Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Генен вариант на MicroRNA-499a (rs3746444A/G) и предразположеност към крайна фаза на бъбречно заболяване, свързано с диабет тип 2

MANAL S. FAWZY, et al

Резюме

Диабетната нефропатия (DN) е основен рисков фактор за краен стадийбъбречназаболяване(ESRD). МикроРНК (miRNAs/miRs) и техните варианти могат да бъдат замесени в здравето и болестите, включително DN. Настоящото проучване имаше за цел да изследва връзката на miRNA-499a гена (MIR499A) вариант на A/G регион на семена (rs3746444) с DN-асоцииран ESRD(краен стадийбъбречнаболест)чувствителност при пациенти със захарен диабет и да се определи дали има връзка между различните генотипове и лабораторните и клинични данни на пациентите. Беше проведено пилотно проучване случай-контрола върху 180 възрастни пациенти със захарен диабет тип 2. Общо 90 пациенти с ESRD (краен стадийбъбречнаболест)на редовна хемодиализа се разглеждат като случаи, а 90 пациенти с диабет с нормоалбуминурия, съответстващи на възрастта, пола и етническата принадлежност, се считат за контроли. Генотипирането на MIR499A беше извършено с помощта на анализ за дискриминация на алели в реално време TaqMan. Резултатите показват, че вариантът MIR499A rs3746444*G дава чувствителност към развитие на ESRD при съвместно доминиране [(коефициент на шансове (95 процента доверителен интервал): 2,49 (1,41-3,89) и 2,41 (1,61-6,68) за хетерозиготно и хомозиготно сравнение, съответно], доминантен [2,30 (1,18-3,90)] и алелен [1,82 (1,17-2,83)] модели Различните генотипове на посочения вариант не показват значими асоциации с клинично-лабораторните данни на изследваните пациенти или циркулиращия miR- 499a плазмени нива.В заключение, резултатите от настоящото проучване предполагат, че MIR499A rs3746444 може да бъде вариант на чувствителност към свързаната с DN ESRD в изследваната популация.Въпреки това, проучвания с по-голям размер на извадката с различни етнически групи са оправдани, за да се проверят тези констатации.

Cistanche може да лекувабъбречназаболяване

Въведение

Краен стадий, свързан с диабетна нефропатия (DN).бъбречназаболяване(ESRD) е нарастващ проблем за общественото здраве в световен мащаб (1). През последните три десетилетия, свързаната с DN ESRD(краен стадийбъбречнаболест) has been identified as a major cause for dialysis in several countries, including Saudi Arabia, in which type 2 diabetes mellitus (T2DM) accounts for >33 процента от всички случаи на ESRD (1,2). Няколко обещаващи проучвания са идентифицирали гени, свързани с появата и прогресията на DN, включително гени, свързани с микроРНК (miRNAs/miRs) (3,4). Това семейство от некодиращи РНК е силно запазено, тъканно-специфично и с малка дължина (20-24 нуклеотида). miRNAs играят ключова роля в множество физиологични и патологични състояния в човешките органи, включителнобъбреци. Например регулиране нагоре на miR-192, miR-194, miR-204, miR-215 и miR-216 и регулиране надолу на miR-133a, miR-133b, miR-1d, miR-296, miR-1a, miR -122 и miR-124a са наблюдавани при хорабъбреци(5). Освен това се съобщава, че miR-192 е 20 пъти по-високо експресиран в кортикалнатабъбректъкан в сравнение с медуларнатабъбректъкан, където е замесен в регулирането на транспорта на натрий; в допълнение, miR-155 може да потисне експресията на ангиотензин II рецептор тип 1, което може да повлияе на кръвното налягане (5,6). Чрез свързване към mRNA мишени, miRNAs имат способността да причиняват транслационна репресия, mRNA дестабилизация и/или разграждане (7). Термодинамиката на целевите взаимодействия miPHK-mRNA може да бъде повлияна от единични нуклеотидни полиморфизми (SNPs), възникващи в прекурсорната miPHK (пре-miPHK), което води до дисрегулация на целевия ген и впоследствие фенотипни вариации или чувствителност към заболяване (8). Генът miRNA‑499a (MIR499A) се намира в гена на тежката верига на човешкия миозин 7B на сърдечния мускул на хромозома 20q11.22 34990376-34990497 (плюс) и се състои от един екзон, който кодира един транскрипт (MI0003183). Той е с дължина 122 базови двойки и се съобщава, че е маркер за увреждане на кардиомиоцитите (9). Въпреки че броят на проучванията, фокусиращи се върху точната роля на miR-499a в патогенезата и развитието на ESRD, дължаща се на DN, е ограничен, miR-499a се предполага, че засяга няколко биологични процеса, като клетъчно стареене, възпаление, апоптоза и имунен отговор (10), който може да играе роля в биогенезата на ESRD (Таблица SI) (11-14). Освен това по-рано беше съобщено, че регулирането на miR-499a може да регулира инсулиновата резистентност, гликогенезата и да модулира инсулиновото сигнализиране чрез инхибиране на фосфатаза и хомолог на тензин (15).

Съобщава се, че често срещан вариант (rs3746444), който се намира в семенния регион на miR-499a-3p AC(A/G)UCAC на позиция 20:34,990,448 (GRCh38), е свързан с няколко заболявания, особено в Близкия изток население, като сърдечно-съдови заболявания (9), автоимунни заболявания (16) и рак (17). В нашето предишно проучване беше идентифицирано значително нарушаване на регулацията на циркулиращите нива на miR-499a в текущата ESRD, свързана със ЗД(краен стадийбъбречнаболест)кохорта (18). Следователно, настоящото проучване имаше за цел да проучи връзката на варианта на семенния регион MIR499A(A/G) (rs3746444) с DN-свързаната чувствителност към ESRD при пациенти с T2DM и да определи дали има връзка между различните генотипове и пациентите клинично-лабораторни данни. Доколкото ни е известно, това е първото проучване, което изследва потенциалната връзка на посочения вариант с чувствителността към ESRD в проба от пациенти от Близкия изток.

Материали и методи

Проучване на населението.

Общо 90 последователни пациенти с ESRD, свързана с T2DM(краен стадийбъбречнаболест)на редовна хемодиализа (три пъти седмично) са включени като група пациенти в настоящото проучване. Пациентите са посещавали Нефрологичния център на Мохамед бин Сауд Ал-Кабир за бъбречна диализа в централната болница на Арар (Арар, Саудитска Арабия). Критериите за включване/изключване за избор на група пациенти с ESRD са описани подробно в предишната ни работа по същата ESRD(краен стадийбъбречнаболест)кохорта пациенти (18). Пациенти с някакво хронично заболяване, автоимунни заболявания, рак ибъбречназаболяванеразлична от нефропатия, свързана със ЗД (диагностицирана чрез бъбречна биопсия съгласно местните стандартни протоколи, възприети от международните стандарти за диагностика на недиабетнибъбречназаболяване) (19) бяха изключени. Тъй като е много вероятно в крайна сметка значителна част от пациентите, диагностицирани с диабет рано, да развият ESRD(краен стадийбъбречнаболест), пациенти с T2DM със съответстваща продължителност на диабета и нормоалбуминурия (съотношение албумин/креатинин в урината,<30 µg/mg)="" (20,21)="" were="" considered="" as="" the="" control="" group.="" all="" biomedical="" research="" involving="" human="" participants="" conformed="" to="" the="" guidelines="" of="" the="" helsinki="" declaration.="" the="" protocol="" of="" the="" present="" study="" was="" approved="" by="" the="" research="" ethics="" committees="" of="" northern="" border="" university="" (approval="" no.="" 6/340/h),="" and="" written="" informed="" consent="" was="" obtained="" from="" all="">

Cistanche може да лекувабъбречназаболяване

Лабораторен анализ.

Венозни проби на гладно бяха събрани във вакуумни епруветки с обикновена и етилендиаминтетраоцетна киселина преди определената втора диализна сесия за пациенти с ESRD(краен стадийбъбречнаболест). Серумът се отделя чрез центрофугиране в продължение на 12 минути при 1300 xg при стайна температура, веднага от предишната епруветка за биохимичен анализ, като се използват налични в търговската мрежа комплекти за глюкоза (кат. № 44044831190),бъбрекфункционални тестове [креатинин (кат. № 4810716190) и урея (кат. № 4460715190)] и липиден профил [общ холестерол (кат. № 3039773190), триацил-глицерол (кат. № 20767107322), HDL- c (кат. № 7528566190) и LDL-c (кат. № 7005717190)] на биохимичен анализатор Cobas Integra (всички Roche Diagnostics GmbH).

Генотипизиране за MIR499A (rs3746444). Геномната ДНК се екстрахира от цяла кръв с помощта на комплект Wizard Genomic DNA Purification (кат. № A1120; Promega Corporation) съгласно протокола на производителя, последвано от оценка на концентрацията и чистотата на ДНК с помощта на спектрофотометър NanoDrop ND‑1000 (NanoDrop Technologies; Thermo Fisher Scientific, Inc.) и електрофореза с агарозен гел (2 процента) за оценка на целостта на ДНК. След това пробите се съхраняват при -20˚C до момента на генотипизиране. Анализ на полиморфизъм MIR499A (rs3746444, ID на анализ: C_2142612_30) ​​беше проведен с помощта на PCR в реално време за дискриминация на алели TaqMan с измерванията на качеството, както е описано по-горе (16). Накратко, PCR се провежда в 25-µl реакционен обем, съдържащ gDNA (20 ng), разреден до 11,25 µl с вода без нуклеази, 12,5 µl TaqMan Universal PCR Master Mix (2X) и 1,25 µl 20 x TaqMan SNP анализ, предоставен от същия доставчик. Проби без шаблон и ензим без полимераза се пускат всеки път с изследваните проби като отрицателни контроли. Генотипизирането беше извършено по начин, заслепен за статуса на случай/контрола. PCR амплификацията се извършва на StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.), като се използват следните условия: Двуфазово първоначално задържане (2 минути при 50˚C и 10 минути при 95˚C) , последвано от 40-цикълен двуетапен PCR (денатурация за 15 секунди при 95˚C и отгряване/удължаване за 1 минута при 60˚C). Алелната дискриминация се определя чрез анализиране на файловете с данни за флуоресценция от всеки цикъл с помощта на автоматизиран софтуер за извикване на алели (SDS версия 1.3.1; Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.; Фиг. S1). Общата честота на извикване на генотипа е 100 процента.

Статистически анализ.

Изчисленията на размера на извадката и мощността с помощта на софтуера G power‑3 (http://www.gpower.hhu.de/) показаха, че с посочения дизайн на изследването, допустимите нива на грешка, грешка=0.05, среден ефект size=0.5 и размер на извадката от 90/група може да даде 91 процента мощност на изследването. Разпределението на данните и хомогенността на вариацията бяха оценени съответно чрез теста на Shapiro-Wilk и теста на Levene. Непрекъснатите данни са изразени като средна стойност ± стандартно отклонение, а категоричните променливи са представени като преброяване на честотата. Данните бяха сравнени с помощта на теста χ2, докато несдвоен t-тест на Student, еднопосочен ANOVA или тестове на Kruskal-Wallis бяха приложени за сравняване на непрекъснати променливи. Отклонението на наблюдаваното разпределение на генотипа от равновесието на Харди-Вайнберг беше анализирано с помощта на χ2 добро съответствие с помощта на Онлайн енциклопедия за генетична епидемиология (http://www.oege.org/). За различните генетични модели бяха изчислени специфични за генотипа коригирани коефициенти на шансове (OR) и 95 процента доверителни интервали (CI). Променливите на изследването, включително възраст, пол, брой сесии на хемодиализа, наличие на хипертония и продължителност на заболяването, бяха коригирани. П<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="" difference.="" spss="" version="" 23="" (ibm="" corp.)="" was="" used="" for="" the="" statistical="">

MIR499A (rs3746444) вариант в силико анализ.

MIR499A (rs3746444) вариант в силико анализ. Генният структурен и функционален анализ беше извършен с помощта на Ensembl Genomic база данни (ensembl.org) и miRBase.org; предвиждането на целта беше извършено с помощта на DIANA‑micro T‑CDS v5.0 (http://diana.imis.athena innovation.gr/DianaTools/index.php?r=microT_ CDS/index), miRBase (http://www.mirbase.org/) и алгоритъм DIANA‑TarBase v7.0 (http://diana.imis.athena‑innovation.gr/DianaTools/index.php ?r=tarbase/index) бази данни; и клъстерирането на анотации и анализът на обогатяването на пътя бяха извършени с помощта на miRPath v3.0 (http://www.microrna.gr/miRPathv3) и всички бяха подробно описани в нашите предишни проучвания (8,12). Предвидените miR-499a мишени бяха сравнени с наличието на A и G алели с помощта на програмата miR2Go (http://compbio.uthsc.edu/miR2GO) на средно йерархично ниво на филтриране (P<>

Резултати

Характеристики на изследваната популация.

Основните характеристики на участниците в проучването са обобщени в таблица I. Средната възраст на пациентите с ESRD(краен стадийбъбречнаболест)е 46,6±12,3 години за мъжете и 47.0±14,7 години за жените. Средната продължителност на диализата е сравнима и за двата пола при участниците в проучването. Нямаше специфични за пола разлики в клиничните и биохимичните характеристики на участниците, с изключение на тези, свързани с параметрите на липидния профил, които бяха по-лоши при пациентите жени в сравнение с тези при мъжете (Таблица I).

MIR499A вариант (rs3746444) в изследваната популация.

В изследваната популация, генотипните честоти на MIR499A (rs3746444) SNP следват равновесието на Харди-Вайнберг (P=0.149 при контролите и P=0.398 хоспитализирани). Честотите на второстепенните алели за rs3746444*G бяха 0.28 и 0.42 при контролите и пациентите с ESRD(краен стадийбъбречнаболест), съответно. Наблюдавана е значителна разлика в генотипите MIR499A между изследваните групи. Честотата на GG генотипа е 11,1% при контролите, в сравнение с 20% при пациенти с ESRD(краен стадийбъбречнаболест)(P=0.030). Носенето на алела rs3746444*G води до почти 2-кратно увеличение на податливостта към развитие на ESRD(краен стадийбъбречнаболест), с OR (95 процента CI) от 1,82 (1,17-2,83) при модела на алелна генетична асоциация. Последователно хомозиготни/хетерозиготни индивиди (rs3746444*GG/AG) са по-склонни да развият ESRD при хомозиготно/хетерозиготно сравнение и доминиращи модели [GG срещу AA: OR=2.41, 95% CI: 1,61-6,68 ; AG спрямо AA: OR=2.49, 95 процента CI: 1,41-3,89; (AG плюс GG) спрямо AA: ИЛИ =2.30, 95 процента CI: 1,18-3,90; Таблица II].

MIR499A вариант (rs3746444) и клинично-лабораторни характеристики на пациенти с ESRD(краен стадийбъбречнаболест). При изследване на връзката между различните генотипове на посочения вариант и клиничните и биохимични характеристики на групата пациенти не са демонстрирани значими асоциации, както е показано в таблица III.

Ефект на MIR499A (rs3746444) върху генната структура и функция.

Въпреки че miR-499a образува вторична верига с фиби с допълващи се последователности в нейната структура (фиг. S2), различни гени се предвижда да бъдат насочени и от двете зрели форми, синтезирани от двете рамена. Общо 1890 гена се предвижда да бъдат засегнати от miR-499a (919 гена от 3p, 810 от 5p и 161 гена от двата), както беше описано по-рано (8). Най-значимите пътища на Киотската енциклопедия на гените и геномите (KEGG), свързани с miR-499a цели, които могат да участват в прогресията на DN в ESRD(краен стадийбъбречнаболест)са обобщени в таблица IV.

Наличието на rs3746444 SNP в семенната област на веригата miR-499a на пътника може да доведе до прекъсване на мишените и създаване на различен набор от гени (8, 16). Освен това може да скъси структурата на стеблото; по този начин, засягайки обработката на цялата miRNA.

Нашето предишно проучване съобщава за дисрегулация на нивата на кръвообращението на miR-499a в същата група пациенти (18); следователно, настоящото изследване се фокусира върху определянето дали тези циркулаторни нива показват значителни вариации между различните генотипове на един и същи ген. Констатациите обаче не разкриват значителни асоциации между различните генотипове на MIR499A (rs3746444) и циркулиращите плазмени нива на miR-499a, открити преди това с помощта на метода Livak (22) (P=0.173; Фиг. 1) .

Cistanche може да лекувабъбречназаболяване

Дискусия

Съобщава се, че SNPs са най-често срещаният тип генетична вариация, свързана с разнообразието на населението, чувствителността към болести и индивидуалните терапевтични отговори (23). SNP могат да повлияят експресията и/или съзряването на miPHK на нивото на транскрипция на първичния транскрипт, пост-транскрипционна обработка на първични транскрипти или пре-miPHK, или да повлияят на взаимодействията miPHK-mRNA (24).

Настоящото проучване показа, че носенето на алела rs3746444*G придава чувствителност към ESRD(краен стадийбъбречнаболест)in patients with DM compared with non‑carriers under the allelic, co‑dominant, and dominant genetic association models. Results of our previous study demonstrated that the rs3746444 polymorphism results in an A>G несъответствие в miR-499a прекурсорната стволова област (разположена срещу зрялата последователност), засягаща зрялата miR-499a-3p зародишна област, замесена в правилното свързване на miRNA-mRNA, с последващо разрушаване и създаване на няколко мишени (8). Носителите на хомозиготните генотипове (AA или GG) дават две зрели форми, miR-499a-5p и miR-499a-3p*A или *G, съответно, като всяка има свой специфичен панел от целеви гени. За сравнение, хетерозиготните (AG) носители произвеждат три зрели форми, miR-499a-5p, -3p*A и -3p*G, с три подгрупи от целеви гени. Анализите в силиций на настоящото изследване разкриха, че присъствието на тези различни алели може да наруши и създаде съответно 667 и 744 генни цели. Сред валидираните генни мишени, които са изследвани, са нуклеоларен протеин 4, взаимодействащ с ядрен рецептор протеин-1, Bcl-2-подобен протеин 14, хемокин (C-C мотив) лиганд 8 и определящ пола регион Y-box 4 (20) . Доколкото ни е известно, това е първото проучване, което изследва варианта MIR499A rs3746444 за чувствителност към ESRD при пациенти със ЗД в извадка от населението на Близкия изток. В съответствие с констатациите от настоящото проучване, Misra et al (25) съобщават, че хетерозиготните и хомозиготните генотипове на MIR-499A rs3746444 предоставят риск от развитие на ESRD, което е индуцирано от други заболявания, различни от DN, и може да бъде свързано с почти 3-кратно повишен риск от остро отхвърляне на алотрансплантант в популация от Северна Индия (25).

Като се има предвид, че SNPs в pre-miRNA могат да променят обработката и/или експресията на miRNA, при анализиране на връзката на полиморфизма на MIR499A с циркулиращите плазмени нива на miR-499a и различни клинично-лабораторни характеристики на пациентите, не са наблюдавани значими асоциации, както е описано по-горе. Предполага се, че наличието на вариант на miR-499a може да повлияе на термодинамиката на взаимодействията РНК-РНК и афинитета на тази miPHK чрез намеса в оптималното свързване към целевите иРНК, като по този начин води до дисрегулация на целевите гени, които медиират податливостта на заболяване към ESRD(краен стадийбъбречнаболест)без да се засяга относителната експресия и/или фенотипа на заболяването (22). Анализите in silico на настоящото проучване разкриха някои от най-значимите KEGG пътища, включващи miR-499a мишени, които могат да участват в прогресирането на DN в ESRD (26-32). Например пътят (TGF-1) е замесен в етиопатологията на DN (26, 28). Пътят на TGF‑1 активира ключови сигнални пътища, включително пътя PI3K/AKT, който медиира фосфорилирането и инактивирането на транскрипционния FOXO, което води до оксидантен стрес, експанзия на мезангиалните клетки и натрупване на извънклетъчни матрични протеини, ключови компоненти на свързаната с DN хроничнабъбрекзаболяване (26). Повишаването на активността на тирозин киназата на рецептора на епидермалния растежен фактор (ErbB) е важно за медиирането на няколко усложнения на диабета, включително бъбречни патологии, сърдечна фиброза и съдова дисфункция (29). Освен това, ролята на пътя на TNF в прогресията на DN при модели на мишки и плъхове с диабет е очевидна. Например, съобщава се, че използването на разтворим слят протеин на TNF рецептор-2 подобрява ранния стадий на DN в модела на DM на мишка KK-Ay (30). Също така е установено, че инхибиторът на TNFR-Fc TNF отслабва бъбречната хипертрофия, без да повлиява метаболитния профил при плъхове с индуциран диабет (31). mTOR е замесен в поддържането на функцията на гломерулните подоцити; повишената активност допринася за гломерулна хипертрофия и хиперфилтрация, свързани с прогресираща DN (32).

Трябва да се отбележи, че гореспоменатите пътища бяха насочени към многобройни експериментални изследвания, за да се потвърди тяхното терапевтично значение в DN (29, 30, 33, 34). Ziyadeh et al (33) съобщават за подобрение в скоростите на гломерулна филтрация, предизвикано от моноклоналното анти-TGF-антитяло при db/db мишки с диабет (33). Освен това се съобщава, че дългосрочно лечение на индуцирани от стрептозотоцин диабетни плъхове с AG825, специфичен инхибитор на рецепторна тирозин-протеин киназа ErbB-2, коригира значително хиперреактивността на перфузираното мезентериално съдово легло към норепинефрин и отслабената реакция към карбахол (29). Инхибирането на TNF- с разтворимия TNF рецептор (TNFR)2 слят протеин, етанерцепт, подобрява прогресирането на ранния стадий на DN в диабетен модел, установен в мишка KK-A(y), главно чрез инхибиране на противовъзпалителния действие на бъбречния TNF--TNFR2 път (30). Освен това, рапамицинът, първото докладвано съединение, което инхибира mTOR, инхибира индуцираното от глюкоза фосфорилиране на p70S6 киназа и нейния субстрат, S6 рибозомален протеин, в мезангиалните клетки, намалявайки морфологичните и функционални нарушения на диабетабъбрецив модел на мишка T2DM (34).

В съответствие с констатациите от настоящото проучване, Ciccacci et al (35) разкриват участието на miR-499a в податливостта на DN в италианска кохорта от T2DM (35). Резултатите от гореспоменатото проучване разкриха, че тази връзка се дължи на въздействието на miR-499a върху два апоптотични играча, калциневрин и протеин, свързан с динамин, чрез който дисрегулацията на miR-499a причинява митохондриална дисфункция и клетъчна апоптоза, което може да е допринесло за чувствителността към заболяване (33). Трябва да се отбележи, че последните процеси са замесени в DN (36, 37), което може отчасти да подкрепя връзката на варианта miR-499a с ESRD(краен стадийбъбречнаболест)чувствителност в настоящата кохорта. Необходими са обаче все по-голям брой проучвания, включващи по-големи независими кохорти с различни етноси, за да се потвърдят констатациите от настоящото проучване

В заключение, доколкото ни е известно, настоящото проучване е първото, което предлага въздействието на варианта на семенния регион MIR499A A/G (rs3746444) върху свързаната с DN ESRD(краен стадийбъбречнаболест)чувствителност. Той може да бъде включен в списъка на гените за молекулярна чувствителност, които могат да подпомогнат стратификацията на риска за пациентите и прилагането на ранни превантивни измервания. Заслужава обаче да се отбележи, че значението на други потенциални объркващи фактори не може да бъде окончателно изключено, като излагане на различни фактори на околната среда (като вид лечение или хранене) и допълнителните генетични фактори. Допълнителни по-големи размери на извадката и дългосрочни последващи репликационни проучвания, особено в популации с различни етнически групи, са оправдани. Необходими са и функционални изследвания за валидиране на ролята на miR-499a в етиопатологията на ESRD, свързана с DN.

Cistanche може да лекувабъбречназаболяване

Препратки:

1. Sattar A, Argyropoulos C, Weissfeld L, Younas N, Fried L, Kellum JA и Unruh M: Смъртност по всякаква причина и специфична за причината смъртност, свързана с диабет при пациенти с преобладаваща хемодиализа. BMC Nephrol 13: 130, 2012 г.
2. Al-Sayyari AA и Shaheen FA: Хроничен краен стадийбъбрекзаболяване в Саудитска Арабия. Бързо променяща се сцена. Saudi Med J 32: 339-346, 2011 г.
3. Mooyaart AL: Генетични асоциации при диабетна нефропатия. Clin Exp Nephrol 18: 197-200, 2014 г.
4. Lu Z, Liu N и Wang F: Епигенетични регулации при диабетна нефропатия. J Diabetes Res 2017: 7805058, 2017.
5. Schena FP, Serino G и Sallustio F: МикроРНК вбъбрекзаболявания: нови обещаващи биомаркери за диагностика и наблюдение. Nephrol Dial Transplant 29: 755-763, 2014 г.
6. Felekkis K, Touvana E, Stefanou Ch и Deltas C: МикроРНК: Новоописан клас от кодирани молекули, които играят роля в здравето и болестите. Хипократия 14: 236-240, 2010 г.
7. Mashayekhi S, Saeidi Saedi H, Salehi Z, Soltanipour S и Mirzajani E: Ефекти на miR-27a, miR-196a2 и miR-146a полиморфизми върху риска от рак на гърдата. Br J Biomed Sci 75: 76-81, 2018 г.

8. Toraih EA, Hussein MH, Al Ageeli E, Riad E, Abdallah NB, Helal GM и Fawzy MS: Структура и функционално въздействие на варианта на региона на семената в генното семейство MIR-499 при бронхиална астма. Respir Res 18: 169, 2017.

9. Fawzy MS, Toraih EA, Hamed EO, Hussein MH и Ismail HM: Асоциация на експресия на MIR-499a и вариант на региона на семена (rs3746444) със сърдечно-съдови заболявания при египетски пациенти. Acta Cardiol 73: 131-140, 2018 г.

10. Wang WJ, Cai GY и Chen XM: Клетъчно стареене, свързан със стареенето секреторен фенотип и хроничнобъбрекзаболяване. Oncotarget 8: 64520-64533, 2017 г.
11. Sluijter JP, van Mil A, van Vliet P, Metz CH, Liu J, Doevendans PA и Goumans MJ: MicroRNA-1 и -499 регулират диференциацията и пролиферацията в произхождащи от човека кардиомиоцитни прогениторни клетки. Arterioscler Thromb Vasc Biol 30: 859-868, 2010.
12. Ling TY, Wang XL, Chai Q, Lau TW, Koestler CM, Park SJ, Daly RC, Greason KL, Jen J, Wu LQ и др.: Регулиране на канала SK3 чрез потенциална роля на микроРНК-499 при предсърдно мъждене . Сърдечен ритъм 10: 1001-1009, 2013 г.
13. Xu Z, Han Y, Liu J, Jiang F, Hu H, Wang Y, Liu Q, Gong Y и Li X: MiR-135b-5p и MiR-499a-3p насърчават клетъчната пролиферация и миграция при атеросклероза чрез директен насочен към MEF2C. Sci Rep 5: 12276, 2015 г.
14. Консорциум на генната онтология: Ресурсът на генната онтология: Обогатяване на златна мина. Нуклеинови киселини Res 49: D325-D334, 2021 г.
15. Wang L, Zhang N, Pan HP, Wang Z и Cao ZY: MiR‑499‑5p допринася за чернодробната инсулинова резистентност чрез потискане на PTEN. Cell Physiol Biochem 36: 2357-2365, 2015 г.
16. Toraih EA, Ismail NM, Toraih AA, Hussein MH и Fawzy MS: Прекурсорен miR-499a вариант, но не и miR-196a2, е свързан с податливостта на ревматоиден артрит в египетската популация. Mol Diagn Ther 20: 279-295, 2016 г.
17. Toraih EA, Fawz MS, Elgazzaz MG, Hussein MH, Shehata RH и Daoud HG: Комбинирани генотипни анализи на варианти на прекурсор miRNA196a2 и 499a с чувствителност към рак на черния дроб и бъбреците, предварително проучване. Asian Pac J Cancer Предишна 17: 3369-3375, 2016 г.

18. Fawzy MS, Abu AlSel BT, Al Ageeli E, Al-Qahtani SA, Abdel-Daim MM и Toraih EA: Профили на експресия на дълга некодираща РНК MALAT1 и микроРНК-499a при пациенти с диабетна ESRD, подложени на диализа: предварителен кръстосан анализ секционен анализ. Arch Physiol Biochem 126: 172-182, 2020 г.

19. Ghani AA, Al Waheeb S, Al Sahow A и Hussain N: Бъбречна биопсия при пациенти със захарен диабет тип 2: Показания и естество на лезиите. Ann Saudi Med 29: 450-453, 2009 г.

20. Nah EH, Cho S, Kim S и Cho HI: Сравнение на съотношението албумин-към-креатинин в урината (ACR) между ACR лентов тест и количествен тест при предиабет и диабет. Ann Lab Med 37: 28-33, 2017 г.
21. Fawzy MS и Beladi FIA: Асоциация на експресията на циркулиращия витамин D, VDBP и витамин D рецептор с тежестта на диабетната нефропатия в група от саудитски пациенти със захарен диабет тип 2. Clin Lab 64: 1623-1633, 2018 г.
22. Livak KJ и Schmittgen TD: Анализ на данните за относителната генна експресия с помощта на количествена PCR в реално време и метода 2(-Delta Delta C(T)). Методи 25: 402-408, 2001 г.
23. Shastry BS: SNPs: Въздействие върху генната функция и фенотипа. Методи Mol Biol 578: 3-22, 2009 г.
24. Hoffman AE, Zheng T, Yi C, Leaderer D, Weidhaas J, Slack F, Zhang Y, Paranjape T и Zhu Y: MicroRNA miR‑196a‑2 и рак на гърдата: Изследване на генетична и епигенетична асоциация и функционален анализ. Cancer Res 69: 5970-5977, 2009 г.
25. Misra MK, Pandey SK, Kapoor R, Sharma RK и Agrawal S: Генетични варианти на микроРНК-свързани гени в чувствителността и прогнозата на краен стадийбъбречназаболяванеи резултат от алографт на бъбрек сред северноиндийците. Pharmacogenet Genomics 24: 442-450, 2014 г.
26. Kato M, Yuan H, Xu ZG, Lanting L, Li SL, Wang M, Hu MC, Reddy MA и Natarajan R: Роля на Akt/FoxO3a Pathway TGF-beta1-медиирана дисфункция на мезангиалните клетки: свързан с нов механизъм на диабетицибъбрекзаболяване. J Am Soc Nephrol 17: 3325-3335, 2006.
27. Qin G, Zhou Y, Guo F, Ren L, Wu L, Zhang Y, Ma X и Wang Q: Свръхекспресията на FoxO1 подобрява дисфункцията на мезангиалните клетки при мъжки плъхове с диабет. Mol Endocrinol 29: 1080-1091, 2015 г.
28. Chang AS, Hathaway CK, Smithies O и Kakoki M: Трансформиращ растежен фактор-1 и диабетна нефропатия. Am J Physiol Renal Physiol 310: F689-F696, 2016.
29. Akhtar S, Yousif MH, Dhaunsi GS, Sarkhouh F, Chandrasekhar B, Attur S и Benter IF: Активирането на ErbB2 и низходящото сигнализиране чрез Rho кинази и ERK1/2 допринася за индуцирана от диабет съдова дисфункция. PLoS One 8: e67813, 2013 г.

30. Omote K, Gohda T, Murakoshi M, Sasaki Y, Kazuno S, Fujimura T, Ishizaka M, Sonoda Y и Tomino Y: Роля на пътя на TNF в прогресирането на диабетна нефропатия при KK-A(y) мишки. Am J Physiol Renal Physiol 306: F1335-F1347, 2014 г.

31. Al-Lamki RS и Mayadas TN: TNF рецептори: Сигнални пътища и принос към бъбречна дисфункция.БъбрекInt 87: 281-296, 2015 г.
32. Gödel M, Hartleben B, Herbach N, Liu S, Zschiedrich S, Lu S, Debreczeni‑Mór A, Lindenmeyer MT, Rastaldi MP, Hartleben G, et al: Роля на mTOR във функцията на подоцитите и диабетната нефропатия при хора и мишки . J Clin Invest 121: 2197-2209, 2011 г.

33. Ziyadeh FN, Hoffman BB, Han DC, Iglesias-De La Cruz MC, Hong SW, Isono M, Chen S, McGowan TA и Sharma K: Дългосрочна профилактика на бъбречна недостатъчност, експресия на излишен матричен ген и гломерулен мезангиален матрикс експанзия чрез третиране с моноклонално антитяло срещу трансформиращ растежен фактор-бета в db/db мишки с диабет. Proc Natl Acad Sci USA 97: 8015-8020, 2000.

34. Mori H, Inoki K, Masutani K, Wakabayashi Y, Komai K, Nakagawa R, Guan KL и Yoshimura A: Пътят на mTOR е силно активиран при диабетна нефропатия и рапамицинът има силен терапевтичен потенциал. Biochem Biophys Res Commun 384: 471-475, 2009 г.
35. Ciccacci C, Latini A, Greco C, Politi C, D'Amato C, Lauro D, Novelli G, Borgiani P и Spallone V: Асоциация между MIR499A полиморфизъм и диабетна невропатия при диабет тип 2. J Диабетни усложнения 32: 11-17, 2018 г.
36. Forbes JM и Thorburn DR: Митохондриална дисфункция при диабетицибъбрекзаболяване. Nat Rev Nephrol 14: 291-312, 2018 г.
37. Flemming NB, Gallo LA и Forbes JM: Митохондриална дисфункция и сигнализиране при диабетбъбрекзаболяване: Оксидативен стрес и извън него. Semin Nephrol 38: 101-110, 2018 г.