробата при UVB облъчване; Нормална група е абсорбцията на ямките, съдържащи клетки и разтвор на пробата без UVB облъчване; Празна група е абсорбцията на кладенците, съдържаща културална среда, но няма клетки.
1.4.5 Определяне на съдържанието на меланин
Съдържанието на меланин се определя по метода на лизиса на NaOH. След третиране на клетките в продължение на 72 часа съгласно метода в раздел 1.4.2, супернатантата се изхвърля и се промива два пъти с PBS и се добавя 100 μl воден разтвор на NAOH, съдържащ 10% DMSO по обем (концентрация 1 mol/L). След поставяне в фурна от 90 градуса в продължение на 1 час, абсорбцията на разтвора при 490 nm се определя чрез ензимен маркер. Експериментът се повтаря 3 пъти. Съдържанието на меланин (%) се изчислява съгласно формулата (5).
1.5 Определяне на съдържанието на възпалителен фактор и индекса на оксидативния стрес
След третиране на клетките в продължение на 48 часа съгласно метода в раздел 1.4.2, HACAT клетките във всяка група се събират с клетъчен скрепер, центрофугиран и супернатантата се събира. Съдържанието на IL -6 и TNF- се определя според инструкциите на комплекта ELISA.
След третиране на клетките в продължение на 48 часа съгласно метода в раздел 1.4.2, HACAT клетките във всяка група се събират с клетъчен скрепер и клетките се разбиват чрез многократно замръзване и размразяване. Клетките се центрофугират при 12000 r/min при 4 градус за 10 минути и супернатантата се събира. Активността на SOD и съдържанието на котки се определят според инструкциите на комплекта ELISA.
1.6 Определяне на комбинирания индекс
Методът на комбинирания индекс (CI) [20] се използва за определяне дали PHGs и GLA в различни съотношения на масата имат синергичен ефект при инхибиране на тирозиназната активност и анти-окисляване. Комбинираният индекс се изчислява според формулата (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 Показва антагонистичен ефект, CI =1 показва добавка и CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Анализ на данните
Всички данни се изразяват като "аритметично средно ± стандартно отклонение (𝑥̅ ± 𝑠)". Графична призма 9.5. 0 Софтуерът е използван за статистически анализ. Еднопосочен анализ на дисперсията беше използван за сравнение между множество групи. P<0.05 was considered statistically significant.
