Уникални и споделени miPHK от трите вида екзозоми

След това изследвахме ролята на уникалните miPHK от трите вида екзозоми в регулирането на сигнала. Диаграмата на Venn разкрива 16, 27 и 61 уникални miRNAs в hESC-Exos, hiPSC-Exos и hUC-MSC-Exos, съответно, и 70 споделени miPHKs (фиг. 6A). Регулаторната мрежа от miRNA-протеинови взаимодействия беше оценена чрез насочване към уникалните miRNAs. В hESC-Exos беше установено, че 16-те уникални miPHK регулират аутофагията, PI3K-AKT, Foxo, HIF-1, ErbB, mTOR, дълголетието, пътя на AMPK и т.н. (фиг. 6B). За 27-те уникални miPHK в hiPSC-Exos, KEGG анализът разкри множество значими онтологии, включително метаболизма на ксенобиотици, AGE-RAGE сигнализиране, mTOR сигнализиране, метаболизъм на ретинол, клетъчно стареене, MAPK сигнализиране и т.н. (Фиг. 6C). В hUC-MSC-Exos беше установено, че 61-те уникални miPHK участват в регулирането на PI3K-AKT сигнализация, човешка папиломавирусна инфекция, cGMP-PKG сигнализация, клетъчно стареене, Ras сигнализация, mTOR сигнализация, JAK-STAT сигнализация, NF-κB сигнализация и др. (фиг. 6D).

Гликозидът на цистанхе може също така да повиши активността на SOD в сърдечните и чернодробните тъкани и значително да намали съдържанието на липофусцин и MDA във всяка тъкан, като ефективно улавя различни реактивни кислородни радикали (OH-, H₂O₂ и др.) и предпазва от увреждане на ДНК, причинено от ОН-радикали. Cistanche phenylethanoid гликозидите имат силна способност за изчистване на свободните радикали, по-висока редуцираща способност от витамин С, подобряват активността на SOD в сперматозоидната суспензия, намаляват съдържанието на MDA и имат известен защитен ефект върху функцията на мембраната на спермата. Полизахаридите Cistanche могат да повишат активността на SOD и GSH-Px в еритроцитите и белодробните тъкани на експериментално стареещи мишки, причинени от D-галактоза, както и да намалят съдържанието на MDA и колаген в белите дробове и плазмата и да увеличат съдържанието на еластин, имат добър очистващ ефект върху DPPH, удължава времето на хипоксия при стареещи мишки, подобрява активността на SOD в серума и забавя физиологичната дегенерация на белия дроб при експериментално стареещи мишки. С клетъчна морфологична дегенерация експериментите показват, че Cistanche има добра антиоксидантна способност и има потенциала да бъде лекарство за предотвратяване и лечение на заболявания, свързани със стареенето на кожата. В същото време, ехинакозидът в Cistanche има значителна способност да пречиства DPPH свободните радикали и има способността да пречиства реактивните кислородни видове и да предотвратява индуцираното от свободните радикали разграждане на колагена, а също така има добър възстановителен ефект върху увреждането на анионите от свободните радикали на тимина.

Кликнете върху добавката Cistanche Deserticola

【За повече информация:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Компонентите на miRNA индиректно допринасят значително за множество сигнални пътища. За да изследваме взаимодействието между уникалните миРНК клъстери и каноничните пътища, извършихме регулаторен мрежов анализ, използвайки IPA базата данни. Резултатите от IPA разкриха, че най-високото четене отброява miRNAs (P<0.05, abundance>1000) в регулаторната мрежа са картографирани към множество канонични сигнални пътища. miPHK и съответните им пътища са изброени в Допълнителен файл 5. Използвайки hESC-Exos miRNA като примери, множество miPHK с голямо изобилие, включително has-miR-95-3p, has-miR-30a{{8} }p, has-miR- 181-5p, has-miR-183-3p и has-miR-301a-3p, участваха в AMPK, автофагия, ErbB, дълголетие регулиране и сигналния път на FOXO, между другото. Cytoscape беше използван за изчертаване на мрежата от уникални miPHK от трите вида екзозоми и техните регулирани сигнални пътища (Допълнителен файл 1: Фиг. S11).

miRNA профили, свързани с регулирането на плурипотентността

To investigate the regulatory effect of exosome-derived miRNAs on the pluripotency of stem cells, we predicted the target genes and screened the miRNAs involved in regulating the above process. Pluripotency-related miRNAs (abundance>1000) в трите вида екзозоми са изброени (фиг. 7A–C). Топ три miPHK в трите вида екзозоми са has-miR-302b-3p, has-miR-302a-5p и has-miR{{9} }d-3p (hESC-Exos), has-miR-372-3p, has-miR-371a-5p и has-miR-221-3p (hiPSC-Exos) и has-miR-21-5p, has-miR-146a-5p и has-miR- 320a-3p ( hUC-MSC-Exos). Освен това, ние описахме регулаторната мрежа на първите десет miPHK от екзозоми и техните целеви гени, участващи в регулирането на плурипотентността (фиг. 7D-F). Анализът на диаграмата на Venn разкри 12 припокриващи се miRNAs, което показва, че те могат да бъдат решаващи набори miPHK в регулирането на плурипотентността на стволовите клетки (фиг. 7G-H).

Специфични протеини и miPHK в трите вида екзозоми

За по-нататъшна проверка на действителната експресия на специфични протеини в трите екзозоми, ние извършихме Western blotting за откриване на кандидат протеини в различни пътища (фиг. 8A и B). За клетъчния цикъл три решаващи регулаторни фактора, MCM5, PCNA1 и CDK1, са по-силно експресирани в hESC-Exos и hiPSCExos, отколкото в hUC-MSC-Exos. PRKAA1, принадлежаща към семейството на ser/thr протеин киназа, е клетъчен енергиен, консервативен фактор във всички еукариотни клетки и показва подобно натоварване в трите екзозоми. SYK е широко експресиран в хематопоетичните клетки и участва в свързването на активирани имунорецептори към сигнални събития надолу по веригата. BTK играе решаваща роля в развитието на В клетките и имунорегулацията. Протеиновите натоварвания на SYK и BTK бяха повишени в hUC-MSCExos в сравнение с тези в hESC-Exos или hiPSC-Exos. Wnt5 е член на генното семейство Wnt, което е замесено в процесите на развитие, включително регулирането на клетъчната съдба и моделирането по време на ембриогенезата. hESC-Exos бяха най-обогатени в Wnt5, следвани от hiPSC-Exos и hUC-Exos. RHEB е жизненоважен за регулиране на растежа и прогресията на клетъчния цикъл, като се има предвид ролята му в сигналния път на mTOR/S6K. Western blotting показва, че трите типа екзозоми носят подобно RHEB натоварване. EGFR е протеин на клетъчната повърхност, който свързва епидермалния растежен фактор, като по този начин индуцира димеризация на рецептора и автофосфорилиране на тирозин, което води до клетъчна пролиферация. Както hESC-Exos, така и hUC-MSC-Exos имат по-високи нива на EGFR, отколкото hiPSC-Exos. ICAM2 е член на семейството на междуклетъчните адхезионни молекули (ICAM) и медиира адхезивните взаимодействия, важни за антиген-специфичния имунен отговор, клирънс, медииран от NK клетки, рециркулация на лимфоцити и други клетъчни взаимодействия, важни за имунния отговор и наблюдение. Сред трите екзозоми, hUC-MSC-Exos има най-високото ниво на ICAM2. В допълнение, първите пет miPHKs в трите вида екзозоми бяха оценени чрез RT-qPCR и тяхната експресия беше в съответствие с резултатите от секвенирането на РНК (фиг. 8C).

Дискусия

EV са богати на различни биологично активни вещества и се състоят главно от протеини, нуклеотиди и липиди [3, 17]. През последните десетилетия изследователската общност постави началото на златния век на аналитичните техники за протеинови, нуклеотидни и липидни омики. Сред тези техники масспектрометрията [14, 20] и високопроизводителното секвениране [6, 54] позволяват широкомащабно скриниране и идентифициране на EV компоненти. Две бази данни, Vesiclepedia (https://microvesicles.org) [28] и Expedia (https://evpedia.info) [29], се актуализират непрекъснато и предоставят обобщение на компонентите съответно на EVs на бозайници и небозайници . Като EV, екзозомите се различават от MV по отношение на техния биологичен произход и физически измерения [46]. С непрекъснатия напредък в областта на EV, новите методи непрекъснато се оптимизират, за да улеснят изолирането и пречистването на екзозоми, отговаряйки на строгостта, необходима за сравнителен анализ. За да попълним базите данни с екзозоми и да разширим обхвата на техните клинични приложения, в това проучване ние описваме компонентната рамка на екзозомите от hESCs и hiPSCs, която все още не е докладвана. Ние също сравнихме техния състав и биологични функции с тези на екзозомите, получени от hUC-MSC. За тази цел ние арестувахме екзозоми от EVs в разпознати размери, използвайки ултрацентрофугиране, комбинирано с филтриране, с изключение на MVs и апоптотични тела, което улесни усъвършенстването на екзозомните компоненти. По време на логаритмичната фаза на растеж на клетките, събраните CM бяха готови за подготовка на екзозома. Установено е, че концентрацията на частици на hESC-Exos е значително по-висока от тази на hUC-MSC-Exos, но подобна на тази на hiPSC-Exos. Подобни резултати са получени при сравняване на протеиновите концентрации. Обратно, общите РНК показват значително намаляване на градиентите от hESC-Exos и hiPSC-Exos до hUC-MSC-Exos. Тези резултати показват, че hESC (H9) могат да играят централна роля в репликационната активност и имат по-силна способност да секретират екзозоми сред трите стволови клетки.

В предишни проучвания изследователите са се фокусирали върху достъпността на екзозомите [1, 11, 58], докато са били ограничени до тяхната изследователска област. В резултат на това по-малко внимание се обръща на анализа на разликата между екзозомите, получени от различни източници. Въпреки че е извършена известна EV протеомика на трите стволови клетки, изследователите все още не са прецизирали размерите на екзозомите [19, 32, 59] и методът за анализ обикновено се основава на една техника на масспектрометрия. В настоящото изследване са използвани както TMT, така и LFQ методи за измерване и количествено определяне на протеиновите компоненти на изолираните екзозоми. Биоинформационният анализ разкри, че силно натоварените протеини могат да координират процесите на развитие, възстановяване на щети и метаболизъм чрез намеса на Wnt, AMPK, VEGF и сигнални пътища на клетъчния цикъл, което е в съответствие с предишен доклад [19]. По подобен начин, hiPSC-Exos може също да участва в горните биологични процеси, като повлияе на страничните сигнали. Въпреки това, EV протеомиката на hiPSCs, индуцирани от HFFs, показа различен преглед на генната онтология, фокусирайки се повече върху процесите на репликация на ДНК и катаболизъм на РНК [45]. Следователно, ние заключихме, че екзозомите, секретирани от hiPSCs, получени от различни тъкани, могат да имат различни протеинови профили. По отношение на hUC-MSCs-Exos, неговите компоненти се смесват в много имуномодулиращи дейности чрез регулиране на системата на комплемента, микробна инфекция, NF-κB сигнализиране и т.н., и засягат множество метаболитни сигнали, като метаболизма на холестерола, метаболизма на фосфолипаза D и пурин метаболизъм, предоставяйки резултати, подобни на тези от предишни доклади [1, 59].

В настоящото изследване сравнихме протеомите на три вида екзозоми по двойки и допълнително анализирахме техните изключителни протеини по отношение на функционалните пътища и регулаторните мрежи. HiPSCs са вид плурипотентни стволови клетки, които могат да бъдат генерирани чрез препрограмиране на соматични клетки, за да имитират плурипотентността на hESCs [48], което показва, че тези клетки са сходни до известна степен. Въпреки че техните екзозомни протеини са силно припокриващи се, тези на hESC-Exos са обогатени с регулация на развитието и функции на клетъчния цикъл, което показва, че hESC-Exos може да има по-силна способност да регулира плурипотентността от hiPSC-Exos в нашето изследване. Плурипотентността на hUC-MSCs е по-ниска от тази на hiPSCs и hESCs, както е отразено от техните значително различни протеинови профили. Протеомът на hUC-MSC-Exos се различава от този на hESC-Exos и hiPSC-Exos в имунорегулацията, като е обогатен с протеини, регулиращи дейностите на естествените клетки убийци и системата на комплемента. Освен това, биоинформатиката на протеините, споделени от трите вида екзозоми, разкри, че регулирането на hESC-Exos или hiPSC-Exos протеини се фокусира повече върху функциите на метаболизма, развитието и клетъчната пролиферация чрез намеса в класическите сигнални пътища като AMPK, Wnt, mTOR и клетъчния цикъл. За сравнение, регулираните нагоре протеини на hUC-MSC-Exos не само са обогатени в имунно-свързано сигнализиране, включително системата на комплемента, микробна инфекция, NF-кВ сигнализиране и В клетъчно рецепторно сигнализиране, но също и в метаболитни процеси като PPAR сигнализиране , метаболизъм на холестерола и MAPK сигнализиране.

Екзозомните товари са с уникален тъканен и клетъчен произход и съдържат миРНК [16]. Настоящото проучване също така показа, че екзозомите, изолирани от CMs, произведени in vitro от hESCs, hiPSCs и hUC-MSCs, съдържат отличителни и специфични miRNA подписи. Открихме, че всяка екзозомна miRNA има уникален пейзаж. Експресията на miRNA и взаимодействието с 3' или 5' UTR на техните целеви гени са включени в сложни физиологични и патофизиологични дейности [18]. Най-заредените miPHK от трите вида екзозоми регулират серия от биологични процеси, включително клетъчния цикъл и Hippo, Wnt, AMPK и TGF-сигнализиране. Въпреки това, miRNA профилите на hUC-MSC-Exos имат по-силна имуномодулираща способност от тази на hESC-Exos или hiPSC-Exos по отношение на поведението на В и Т клетките, както и TNF, JAK-STAT и NF-кВ сигнализиране. По-специално, повечето уникални miRNA профили са свързани с регулирането на автофагията, дълголетието, PI3K-Akt, mTOR, AMPK и p53 сигнализиране, което показва, че тези miRNA клъстери могат да модулират стареенето, свързаните със стареенето заболявания, възстановяването на тъканите след нараняване и метаболизма . Уникалните miPHK на hiPSC-Exos регулират сигнализирането на mTOR, клетъчното стареене, метаболизма на ретинола и TNF сигнализирането, което също допринася за регулирането на стареенето и метаболизма. В допълнение към сигнализирането на mTOR и клетъчното стареене, уникалните miPHK на hUC-MSC-Exos регулират сигнализирането на Foxo, Jak-STAT и NF-κB, което може да допринесе за ремоделиране на метаболитната и имунната микросреда. Анализът на споделени miPHK между трите вида екзозоми допълнително подкрепи тези разлики в регулирането на сигнализирането. Като цяло, миРНК клъстерите в hESC-Exos или hiPSC-Exos координираха появата на множество събития, като развитие, клетъчен цикъл и клетъчна диференциация. Наборът miRNA на hiPSC-Exos изглежда играе по-малко важна роля в тези функции от тази на hESC-Exos, но по-важна роля от тази на hUCMSC-Exos. Що се отнася до hUC-MSC-Exos, откритите профили на miRNA показват тяхната превъзходна способност за регулиране на имунната среда, особено при зарастване на рани и инфекции.

В биологията на развитието екзозомите, получени от плурипотентни стволови клетки, насърчават поддържането на плурипотентното състояние. Следователно miPHK, навлизащи в клетъчната микросреда, допринасят значително за поддържането на стволовостта [4, 32]. Трите вида екзозоми в настоящото изследване съдържат различни миРНК клъстери, които регулират плурипотентното сигнализиране. Независимо от това, 12-те miPHK, споделени между трите типа екзозоми, може да са от решаващо значение за регулирането на плурипотентността, включително miR- 21-5p, miR-92a-3p и miR-221-3p. Тази хипотеза остава да бъде тествана и повече видове стволови клетки трябва да бъдат изследвани. В допълнение, припокриващите се miRNAs между hESC-Exos и hiPSC-Exos могат да бъдат включени в клетъчната диференциация и препрограмиране, както е посочено от резултатите от по-подробни анализи. Например, семейството miR-302 беше силно обогатено и изключително за hESC-Exos и hiPSC-Exos и допринесе значително за повлияване на поведението на стволовите клетки чрез модулиране на препрограмирането [33, 50]. Тази точка косвено съвпада с предишни изследвания относно уникалността на miR-302 в човешки и миши ESC [33, 50]. Експресионният анализ на миРНК клъстери, които са силно експресирани в ESCs по време на началната фаза на препрограмиране, разкри индукцията на miR-17 [41] и miR-106a/106b [37]. Свръхекспресията на miR-93 насърчава увеличаването на броя на колониите на iPSC [35].

Сигналната мрежа, създадена от екзозомни товари, управлява вътреклетъчни събития, като допълнително се намесва в серия от патологични и физиологични процеси [3]. Екзозомите на hESC съдържат многобройни заредени протеини и miPHK, за които се предвижда да регулират пейзажа на развитие, метаболизъм и анти-стареене чрез смесване в сигналните пътища AMPK, mTOR и Wnt и регулиране на автофагията, дълголетието и клетъчния цикъл. Множество проучвания подчертават функциите на hESCEV за подмладяване на стареещия хипокампус [25, 26], костен мозък [19] и ендотелни клетки [10], както и облекчаване на повтарящ се остеоартрит чрез доставяне на специфични протеини или miPHK [58]. Нашите констатации също подкрепят предишни изследвания, в които е установено, че получените от ESC EVs имат положителни последици за възстановяване на нарушена сърдечно-съдова функция [5]. Електрическите превозни средства, получени от ESC, позволяват поддържането на стволовостта на ESC, като по този начин са способни на препрограмиране [4], което е в съответствие с нашите резултати за hESC-Exos товари. В нашето проучване hiPSCs, препрограмирани от клетки от пъпна връв, имаха биологични функции, подобни на тези на hESC-Exos; обаче няма доклади, които конкретно да подкрепят тази теория. За сравнение, hUC-MSC-Exos са получили повече внимание и различни предклинични и клинични изпитвания са изяснили техния терапевтичен ефект върху множество заболявания [51]. Въпреки че hUC-MSC-Exos допринася за тъканна регенерация и тъканно ремоделиране, тези способности са по-ниски от тези на hESC-Exos и hiPSC-Exos. Нашият анализ разкри, че hUC-MSC-Exos показва отлична способност за имунна регулация. Тези констатации предоставят основа за по-нататъшни изследвания на заболявания, свързани с възпаление, като COVID-19 [2].

Изводи

Като цяло, hESC-Exos е изключителен в регулирането на развитието, метаболизма и против стареене, hiPSC-Exos има подобни биологични функции, но е по-нисък от hESC-Exos. За сравнение, hUC-MSC-Exos допринася повече за имунната регулация. Нашият анализ разширява обхвата на приложение на hESC-Exos, hiPSCs и hUC-MSC-Exos и подчертава съответните им предимства при намесата на свързаното със заболяването сигнализиране. Доколкото ни е известно, това проучване е първото, което докладва систематичен и изчерпателен анализ на екзозомна протеомика и miRNA профили на hESCs, hiPSCs и hUC-MSCs. Нашето проучване допълнително обогатява настоящите EV бази данни, улеснявайки извличането на по-ценни данни за идентифициране на подходящи ацелуларни терапии в клинични условия. Тези екзозоми също се грижат за разработването на лекарства като алтернативна система за доставяне, която да замени системите за доставяне на вируси като аденовирус [7]. Въпреки че настоящите прогнози нямат съществено валидиране, тези открития биха могли да разкрият допълнителни индивидуални или съвместни приложения на трите екзозоми в предклинични или клинични изследвания. Освен това, бъдещи изследвания могат да се провеждат и чрез интегриран диференциален анализ на екзозомни товари с EV, както и на компонентите на самите клетки.

Съкращения

MSC: Мезенхимни стволови клетки; hESCs: Човешки ембрионални стволови клетки; hiPSCs: Индуцирани от човека плурипотентни стволови клетки; hUC-MSCs: Човешки мезенхимни стволови клетки от пъпна връв; TMT: Тандемен етикет за маса; LFQ: количествено определяне на относителен пептид без етикет; hESC-Exos: екзозоми, получени от човешки ембрионални стволови клетки; hiPSC-Exos: екзозоми, получени от човешки ембрионални стволови клетки; hUC-MSC-Exos: екзозоми, получени от мезенхимни стволови клетки на човешка пъпна връв; EVs: Извънклетъчни везикули; MVs: микровезикули; Alix: Свързан с апоптоза ген 2-взаимодействащ протеин X; TSG101: Ген за чувствителност към тумор 101; HFFs: човешки фибробласти на препуциума; CAMs: Молекули за клетъчна адхезия; ТЕМ: трансмисионна електронна микроскопия; PDI: полидисперсност; TEAB: Тетраетиламониев бромид; DEPs: Диференциално експресирани протеини; FDR: Процент на фалшиви открития.

Благодарности

Благодарни сме на Xueke Tan, Zhongshuang Lv и Xixia Li за помощта при подготовката на пробите за електронна микроскопия и заснемането на TEM изображения в Центъра за биологични изображения (CBI), Института по биофизика, Китайската академия на науките. Авторите също така благодарят на д-р Baohua Zou от Института по биофизика на Китайската академия на науките за нейната любезна помощ при решаващо четене и предложения.

Авторски принос

YB, YZ и JG замислиха и проектираха експериментите. YB и XQ извършиха изолирането и идентифицирането на екзозомата. YB, XQ, QL, SS, KZ, XQ, XZ, CJ, HW и ZY допринесоха за анализа на биоинформатиката. YB, YZ и JG написаха статията. Всички автори са прочели и одобрили ръкописа.

Финансиране

Тази работа беше подкрепена от безвъзмездни средства от Националния ключов проект за научноизследователска и развойна дейност (2019YFA0110400 до GJ), Националната фондация за наука и технологии (31971051, 31771562 до GJ) и подкрепа за безвъзмездна помощ за клинична медицина на град Далиан Dengfeng (2021024 до YZ).

Наличие на данни и материали

Всички масиви от данни, използвани и/или анализирани по време на настоящото проучване, са достъпни от съответния автор при разумно искане. Всички автори са потвърдили, че е включен цитат за наличните данни в раздела за препратки.

Декларации

Етично одобрение и съгласие за участие

Авторите декларират липса на потенциален конфликт на интереси.

Съгласие за публикуване

Не е приложимо.

Подробности за автора

1 Ключова лаборатория за интердисциплинарни изследвания, Институт по биофизика, Китайска академия на науките, Пекин 100101, Китай. 2 Университет на Китайската академия на науките, Пекин 100049, Китай. 3 отдел по медицинска онкология, Втората свързана болница на Далианския медицински университет, Далиан 116023, Китай. 4 Шесто отделение по чернодробни заболявания, Клиничен център за обществено здраве в Далиан, Медицински университет в Далиан, Далиан 116023, Китай.

Препратки

1. Abbaszadeh H, Ghorbani F, Derakhshani M, Movassaghpour A, Yousef M. Извънклетъчни везикули, получени от мезенхимни стволови клетки на човешка пъпна връв: нова терапевтична парадигма. J Cell Physiol. 2020; 235 (2): 706–17.

2. Abdelgawad M, Bakry NS, Farghali AA, Abdel-Latif A, Lotfy A. Терапия, базирана на мезенхимни стволови клетки и екзозоми при COVID-19: текущи тенденции и перспективи. Стволови клетки Res Ther. 2021; 12 (1): 469.

3. Abels ER, Breakefeld XO. Въведение в извънклетъчните везикули: биогенеза, селекция на РНК товар, съдържание, освобождаване и поемане. Cell Mol Neurobiol. 2016; 36 (3): 301–12.

4. Бауман К. Електрическите автомобили насърчават стволовото развитие. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021; 22 (2): 72– 3.

5. Bei Y, Das S, Rodosthenous RS, Holvoet P, Vanhaverbeke M, Monteiro MC, Monteiro VVS, Radosinska J, Bartekova M, Jansen F, Li Q, Rajasingh J, Xiao J. Екстрацелуларни везикули в сърдечно-съдовата тераностика. Теранотика. 2017; 7 (17): 4168–82.

6. Bellingham SA, Coleman BM, Hill AF. Дълбокото секвениране на малка РНК разкрива отчетлива миРНК сигнатура, освободена в екзозоми от инфектирани с приони невронни клетки. Nucleic Acids Res. 2012; 40 (21): 10937–49.

7. Bi Y, Gu L, Wang J, Chang Y, Jin M, Mao Y, Wang H, Ji G. Нова система за проста бърза аденовирусна векторна конструкция за улесняване на CRISPR/Cas9- медиирано редактиране на генома. CRISPR J. 2021; 4 (3): 381–91.

8. Bi Y, Guo X, Zhang M, Zhu K, Shi C, Fan B, Wu Y, Yang Z, Ji G. Мезенхимните стволови клетки от костен мозък подобряват свързания с диабет мастен черен дроб чрез трансформация на митохондриите при мишки. Стволови клетки Res Ther. 2021; 12 (1): 602.

9. Bissels U, Wild S, Tomiuk S, Holste A, Hafner M, Tuschl T, Bosio A. Абсолютно количествено определяне на микроРНК чрез използване на универсална справка. РНК. 2009; 15 (12): 2375–84.

10. Chen B, Sun Y, Zhang J, Zhu Q, Yang Y, Niu X, Deng Z, Li Q, Wang Y. Екзозомите, получени от човешки ембрионални стволови клетки, подпомагат заздравяването на язва под налягане при възрастни мишки чрез подмладяване на стареещите ендотелни клетки. Стволови клетки Res Ther. 2019; 10 (1): 142.

11. Chen L, Xiang B, Wang X, Xiang C. Екзозоми, получени от стволови клетки, получени от човешка менструална кръв, облекчават фулминантната чернодробна недостатъчност. Стволови клетки Res Ther. 2017; 8 (1): 9.

12. Chiang HR, Schoenfeld LW, Ruby JG, Auyeung VC, Spies N, Baek D, Johnston WK, Russ C, Luo S, Babiarz JE, Blelloch R, Schroth GP, Nusbaum C, Bartel DP. МикроРНК на бозайници: експериментална оценка на нови и предварително анотирани гени. Genes Dev. 2010; 24 (10): 992–1009.

13. Choi DS, Choi DY, Hong BS, Jang SC, Kim DK, Lee J, Kim YK, Kim KP, Gho YS. Количествена протеомика на извънклетъчни везикули, получени от човешки първични и метастатични колоректални ракови клетки. J Екстраклетъчни везикули. 2012 г.

14. Choi DS, Kim DK, Kim YK, Gho YS. Протеомика на извънклетъчните везикули: екзозоми и екзозоми. Mass Spectrom Rev. 2015; 34 (4): 474–90.

15. Colombo M, Moita C, van Niel G, Kowal J, Vigneron J, Benaroch P, Manel N, Moita LF, Théry C, Raposo G. Анализът на функциите на ESCRT в екзозомната биогенеза, състав и секреция подчертава хетерогенността на извънклетъчните везикули. J Cell Sci. 2013; 126 (Pt 24): 5553–65.

16. Colombo M, Raposo G, Théry C. Биогенеза, секреция и междуклетъчни взаимодействия на екзозоми и други извънклетъчни везикули. Annu Rev Cell Dev Biol. 2014; 30: 255-89.

17. Dai J, Su Y, Zhong S, Cong L, Liu B, Yang J, Tao Y, He Z, Chen C, Jiang Y. Екзозоми: ключови играчи в рака и потенциална терапевтична стратегия. Signal Transduct Target Ther. 2020; 5 (1): 145.

18. Gangaraju VK, Lin H. МикроРНК: ключови регулатори на стволови клетки. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009; 10 (2): 116–25.

19. Gong L, Chen B, Zhang J, Sun Y, Yuan J, Niu X, Hu G, Chen Y, Xie Z, Deng Z, Li Q, Wang Y. Човешки ESC-sEV облекчават свързаната с възрастта костна загуба чрез подмладяване стареещи мезенхимни стволови клетки, получени от костен мозък. J Екстраклетъчни везикули. 2020; 9 (1): 1800971.

20. Haraszti RA, Didiot MC, Sapp E, Leszyk J, Shafer SA, Rockwell HE, Gao F, Narain NR, DiFiglia M, Kiebish MA, Aronin N, Khvorova A. Протеомен и липидомен анализ с висока разделителна способност на екзозоми и микровезикули от различни клетъчни източници. J Екстраклетъчни везикули. 2016; 5: 32570.

21. He C, Zheng S, Luo Y, Wang B. Екзозомна тераностика: биология и транслационна медицина. Теранотика. 2018; 8 (1): 237–55.

22. Hessvik NP, Llorente A. Текущи познания за биогенезата и освобождаването на екзозоми. Cell Mol Life Sci. 2018; 75 (2): 193–208.

23. Hinna A, Steiniger F, Hupfeld S, Stein P, Kuntsche J, Brandl M. Филтърно екструдирани липозоми: проучване на разпределението на размера и морфологията на липидния състав и параметрите на процеса. J Liposome Res. 2016; 26 (1): 11–20.

24. Hsu C, Morohashi Y, Yoshimura S, Manrique-Hoyos N, Jung S, Lauterbach MA, Bakhti M, Grønborg M, Möbius W, Rhee J, Barr FA, Simons M. Регулиране на екзозомната секреция от Rab35 и неговата GTPase- активиращи протеини TBC1D10A-C. J Cell Biol. 2010; 189 (2): 223–32.

25. Hu G, Xia Y, Chen B, Zhang J, Gong L, Chen Y, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEVs подмладяват стареещите хипокампални NSC чрез прехвърляне на SMAD за регулиране на MYT1-Egln{ {3}}Ос Sirt1. Mol Ther. 2021; 29 (1): 103–20.

26. Hu G, Xia Y, Zhang J, Chen Y, Yuan J, Niu X, Zhao B, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEVs подмладяват стареещите хипокампални NSC чрез активиране на лизозоми за подобряване на когнитивната дисфункция при васкуларна деменция. Adva Sci. 2020;7(10):1903330.

27. Huang H, Xiong Q, Wang N, Chen R, Ren H, Siwko S, Han H, Liu M, Qian M, Du B. Сигнализацията на Kisspeptin/GPR54 ограничава антивирусния вроден имунен отговор чрез регулиране на активността на калциневрин фосфатаза. Sci Adv. 2018; 4 (8): 9784.

28. Kalra H, Simpson RJ, Ji H, Aikawa E, Altevogt P, Askenase P, Bond VC, Borràs FE, Breakefeld X, Budnik V, Buzas E, Camussi G, Clayton A, Cocucci E, Falcon-Perez JM, Gabrielsson S, Gho YS, Gupta D, Harsha HC, Hendrix A, Hill AF, Inal JM, Jenster G, Krämer-Albers EM, Lim SK, Llorente A, Lötvall J, Marcilla A, Mincheva-Nilsson L, Nazarenko I, Nieuwland R , Nolte-'t Hoen EN, Pandey A, Patel T, Piper MG, Pluchino S, Prasad TS, Rajendran L, Raposo G, Record M, Reid GE, Sánchez-Madrid F, Schifelers RM, Siljander P, Stensballe A, Stoorvogel W, Taylor D, Thery C, Valadi H, van Balkom BW, Vázquez J, Vidal M, Wauben MH, Yáñez-Mó M, Zoeller M, Mathivanan S. Vesiclepedia: компендиум за извънклетъчни везикули с непрекъсната анотация на общността. PLoS Biol. 2012; 10 (12): e1001450.

29. Kim DK, Kang B, Kim OY, Choi DS, Lee J, Kim SR, Go G, Yoon YJ, Kim JH, Jang SC, Park KS, Choi EJ, Kim KP, Desiderio DM, Kim YK, Lötvall J, Hwang D, Gho YS. Expedia: интегрирана база данни с високопроизводителни данни за системни анализи на извънклетъчни везикули. J Екстраклетъчни везикули. 2013.

30. Kim KI, van de Wiel MA. Ефекти от зависимостта при проблеми с множество тестове с висока размерност. BMC Bioinf. 2008;9:114.

31. Kingham E, Орефо RO. Ембрионални и индуцирани плурипотентни стволови клетки: разбиране, създаване и използване на нанонишата за регенеративна медицина. ACS Нано. 2013; 7 (3): 1867–81.

32. La Greca A, Solari C, Furmento V, Lombardi A, Biani MC, Aban C, Moro L, García M, Guberman AS, Sevlever GE, Miriuka SG, Luzzani C. Извънклетъчни везикули от мезенхимни стволови клетки, получени от плурипотентни стволови клетки придобиват стромален модулиращ протеомен модел по време на диференциация. Exp Mol Med. 2018; 50 (9): 1–12.

33. Li HL, Wei JF, Fan LY, Wang SH, Zhu L, Li TP, Lin G, Sun Y, Sun ZJ, Ding J, Liang XL, Li J, Han Q, Zhao RC. miR-302 регулира плурипотентността, образуването на тератома и диференциацията в стволовите клетки чрез AKT1/OCT4-зависим начин. Клетъчна смърт Dis. 2016; 7 (1): e2078.

34. Li P, Kaslan M, Lee SH, Yao J, Gao Z. Напредък в техниките за изолиране на екзозоми. Теранотика. 2017; 7 (3): 789–804.

35. Li Z, Yang CS, Nakashima K, Rana TM. Малка РНК-медиирана регулация на генерирането на iPS клетки. EMBO J. 2011; 30 (5): 823–34.

36. Liang G, Zhang Y. Ембрионални стволови клетки и индуцирани плурипотентни стволови клетки: епигенетична перспектива. Cell Res. 2013; 23 (1): 49–69.

37. Lüningschrör P, Hauser S, Kaltschmidt B. Kaltschmidt C (2013) МикроРНК в плурипотентност, препрограмиране и индукция на клетъчна съдба. Biochim Biophys Acta. 1833; 8: 1894–903.

38. Maas SLN, Breakefeld XO, Weaver AM. Извънклетъчни везикули: уникални междуклетъчни носители. Trends Cell Biol. 2017; 27 (3): 172–88.

39. Martínez-Greene JA, Hernández-Ortega K, Quiroz-Baez R, ResendisAntonio O, Pichardo-Casas I, Sinclair DA, Budnik B, Hidalgo-Miranda A, Uribe-Querol E, Ramos-Godínez MDP, Martínez-Martínez E Количествен протеомен анализ на субгрупи извънклетъчни везикули, изолирани чрез оптимизиран метод, комбиниращ утаяване на основата на полимер и хроматография с изключване на размера. J Екстраклетъчни везикули. 2021; 10 (6): e12087.

40. Mathieu M, Martin-Jaular L, Lavieu G, Théry C. Специфики на секрецията и поглъщането на екзозоми и други извънклетъчни везикули за комуникация от клетка към клетка. Nat Cell Biol. 2019; 21 (1): 9–17.

41. Mogilyansky E, Rigoutsos I. Клъстерът miR-17/92: цялостна актуализация на неговата геномика, генетика, функции и все по-важни и многобройни роли в здравето и болестите. Клетъчна смърт Разл. 2013; 20 (12): 1603–14.

42. Nguyen HQ, Lee D, Kim Y, Bang G, Cho K, Lee YS, Yeon JE, Lubman DM, Kim J. Количествен протеомен анализ без етикет на серумни извънклетъчни везикули, диференциращи пациенти с алкохолни и неалкохолни мастни чернодробни заболявания. J Протеомика. 2021;245: 104278.

43. Pittenger MF, Discher DE, Péault BM, Phinney DG, Hare JM, Caplan AI. Перспектива на мезенхимните стволови клетки: клетъчна биология до клиничен прогрес. NPJ Regen Med. 2019; 4:22.

44. Pocsfalvi G, Stanly C, Vilasi A, Fiume I, Capasso G, Turiák L, Buzas EI, Vékey K. Масспектрометрия на извънклетъчни везикули. Mass Spectrom Rev. 2016; 35 (1): 3–21.

45. Questa M, Romorini L, Blüguermann C, Solari CM, Neiman G, Luzzani C, Scassa MÉ, Sevlever GE, Guberman AS, Miriuka SGa. Генериране на iPSC линия iPSC-FH2.1 в хипоксични условия от човешки фибробласти на препуциума. Stem Cell Res. 2016; 16 (2): 300–3.

46. ​​Raposo G, Stoorvogel W. Извънклетъчни везикули: екзозоми, микровезикули и приятели. J Cell Biol. 2013; 200 (4): 373–83.

47. Ela S, Mäger I, Breakefeld XO, Wood MJ. Извънклетъчни везикули: биология и нововъзникващи терапевтични възможности. Nat Rev Drug Discov. 2013; 12 (5): 347–57.

48. Shi Y, Inoue H, Wu JC, Yamanaka S. Индуцирана плурипотентна технология за стволови клетки: десетилетие напредък. Nat Rev Drug Discov. 2017;16(2):115–

49. Шотландия T, Sandvig K, Llorente A. Липиди в екзозоми: Текущи знания и пътят напред. Prog Lipid Res. 2017; 66: 30-41.

50. Subramanyam D, Lamouille S, Judson RL, Liu JY, Bucay N, Derynck R, Blelloch R. Множество цели на miR-302 и miR-372 насърчават препрограмирането на човешки фибробласти до индуцирани плурипотентни стволови клетки. Nat Biotechnol. 2011; 29 (5): 443–8.

51. Tang Y, Zhou Y, Li HJ. Напредък в екзозомите на мезенхимните стволови клетки: преглед. Стволови клетки Res Ther. 2021; 12 (1): 71.

52. Théry C, Witwer KW, Aikawa E, Alcaraz MJ, Anderson JD, Andriantsitohaina R, Antoniou A, Arab T, Archer F, Atkin-Smith GK, Ayre DC, Bach JM, Bachurski D, Baharvand H, Balaj L, Baldacchino S, Bauer NN, Baxter AA, Bebawy M, Beckham C, Bedina Zavec A, Benmoussa A, Berardi AC, Bergese P, Bielska E, Blenkiron C, Bobis-Wozowicz S, Boilard E, Boireau W, Bongiovanni A, Borràs FE, Bosch S, Boulanger CM, Breakefeld X, Breglio AM, Brennan M, Brigstock DR, Brisson A, Broekman ML, Bromberg JF, Bryl-Górecka P, Buch S, Buck AH, Burger D, Busatto S, Buschmann D, Bussolati B, Buzás EI, Byrd JB, Camussi G, Carter DR, Caruso S, Chamley LW, Chang YT, Chen C, Chen S, Cheng L, Chin AR, Clayton A, Clerici SP, Cocks A, Cocucci E, Cofey RJ, Cordeiro- da-Silva A, Couch Y, Coumans FA, Coyle B, Crescitelli R, Criado MF, D'Souza-Schorey C, Das S, Datta Chaudhuri A, de Candia P, De Santana EF, De Wever O, Del Portillo HA, Demaret T, Deville S, Devitt A, Dhondt B, Di Vizio D, Dieterich LC, Dolo V, Dominguez Rubio AP, Dominici M, Dourado MR, Driedonks TA, Duarte FV, Duncan HM, Eichenberger RM, Ekström K, El Andaloussi S , Elie-Caille C, Erdbrügger U, Falcón-Pérez JM, Fatima F, Fish JE, Flores-Bellver M, Försönits A, FreletBarrand A, Fricke F, Fuhrmann G, Gabrielsson S, Gámez-Valero A, Gardiner C, Gärtner K , Gaudin R, Gho YS, Giebel B, Gilbert C, Gimona M, Giusti I, Goberdhan DC, Görgens A, Gorski SM, Greening DW, Gross JC, Gualerzi A, Gupta GN, Gustafson D, Handberg A, Haraszti RA, Harrison P, Hegyesi H, Hendrix A, Hill AF, Hochberg FH, Hofmann KF, Holder B, Holthofer H, Hosseinkhani B, Hu G, Huang Y, Huber V, Hunt S, Ibrahim AG, Ikezu T, Inal JM, Isin M, Иванова A, Джаксън HK, Якобсен S, Jay SM, Jayachandran M, Jenster G, Jiang L, Johnson SM, Jones JC, Jong A, Jovanovic-Talisman T, Jung S, Kalluri R, Kano SI, Kaur S, Kawamura Y, Keller ET, Khamari D, Khomyakova E, Khvorova A, Kierulf P, Kim KP, Kislinger T, Klingeborn M, Klinke DJ, Kornek M, Kosanović MM, Kovács ÁF, Krämer-Albers EM, Krasemann S, Krause M, Kurochkin IV, Kusuma GD, Kuypers S, Laitinen S, Langevin SM, Languino LR, Lannigan J, Lässer C, Laurent LC, Lavieu G, Lázaro-Ibáñez E, Le Lay S, Lee MS, Lee YXF, Lemos DS, Lenassi M, Leszczynska A , Li IT, Liao K, Libregts SF, Ligeti E, Lim R, Lim SK, Linē A, Linnemannstöns K, Llorente A, Lombard CA, Lorenowicz MJ, Lörincz ÁM, Lötvall J, Lovett J, Lowry MC, Loyer X, Lu Q, Lukomska B, Lunavat TR, Maas SL, Malhi H, Marcilla A, Mariani J, Mariscal J, Martens-Uzunova ES, Martin-Jaular L, Martinez MC, Martins VR, Mathieu M, Mathivanan S, Maugeri M, McGinnis LK , McVey MJ, Meckes DG Jr, Meehan KL, Mertens I, Minciacchi VR, Möller A, Møller Jørgensen M, Morales-Kastresana A, Morhayim J, Mullier F, Muraca M, Musante L, Mussack V, Muth DC, Myburgh KH, Najrana T, Nawaz M, Nazarenko I, Nejsum P, Neri C, Neri T, Nieuwland R, Nimrichter L, Nolan JP, Nolte-'t Hoen EN, Noren Hooten N, O'Driscoll L, O'Grady T, O' Loghlen A, Ochiya T, Olivier M, Ortiz A, Ortiz LA, Osteikoetxea X, Østergaard O, Ostrowski M, Park J, Pegtel DM, Peinado H, Perut F, Pfaf MW, Phinney DG, Pieters BC, Pink RC, Pisetsky DS , Pogge von Strandmann E, Polakovicova I, Poon IK, Powell BH, Prada I, Pulliam L, Quesenberry P, Radeghieri A, Rafai RL, Raimondo S, Rak J, Ramirez MI, Raposo G, Rayyan MS, Regev-Rudzki N, Ricklefs FL, Robbins PD, Roberts DD, Rodrigues SC, Rohde E, Rome S, Rouschop KM, Rughetti A, Russell AE, Saá P, Sahoo S, Salas-Huenuleo E, Sánchez C, Saugstad JA, Saul MJ, Schifelers RM, Schneider R, Schøyen TH, Scott A, Shahaj E, Sharma S, Shatnyeva O, Shekari F, Shelke GV, Shetty AK, Shiba K, Siljander PR, Silva AM, Skowronek A, Snyder OL 2nd, Soares RP, Sódar BW, Soekmadji C, Sotillo J, Stahl PD, Stoorvogel W, Stott SL, Strasser EF, Swift S, Tahara H, Tewari M, Timms K, Tiwari S, Tixeira R, Tkach M, Toh WS, Tomasini R, Torrecilhas AC, Tosar JP, Toxavidis V, Urbanelli L, Vader P, van Balkom BW, van der Grein SG, Van Deun J, van Herwijnen MJ, Van Keuren-Jensen K, van Niel G, van Royen ME, van Wijnen AJ, Vasconcelos MH, Vechetti IJ Jr , Veit TD, Vella LJ, Velot É, Verweij FJ, Vestad B, Viñas JL, Visnovitz T, Vukman KV, Wahlgren J, Watson DC, Wauben MH, Weaver A, Webber JP, Weber V, Wehman AM, Weiss DJ, Welsh JA, Wendt S, Wheelock AM, Wiener Z, Witte L, Wolfram J, Xagorari A, Xander P, Xu J, Yan X, YáñezMó M, Yin H, Yuana Y, Zappulli V, Zarubova J, Žekas V, Zhang JY, Zhao Z, Zheng L, Zheutlin AR, Zickler AM, Zimmermann P, Zivkovic AM, Zocco D, Zuba-Surma EK. Минимална информация за изследвания на извънклетъчни везикули 2018 (MISEV2018): изявление за позицията на международното общество за извънклетъчни везикули и актуализация на указанията на MISEV2014. J Екстраклетъчни везикули. 2018; 7 (1): 1535750.

53. Théry C, Zitvogel L, Amigorena S. Екзозоми: състав, биогенеза и функция. Nat Rev Immunol. 2002; 2 (8): 569–79.

54. Tosar JP, Gámbaro F, Sanguinetti J, Bonilla B, Witwer KW, Cayota A. Оценка на сортирането на малка РНК в различни извънклетъчни фракции, разкрита чрез високопроизводително секвениране на клетъчни линии на гърдата. Nucleic Acids Res. 2015; 43 (11): 5601–16.

55. Trajkovic K, Hsu C, Chiantia S, Rajendran L, Wenzel D, Wieland F, Schwille P, Brügger B, Simons M. Ceramide предизвиква пъпкуване на екзозомни везикули в мултивезикуларни ендозоми. Наука. 2008; 319 (5867): 1244–7.

56. Vader P, Mol EA, Pasterkamp G, Schifelers RM. Извънклетъчни везикули за доставка на лекарства. Adv Drug Deliv Rev. 2016; 106 (Pt A): 148–56.

57. van Niel G, D'Angelo G, Raposo G. Хвърляне на светлина върху клетъчната биология на извънклетъчните везикули. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018; 19 (4): 213–28.

58. Wang Y, Yu D, Liu Z, Zhou F, Dai J, Wu B, Zhou J, Heng BC, Zou XH, Ouyang H, Liu H. Екзозоми от ембрионални мезенхимни стволови клетки облекчават остеоартрита чрез балансиране на синтеза и разграждането на хрущяла извънклетъчен матрикс. Стволови клетки Res Ther. 2017; 8 (1): 189.

59. Wang ZG, He ZY, Liang S, Yang Q, Cheng P, Chen AM. Изчерпателен протеомен анализ на екзозоми, получени от човешки костен мозък, мастна тъкан и мезенхимни стволови клетки от пъпна връв. Стволови клетки Res Ther. 2020; 11 (1): 511.

60. Xie C, Mao X, Huang J, Ding Y, Jianmin W, Dong S, Kong L, Gao G, Li CY, Wei L. KOBAS 2.0: уеб сървър за анотация и идентифициране на обогатени пътища и заболявания. Nucleic Acids Res. 2011; 39 (допълнение _2): W316–22.

61. Xu R, Rai A, Chen M, Suwakulsiri W, Greening DW, Simpson RJ. Екстрацелуларни везикули при рак: последици за бъдещи подобрения в грижите за рака. Nat Rev Clin Oncol. 2018; 15 (10): 617–38.

62. Yáñez-Mó M, Siljander PR, Andreu Z, Zavec AB, Borràs FE, Buzas EI, Buzas K, Casal E, Cappello F, Carvalho J, Colás E, Cordeiro-da Silva A, Fais S, Falcon-Perez JM , Ghobrial IM, Giebel B, Gimona M, Graner M, Gursel I, Gursel M, Heegaard NH, Hendrix A, Kierulf P, Kokubun K, Kosanovic M, Kralj-Iglic V, Krämer-Albers EM, Laitinen S, Lässer C, Lener T, Ligeti E, Linē A, Lipps G, Llorente A, Lötvall J, Manček-Keber M, Marcilla A, Mittelbrunn M, Nazarenko I, Nolte-'t Hoen EN, Nyman TA, O'Driscoll L, Olivan M, Oliveira C, Pállinger É, Del Portillo HA, Reventós J, Rigau M, Rohde E, Sammar M, Sánchez-Madrid F, Santarém N, Schallmoser K, Ostenfeld MS, Stoorvogel W, Stukelj R, Van der Grein SG, Vasconcelos MH, Wauben MH, De Wever O. Биологични свойства на извънклетъчните везикули и техните физиологични функции. J Екстраклетъчни везикули. 2015; 4: 27066.

Бележка на издателя

Springer Nature остава неутрален относно претенциите за юрисдикция в публикувани карти и институционални връзки.

【За повече информация:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】