Ефектите на Cistanche Shenqiwan върху бъбречно увреждане, GRP78 и фактори, свързани с аутофагията при захарни плъхове с диабет тип 2 и захарен диабет тип 2

количество нормален физиологичен разтвор. Плъховете се прилагат непрекъснато в продължение на 4 седмици. Редовно се наблюдава общото състояние на плъховете. Измерват се нивата на кръвната захар на гладно (FBG) и 24--часовия микроалбумин в урината (24 h U-mAlb). Бъбречната тъкан се оцветява и се наблюдава морфология. Ултрамикроструктурата се наблюдава чрез трансмисионна електронна микроскопия. Нивата на mRNA на GRP78, Beclin-1 и LC3 в бъбречната тъкан на плъхове бяха изследвани чрез PCR в реално време и нивата на протеин бяха изследвани чрез Western blotting. Резултати В сравнение с моделната група, плъховете в групата Shenqiwan показаха

подобрен блясък на козината, повече увеличаване на теглото и повече активност; както FBG, така и 24-часовите нива на U-mAlb бяха понижени (P < 0.05). Theбъбрецина плъховете в моделната група показахаразширени гломерулни капиляри, неравномерно удебелени базални мембрани, разширени мезангиални области и сегментна склероза; бъбречна тубулна атрофия и бъбречна интерстициална фиброзна тъкан също са наблюдавани в тези бъбреци. Тези патологични промени бяха облекчени в групата Shenqiwan. В сравнение с моделната група, както генните, така и протеиновите нива на GRP78 бяха намалени (P < 0.05) в групата Shenqiwan; протеиновото ниво на Beclin-1

беше намален (P < {{0}}.05); и нивото на протеин на LC3 беше повишено (P <0.05). Заключение Shenqiwan може да облекчи бъбречното увреждане при ZDF плъхове и да забави прогресирането на диабетното бъбречно заболяване чрез намаляване на стреса на ендоплазмения ретикулум и засилване на аутофагията.

 

Ключова дума: Shenqiwan;захарен диабет тип 2; диабетно бъбречно заболяване; стрес на ендоплазмения ретикулум;автофагия; GRP78; Zucker диабетични тлъсти плъхове

Щракнете тук, за да научите повече за продуктите Cistanche за лечение на диабетно бъбречно заболяване

ПИТАЙТЕ ЗА ПОВЕЧЕ ПОДРОБНОСТИ:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

Диабетно бъбречно заболяване(DKD) е важно микроваскуларно усложнение назахарен диабети основна причина закраен стадий на бъбречно заболяване[1]. DKD е важенмикроваскуларно усложнение на диабетаиосновна причина за краен стадий на бъбречно заболяване[1]. Пациентите с DKD могат да имат персистираща протеинурия и постоянно намалениескорост на гломерулна филтрация[2]. Theпатогенеза на DKDе сложен и последните проучвания показват, че стресът на ендоплазмения ретикулум (ERS) в бъбреците е най-честата причина за краен стадий на бъбречно заболяване. （Стресът на ендоплазмения ретикулум (ERS) и аутофагията също са тясно свързани с DKD и изследването на тяхната патогенеза може да бъде важно за лечението на DKD. DKD е по-подобен на "по-ниското изчезване" в категорията на разстройствата на жаждата в китайската медицина.
Типичните симптоми на жажда и прекомерно пиене и уриниране са записани в Jin Kui Yao (Основи на Златния хороскоп) иХапче Qi за бъбрецисе предлага като основна терапевтична формула. Джин Куй Яо (金匮要略) записва типичните симптоми на жажда и прекомерно уриниране и предлагаХапче Qi за бъбрецикато основна лечебна формула. Лечението на DKD с TCM може наистина ефективно да защити бъбречната функция и има безопасни и надеждни характеристики [5-6]. Лечението на DKD с китайска медицина може ефективно да защити бъбречната функция и има безопасни и надеждни характеристики [5-6]. Ефикасността на Kidney Qi Pill за тонизиране на бъбреците и подпомагане на Yang е потвърдена в свързани проучвания [7]. Нашето предишно проучване също Нашето предишно проучване също показа, че бъбречните хапчета Чи имат добри защитни ефекти върху структурата и функцията на бъбречните тъкани при мишки с диабет [8]. В настоящото проучване наблюдавахме ефектите на хапчетата renal qi върху. В настоящото проучване ние наблюдавахме ефектите на хапчетата renal qi върху увреждане на бъбречната тъкан, ERS и свързаните с аутофагията фактори при дебел плъх с диабет Zucker (ZDF). В това проучване ние изследвахме възможните механизми на бъбречно увреждане при ZDF плъхове, като наблюдавахме ефектите на хапчетата за бъбречна Чи върхуувреждане на бъбречната тъкан, ERS и фактори, свързани с аутофагия, медиирани от хапчета за бъбречна чи.

1 Материали
1.1 Опитни животни
Двадесет 12-седмични SPF мъжки ZDF плъхове (телесно тегло 390-410 g, хранени с 5C08 висококачествена храна за гризачи в продължение на 4 седмици за завършване на индуцирането на диабет тип 2) и седем 12-седмични- стари SPF мъжки плъхове Zucker Lean (ZL) (телесна маса 350-380 g) са закупени от Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. Всички плъхове са настанени в бариерна среда на Института по клинична медицина, Китайско-японската болница за приятелство , номер на лиценз: SYXK (Пекин) 2016-0043, а платформата осигури независима вентилационна система вътре в бариерата, поддържаща 12-h редуване на светлина и тъмнина, стайна температура от 23-25 градуса и относителна влажност в помещението от 50 процента -60 процента . На всички плъхове беше позволено да пият и да се хранят свободно по време на периода на хранене.

1.2 Етичен преглед
Експериментите с животни бяха одобрени от Подкомитета по етика на експерименталните животни към Академичния комитет на Пекинския университет по традиционна китайска медицина (BUCM) с номер на одобрение BUCM-4-2021102801-4034.
1.3 Основни лекарства и реактиви
Таблетките (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Цистанче, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) за отвара отЦи на бъбрецитеХапчетата са закупени от Beijing Tong Ren Tang Co. Физиологичен разтвор, спецификация: 500 mL, предоставен от Shandong Hualu Pharmaceutical Co. Silver Staining Solution (Beijing Regen Biotechnology Co., Ltd., партида № DG0090), Magic SYBR смес (Jiangsu Kangwei Century Biotechnology Co., Ltd.), комплект за обратна транскрипция на mRNA (Thermo Fisher Scientific, Inc.), RNA TRIzol реагент (RNA TRIzol реагент), RNA TRIzol реагент (RNA TRIzol реагент). RNA TRIzol реагент (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), комплект ELISA с микроалбумин на плъхова урина (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., партида № KT8560-A), GRP78 BiP антитяло, LC3B антитяло и Beclin{ {5}} Антитяло (Abcam, Обединеното кралство) (партидни номера: ab108613, ab192890, ab207612), заешко анти-GAPDH поликлонално антитяло (Proteintech, САЩ), кози анти-заешки IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. ООД).

 

Глюкомер, тест ленти за кръвна захар (Shanghai Roche Diagnostic Products Co. Ltd.), нискотемпературна високоскоростна центрофуга (Eppendorf, Германия), флуоресцентен количествен PCR инструмент, инструмент за двойна вертикална електрофореза и инструмент за трансферна електрофореза (Burroughs Life Medical Products Co. Ltd.), гел изображение (Protein Simple, САЩ), светлинен микроскоп (Leica, Германия), трансмисионен електронен микроскоп (Leica, Германия) и гел изображение. (Leica, Германия), трансмисионен електронен микроскоп (Hitachi, Япония).

2 Методи
2.1 Приготвяне на експериментални лекарства
Отварата отХапче за бъбреци-Qiбеше приготвен чрез преобразуване на дозата на хапчето Kidney-Qi в Jin Kui Yao [9] според древните и съвременните съотношения на метрологичната система Хан в първото издание на „Изследване на дозата и съотношението на рецептите за тиф“ [2015 г. ], а дозата на отварата, необходима за експеримента, беше следната: Shu Di Huang 24 g, Shan Yu Fei 12 g,Цистанче10 g, Shan Yao 12 g, Mudan Pi 9 g, Fu Ling 9 g, Ze Xie 9 g, Gunnera 3 g и Gui Zhi 3 g. Лекарствата се накисват в дестилирана вода за 2 часа. След това отварата се концентрира за 30 минути и се филтрира през стерилна марля. Билките се варят 30 минути, след което се добавят останалите дрога и се варят 1 час. След като температурата на разтвора се понижи до стайна температура, разтворът се концентрира и филтрира през стерилна марля, а филтратът се пакетира и съхранява при -20 градуса. Лекарството трябва да се съхранява не повече от 1 седмица, като разтворът трябва да се доведе до стайна температура преди приложение.

2.2 Създаване и групиране на животински модели
ZDF плъховете бяха индуцирани с 5C08 диета с високо съдържание на мазнини в продължение на 4 седмици и кръвната глюкоза беше измерена чрез събиране на кръв от върха на опашката на 12-седмична възраст. На плъховете в групата на бъбречно хапче Чи беше дадена водна отвара от бъбречно хапче Чи и дневната доза от 8,12 g/kg на плъх беше изчислена съгласно формулата в „Модели на заболяване при експериментални животни“ [10] и концентрацията на дозиране е 0,812 g/mL и на плъховете в моделната и контролната групи е даден физиологичен разтвор в съответния обем в продължение на 4 седмици.

2.3 Общо състояние и тест за кръвна захар на гладно (FBG) на плъхове
Общите условия на плъховете се наблюдават и записват ежедневно, а телесните маси се претеглят редовно. В края на 12-седмична и 16-седмична възраст се взема кръв от върха на опашката на плъхове след 8 часа гладуване и FBG се измерва с глюкометър Roche и тест ленти. 2.4 24-h микроалбуминът в урината (24-h U-mAlb) се измерва в края на 16-седмична възраст и концентрацията на 24-h U-mAlb се измерва съгласно инструкциите от комплект LISA.

2.5 Вземане на проби от бъбречна тъкан
В края на 16-седмична възраст всички плъхове гладуват в продължение на 8 часа. След анестезията коремната кухина беше отворена и двустранните бъбреци бяха открити, а перитонеумът беше отстранен непокътнат и отлепен. Бъбречната кора се отделя и частично фиксира в 4% параформалдехид за приготвяне на 3 μm парафинови срезове; частично нарязани на 1 mm3 тъканни блокове и фиксирани в 2,5 процента глутаралдехид за приготвяне на ултратънки срезове. Останалите бъбречни тъкани се съхраняват при -80 градуса за PCR в реално време и Western blotting анализи.

 

2.6 Прилагане на морфологично наблюдение на бъбречни тъкани
PAS оцветяване, Masson оцветяване и хексаамониево сребро-хематоксилин-еозин оцветяване бяха използвани за наблюдение набъбречни хистопатологични променипод светлинен микроскоп и за получаване на изображения. Приложена е трансмисионна електронна микроскопия за наблюдение на ултраструктурните промени на бъбречните тъкани и са събрани изображения.

 

2.7 PCR анализ в реално време
Замразенибъбречни тъканисе смилат върху лед и се добавя реагент TRIzol за извличане на обща РНК и се центрофугират при 4 градуса с радиус 9,5 cm. Супернатантата се екстрахира чрез центрофугиране при 12 000 r/min за 10 min и след това се центрофугира за 15 min с хлороформ. Супернатантата се центрофугира отново в продължение на 15 минути при стайна температура в продължение на 10 минути и супернатантата се промива със 75 процента етанол. експресия на ниво иРНК. Праймерите са проектирани с помощта на софтуера Primer Premier 5.0 и са синтезирани от Shanghai Bioengineering Co. Ltd. Последователностите на праймерите са както следва.