Разликата между химическите компоненти и биологичните активности на резените от сурови продукти и продукта, обработен с пара от вино от Cistanche Deserticola

1. Въведение

Cistanche deserticolaе обичайна традиционна китайска медицина и обикновено се използва като тоник в Китай и Япония в продължение на много години, известен като "пустинен женшен".Cistanche deserticolaза първи път е записан като най-висок клас в „Билковия класик на Shenong от Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)“ през около 100 г. пр.н.е. и е използван за лечение на различни заболявания, включително бъбречна недостатъчност, импотентност, женско безплодие, болестна левкорея, обилна метрорагия (бели) , усещане за студ в слабините и коленете и хроничен запек при възрастни хора [1]. Досега са изолирани няколко основни съставки, като полизахариди [2, 3], фенилетаноидни гликозиди (PhG) [1, 4], иридоиди [1] и лиганди [1, 5]. Между тях,PhG и полизахаридиса основните биологично активни компоненти вCistanche deserticola[6–9]. Съвременните фармакологични експерименти го доказватЦистанчеdeserticolaможе да подобри производството на тестостерон и да защити сперматозоидите, да стимулира клетъчната пролиферация и да подобри клетъчното оцеляване, проявявайки подчертани дейности за сексуална потентност, подобряване на паметта, против стареене, улавяне на свободните радикали и невропротекция [10–13].

НАТУРАЛНА CISTANCHE TUBULOSA ТРАДИЦИОННИ КИТАЙСКИ БИЛКИ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

За да се намали токсичността и/или да се засилят ефектите, повечето от традиционните китайски билки трябва да бъдат обработени преди предписване. традиционните етапи на процеса включват почистване, воден процес (смилане във вода, варене на пара и печене) и свободен процес (разбъркване и нагряване с вино, оцет, сол или мед) [14]. По време на процеса химическите компоненти могат да бъдат променени: относителното съдържание на определени компоненти може да се промени или да се образуват нови компоненти [15]. Процесът на Cistanche deserticola има дълга история и Cistanche deserticola трябва да се обработва чрез накисване в оризово вино и варене на пара, както е описано в Китайската фармакопея (издание от 2015 г.) [16]. Доказано е, че SPW влияе върху техните ефекти върху бъбречните меридиани според теорията на традиционната китайска медицина (TCM) [17]. WSCD е документиран за първи път в „Трактат на Lei Gongs относно приготвянето и варенето на Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)“ в Северните и Южните династии на Китай. WSCD се използва по-добре за лечение на бъбречни недостатъци и защита на спермата, както е записано в "Taiping Shenghui Fang" от династията Song на Китай. Досега обаче не е имало сравнителни проучвания на химичните компоненти между RCD и WSCD.

Съвременните фармакологични изследвания показват, че WSCD може да тонизира бъбрека, за да осигури есенция чрез стимулиране на оста хипоталамус-хипофиза-гонада в различна степен и се използва за лечение на дефицит в бъбреците, като дефицит на бъбречен ян [18]. Досега обаче разликите в биологичните активности между RCD и WSCD не са проучени. Наскоро, за да се улеснят експерименталните изследвания, животинският модел с бъбречно-ян дефицит беше дублиран чрез инжектиране на плъхове с висока доза хидрокортизон, при което плъховете ще покажат симптоми, много наподобяващи тези, описани при бъбречно-ян дефицит на TCM [19, 20] . Плъховете с бъбречно-ян дефицит винаги имат някои симптоми като загуба на тегло, намалена консумация на храна, слабост, повишен прием на вода и намалена активност. Въз основа на този животински модел разликите в подхранващите бъбречни ефекти между RCD и WSCD бяха открити и дори разкриха научната същност на традиционния китайски процес.

2. Материали и методи

2.1. Материали и химикали

Стандартните вещества като напрактеозид, изоактеозид, ехинакозид, цистанозид А и 2- ацетилактеозидбяха закупени от Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Шанхай, Китай). Цистанозид F, цистанозид С, османтузид В и тубулозид В бяха закупени от Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Чънду, Китай). Чистотата на всички стандарти беше не по-малко от 98%. Метанол и ацетонитрил с клас HPLC бяха закупени от Aladdin Chemistry Inc. (Шанхай, Китай). Дейонизираната вода беше получена с помощта на MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, USA) за приготвяне на проби и мобилни разтвори. Всички други органични разтворители, използвани в това изследване, са с аналитичен клас и са закупени от Shanghai Chemical Co. Ltd (Шанхай, Китай).

2.2. Събиране на мостри

Всички сурови Cistanche deserticola (7 партиди проби) бяха събрани от Медицинския университет на Вътрешна Монголия от провинциите Вътрешна Монголия и Нинся. Всички бяха идентифицирани като cistanche deserticola YC Ma от Xiaoqin Wang, професор по фармакогнозия в медицинския университет на Вътрешна Монголия. Образец на ваучер беше депозиран в Училището по фармация, Медицински университет на Вътрешна Монголия. след събиране, съцветията на Cistanche deserticola бяха отстранени, стъблата бяха нарязани и изсушени при стайна температура с въздух и след това резените бяха произволно разделени на две групи във всяка партида: едната е RCD, а другата беше използвана за приготвянето на WSCD .

WSCD са приготвени в лабораторията съгласно китайската фармакопея (издание от 2015 г.) [16], което означава, че нарязаните RCD са накиснати в оризово вино в затворен съд в продължение на 6 часа, докато омекнат, задушени на водна баня за допълнителни 12 часа, докато повърхността става черна и се изсушава при стайна температура с въздух.

2.3. Анализ на главните компоненти (PCA)

Анализът на главните компоненти (PCA) е усъвършенствана техника, широко използвана за намаляване на измеренията на многовариантни проблеми. Той намалява размерността на оригиналния набор от данни, като обяснява корелацията между голям брой променливи по отношение на по-малък брой основни фактори без значителна загуба на информация. В това проучване разликите между RCD и WSCD бяха извършени чрез неконтролиран PCA с помощта на софтуера SIMCA 13.0 въз основа на относителните пикови площи в HPLC хроматографията. С помощта на PCA бяха открити основните влияния на химикалите върху класификацията сред различните проби.

2.4. Приготвяне на пробата

2.4.1. Препарат за екстракти за животни

RCD и WSCD бяха избрани от събраните и подготвени проби, както е описано в раздел 2.2.

Изсушен на въздух и нарязан RCD се стрива на прах с пулверизатор (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), претегля се точно 1.0 kg и се накисва в 50% етанол за 30 минути, и съотношенията на растението Използваният /етанол беше 1/10 (w/w). И след това се екстрахира под обратен хладник два пъти за 1 час всеки път. двата екстракта се комбинират и филтруват и етанолът се възстановява при понижено налягане при 60°С. te Общият суров екстракт от PhGs се изсушава във вакуум при 60°С и се пречиства с макропореста смола. Накрая се получава PhG екстракт от RCD и се претегля точно.

PhG екстрактът от WSCD беше получен по същата процедура по-горе.

утайките от извличането на PhGs се изсушават на въздух и се отваряват два пъти за 1,5 часа всеки път с 20 пъти вода. Двата екстракта се комбинират и центрофугират при 4000 rpm за 10 минути, а супернатантата се концентрира и утаява с 95% етанол. след центрофугиране, утайката се изсушава във вакуум при 60∘ C. Накрая,полизахариден екстрактот RCD беше получено и претеглено точно.

Полизахаридният екстракт от WSCD се получава следвайки същата процедура по-горе.

PhGs и полизахаридните екстракти от RCD и WSCD са смесени суспензии във вода, съответно, когато плъховете са третирани орално.

2.4.2. Подготовка на проби за определяне на PhG

Екстрактите на PhGs в раздел 2.4.1 бяха претеглени точно на 0.15 g и екстрахирани чрез ултразвук с 50mL 50% воден разтвор на метанол за 40 минути. След охлаждане, загубата на тегло се допълва с 50% метанол. Всички проби и разтворители бяха филтрирани през 0.45 цт мембрана преди анализа. Съдържанието на четири PhGs в RCD и WSCD се определя с помощта на HPLC, а общите PhGs се определят с помощта на UV спектрофотометрия.

2.4.3. Подготовка на пробата за определяне на полизахарид

Полизахаридните екстракти в раздел 2.4.1 бяха претеглени точно като 0.10 g и екстрахирани чрез ултразвук с 50 mL гореща вода в продължение на 40 минути; след охлаждане загубата на тегло се попълва с вода. Всички проби и разтворители бяха филтрирани през 0.45 цт мембрана преди анализа.

2.5. Хроматографско състояние на HPLC и определяне на четирите PhG

Хроматографското разделяне се извършва в система UltiMate 3000 HPLC (Thermo Fisher Scientific, САЩ), оборудвана с помпа с двоен градиент, колонно отделение и DAD детектор . Данните бяха събрани и обработени с помощта на система за хроматографски данни ChromeLeon. Пробите бяха разделени на Agilent Zorbax SB-C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 µm) с предпазна колона C18 (4.6 mm × 12.5 mm, 5 µm). Подвижната фаза се състои от ацетонитрил (А) и 0.1% разтвор на фосфорна киселина (В) при скорост на потока 1 mL/min. Градиентното елуиране е както следва: първоначално 0–13 минути, линейна промяна от AB (5:95, v/v) до AB (15:85, v/v); 13–25 минути, линейна промяна към AB (20:80, v/v); 25–43 минути, линейна промяна към AB (25:75, v/v). Дължината на вълната на детектора се наблюдава при 330 nm. Температурата на колоната беше настроена на 30∘ C и обемът на инжектираната проба беше 10µL [21]. Основният разтвор, съдържащ четири референтни стандарта, се приготвя чрез разтваряне на референтните стандарти в 50% метанол до крайна концентрация от 0,20 mg/mL за 2-ацетилактеозид, 0,20 mg/mL за актеозид, 0,05 mg/mL за османтузид B, и 0.10 mg/mL за изоактеозид. След това разтворът се разрежда до пет различни концентрации с три повторения, за да се установят калибрационни криви. Съдържанието на пробата се изразява в g/kg сурово тегло.

2.6. Определяне на общия PhG

Общите PhG се определят с помощта на метода на UV спектрофотометрия при дължина на вълната 330nm в UV1000 спектрофотометър (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Основният разтвор се приготвя чрез разтваряне на ехинакозидни стандарти в 50% метанол до крайна концентрация от 0,10 mg/mL и след това се разрежда до пет различни концентрации с три повторения, за да се установят калибрационни криви.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.7. Определяне на полизахариди

Определянето наполизахаридисе извършва по метода на фенол-сярна киселина. 1 ml от разтвора на пробата се поставя в епруветка от 2 0 ml със стъклена запушалка и се добавят 1 ml 6% разтвор на фенол и 5 ml концентрирана сярна киселина и се разклащат в продължение на 5 минути. Сместа се прехвърля в кипяща водна баня за 10 минути и се охлажда до стайна температура за ултравиолетово откриване. Ултравиолетовата абсорбция се наблюдава при 480 nm в UV1000 спектрофотометър. Референтният стандарт на безводна D-глюкоза се претегля точно и се разтваря в дестилирана вода до крайна концентрация от 0,10 mg/mL. След това разтворът се разрежда до пет различни концентрации с три повторения, за да се установят калибрационни криви.

2.8. Експерименти с животни

2.8.1. Животни и жилища

Мъжки SD плъхове с полова зрялост (180-200 g) са закупени от Xinglong (Пекин) Експериментална животинска ферма (възраст: 6 седмици) и лицензът за лабораторни животни е SCXK (Jing):2016-0003. Всички процедури върху животни са одобрени от Комитета за изследване на животните на Медицинския университет на Вътрешна Монголия и са извършени съгласно насоките на Националния институт по здравеопазване относно принципите за грижа за животните (2004 г.). Всички животни се държат при бариерна система с регулирана температура от 21–23∘ C и относителна влажност от 40–65% и на 12-часов цикъл тъмно/светло. На плъховете се дава ad libitum храна и вода и се аклиматизират към горната среда за една седмица.

2.8.2. Дозировка и вземане на проби

Плъховете бяха прехвърлени в отделни метаболитни клетки и произволно разделени на 6 групи (?=10 във всяка група). На тях им беше дадена интрамускулна инжекция от 15 mg/kg хидрокортизон натриев сукцинат (закупен от Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, Китай) в продължение на 2 седмици, с изключение на група 1, която беше инжектирана с равен обем физиологичен разтвор. На 14-ия ден телесното тегло, консумацията на храна, приемът на вода, обемът на урината и спонтанната активност в рамките на 5 минути бяха събрани, за да се увери дали моделът на бъбречен ян дефицит е направен успешно. От 15-ия ден 6 групи бяха третирани, както следва: група 1 и група 2 (моделна група, М) бяха третирани с равен обем дестилирана вода, група 3 (PhGs екстракт от RCD група, PR) бяха третирани с {{12 }}.42 g/kg PhGs екстракт от RCD, което се равнява на около 1,8 g/kg от суровия Cistanche deserticola и другите групи бяха същите, група 4 (PhGs екстракт от WSCD група, PW) бяха третирани с доза { {17}}.49 g/kg PhGs екстракт от WSCD, група 5 (полизахариден екстракт от RCD група, SR) бяха третирани с {{20}}.18 g/kg полизахариден екстракт от RCD, и група 6 беше (полизахариден екстракт от WSCD група, SW) бяха третирани с доза от 0,22 g/kg полизахаридния екстракт от WSCD. Всички плъхове бяха третирани чрез стомашна перфузия на ден. След едномесечно лечение, на плъховете е отказана храна в продължение на 12 часа преди вземането на кръв. На следващия ден всички плъхове бяха анестезирани и умъртвени. По време на тестването плъховете се претеглят веднъж седмично, за да се коригира дозата и се претеглят отново преди умъртвяването. Кръвните проби бяха събрани в епруветка Eppendorf с 10% разтвор на EDTA-2Na. Серумът се отделя чрез центрофугиране при 2000 rpm за 15 минути и се съхранява при -80 градуса за по-нататъшна употреба. В допълнение, бъбреците, тестисите, епидидимите, простатната жлеза и семенните мехурчета бяха отстранени и претеглени бързо. След претегляне тестисите се замразяват в течен азот за определяне на SOD и MDA.

2.9. Анализ на хормоналния и антиоксидантния ефект

Нивата на тестостерон (Т) и естрадиол (Е2) са определени в Центъра за инспекция на качеството на Кингдао Кечуанг чрез радиоимунен и колориметричен метод. Замразените тестиси бяха претеглени и смесени с 20 пъти студен физиологичен разтвор (W/W). Хомогенатът на тестисите, получен от тъканен хомогенат в ледена баня, се центрофугира, за да се получи супернатантата. Съдържанието на SOD и MDA в тестиса се определя чрез комплекти SOD и MDA, следвайки инструкциите.

2.10. Статистически анализ

Значимостта на разликите между групите беше сравнена чрез еднопосочен ANOVA тест, последван от теста на Schefe с граница на значимост 0.05, използвайки софтуер SPSS 25.0. Всички данни бяха изразени като средно ± стандартно отклонение (SD) (n=3).

3. Резултати

3.1. Анализът на промените в PhGs след SPW с помощта на PCA

За да се сравнят промените на PhGs след SPW, 9 хроматографски пика бяха избрани като характерни пикове и бяха идентифицирани. Техните структури са показани на фигура 1, чиито относителни пикови площи са изчислени за количествено изразяване. HPLC хроматограмата е показана на Фигура 2, което показва, че относителното съдържание на основните PhGs е променено по време на SPW. PCA анализ на относителните пикови площи на 9 компонента беше получен за разграничаване на различни проби. RCD и WSCD бяха далеч един от друг в графиката на резултатите (Фигура 3(a)), което показва, че пробите са класифицирани в два клъстера. Така че се смята, че съдържанието на химическите съставки е различно. За по-нататъшно намиране на потенциалните химични маркери за дискриминацията беше извършен разширен статистически анализ, за ​​да се генерира графиката Bi за натоварване (Фигура 3 (b)). Пикове 2, 3, 4, 6 и 7 ще намалеят след SPW, докато пикове 5, 8 и 9 ще се увеличат и всички те са най-важните компоненти за разграничаване на RCD и WSCD. относителното съдържание на пик 1 не варира много след SPW.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.2. Съдържанието на общите полизахариди и PhG се променя след SPW

Както е показано на фигура 3(b), 8 компонента (5, 8 и 9 увеличени и 2, 3, 4, 6 и 7 намалени) са се променили значително и са имали голямо влияние върху клъстерирането на извадката. Сред тях изоактеозидът и османтузид Б са се увеличили най-много, докато 2? -ацетилактеозид и актеозид намаляват най-много. И така, съдържанието на изоактеозид, османтузид B, 2? -ацетилактеозид и актеозид се определят чрез HPLC. Както е показано на фигура 1, пик 4 е актеозид, пик 5 е изоактеозид, пик 7 е 2? -ацетилактеозид, а пик 8 е османтузид B. Общите PhG в RCD и WSCD са определени с помощта на UV метод, а общите полизахариди са извършени с помощта на метода на фенол-сярна киселина, резултатите са показани в таблица 1, изоактеозид, османтузид B ,общи полизахариди и PhGsв WSCD се е увеличил значително в сравнение с RCD. 2? -ацетилактеозид и актеозид са намалели значително.

3.3. Направен е моделът на индуциран от хидрокортизон бъбречен дефицит на Ян

В сравнение с нормалната група, след 2 седмици интрамускулно инжектиране на 15 mg/kg хидрокортизон натриев сукцинат, телесното тегло, консумацията на храна и спонтанната активност бяха значително намалени (P<0.05) and the water intake and urine volume were increased; the results were shown in Table 2. The T and E2 levels in the serum of the model group were lower than normal group as shown in Figure 4. From the above, the kidney-yang deficiency model was successfully made.

3.4. Влиянието на екстрактите върху средното тегло и индекс на вътрешните органи.

Всички плъхове и техните вътрешности се претеглят и след това се изчислява средният индекс на вътрешните органи. В сравнение с N групата, М групата е намалила значително теглото на вътрешните органи на бъбреците, семенните везикули, епидидимиса и тестисите, което също показва, че моделът на индуциран от хидрокортизон бъбречен Ян дефицит е направен успешно. В сравнение с групата M, цялото наблюдавано тегло на вътрешните органи се е увеличило в групите PW и SR, групата PR е увеличила теглото на тестисите, епидидима, семенните везикули и простатната жлеза, а групата SW е увеличила теглото на бъбреците, тестисите, епидидима , и семенно мехурче. В сравнение с PR групите, PW групата е по-добра в бъбреците, семенните везикули и простатната жлеза. Няма значителна разлика между SR и SW групите в теглото на тестиса, епидидима, семенния везикул и простатната жлеза. Резултатите са показани в таблица 3.

В сравнение с N групата, индексите на вътрешните органи на бъбреците, тестисите, епидидимиса и семенните мехурчета са намалени в групата M. В сравнение с групата M, PW и SR групата са увеличили индекса на бъбреците, тестисите, простатната жлеза и семенните мехурчета, PR групите са увеличили индекса на тестисите, простатната жлеза и семенните мехурчета, а SW групата е увеличил индекса на бъбреците, тестисите и семенните мехурчета. В сравнение с PR групите, PW групата е по-добра в бъбреците, семенните везикули и простатната жлеза. Групите SW и SR имат подобен индекс на бъбреците, тестисите, семенните мехурчета и епидидима. Резултатите са показани в таблица 4.

3.5. Влиянието на екстракта върху нивото на хормона (Т и Е2)

Както е показано на Фигура 4, в сравнение с групата М, нивата на Т и Е2 във всички групи на лечение (PW, PR, SW и SR група) са се увеличили значително (P<0.05). However, the PW group was better than the PR group in the level T and E2. The SR and SW groups had no significant difference.

3.6. Влиянието на екстрактите върху антиоксидантния ефект

SOD е важен антиоксидантен ензим. MDA е продукт на липидна пероксидация, който е индикаторът за отразяване на степента на оксидантно увреждане. Съдържанието на SOD и MDA влияе върху степента на окислителна и антиоксидантна способност. Както е показано на фигура 5, в сравнение с групата M, антиоксидантният ефект във всички групи на лечение (PW, PR, SW и SR) е бил повишен. SW групата има най-голям антиоксидантен ефект.

4. Дискусия

Преди клинично приложение, суровите материали трябва да бъдат подложени на традиционни китайски техники за обработка. Задушаването е един от традиционните подходи за обработка на някои китайски лечебни билки, което дава черен цвят, произведен от реакцията на Maillard [22], увеличавайки количествата на някои биоактивни компоненти [23] и фармакологичните активности. WSCD като един от продуктите на процеса е по-добър по отношение на подхранването на бъбреците в сравнение с RCD, както е документирано в изданието на Китайската фармакопея от 2015 г. В това проучване резултатите от PCA показват, че SPW е променил химичния профил на RCD. Нещо повече, 8 компонента в PhGs са се променили значително. Общите PhGs, общите полизахариди, изоактеозид и османтузид B са се увеличили най-много, докато 2? -ацетилактеозид и актеозид намаляват след SPW. Резултатите показват, че SPW може да промени химическите съставки на RCD. Съдържанието на PhGs с 1,3,4- тризаместени глюкопиранозилови части (като актеозид, 2?-ацетилактеозид и цистанозид С) намалява в WSCD, но концентрациите на техните изомери с 1,3,{{13 }} тризаместен глюкопиранозилов остатък (като изоактеозид и табличен B) се увеличава, което показва, че трансформацията на химични съставки може да настъпи по време на SPW и реакцията на хидролиза ще бъде една от причините. Предложените пътища на трансформация са показани на Фигура 6. Увеличаването на полизахаридите след SPW също е докладвано в женшен [24].

Документирано е, че Cistanche deserticola активизира бъбреците и обръща намаляването на нивата на тестостерон и притежава антиоксидантен ефект и противовъзпалително действие [25], а PhG и полизахаридите са двата основни биологично активни компонента в Cistanche deserticola. Като PhG, изоактеозидът и османтузидът B имат антиоксидантни и противовъзпалителни ефекти [26, 27]. Така беше проучено сравнението на фармакологичните ефекти в нивото на тестостерона и антиоксидантния ефект на RCD и WSCD. В модела на индуциран от хидрокортизон бъбречен Ян дефицит, ендокринната система е нарушена и нивото на половите хормони е силно понижено в кръвта. В това проучване резултатите от анализа на половите хормони показват, че както RCD, така и WSCD могат значително да повишат нивото на T и E2, и дветеPhG и полизахаридипоказа подобрение на половите хормони. WSCD беше по-добър от RCD, особено в групите с екстракт от PhG. Резултатите от индексите на вътрешностите показват, че както PhG, така и полизахаридите могат да подобрят теглото на вътрешностите и техните индекси на тегло. В групите с екстракти от PhG, WSCD е по-добър от RCD за увеличаване на теглата и индексите на бъбреците и семенните везикули. В допълнение, Cistanche deserticola има значителен антиоксидантен ефект, особено в полизахаридните екстрактни групи с WSCD. Както беше обсъдено по-горе, както RCD, така и WSCD могат да подобрят синдрома на бъбречно-ян дефицит; въпреки това, WSCD е по-добър от RCD за повишаване на нивото на T, E2, теглата и индексите на епидидима и тестисите. Резултатите от изследването на фармакологичните ефекти показват, че SPW е променил химическите компоненти на PhGs и е увеличил съдържанието на полизахариди, което от своя страна повишава нивото на половите хормони и засилва антиоксидантния ефект.

5. Заключение

Проучването трябваше да открие промяната на PhGs, общите полизахариди и фармакологичния ефект при RCD и WSCD върху плъхове с бъбречен дефицит, особено върху нивото на хормоните и антиоксидантния ефект. това проучване показа, че процесът на традиционните китайски билки може да промени техните химически съставки и да повлияе на тяхната биоактивност. Също така се поддържа, че суровите продукти и преработените продукти са предписани по различен начиннтlyв клиниката.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%