4.6. Вещества, реагиращи на тиобарбитуровата киселина (TBARs)

Съдържанието на TBARs се използва като индекс на липопероксидация. В мозъчната тъкан се добавя 50 mM фосфатен буфер (рН 7,4) до концентрация от 25 mg/mL (w/v) и суспензията се хомогенизира чрез ултразвук за 10 s. Към 30 µL от хомогената се добавят 250 µL 1% фосфорна киселина и 75 µL 0.6% тиобарбитурова киселина (TBA). Реагентната смес се инкубира при 100 ◦C във водна баня в продължение на 45 минути, след което се охлажда в ледена баня и след това се центрофугира при 3000 × g за 10 минути при 4 ◦C. От всяка проба се взема обем от 150 uL супернатант. Флуоресценцията беше измерена с помощта на четец на микроплаки FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ортенберг, Баден-Вюртемберг, Германия) с филтър за възбуждане, настроен на 485 nm (ширина на честотната лента 5 nm) и емисионен филтър, настроен на 530 nm (ширина на честотната лента 5 nm). Беше изготвена калибровъчна крива, като се използва малондиалдехид (MDA) като стандарт. Резултатите се изразяват в pmol MDA/mg протеин.

Гликозидът на цистанхе може също така да повиши активността на SOD в сърдечните и чернодробните тъкани и значително да намали съдържанието на липофусцин и MDA във всяка тъкан, като ефективно улавя различни реактивни кислородни радикали (OH-, H₂O₂ и др.) и предпазва от увреждане на ДНК, причинено от ОН-радикали. Cistanche phenylethanoid гликозидите имат силна способност за изчистване на свободните радикали, по-висока редуцираща способност от витамин С, подобряват активността на SOD в сперматозоидната суспензия, намаляват съдържанието на MDA и имат известен защитен ефект върху функцията на мембраната на спермата. Полизахаридите Cistanche могат да повишат активността на SOD и GSH-Px в еритроцитите и белодробните тъкани на експериментално стареещи мишки, причинени от D-галактоза, както и да намалят съдържанието на MDA и колаген в белите дробове и плазмата и да увеличат съдържанието на еластин, имат добър очистващ ефект върху DPPH, удължава времето на хипоксия при стареещи мишки, подобрява активността на SOD в серума и забавя физиологичната дегенерация на белия дроб при експериментално стареещи мишки. С клетъчна морфологична дегенерация експериментите показват, че Cistanche има добра антиоксидантна способност и има потенциала да бъде лекарство за предотвратяване и лечение на заболявания, свързани със стареенето на кожата. В същото време, ехинакозидът в Cistanche има значителна способност да пречиства DPPH свободните радикали и има способността да пречиства реактивните кислородни видове и да предотвратява индуцираното от свободните радикали разграждане на колагена, а също така има добър възстановителен ефект върху увреждането на анионите от свободните радикали на тимина.

Кликнете върху Къде мога да купя Cistanche

【За повече информация:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Ензимна активност на основните антиоксидантни ензими

За определяне на ензимната активност в мозъчната тъкан, към концентрация от 50 mg/mL (w/v). След това суспензията се обработва с ултразвук в продължение на 30 s в ледена баня и хомогенатът се центрофугира при 10, 000 × g за 15 минути при 4 ◦C. Супернатантите бяха събрани за определяне на ензимната активност на антиоксидантните ензими.

Активността на супероксид дисмутазата (SOD) се измерва чрез проследяване на инхибирането на автоокислението на пирогалол при 420 nm [69]. Една единица ензим се определя като количеството ензим, необходимо за инхибиране на скоростта на автоокисляване на пирогалол с 50 процента. Ензимната активност на SOD се изразява като международни единици (IU)/mg протеин. Активността на каталазата (CAT) беше измерена в третирани с Triton-X-100 (1 процент, v/v) супернатанти чрез проследяване на изчезването на водороден пероксид (H2O2) при 240 nm [70] и ензимната активност беше отчетена като субстрат ( µmol H2O2) трансформиран/min · mg протеин. Общата глутатион пероксидаза (GPx) се определя след окисление на NADPH при 340 nm в присъствието на излишък от GR, GSH и кумен хидропероксид [71]. GPx активността се изразява като субстрат (nmol NADPH) трансформиран/min mg протеин. Активността на глутатион редуктаза (GR) се анализира след окисление на NADPH при 340 nm в присъствието на GSSG [72] и се изразява като субстрат (nmol NADPH) трансформиран/min · mg протеин. GR и двете GPx активности бяха коригирани за спонтанна реакция в отсъствието на биологични проби (в отсъствието на ензим).

4.8. Тест за активност BACE1

Тестовият протокол BACE1 включва използването на секретазен-специфичен субстрат (пептид), който е конюгиран с две репортерни молекули, а именно EDANS и DABCYL, което води до освобождаване на флуоресцентен сигнал [73,74]. Активността на BACE1 се измерва както в кората, така и в лизатите на хипокампуса. Реакцията се провежда при 37 °С в продължение на 1 час, като се използва 10 цМ субстрат в 50 тМ натриев ацетатен буфер (рН 4.5). Измерванията на интензитета на флуоресценцията бяха направени с помощта на четец на микроплаки FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Германия) с филтър за възбуждане, настроен на 360 nm (ширина на честотната лента 5 nm) и емисионен филтър, настроен на 530 nm (ширина на честотната лента 5 nm). Нивото на ензимната активност на секретазата е пропорционално на флуорометричната реакция и данните се изразяват като x-кратно увеличение на флуоресценцията спрямо тази на фоновите контроли (реакции в отсъствието на субстрат или тъкан). Активността на BACE1 се нормализира с концентрация на протеин. BACE1 активността на мишките, третирани с кверцетин или рутин, се изразява като процент на активност от тази на TgAPP контролни мишки.

4.9. RT-PCR генна експресия на основните антиоксидантни ензими, APP, BACE1, ADAM10, каспаза-3 и каспаза-6 и възпалителни цитокини

4.9.1. Екстракция и пречистване на пълна РНК

Анализирахме различните области на мозъка, а именно кората и хипокампуса, съхранявани при -80 ◦C. Към известно количество мозъчна тъкан се добавя Triomol® лизисен буфер в съотношение 1:10 (w/v). Пробите се хомогенизират в продължение на 30 секунди с помощта на безжичен двигател (Пелетен пестик, Sigma-Aldrich) и се инкубират в продължение на 5 минути при 25 °C, за да се даде възможност за пълна дисоциация на нуклеопротеиновите комплекси. След това се добавят 0,2 mL хлороформ за всеки mL използван лизисен буфер Triomol®. Епруветките се разклащат енергично в продължение на 15 s и се инкубират при 25 °C в продължение на 3 минути. След това те се центрофугират при 11, 000 × g за 15 минути при 4 ◦C. След центрофугиране се получават три фази, с РНК в горната фаза.

За да се изолира РНК, горната фаза се прехвърля в друга епруветка и се утаява чрез добавяне на 0.5 mL изопропанол. След щателно смесване на изопропанол и воден разтвор чрез обръщане, сместа се инкубира при стайна температура в продължение на 10 минути, за да се стимулира утаяването, и се центрофугира при 12, 000 × g за 10 минути при 4 ◦C. Супернатантите се отстраняват и пелетите се промиват със 75 процента етанол и се центрофугират при 7500 × g за 5 минути при 4 ◦C. Пелетите се сушат при стайна температура и се разтварят в 50 uL вода, обработена с DEPC. За отстраняване на следи от ДНК се добавят 2,5 µL ДНКаза (без РНКаза) и се инкубират при 37 °C за 30 минути. Накрая, пробите се инкубират при 64 ◦C за 5 минути, за да се инактивира DNase.

Впоследствие концентрациите на РНК бяха измерени в UV-VIS спектрофотометър (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Германия) при 260 nm и чистотата беше оценена като се има предвид съотношението на абсорбция при 260 и 280 nm (A260/A280).

Определянето на целостта и чистотата на РНК се извършва чрез електрофореза в 1% агарозен гел, оцветен с GelRed и визуализиран под UV светлина, където, ако РНК е непокътната, две горни ленти, съответстващи на рибозомна РНК (28S и 18S) и две долни ленти трябваше да се наблюдават, съответстващи на трансферна РНК (tRNA) и 5S рибозомна РНК.

4.9.2. Синтез на комплементарна ДНК (cDNA).

cDNA е много по-стабилна от RNA и следователно позволява по-удобна и по-безопасна работа с пробите. cDNA се синтезира от mRNA чрез ретротранскрипция, като се използва First Strand cDNA Synthesis Kit за RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

За извършване на ретротранскрипция за синтез на cDNA към 2 µg РНК, бяха добавени 11 µL третирана с DEPC вода и 1 µL 10X случайни праймери. След това сместа се инкубира при 65 ° С в продължение на 10 минути, за да се денатурира РНК. След това време епруветките незабавно се довеждат до 4 ◦C за 5 минути, за да се избегне ренатурация на РНК. Сместа от реагенти за синтез на cDNA е показана в таблица S1 (допълнителни данни).

Осем uL от реакционната смес се добавят към всяка проба. Целият обем се поставя на дъното на епруветките и се инкубира при 42 °C за 60 минути. Накрая, реакцията беше спряна чрез инактивиране на обратната транскриптаза чрез нагряване при 70 ◦C за 10 минути.

4.9.3. PCR в реално време

Основната характеристика на PCR в реално време е, че анализът на продуктите се извършва по време на процеса на амплификация чрез определяне на флуоресценцията. По този начин процесите на усилване и откриване се извършват едновременно в една и съща епруветка или флакон, без да е необходимо допълнително действие. За PCR в реално време се използват термоциклери, които могат да усилват и откриват флуоресценция едновременно. Използвахме термичния цикъл LightCycler в реално време (Roche Diagnostics, Манхайм, Германия).

Таблица S2 (Допълнителни данни) изброява реагентите, необходими за PCR в реално време, като се използват специфични за последователността праймери и ДНК-свързващо багрило (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Швейцария) като система за откриване.

За проектирането на праймерите за различните количествено определени маркери беше използвана програмата за биоинформатика Primer3Plus, за която взехме cDNA последователностите на интересуващите ни гени от базата данни с отворен достъп Medline. Праймерите бяха доставени от Merck (Sigma-Aldrich). Температурата на хибридизация и последователността на различните използвани праймери са показани в таблица S3 (допълнителни данни).

Реакционните условия за амплификация на интересуващите ни гени са показани в таблица S4 (допълнителни данни).

Накрая, пробите бяха подложени на програма за топене: 95 ◦C за 15 s, 65 ◦C за 30 s и до 98 ◦C със скорост от 0.1 ◦C/s с непрекъснато записване на флуоресценция.

За количественото определяне на нивата на cDNA беше използван методът за сравнение на прага на цикъла (Ct) [75], използвайки GADPH като икономка. Амплификацията на икономката е направена паралелно с анализирания ген. Стойностите на Ct бяха изчислени с помощта на софтуера 4.0, предоставен от LightCycler (Roche Diagnostics, Манхайм, Германия). Софтуерът позволява разграничаване между флуоресценция поради усилване на пробата и фон. Кривите на топене също бяха записани. Определянето на температурата на топене на амплифицирания фрагмент позволява характеризирането на амплифицирания продукт. Размерът на ивиците се проверява върху 1,5% агарозен гел.

Вариацията на експресията на изследвания ген с лечение с кверцетин или рутин се изразява като функция на контролния TgAPP (мишки без лечение) и нормализиране на тази експресия с нивата на GADPH. Сгъването на промяната (2−∆∆Ct) представлява броят пъти, в които генът, който представлява интерес, е модифициран при конкретното третиране по отношение на контролните мишки.

4.10. Статистически анализи

Всички тестове бяха проведени поне в два екземпляра и в три различни експеримента. Получените резултати се изразяват като средна ± стандартна грешка. Еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA) беше извършен, след като данните бяха тествани и демонстрираха, че отговарят на нормално разпределение. Бяха проведени пост-хок тестове за множество сравнения на Newman-Keuls, като се изследваха средните разлики между групите. Стойностите на p < 0.05 се считат за значими. За статистически анализи е използван софтуер SigmaPlot 11.0.

5. Изводи

Хранителните навици и добавките могат да повлияят на клетъчния редокс статус. Въз основа на това, ние имахме за цел да подобрим клетъчната редокс хомеостаза в AD миши модел с флавоноидна диета, съдържаща кверцетин или рутин за облекчаване на амилоидната патология, като се има предвид взаимодействието между клетъчния редокс статус и протеазомно-зависимите амилоидни характеристики при асимптоматична AD. Нашите набори от данни са подходящи, тъй като флавоноидните ефекти, показани в модела на мишка TgAPP, са в съответствие с тези, докладвани по-рано в нашите in vitro и ex vivo модели.

В заключение, нашите открития показват, че започването на диетично лечение в асимптоматичния стадий или появата на AD-подобни симптоми може да възстанови клетъчния редокс статус и физиологичната обработка на АРР чрез едновременно регулиране на експресията на АРР и активността на BACE1.

Въпреки че е трудно да екстраполираме нашите открития към човешкото състояние, те могат да имат широки последици за човешкия отговор към бъдещи терапевтични средства. От двата флавоноида, рутинът, с като цяло по-изявени in vivo ефекти, изглежда най-подходящ за включване в ежедневната диета като адювантна терапия при AD, въз основа на увеличаването на вътреклетъчната редокс хомеостаза на мозъка.

Допълнителни материали:Следната поддържаща информация може да бъде изтеглена от уебсайта. Референция [76] е цитирана в допълнителните материали.

Авторски принос:PB-B. и SM-A. замисли идеята и експерименталния дизайн, помогна в експериментите, интерпретира получените резултати и написа ръкописа. KLJ-A. проведе експериментите, извърши анализите на данните и интерпретира получените резултати. JB помогна с анализите на данните и ревизията на ръкописа. Всички данни са генерирани вътрешно и не е използвана фабрика за хартия. Всички автори се съгласяват да носят отговорност за всички аспекти на работата, като гарантират почтеност и точност. Всички автори са прочели и са съгласни с публикуваната версия на ръкописа.

Финансиране:Това изследване е финансирано от Фондация за медицински изследвания «Mutua Madrileña» (Четвърто издание на безвъзмездни средства за проекти за медицински изследвания), испанското Министерство на образованието и науката (Реф. AGL2008-04892-C03-02) и Министерство на науката и иновациите на Испания (Реф. CTQ2010-16170).

Изявление на институционалния съвет за преглед:Протоколите за животни бяха одобрени от Комитета за институционална грижа и използване на животните (IACUC) към Университета Комплутенсе в Мадрид и бяха в пълно съответствие с Европейската директива 2010/63/за защита на животните, използвани за научни цели и испанското законодателство за хуманно отношение към животните ( Кралски указ 53/2013, 1 февруари 2013 г.).

Декларация за информирано съгласие:Не е приложимо.

Декларация за наличност на данни:Данните, които подкрепят констатациите от това проучване, са достъпни от съответния автор при разумно искане.

Благодарности:Благодарим на фондация Folch за преддокторантската стипендия на KLJA.

Конфликти на интереси:Авторите декларират, че няма конфликт на интереси.

Съкращения

AD, болест на Алцхаймер; ADAM-10, протеин 10, съдържащ дезинтегрин и металопротеиназен домен; АРР, амилоиден прекурсорен протеин; APPswe, шведска мутация на амилоидния прекурсорен протеин; А, амилоид-; BACE1, -място АРР разцепващ ензим 1; CAT, каталаза; GPx, глутатион пероксидаза; GR, глутатион редуктаза; GSH, редуциран глутатион; GSSG, окислен глутатион; SOD, супероксид дисмутаза.

Препратки

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; ван ден Бош, Калифорния; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Принс, Северна Дакота; Barkhof, F.; et al. Асоциация на CSF, плазмени и образни маркери на невродегенерация с клинична прогресия при хора със субективен когнитивен упадък. Неврология 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Домингес, LJ; Веронезе, Н.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Салеми, Г.; Barbagallo, M. Хранене, физическа активност и други фактори на начина на живот в превенцията на когнитивен упадък и деменция. Хранителни вещества 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Болест на Алцхаймер: Изследване на природния „лечебен сандък“ за нови терапевтични средства. Biomol. Концепции 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Аш, KH; Zahs, KR Проучване на биологията на болестта на Алцхаймер при мишки. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Захс, КР; Ashe, KH „Твърде много добри новини“ – Опитват ли се моделите на мишки на Алцхаймер да ни кажат как да предотвратим, а не да излекуваме болестта на Алцхаймер? Тенденции Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Фоли, AM; Ammar, ZM; Лий, RH; Mitchell, CS Систематичен преглед на връзката между нивата на амилоид и мерките за когнитивен дефицит на трансгенна мишка при болестта на Алцхаймер. J. Алцхаймер Dis. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Ананд Дейвид, А.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Прегледи на биологичното значение на кверцетин: биоактивен флавоноид. Pharm. Rev. 2016, 10, 84–89.

8. Хабтемариам, С. Рутин като естествена терапия за болестта на Алцхаймер: прозрения за неговите механизми на действие. Curr. Med. Chem. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Мартин-Арагон, С.; Хименес-Алиага, К.; Benedí, J.; Bermejo-Bescós, P. Неврохорметични реакции на кверцетин и рутин в клетъчна линия, свръхекспресираща амилоидния прекурсорен протеин (APPswe клетки). Фитомедицина 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Джоу, В.; Qing, H.; Тонг, Й.; Song, W. BACE1 генна експресия и разграждане на протеини. Ан. NY Acad. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Gutbier, S.; Spreng, AS; Delp, J.; Шилдкнехт, С.; Karreman, C.; Suciu, I.; Брунър, Т.; Groettrup, M.; Leist, M. Предотвратяване на невронална апоптоза от астроцити чрез тиол-медиирана модулация на реакцията на стрес и ускорено възстановяване от протеотоксичен стрес. Клетъчна смърт Разл. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Аояма, К. Глутатион в мозъка. Вътр. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Шоли, А. Хранителни вещества за невропознаване при здраве и болест: Мерки, методологии и механизми. Proc. Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Бигл, М.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Свързаното със стареенето увеличение на оксидативния стрес корелира с модела на развитие на бета-секретазната активност и образуването на бета-амилоидна плака при трансгенни Tg2576 мишки с патология, подобна на Алцхаймер. Вътр. J. Dev. Neurosci. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Хаулет, ДР; Richardson, JC Патологията на АРР трансгенни мишки: Модел на болестта на Алцхаймер или просто свръхекспресия на АРР? Histol. Хистопатол. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spallotta, F.; Мартели, Ф.; Валенте, С.; Май, А.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Оксидативен стрес и епигенетична регулация при стареене и свързани с възрастта заболявания. Вътр. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Оксидативен и нитрозативен стрес при болестта на Паркинсон. Biochim. Biophys. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Мандал, ПК; Сахара, С.; Трипати, М.; Murari, G. Мозъчни нива на глутатион - нов биомаркер за леко когнитивно увреждане и болестта на Алцхаймер. Biol. Психиатрия 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Чен, JJ; Thiyagaraja, М.; Песен, J.; Chen, C.; Херман, Н.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Черно, SE; Ramirez, J.; Андреаца, AC; et al. Променен централен и кръвен глутатион при болестта на Алцхаймер и леко когнитивно увреждане: мета-анализ. Алцхаймер Res. Там. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Pocernich, CB; Butterfield, DA Повишаване на глутатиона като терапевтична стратегия при болестта на Алцхаймер. Biochim. Biophys. Acta (BBA)-Mol. Основа Dis. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Раза, А.; Xie, W.; Ким, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Винс, Р.; Още повече, SS дипептидът на ψ-GSH инхибира оксидативния стрес и невровъзпалението в модел на мишка с болестта на Алцхаймер. Антиоксиданти 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Янг, Х.; Xie, Z.; Wei, L.; Динг, М.; Wang, P.; Bi, J. Глутатион-миметик D609 облекчава дефицита на паметта и намалява отлагането на амилоид в A PP/PS1 трансгенен модел на мишка. Neuroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Гереро-Гомез, Д.; Мора-Лорка, JA; Sáenz-Narciso, B.; Наранхо-Галиндо, FJ; Муньос-Лобато, Ф.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Линк, CD; Neri, C.; et al. Загубата на редокс хомеостаза на глутатион уврежда протеостазата чрез инхибиране на зависимото от автофагия разграждане на протеини. Клетъчна смърт Разл. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Лефаки, М.; Папаевгениу, Н.; Chondrogianni, N. Redox регулиране на протеазомната функция. Redox Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Боне-Коста, В.; Pomatto, LC; Davies, KJ Протеазомата и оксидативният стрес при болестта на Алцхаймер. Антиоксид. Редокс сигнал. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Белкачеми, А.; Ramassami, C. Времева последователност на оксидативния стрес в мозъка от трансгенни миши модели на болестта на Алцхаймер, свързани с амилоидната каскада. Свободен Радик. Biol. Med. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Танигава, С.; Фуджи, М.; Hou, DX действие на Nrf2 и Keap1 в ARE-медиирана NQO1 експресия от кверцетин. Свободен Радик. Biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Chondrogianni, N.; Капета, С.; Chinou, I.; Василату, К.; Папассидери, И.; Gonos, ES Против стареене и подмладяващи ефекти на кверцетин. Exp. Геронтол. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Бодендорф, У.; Danner, S.; Фишер, Ф.; Стефани, М.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Експресията на човешка бета-секретаза в мозъка на мишката повишава нивото на стационарно състояние на бета-амилоид. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [CrossRef]

30. Ямакава, Х.; Ягишита, С.; Футай, Е.; Ishiura, S. Ефективността на инхибитора на бета-секретазата е намалена от аберантно местоположение на бета-разцепване на "шведския мутант" амилоиден прекурсорен протеин. J. Biol. Chem. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Келър, Д.; Erö, C.; Markram, H. Клетъчна плътност в мозъка на мишката: систематичен преглед. Отпред. Невроанат. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Младенович Джорджевич, AN; Капетану, М.; Лончаревич-Василкович, Н.; Тодорович, С.; Атанасопулу, С.; Йович, М.; Првулович, М.; Тауфик, Е.; Матсас, Р.; Каназир, С.; et al. Фармакологичната интервенция в модел на трансгенна мишка подобрява свързания с Алцхаймер патологичен фенотип: участие на протеазомна активация. Свободен Радик. Biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Таманьо, Е.; Бардини, П.; Guglielmotto, M.; Дани, О.; Табатон, М. Различните състояния на агрегиране на бета-амилоид 1-42 медиират различни ефекти върху оксидативния стрес, невродегенерацията и експресията на BACE-1. Свободен Радик. Biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Йорисен, Е.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Шванбек, Р.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Татия, А.; Тесер, И.; et al. Дезинтегрин/металопротеиназата ADAM10 е от съществено значение за установяването на мозъчната кора. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Кун, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Коломбо, А.; Zeitschel, U.; Елуарт, JW; Креммер, Е.; Roßner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 е физиологично релевантна, конститутивна секретаза на амилоидния прекурсорен протеин в първичните неврони. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

36. Постина, Р.; Шрьодер, А.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Шмит, У.; Койро, Е.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Благословение, М.; et al. Дезинтегрин-металопротеиназа предотвратява образуването на амилоидна плака и хипокампални дефекти в миши модел на болестта на Алцхаймер. J. Clin. разследване. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Елфики, AM; Махмуд, АА; Elreedy, HA; Ибрахим, KS; Гази, Масачузетс Кверцетинът стимулира неамилоидогенния път чрез активиране на генна експресия на ADAM10 и ADAM17 в модел на плъх, предизвикан от алуминиев хлорид на болестта на Алцхаймер. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Копанаки, Е.; Чанг, С.; Влахос, А.; Tschäpe, JA; Мюлер, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha противодейства на дендритната дегенерация и невронната смърт, предизвикана от протеазомния стрес. Mol. Клетъчни неврони. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Кунду, А.; Кинс, С.; Когел, Д.; Behl, C.; Hajieva, P. Продуктът на разцепване на прекурсора на амилоид-бета протеин sAbetaPPalpha модулира BAG3-зависимото агресивно образуване и подобрява клетъчната протеазомна активност. J. Алцхаймер Dis. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Ливингстън, RW; Старейшина, MK; Сингх, А.; Westlake, CM; Тейт, WP; Авраам, WC; Williams, JM. Секретираният амилоиден прекурсорен протеин-алфа подобрява LTP чрез синтеза и трафика на Ca2 плюс -пропускливи AMPA рецептори. Отпред. Mol. Neurosci. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Крауфорд, HC; Демпси, PJ; Браун, Г.; Адам, Л.; Moss, ML ADAM10 като терапевтична цел за рак и възпаление. Curr. Pharm. Дес. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Сафтиг, П.; Lichtenthaler, SF Алфа секретазата ADAM10: металопротеаза с множество функции в мозъка. Прог. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Борека, А.; Gironi, K.; Амадоро, Г.; Ammassari-Teule, M. Противоположна дисрегулация на Fragile-X протеин на умствена изостаналост и хетеронуклеарен рибонуклеопротеин C протеинови асоциати с подобрена APP транслация при болестта на Алцхаймер. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Августин, С.; Rimbach, G.; Августин, К.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Cermak, R. Ефект от краткосрочно и дългосрочно лечение с екстракт от Ginkgo biloba върху нивата на амилоиден прекурсорен протеин в модел на трансгенна мишка, свързан с болестта на Алцхаймер. Арх. Biochem. Biophys. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Борека, А.; Валери, Ф.; Де Лука, М.; Ернст, Л.; Русо, А.; Нобили, А.; Кордела, А.; Корсети, В.; Амадоро, Г.; Mercuri, NB; et al. Преходното регулиране на транслационната ефективност при продромални и ранни симптоматични Tg2576 мишки допринася за А патология. Neurobiol. дис. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Д'Амелио, М.; Шенг, М.; Cecconi, F. Caspase-3 в централната нервна система: Отвъд апоптозата. Тенденции Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ертюрк, А.; Wang, Y.; Sheng, M. Локално подрязване на дендрити и шипове чрез каспаза-3-зависими и ограничени от протеазоми механизми. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. Д'Амелио, М.; Кавалучи, В.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Фери, А.; Диамантини, А.; De Zio, D.; Карара, П.; Батистини, Л.; et al. Каспаза-3 предизвиква ранна синаптична дисфункция в миши модел на болестта на Алцхаймер. Нац. Neurosci. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

49. Gervais, FG; Xu, D.; Робъртсън, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Смит, Д.; Ригби, М.; Шиърман, MS; et al. Участие на каспази в протеолитичното разцепване на амилоид-бета прекурсорния протеин на Алцхаймер и образуването на амилоидогенен А бета пептид. Cell 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Парк, Г.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Наваро, М.; Koo, EH Активирането на каспаза и медиираното от каспаза разцепване на АРР е свързано с индуцирана от амилоид-протеин загуба на синапс при болестта на Алцхаймер. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Лу, окръг Колумбия; Рабизаде, С.; Чандра, С.; Шая, РФ; Ellerby, LM; Йе, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Втори цитотоксичен протеолитичен пептид, получен от прекурсор на амилоид бета-протеин. Нац. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 като нова ранна цел при лечението на болестта на Алцхаймер. Евро. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Албрехт, С.; Богданович, Н.; Гети, Б.; Уинблад, Б.; LeBlanc, AC Caspase-6 активиране в мозъци с фамилна болест на Алцхаймер, носещи амилоиден прекурсорен протеин или мутации на пресенилин I или пресенилин II. J. Neuropathol. Exp. неврол. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Морихара, Т.; Тетър, Б.; Янг, Ф.; Лим, GP; Будино, С.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM. Ибупрофенът потиска интерлевкин-1бета индукцията на проамилоидогенен алфа1-антихимотрипсин, за да облекчи бета-амилоидната (Абета) патология в моделите на Алцхаймер. Невропсихофармакология 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Джан, WJ; Wu, P.; Лиу, Б.; Sun, GT; Ю, DM; Deng, JB Експресия на свързаните с апоптоза протеини каспаза -3 и NF-kappaB в хипокампуса на Tg2576 мишки. Neurosci. Бик. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Фулър, С.; Стийл, М.; Munch, G. Активирана астроглия по време на хронично възпаление при болестта на Алцхаймер - пренебрегват ли невроподдържащите си роли? Мутат. Рез. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Лий, М.; Чо, Т.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Изчерпването на GSH в глиалните клетки предизвиква невротоксичност: значение за стареенето и дегенеративните неврологични заболявания. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Хенсли, К. Невровъзпаление при болестта на Алцхаймер: Механизми, патологични последствия и потенциал за терапевтична манипулация. J. Алцхаймер Dis. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59. Лу, Дж.; Wu, DM; Zheng, YL; Hu, B.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Кверцетинът активира AMP-активираната протеин киназа чрез намаляване на експресията на PP2C, защитавайки стария мозък на мишка срещу индуцирана от висок холестерол невротоксичност. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Чен, JC; Хо, FM; Чао, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Лий, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Инхибирането на експресията на iNOS ген от кверцетин се медиира от инхибирането на IkappaB киназата, ядрен фактор-kappa B и STAT1 и зависи от индукцията на хемоксигеназа-1 в BV-2 микроглия на мишка. Евро. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Двиведи, Д.; Мега, К.; Мишра, Р.; Mandal, PK Глутатион в мозъка: Преглед на неговите конформации, функции, биохимични характеристики, количествено определяне и потенциална терапевтична роля при мозъчни разстройства. Neurochem. Рез. 2020 г., 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Роснер, С.; Састре, М.; Борн, К.; Lichtenthaler, SF Транскрипционна и транслационна регулация на експресията на BACE1 – последици за болестта на Алцхаймер. Прог. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Купър-Блакетър, Д.; Мариаш, А.; Котилинек, Л.; Каварабаяши, Т.; Younkin, LH; Карлсън, Джорджия; Юнкин, SG; Ashe, KH Връзката между Abeta и паметта в Tg2576 миши модел на болестта на Алцхаймер. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT Beta-site APP разцепващ ензим mRNA експресия в APP трансгенни мишки: Анатомично припокриване с трансгенна експресия и статични нива със стареенето. Am. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Хсиао, К.; Чапман, П.; Нилсен, С.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Юнкин, С.; Янг, Ф.; Cole, G. Корелативни дефицити на паметта, повишаване на Abeta и амилоидни плаки при трансгенни мишки. Наука 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Трансгенни мишки, експресиращи амилоидни прекурсорни протеини на Алцхаймер. Exp. Геронтол. 1998, 33, 883–889. [CrossRef]

67. Симон, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Куадрадо-Техедор, М.; Escribano, L.; Лопес де Матурана, Р.; Дел Рио, Дж.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Свръхекспресията на човешки APP от див тип при мишки причинява когнитивен дефицит и патологични характеристики, несвързани с нивата на Abeta. Neurobiol. дис. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Определяне на глутатион и глутатион дисулфид с помощта на флуоресцентна сонда офталалдехид. анален Biochem. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Марклунд, С.; Marklund, G. Участие на супероксидния анионен радикал в автоокислението на пирогалол и удобен анализ за супероксидна дисмутаза. Евро. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Aebi, H. Каталаза in vitro. Методи Enzymol. 1984, 105, 121–126.

71. Барха де Кирога, Г.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Антиоксидантна защита и пероксидация в черния дроб и мозъка на възрастни плъхове. Biochem. J. 1990, 272, 247–250. [CrossRef] [PubMed]

72. Маси, В.; Williams, CH, Jr. Относно реакционния механизъм на дрождева глутатион редуктаза. J. Biol. Chem. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Джаш, К.; Гондалия, П.; Сункария, А.; Kalia, K. MicroRNA-29b модулира активността на -секретазата в клетъчна линия SH-SY5Y и мозъка на диабетна мишка. Cell Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Хименес-Алиага, К.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Quercetin и рутинът проявяват антиамилоидогенни и дезагрегиращи фибрили ефекти in vitro и мощна антиоксидантна активност в клетките на APPswe. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Рамос, Калифорния; Боуман, ТА; Boles, NC; Търговец, АА; Zheng, Y.; Пара, И.; Fuqua, SA; Шоу, Калифорния; Goodell, MA Доказателство за разнообразие в транскрипционните профили на единични хематопоетични стволови клетки. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stowers, CC; Скалет, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C води до свръхвисока резолюция и контрастно маркиране на дегенериращи неврони. Brain Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Отказ от отговорност/Бележка на издателя:Твърденията, мненията и данните, съдържащи се във всички публикации, са само на отделния автор(и) и сътрудник(и), а не на MDPI и/или редактора(ите). MDPI и/или редакторът(ите) се отказват от отговорност за всякакви наранявания на хора или собственост, произтичащи от идеи, методи, инструкции или продукти, посочени в съдържанието.

【За повече информация:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】