Антиоксидантната нанолента от графенов оксид като нов избелващ агент инхибира свързания с микрофталмията транскрипционен фактор свързан механизъм на меланогенеза

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

РЕЗЮМЕ:Вмеланинпроцес на синтез, окислителните реакции играят съществена роля и е добра стратегия за инхибиране на производството на меланин чрез намаляване на оксидативния стрес. Фулеренът и неговите производни или комплексите се считат за силни уловители на свободни радикали и ние допълнително приложихме многослоен sp2nanocarbon, за да откриеммеланинмеханизми за инхибиране на синтеза. В настоящото изследване използвахме нови наноматериали, като например многостенни въглеродни нанотръби (MWCNTs), MWCNTs от къс тип, наноленти от графенов оксид (GONRs) и GONRs от къс тип, като антиоксиданти за регулиранемеланинпроизводство. Резултатите показват, че GONR имат по-добри антиоксидантни способности в платформите за анализ на вътреклетъчния и извънклетъчния оксидативен стрес, отколкото други. Ние предложихме GONRs да имат функционални групи, съдържащи кислород. В анализа на 2',7'-дихлородихидрофлуоресцеин диацетат открихме, че GONR може да хелатира метални йони, за да поглъща реактивни кислородни видове. В гледна точка на молекулярно прозрение наблюдавахме, че тези наноматериали регулират надолу синтеза на меланин чрез намаляване на генните експресии, свързани с транскрипционния фактор, свързани с микрофталмията, и имаше подобни последствия в експресиите на протеини. За да обобщим, GONRs е потенциален агент като романантиоксиданти козметични материали за избелване на кожата.

цистанчеинхибират образуването на меланин

1. ВЪВЕДЕНИЕ

Кожата е органът, който покрива външната повърхност на човешкото тяло. Тъй като интерфейсът е в контакт с околната среда, кожният слой играе важна роля в защитата на тялото срещу патогени, избягвайки прекомерната загуба на вода, регулирайки телесната температура и т.н. Меланоцитите растат в базалната мембрана на епидермиса на кожата и представляват 5 до 10 процента от клетъчното съдържание. Те са характеризирани като едноклетъчни "жлези", имащи тънки, дълги дендрити, подобни на струя, и разклонения. Меланоцитите се движат през епидермалните клетки в тяхната непосредствена близост, създавайки съзвездие от епидермални клетки около всеки меланоцит. Има много вътрешни и външни причини за стареенето на кожата и един такъв фактор е ултравиолетовото (UV) лъчение от слънчевата светлина.1 По време на излагане на ултравиолетови лъчи нивата на реактивните кислородни видове (ROS) в кожата се повишават драстично, което е известно като оксидативен стрес. Няколко фактора за токсичност на околната среда също повишават оксидативния стрес на кожата, като пестициди, въглероден тетрахлорид, тежки метали, ароматни амини и прахови частици 2,5 (PM2,5).2 В биохимичния механизъм вътреклетъчните оксиданти се генерират от неензимната система, превръщайки ги в ROS за задействане на пътя на меланогенезата.

В допълнение към ROS, има много фактори, които влияят на производството на меланин, включително генна експресия, възпаление, ендокринни промени и усвояване на пигмент.1 В първите стъпки на производството на меланин тирозиназата играе роля в катализирането на тирозин във феомеланин и еумеланин. Механизмите за производство на двата пигмента са сходни, които включват хидроксилиране на L-тирозин до 3,4-дихидрокси-L-фенилаланин (L-DOPA) и окисление на L-DOPA до допахинон. В следващата стъпка допаминът се окислява от свързан с тирозиназа протеин 1 (TRP-1) и свързан с тирозиназа протеин 2 (TRP-2) в меланозома, която се регулира от транскрипционния фактор, свързан с микрофталмията (MITF). за да се образувамеланинНакрая меланинът узрява и се утаява в роговия слой.4,5 Те проникват в съседните кератиноцити на базалния слой и защитават тяхната ДНК от всякакви индуцирани от ултравиолетовите лъчи мутации или модификации. Отлежалитемеланинв рамките на меланозомите се прехвърля в кератиноцитите6-9 и накрая води до дълготрайна пигментация. Лентигини, лунички и кафяви/черни петна понякога причиняват социални проблеми при мъжете и жените. Блокирането на оксидативния стрес или потискането на активността на тирозиназата е една стратегия за понижаване на синдрома на хиперпигментация и дерматологични разстройства.Антиоксидантилекува хиперпигментациите и клетъчните увреждания, причинени от ROS.10,11 Следователно, синтезираните антиоксидантни съединения имат много биофункционални приложения в приложенията за грижа за кожата.

Фулерен (C60), въглеродна нанотръба (CNT), графен и графенова нанолента (GNR) са четири вида sp2 нановъглерод, широко изследвани по целия свят.12 Фулеренът и неговите производни или комплекси са считани за силни уловители на свободни радикали от дълго време. Yodoh и др. използва водоразтворим C60 като защитен агент срещу дегенерация, предизвикана от катаболен стрес. Injac и др. заключава, че C60(OH)24 е силенантиоксидантсъединение, когато оксидативният стрес е твърде висок. Окуда и др. предполагат, че C60 комплексите могат да предотвратят NO-медиирано клетъчно увреждане.13,14 Tong et al. показват, че C60 комплексите могат да бъдат обещаващи кандидати за лечение на заболявания, свързани с мозъка, причинени от повишени нива на супероксид. Всъщност, японска компания идентифицира фулерени със силна антиоксидантна активност за козметична употреба през 2006 г. Lucente Schultz et al. показаха, че способността за поглъщане на кислородни радикали на функционализирани едностенни CNT (SWCNT) е почти 40 пъти по-голяма от тази на дендритните C60.15-19Fenoglio et al. забелязаха, че многостенните CNT (MWCNT) притежават забележителен капацитет за улавяне на радикали в контакт с външен източник на хидроксилни или супероксидни радикали. 20 Изчисленията на функционалната теория на плътността също разкриват модел на SWCNT като улавяне на свободни радикали. През 2004 г. Novoselov et al. за първи път показаха, че графенът проявява силен амбиполярен електрически ефект и може да бъде обещаващ за електронни приложения.21 След това те продължиха да показват, че графенът има електронни свойства, които са отличителни за 2D газ от частици, описан от уравнението на Дирак. 22,23 След тези две новаторски статии, все повече и повече внимание се обръща на изследванията, базирани на графен.24−30 Например, Qiu et al. през 2014 г. показаха, че графеновият оксид и няколкослойният графен показват значителниантиоксидантактивност и може да защити различни биомолекулни молекули от окисляване.31Han et al. експериментално демонстрира през 2007 г., че енергийната празнина на GNRs може да бъде контролирана по време на литографския процес чрез промяна на ширината на лентата.32 Сред четирите нанокарбона, GNRs са получили най-малко внимание. Доколкото ни е известно, има малко изследвания върху антиоксидантните свойства на нанолентите от графенов оксид (GONRs).31,33 Следователно, в това изследване ние внимателно подготвихме MWCNTs, къси MWCNTs, GONRs и къси GONRs и имахме за цел да сравним техните антиоксидантни свойства и свързаните с тях резултати систематично .

2. РЕЗУЛТАТИ И ОБСЪЖДАНЕ

2.1. Морфология на MWCNTs и GONRs.

Figure 1a shows the low- and high-magnification transmission electron microscopy (TEM) images of MWCNTs and short MWCNTs. Following acidic cutting under ultrasonication, the length of MWCNTs could be shortened from >10 μm до 2−3 μm. Едновременно с това се наблюдава, че обработката с азотна киселина прави гладките повърхности на тръбите грапави. Някои прорези и неправилни форми се показват в картината с голямо увеличение. Освен това, използването на MWCNT и къси MWCNT чрез микровълнови реакции получава съответно GONR и short GONR. Ние също така илюстрирахме TEM снимки с ниско и високо увеличение на GONR и къси GONR. Благодарение на голямото надлъжно разкопчаване и второстепенно рязане, изглежда, че GONR са по-къси от MWCNT. От друга страна, снимките с голямо увеличение показват по-големи диаметри, т.е. 0.11−0.18 μm, на GONRs от тези на MWCNT, което показва, че процесът на разархивиране е успешен. По подобен начин късите GONR показват по-къса дължина и по-голям диаметър от късите MWCNT. Във въздушния компресор на нашия нов процес на разкопчаване, тънкослоестите структури на GONR бяха по-малко от това, което получихме в ранния доклад за същата микровълнова мощност от 250 W, като същевременно се запазиха по-дебелите централни MWCNTs. се появяват вместо напълно разкопчаната нанолентова структура през всички микровълнови мощности в новия процес. За сравнение с късия GONR в предишните ни проучвания,34 по-високата микровълнова мощност генерира повече прорези отстрани на лентите и не образува хубави гладки ленти. Имайте предвид, че използвахме два различни вида Cu решетки на Фигура 1а. За MWCNT и GONR с достатъчна дължина беше използвана решетка Gu с дантелена форма, стабилизирана с въглерод (номер на продукта 01881-F, Ted Pella, Inc., САЩ). Отворените дупки в дантелен въглероден филм предотвратяват припокриване на предавателно изображение между нано въглероди и въглероден филм. Тъмносивите мрежи принадлежат към дантеления въглероден филм. Въпреки това, решетка Gu с формвар, стабилизиран с въглерод (продукт № 01800-F, Ted Pella, Inc., САЩ) беше необходима за къс MWCNT и къс GONR. Това е така, защото големите дупки в дантеления въглероден филм създават проблеми за ефективното задържане на късите MWCNT и късите GONR. Както е илюстрирано на Фигура 1, светлосивият контраст под късите MWCNT и късите GONR е лек слой въглерод. Тези въглеродни слоеве стабилизираха формваровия филм, изложен на електронния лъч, чрез своите топло- и електропроводими свойства.

2.2. Конфигурации на свързване на MWCNTs и GONRs.

Спектрите на Раман на четирите нановъглерода са представени на Фигура 1b; D лентата на GONRs беше по-висока от тази на MWCNTs след процеса на разархивиране. Това се дължи на по-високото ниво на окисление и по-големия брой ръбови структури на GONR в сравнение с MWCNT. Това явление също е подобно на това, което наблюдавахме в 2011.12 Благодарение на високото ниво на графитизация, G лентата на MWCNTs имаше най-ниското максимално число на пълната ширина на половината. Съотношенията ID/IG на четирите нановъглерода бяха съответно 0.076, 0.502, 0,483 и 0,700. Накратко, намалената дължина и окисление на повърхността повишиха нивото на дефекта и по този начин направиха съотношението ID/IG по-високо. D' пикът присъства във всички дефектни графени и се разглежда като мярка за качество.35 Както е показано на Фигура 1b, D' пиковете в четирите спектъра стават по-забележими след процеса на рязане или отваряне, което предполага, че те са разрушителни процеси, които въвеждат много дефекти. Фигура 1c, d показва спектрите на рентгеновата фотоелектронна спектроскопия на четирите нановъглерода. Очевидно пикът D' е най-ясният за къси GONR. Както е показано на фигура 1c, нивото на O значително се повишава от 7,6 процента (MWCNTs) до 19,9 процента (GONRs) поради силната окислителна способност на KMnO4 в кисела среда. От друга страна, нивото на O леко се повишава с 0,8 процента от MWCNT към късите MWCNT. Важно е, че най-високото ниво на O е 38,3 процента за късия GONR, което означава, че краищата на нанолентите биха били по-лесни за прикрепване на кислородни функционални групи, отколкото равнинните sp2 повърхности. По-голямото число на пълната ширина на половината от максимума и преминаването към високата енергия на свързване на C 1s пиковете след процеса на разархивиране както на MWCNT, така и на късите MWCNTs са илюстрирани на Фигура 1d. За графенови оксиди деконволюционните пикове във високата енергия на свързване страна може да бъде приписана на C−C(CC), C−O, CO и COOH връзки.36 Ние характеризирахме GONR (200W) през 2013 г.37 и резултатите бяха подобни на резултатите от това проучване. Това проучване заключава явленията на Рамановите спектри, което означава, че повече кислородсъдържащи функционални групи са генерирани по време на трансформацията от тръба към лента (Фигура 2).

2.3. Антиоксидативни свойства на MWCNTs и GONRs.

2.3.1. Определяне на 1,1-дифенил-2-пикрилхидразил анализи на активността на освобождаване на свободни радикали.

1,1-Дифенил-2-пикрилхидразил (DPPH) активността по отстраняване на свободните радикали еантиоксидантплатформа, приложена за откриване на антиоксидантния капацитет; резултатите за четирите нановъглерода са описани в таблица 2. В DPPH анализа витамин С в концентрация от 100 μM е използван като положителна контрола. За да се тестват антиоксидантните активности на MWCNTs, късите MWCNTs, GONRs и късите GONRs, дози от 1, 5 и 10 mg/L бяха инкубирани в реакционния разтвор за измерване на свойствата. MWCNTs, късите MWCNTs, GONRs и късите GONRs имат умерени инхибиторни способности при 1{{20}} mg/L (19.2 ±0.3, 12.1 ± 0.3, 26.8 ± 0.3 и 30.0 ± 0,4 процента), докато витамин Чад е подобно състояние при 100 μM (93,4 ± 0,1 процента) за потискане.

2.3.2. Анализ на йон-хелираща активност.

В рамките на ситуацията на окислителен стрес ферозинът може да развие комплекс с Fe2 плюс, който да бъде измерен количествено. В присъствието на хелатиращи медиатори, комплексът се разрушава, което води до редукция на железните йони от тъмночервен цвят на Fe2 плюс комплекса. Използвахме EDTA като положителна контрола. Таблица 2 показва, че MWCNTs, късите MWCNTs, GONRs и късите GONRs имат хелатираща активност при 10 mg/L (29,2 ± {{10}}.8, 28,7 ± 0). 7, 69,7 ± 0.6 и 68,9 ± 0,3 процента), докато положителната контрола имаше подобно състояние при 100 μM (93,4 ± 0,1 процента).

2.3.3. Измерване на желязо-намаляваща антиоксидантна мощност.

Анализът на потенциала за редуциране на желязо е прост и надежден тест, използван за количествено определяне на синтеза на Fe(III)-ферицианиден комплекс. В този анализ, редуциращата способност на четирите нано въглерода, произвеждащи железен Fe(III)-TPTZ комплекс, беше открита чрез промени в цвета на разтвора от жълт до зелен и син. Таблица 2 демонстрира, че редукционните способности на MWCNT, къси MWCNT, GONR и къси GONR са били оптична плътност (OD) 1,11, 1,13, 1,15 и 1,11 при 10 mg/L.

2.3.4. MWCNTs и GONRs инхибират вътреклетъчното натрупване на ROSA.

Много доклади показват, че ROS разрушава структурната цялост на клетъчните мембрани, включително клетъчните мембрани и ядрените мембрани, което води до увреждане на клетките и до загуба на нормална функция.38-40 В допълнение, ROS е също един от важните фактори за катализиране на тирозиназата, образуваща меланин, и инхибирането на производството на ROS е добра стратегия за понижаване на регулациятамеланин synthesis. In this study, we used the 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) staining assay to analyze the intracellular oxidative stress level in MWCNT and GONR treatment cells. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) induced oxidative stimulations in MWCNT and GONR groups and was used as a negative control.41 When the concentration of PMA was 20 ng/mL, it induced oxidative stress, increasing the value to 38%; after treating GONRs and MWCNTs, the levels of ROS were downregulated to the normal level. The data showed that both materials inhibited oxidative stress levels, and the anti-oxidative effect of GONRs was higher than that of MWCNTs (Figure 3). Table 1 shows a similar consequence list. We contended that there are three reasons for our new findings: first, the order of solubility of these materials was as follows: short GONRs > GONRs >къси MWCNTs > MWCNTs, което означава, че контактната зона на късите GONRs е най-голямата, така че е по-добра за ROSscavenging. Второ, GONRs и MWCNTs са sp{0}}въглеродни структури, които могат да унищожат ROS електричеството чрез образуване на адукти или трансфер на електрони.42 Открихме, чеантиоксидантни ефектиот структурите на нанолентите са по-добри от тези на структурите на нанотръбите, така че нанолентите улесняват преноса на електрони от нанотръбите. И накрая, на Фигура 1b наблюдаваме, че въглеродният сайт на GONR sp2- съдържа повече кислородни функционални групи, отколкото MWCNTs, групите на карбоксилната киселина могат да хелатират метални йони, а хидроксилните групи могат да бъдат H-донор за пречистване на ROS и инхибиране на производството на меланин.

2.4. Цитотоксичност на MWCNTs и GONRs, третирани в човешки дермални фибробластни клетки.

Методът на {{0}}(4,5-диметилтриазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиев бромид (МТТ) беше приложен за оценка на цитотоксичния свойства на GONR върху Hs68 клетки (Фигура 3) и клетките се култивират при различни дози от 1, 5 и 10 ug/mL. Изследвахме, че клетъчната жизнеспособност на MWCNT е 100,7 ± 3,7, 99,8 ± 4,9 и 94,1 ± 4,7 процента при концентрации съответно от 1, 5 и 10 mg/L; жизнеспособността за късата MWCNT беше изчислена в същия ред и беше установено, че е 93,9 ± 2,2, 86.4 ± 3,0 и 98,9 ± 2,1 процента. Ние наблюдавахме, че клетките B16-F10 са инкубирани във високи концентрации и клетъчното оцеляване на клетките Hs68 е повече от 80 процента, което предполага, че MWCNT и късият MWCNT нямат токсичен ефект върху човешки дермални фибробластни клетки. Клетъчната жизнеспособност на GONR и късата GONR беше 86.24 ± 2,1, 90,87 ± 3,5, 88,58 ± 2,5, 89,03 ± 3,6, 90,71 ± 2,8 и 90,64 ± 2,5 процента. На фигура 4а също така се посочва, че GONR и shortGONR не са имали забележим цитотоксичен ефект върху HS68 клетки. В предишни доклади използването на нетествани наноматериали за козметични цели може да се счита за съмнително 43, 44 и обикновено се дължи на атаката на ДНК след навлизането на наночастиците в клетките. След теста за цитотоксичност установихме, че нашите материали не причиняват токсичност за нормалните кожни клетки. Ние заключихме, че след навлизането на наноматериали в клетките, наноматериалите просто инхибират производството на меланин чрез намаляване на оксидативния стрес и хелатиране на метални йони и не увреждат митохондриите или ДНК, което означава, че MWCNTs и GONRs са безопасни за използване.

2.5. Два вида MWCNTs и GONRs в B16−F10клетъчната активност на тирозиназата и съдържанието на меланин.

Вмеланинсинтезен път, тирозиназата играе критична роля. Тирозиназата окислява и образува еумеланин и феомеланин чрез серия от биохимични реакции. За да се определи дали GONRs и MWCNTs инхибират активностите на тирозиназата и причиняват намаляване на производството на меланин, ние анализирахме активността на тирозиназата в B16-F10 клетки. Ние открихме, че MWCNT и късите MWCNT инхибират активността на тирозиназата с приблизително 17,1 процента и 23 процента при 10 mg/L. GONR и късите GONR имат по-добър ефект при потискане на активността на тирозиназата при същите концентрации в сравнение с друг GONR. Те също бяха по дозозависим начин и инхибираха 49,8% и 44,7% от активността на тетирозиназата, както е показано на Фигура 4b.

Меланине незаменим пигмент в човешкото тяло, но свръхекспресията на меланин често отключва серия от заболявания. В предишни проучвания Xiao et al. използва подобен материал, радикална гъба, фулеренова наночастица, като анти-меланинов агент.45 Има някои добри резултати; около 20 процента отмеланинпроизводството може да бъде възпрепятствано. За да подобрим ефективността му, ние допълнително подобрихме тестовия материал за измерване на степента на инхибиране на меланина и неговия молекулен механизъм, както е показано на фигури 4c и 5. MWCNTs и късите MWCNTs намалиха съдържанието на меланин със 17,6 ± 5,5 и 13,2 ± 0. 2 процента при 10 mg/L и в зависимост от дозата. GONR и късите GONR силно понижиха стойностите до 32,0 ±2,3 и 35,3 ± 3,4 процента при 10 mg/L. Експерименталните резултати предполагат, че и четирите типа могат да инхибират синтеза на меланин и GONR имат по-силен ефект. От друга страна, ние също наблюдавахме, че късият GONR има по-добър ефект при инхибирането на производството на меланин. Ние заключаваме, че късите GONRs имат повече функционални групи и могат ефективно да предотвратят катализираната от метални йони тирозиназа, допълнително инхибирайки производството на меланин (Фигура 2). В Таблица 1 наблюдаваме, че усилието при къс тип хелатиране на метални йони е по-високо от нормалния тип; това означава, че тези къси GONR могат да бъдат потенциално приложени в козметичната област като агенти за грижа за кожата.

2.6. Механизмът на MWCNTs и GONRs инхибира B16-F10 клетъчното съдържание на меланин.

Клетките реагират на външния оксидативен стрес чрез регулиране на протеиновата експресия. Клетките B16−F10 усилват експресията на c-myc ген и повишават AMPK за намаляване на окислителните нива, 46 и в тази работа MITF е специфичен транскрипционен фактор на тирозинасето за регулиране на сигналния път на молекулярния синтез на меланин. 47-49 На фигура 5а, MWCNTs и GONRs регулират надолу свързания с микрофталмията транскрипционен фактор чрез намаляване на оксидативния стрес и след това генът надолу по веригата TRP-1 и TRP-2 също се регулира надолу. За нивото на протеина беше открит подобен феномен, при който MWCNTs и GONRs регулираха надолу свързания с MITF път на меланогенеза и след това накрая намалихамеланинсъдържание (Фигура 5b).

цистанче бодибилдинг

3. ЕКСПЕРИМЕНТАЛНИ МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

3.1. Приготвяне на MWCNTs и GONRs.

Съответният процес за получаване на GONRs беше докладван в предишна статия. 12MWCNT (0.05 g) беше суспендиран в 9:1 H2SO4/H3PO4 и обработен с микровълнов реактор (CEM-Discover) с набор от мощности при 250 W за 2 минути. След добавянето на KMnO4 (0,25 g) към разтворите, разтворите бяха третирани със същата микровълнова мощност при 65 градуса за 4 минути12 След това модифицирахме този процес, използвайки по-кратко микровълново време на втория етап от 8 минути чрез използване на въздушен компресор. Тук въздушният компресор се използва за контролиране на температурата на микровълновия реактор по време на процеса. Микровълновата мощност беше зададена на 250 W в предварителните тестове.

3.2. Подготовка на къси MWCNT и къси GONR.

Съответният процес за създаване на къси GONRs беше докладван в нашата предишна статия.34 Времето за киселинна обработка беше избрано като 8 часа. Микровълновата мощност беше зададена на 250 W, което е същото като това за получаване на GONR.

3.3. DPPH активност за отстраняване на радикали.

DPPH често се използва за определяне на капацитета за изчистване на пробите и антиоксидантните свойства.50 DPPH е лилав реагент, който променя цвета си от лилав на жълт, ако свободните радикали се прехвърлят към аналита. Към разтвора се добавят положителни антиоксидантни проби с подходящи концентрации и пробите се анализират при 517 nm за 30 минути. Използвахме процентите на оставащия DPPH освен тестовите проби, за да измерим броя наантиоксидантинеобходими за редуциране на предишните DPPH радикали. Витамин С при 100 μM беше използван като положителна контрола. Почистващата активност (проценти) се измерва като

3.4. Металохелираща активност.

Металният йон е факторът, който причинява прекомерно окисление на липидите, а Fe2 плюс е един от най-влиятелните йони.50 Различни концентрации на нано биоматериали (1 μL) бяха заредени в 96-ямкова плака, която съдържаше 2mM FeCl2·4H2O ( 10 μL) и след това се зарежда във ферозин (5 mM, 20 μL). Сместа се смесва напълно с 69 μL ментол и се държи при стайна температура за 10 минути. След това реакционният разтвор на пробата се наблюдава при 562 nm. EDTA беше използвана като положителна контрола при 100 μM, а формулата за изчисление на активността на хелатиране на метали беше базирана на уравнение 1.

3.5. Намаляване на мощността.

Изчисляването на редуциращата мощност се основава на предишно проучване.50 Първо, 2,5 μL графенови материали се смесват с PBS буфер (67 mM, pH 6,8) и K3Fe(CN)6 (2,5 μL, 20 процента) и след това се инкубират при 50 градуса за 20 мин. След това 10 процента трихлорооцетна киселина (160 μL) се смесва с тези агенти при 300 g и се центрофугира в продължение на 20 минути. Дължината на абсорбция се определя при 700 nm след смесване с 25 μL FeCl3 (2 процента). Бутилиран хидроксианизол (BHA) се използва при 100 μM.

3.6. Изследвания за клетъчна пролиферация.

Клетъчната линия HS68 на човешки дермалфибробласти беше използвана за анализ на съотношението на клетъчна пролиферация. HS68 беше инкубиран в модифицирана на Dulbecco среда Eagle (DMEM), съдържаща 10 процента фетален говежди серум и 1 процент смесени пеницилин и стрептомицин. 50, 51 След третиране с различни концентрации на проби, ние приложихме МТТ за откриване на съотношението на клетъчна пролиферация. 8000 клетки бяха посяти в 96-плаки с ямки и третирани с проби в продължение на 24 часа. Супернатантният разтвор беше отстранен и ние използвахме MTT разтвора за култивиране в продължение на 2 часа при 37 градуса. След инкубиране се премества МТТ-съдържащата среда и се разтваря с диметилсулфоксид (DMSO). Разтворът се отчита при OD 590 nm и скоростта се изчислява по уравнение 1.

3.7. Оценка на клетъчното съдържание на меланин.

Използвахме метод с незначителни модификации, базиран на предишния анализ.52,53 Клетъчни пелети от B16−F10 от Център за събиране и изследване на биоресурси (BCRC, CRL 6323, Hsinchu, Тайван) бяха разтворени в смес от 2,0 N NaOH и 10 процента DMSO. След това пробата се нагрява в продължение на 1 час при 90 градуса и се центрофугира при 10,000g за още 10 минути, за да се получи избистрената супернатанта. Theмеланинброят се определя чрез наблюдение на OD на супернатанта при 475 nm.

3.8. B16−F10 Клетъчна тирозиназна активност.

За B16-F10 активността на клетъчната тирозиназа се позовахме на предишната работа с някои модификации.50 Клетките бяха култивирани в 12-плаки с ямки при 105 клетки всяка ямка. След третиране с проби, клетките бяха лизирани в 1% Triton X-100/PBS и 2 mML-тирозин (50 μL) в продължение на 3 часа. След инкубацията отстранихме средата и отчетохме абсорбцията при OD 590 nm. Формулата за активността на тетирозиназата беше изчислена чрез уравнение 1.

3.9. Откриване на ROS чрез DCFDA оцветяване.

Позовавайки се на предишното проучване, 54 1.2 1.105 B16−F10 клетки бяха посяти в6-плаки с ямки и третирани с различни концентрации на проби. Клетките се суспендират в PBS и след това се зареждат с DCFDA (5 цМ) в нефенолно червено DMEM за 30 минути при 37 градуса. Поточният цитометър (Guava, Merck, Германия) беше използван за откриване на флуоресцентния сигнал на DCFDA. Дължините на вълните на възбуждане и излъчване на DCFDA бяха съответно 488 и 535 nm.

3.10. Количествена полимеразна верижна реакция в реално време.

Следвахме методите на Lin et al. (2018).1 Количествената обратна транскрипция-полимеразна верижна реакция в реално време (qRT-PCR) се състои от изключителен праймер-сонда за генериране на флуоресценция. Той използва техника за откриване на флуоресценция, която усеща всеки цикъл с помощта на 7500 qRT-PCRSystem (Applied Biosystems, САЩ). Той открива цикъла въз основа на количеството освободена флуоресценция и след това продуктът на всеки цикъл се изчислява за генерираното съдържание, което води до постигане на количествени цели в реално време. Trizol (Invitrogen, САЩ) беше използван за извличане на пълна РНК от белодробна тъкан, съгласно указанията, дадени от производителя. Впоследствие беше използван комплект за обратна транскрипция (Takara, Япония) за генериране на ДНК. В qRT-PCR с използване на праймери, изброени в таблица 1, първо пробата се нагрява, за да се образува единична верига на ДНК; след това се извършва праймерно свързване за образуване на двойноверижна ДНК (dsDNA), след което SYBR Green dsDNA се комбинира, за което се използва комплектът SYBR green plus reagent (Roche, Basel, Swiss), което води до освобождаване на флуоресценция. Полученото беше прекарано през система за флуоресцентно откриване. Откриването на флуоресцентни сигнали се извършва по време на фазата на удължаване или отгряване на всеки цикъл; след откриването, съдържанието на пробата се изтласква обратно от откритите интензитети на флуоресценция.55 Нивата на експресия на целевите гени се нормализират до нива на -тубулин, използвайки метода 2−ΔΔCt .

Cistanche избелващ ефект върху кожата до антиоксидация

3.11. Уестърн блот тест.

B16-F10 клетки бяха лизирани при 4 градуса за една нощ с буфер за радиоимунопреципитационен анализ (Thermo Scientific Co., САЩ), който съдържа протеазни инхибитори. Комплектът за анализ на протеин на бицинхонинова киселина (BCA, Sigma-Aldrich Corp., САЩ) беше използван за количествено определяне на количеството протеин. Протеините на пробите се разделят на 10 процента натриев додецилсулфат-полиакриламиден гел и се прехвърлят върху мембрана от поливинилиден дифлуорид (PVDF) (Pall LifeScience, Ann Arbor, MI, USA). PVDF мембраната се блокира с блокиращ буфер (Thermo Scientific) за 1 час и се инкубира със специфичното първично антитяло за една нощ при 4 градуса. След това мембраната се промива с трис-буфериран физиологичен разтвор Tween 20 буфер два пъти и се инкубира с вторични антитела за 1,5 часа. След това мембраната беше потопена в реагенти за откриване на хемилуминесценция (Thermo Scientific) и анализирана от MiniChemi Chemiluminescenceimager (Beijing Sage Creation Science, Китай). Източниците на антитела включват заешки анти-MITF, заешки анти-TRP-1, заешки анти-TRP-2 и -актин (Thermo Scientific).

3.12. Материален анализ.

TEM (JEOL JEM-1230, 100 kV) беше използван за наблюдение на морфологията на нановъглерода. Amicro Raman спектрометър (PTT, RAMaker) беше приложен за проверка на резонансните режими на нанокарбона. Бяха проведени и измервания с рентгенова фотоелектронна спектроскопия (XPS, Kratos Axis Ultra DLD) за определяне на анализа на състава.

3.13. Статистически анализ.

Всички проби и стандартни експерименти бяха повторени поне три пъти. Приложихме t-теста на Стюдънт, за да сравним и изразим средностатистическите средни стойности ± стандартно отклонение Y.

4. ИЗВОДИ

За да обобщим, ние забелязахме, че късият GONR е потенциален материал за производство на грижа за кожата поради множеството му биофункционални свойства (Фигура 6). Резултатите показват, че нанокарбонът играе ролята на извънклетъчен и вътреклетъчен антиоксидант. Междувременно нановъглеродът инхибира активността на тирозиназата имеланинсъдържание и не е причинило сериозно увреждане на пигментните клетки. Тази работа установява анти-меланогенезните функции на четири вида нанокарбон; бъдещи изследвания ще изследват механизма на тези съединения върху специфични генни и протеинови експресии, свързани с узряването, транспортирането и натрупването на меланин.

cistanche bienfaits

ПРЕПРАТКИ

(1) Lin, L.-C.; Chen, C.-Y.; Kuo, C.-H.; Lin, Y.-S.; Хванг, БиХ; Уанг, TK; Kuo, Y.-H.; Wang, H.-MD 36H: Нов мощен инхибитор за антимеланогенеза. Оксид. Med. клетка. Дълголетие 2018,2018, 6354972.

(2) Li, R.; Qiu, X.; Xu, F.; Лин, Й.; Fang, Y.; Zhu, T. Медиирани от макрофагите ефекти на фини прахови частици във въздуха (PM2.5) върху хепатоцитна инсулинова резистентност in vitro. ACS Omega 2016, 1, 736−743.

(3) Вие, Y.-J.; Wu, P.-Y.; Liu, Y.-J.; Hou, C.-W.; Wu, C.-S.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Сезамолът инхибира индуцираната от ултравиолетова радиация хиперпигментация и увреждане на кожата на мишка C57BL/6. Антиоксиданти 2019, 8, 207.

(4) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Синергични ефекти на линдеранолид B, комбиниран с арбутин, PTU или койкова киселина върху инхибирането на тирозиназата. Curr. Pharm. Биотехнология. 2015, 16, 1120−1126.

(5) Bae-Harboe, Y.-SC; Парк, Х.-Й. Тирозиназа: централен регулаторен протеин за кожна пигментация. J. Invest. Dermatol. 2012, 132, 2678−2680.

(6) Rezapour-Lactose, A.; Yeganeh, H.; Ostad, SN; Gharibi, R.; Mazaheri, Z.; Ai, J. Термореактивна полиуретан/силоксанемембрана за превръзка на рани и трансплантация на клетъчни листове: In vitro и in vivo изследвания. Матер. Sci. инж., C 2016, 69, 804−814.

(7) Boo, YC р-кумарова киселина като активна съставка в козметиката: Преглед, фокусиран върху нейните антимеланогенни ефекти. Антиоксиданти 2019, 8, 275.

(8) Awan, F.; Ислям, MS; Може.; Yang, C.; Shi, Z.; Berry, RM; Tam, KC Целулозни нанокристали-ZnO нанохибриди за контролиране на фотокаталитичната активност и UV защита в козметични формули.ACS Omega 2018, 3, 12403−12411.

(9) Кристина Негрито, М.; Valdez, C.; Sharma, J.; Rosenberg, C.; Селаси, CR инхибиране на растежа и увреждане на ДНК, предизвикано от X феноли в дрожди: количествено проучване на връзката структура-активност. ACS Omega 2017, 2, 8568−8579.

(10) Hamelin, M.; Hemmati, S.; Варма, К.; Veisi, H. Greensynthesis, антибактериалният, антиоксидантният и цитотоксичен ефект на златните наночастици, използвайки екстракт от Pistacia Atlantica. J. Taiwan Inst. инж.хим. 2018, 93, 21−30.

(11) Meneses-Gutierrez, CL; Herna ́ ndez-Damia ́ n, J.; Pedraza- ́Chaverri, J.; Гереро-Легарета, И.; Tellez, DI; Харамило-Флорес, M. ́E. Антиоксидантен капацитет и цитотоксични ефекти на катехини и ресвератрол олигомери, произведени чрез ензимно окисление срещу T24 човешки ракови клетки на пикочния мехур. Антиоксиданти 2019, 8, 214.

(12) Sun, C.-L.; Chang, C.-T.; Lee, H.-H.; Zhou, J.; Wang, J.; Шам, Т.-К.; Понг, У.-Ф. Микровълнов синтез на хетероструктура MWCNT/GONR с ядро-обвивка за електрохимично откриване на аскорбинова киселина, допамин и пикочна киселина. ACS Nano 2011, 5, 7788−7795.

(13) Lin, T.-E.; Lu, Y.-J.; Sun, C.-L.; Пик, Х.; Chen, J.-P.; Lesch, A.; Girault, HH Меки електрохимични сонди за картографиране на разпределението на биомаркери и инжектирани наноматериали в човешките тъкани на Animaland. Анджю. Chem., Int. Ед. англ. 2017, 56, 16498−16502.

(14) Окуда, К.; Хирота, Т.; Хиробе, М.; Нагано, Т.; Mochizuki, M.; Nishino, T. Синтез на различни водоразтворими производни на G60 и тяхната супероксид-гасителна активност. Фулерен Sci. техн. 2000, 8,127−142.

(15) Lucente-Schultz, RM; Moore, VC; Леонард, AD; Цена, BK; Косинкин, ДВ; Лу, М.; Парта, Р.; Conyers, JL; Tour, JMA Антиоксидантни едностенни въглеродни нанотръби. J. Am. Chem. Soc. 2009,131, 3934−3941.

(16) Injac, R.; Перс, М.; Obermajer, N.; Джорджевич-Милич, В.; Приятел, М.; Джорджевич, А.; Cerar, A.; Strukelj, B. Потенциални хепатопротективни ефекти на фулерен C60 (OH) 24 при индуцирана от доксорубицин хепатотоксичност при плъхове с карциноми на млечната жлеза. Биоматериали 2008, 29, 3451−3460.

(17) Tong, J.; Zimmerman, MC; Li, S.; Yi, X.; Луксенхофер, Р.; Джордан, Р.; Кабанов, AV Невронно поглъщане и вътреклетъчно отстраняване на супероксид от фулерен (C60)-поли(2-оксазолин)снаноформулация. Биоматериали 2011, 32, 3654−3665.

(18) Югио, К.; Шишидо, К.; Мураяма, Х.; Яно, М.; Мацубаяши, К.; Такада, Х.; Накамура, Х.; Масуко, К.; Kato, T.; Nishioka, K. Водоразтворимият C60 фулерен предотвратява дегенерацията на ставния хрущял при остеоартрит чрез понижаване на хондроцитната катаболична активност и инхибиране на дегенерацията на хрущяла по време на развитието на заболяването. Артрит Rheum. 2007, 56, 3307−3318.

(19) Такада, Х.; Мимура, Х.; Xiao, L.; ислям, RM; Мацубаяши, К.; Ито, С.; Miwa, N. Иновативен антиоксидант: Фулерен (INCI #:7587) е като "радикална гъба" върху кожата. Неговото високо ниво на безопасност, стабилност и потенциал като първокласна козметична съставка против стареене и избелване. Фулерени, нанотръби, въглеродна наноструктура. 2006, 14, 335−341.

(20) Fenoglio, I.; Греко, Г.; Томатис, М.; Muller, J.; Раймундо Пиньоро, Е.; Beguin, F.; Фонсека, А.; Nagy, JB; Лисън, Д.; Fubini, B. ́Структурните дефекти играят основна роля в острата белодробна токсичност на многостенните въглеродни нанотръби: физикохимични аспекти. Chem. Res.Toxicol. 2008, 21, 1690−1697.

(21) Новоселов, KS; Geim, AK; Морозов, С.В.; Jiang, D.; Zhang, Y.; Дубонос, С.В.; Григориева, И.В.; Фирсов, А. А. Ефект на електрическо поле в атомно тънки въглеродни филми. Science 2004, 306, 666−669.

(22) Новоселов, KS; Geim, AK; Морозов, С.В.; Jiang, D.; Katsnelson, MI; Григориева, И.В.; Дубонос, С.В.; Фирсов, А. А. Двуизмерен газ на безмасови фермиони на Дирак в графен. Nature 2005,438, 197−200.

(23) Джоу, X.; Wei, Y.; Той, Q.; Боуи, Ф.; Джан, К.; Zhang, H. Редуцирани филми от графенов оксид, използвани като матрица на MALDI-TOF-MS за откриване на октахлородибензо-р-диоксин. Chem. Общ. 2010, 46,6974−6976.

(24) Zhao, W.; Фен, С.; Xiao, N.; Лиу, Д.; Тей, YY; Ю, С.; Sim, D.; Huang, HH; Джан, К.; Боуи, Ф.; Ма, X.; Джан, Х.; Ян, Q. Хартии от гъвкави въглеродни нанотръби с подобрени термоелектрични свойства. Енергийна среда. Sci. 2012, 5, 5364−5369.

(25) Wang, Z.; Wu, S.; Джан, Дж.; Чен, П.; Янг, Г.; Zhou, X.; Zhang, Q.; Ян, Q.; Zhang, H. Сравнителни изследвания върху еднослойни редуцирани филми от графенов оксид, получени чрез електрохимична редукция и редукция на хидразинови пари. Nanoscale Res. Lett. 2012, 7, 161.

(26) Liang, X.; Фу, З.; Chou, SY Графенови транзистори, произведени чрез трансферен печат в активните зони на устройството върху голямата пластина. Nano Lett.2007, 7, 3840−3844.

(27) Sun, X.; Лиу, З.; Уелшер, К.; Робинсън, JT; Гудуин, А.; Зарич, С.; Dai, H. Нано-графенов оксид за клетъчни изображения и доставка на лекарства. Nano Res. 2008, 1, 203−212.

(28) Чен, У.; Xiao, P.; Чен, Х.; Джан, Х.; Джан, К.; Chen, Y. Полимерни графенови насипни материали с 3D кръстосано свързана монолитна графенова мрежа. адв. Матер. 2019, 31, 1802403.

(29) Чен, Д.; Feng, H.; Li, J. Графенов оксид: подготовка, функционализиране и електрохимични приложения. Chem. Rev. 2012, 112, 6027−6053.

(30) Ranjan, P.; Агравал, С.; Синха, А.; Rao, TR; Balakrishnan, J.; Thakur, AD Евтин неексплозивен синтез на графеноксид за мащабируеми приложения. Sci. Rep. 2018, 8, 12007.

(31) Qiu, Y.; Wang, Z.; Оуенс, ACE; Кулаотс, И.; Чен, Й.; Кейн, АБ; Hurt, RH Антиоксидантна химия на базирани на графен материали и нейната роля в технологията за защита от окисляване. Наномащаб 2014, 6,11744−11755.

(32) Han, MY; Ozyilmaz, B.; Джан, Й.; Ким, П. Инженеринг на енергийна лента на графенови наноленти. Phys. преп. Лет. 2007, 98, 206805.

(33) Souza, JP; Мансано, AS; Вентурини, FP; Santos, F.; Zucolotto, V. Антиоксидантен метаболизъм на риба зебра след сублетално излагане на графенов оксид и възстановяване. Fish Physiol. Biochem. 2019, 45, 1289−1297.

(34) Sun, C.-L.; Su, C.-H.; Ву, Ж.-Ж. Синтез на къси графеноксидни наноленти за подобрено откриване на биомаркери на болестта на Паркинсон. Biosens. Биоелектрон. 2015, 67, 327−333.

(35) Кинг, AAK; Дейвис, BR; Noorbehesht, N.; Newman, P.; Church, TL; Харис, AT; Razal, JM; Minett, AI Нова RamanMetric за характеризиране на графенов оксид и неговите производни. Sci. Rep. 2016, 6, 19491.

(36) Hsu, H.-C.; Показано, И.; Wei, H.-Y.; Chang, Y.-C.; Du, H.-Y.; Lin, Y.-G.; Tseng, C.-A.; Wang, C.-H.; Chen, L.-C.; Lin, Y.-C.; Чен, К.-Х. Графеновият оксид като обещаващ фотокатализатор за преобразуване на CO2 в метанол. Наномащаб 2013, 5, 262−268.

(37) Lin, L.-Y.; Yeh, М.-Х.; Цай, J.-T.; Huang, Y.-H.; Сън, К.-Л.; Хо, К.-К. Нова многостенна въглеродна нанотръба @ графеноксидна нанолента хетероструктура със сърцевина и обвивка като потенциален суперкондензаторен материал. J. Mater. Chem. 2013, 1, 11237−11245.

(38) Yin, H.; Xu, L.; Porter, NA Свободна радикална липидна пероксидация: механизми и анализ. Chem. Rev. 2011, 111, 5944−5972.

(39) Tung, C.-H.; Chang, J.-H.; Hsieh, Y.-H.; Hsu, J.-C.; Ellis, AV; Liu, W.-C.; Ян, Р.-Х. Сравнение на добивите на хидроксилни радикали между фото- и електро-катализирани водни обработки. J. Taiwan Inst. инж.хим. 2014, 45, 1649−1654.

(40) Ohshima, H.; Йоши, Й.; Auriol, S.; Gilbert, I. Антиоксидантни и прооксидантни действия на флавоноиди: ефекти върху увреждане на ДНК, предизвикано от азотен оксид, пероксинитрит и нитроксилен анион. Free Radical Biol. Med.1998, 25, 1057−1065.

(41) Chou, H.-Y.; Lee, C.; Пан, J.-L.; Wen, Z.-H.; Huang, S.-H.; Lan,C.-W.; Liu, W.-T.; Час, T.-C.; Hseu, Y.-C.; Hwang, B.; Cheng, K.-C.; Wang, H.-M. Обогатеният екстракт от астаксантин от Haematococcus Pluvialis увеличава секрецията на растежен фактор, за да увеличи клетъчната пролиферация и индуцира разграждането на MMP1, за да подобри производството на колаген в човешките дермални фибробласти. Вътр. J. Mol. Sci. 2016 г., 17 955.

(42) Bitner, BR; Маркано, окръг Колумбия; Берлин, JM; Fabian, RH; Cherian, L.; Culver, JC; Дикинсън, ME; Робъртсън, CS; Pautler, RG; Кент, ТА; Tour, JM. Антиоксидантните въглеродни частици подобряват мозъчно-съдовата дисфункция след травматично мозъчно увреждане. ACSNano 2012, 6, 8007−8014.

(43) Liao, C.; Li, Y.; Tjong, S. Графенови наноматериали: Синтез, биосъвместимост и цитотоксичност. Вътр. J. Mol. Sci. 2018, 19, 3564.

(44) Kong, H.; Wang, L.; Zhu, Y.; Хуанг, Q.; Fan, C. Свързани с културна среда физикохимични прозрения за цитотоксичността на въглеродните наноматериали. Chem. Рез. Токсикол. 2015, 28, 290−295.

(45) Xiao, L.; Мацубаяши, К.; Miwa, N. Инхибиторен ефект на водоразтворимото полимерно обвито производно на фулерен върху UVA-индуцирана меланогенеза чрез понижаване на експресията на тирозиназа в човешки меланоцити и кожни тъкани. арх. Dermatol. Рез. 2007, 299,245−257.

(46) Kfoury, A.; Амаро, М.; Collet, C.; Sordet-Dessimoz, J.; Giner, MP; Кристен, С.; Моко, С.; Лелеу, М.; Левал, Л.; Кох, У.; Тръмп, К.; Сакамото, К.; Beermann, F.; Radtke, F. AMPK насърчава оцеляването на c-Myc-положителни меланомни клетки чрез потискане на оксидативния стрес. EMBO J. 2018, 37, № e97673.

(47) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.; Ма, Д.-Л.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Синергични ефекти на Linderanolide B, комбиниран с Arbutin, PTU или Kojic Acid върху инхибирането на тирозиназата. Curr. Pharm. Биотехнология. 2015, 16,1120−1126.

(48) Лий, С.; Ким, Дж.; Песен, Х.; Seok, J.; Хонг, С.; Boo, Y. Luteolin7-Sulfate намалява синтеза на меланин чрез инхибиране на CREB и MITF-медиирана експресия на тирозиназа. Антиоксиданти 2019, 8, 87.

(49) Duval, C.; Cohen, C.; Chagnoleau, C.; Флуре, В.; Bourreau, E.; Bernard, F. Ключова регулаторна роля на пигментацията на дермалните фибробласти, както е показано с помощта на реконструиран кожен модел: въздействие на фотостареенето. PLoS One 2014, 9, № e114182.

(50) Li, P.-H.; Chiu, Y.-P.; Shih, C.-C.; Wen, Z.-H.; Ibeto, LK; Huang, S.-H.; Chiu, CC; Ма, Д.-Л.; Leung, C.-H.; Chang, Y.-N.; Wang, H.-MD Биофункционални дейности на екстракт от Equisetum ramosissimum: защитни ефекти срещу окисление, меланом и меланогенеза. Оксид. Med. клетка. Дълголетие 2016, 2016, 2853543.

(51) Liang, C.-H.; Chan, L.-P.; Гумена лодка.; И така, ЕК; Lin, R.-J.; Wang, H.-M.; Chen, Y.-G.; Chou, T.-H. Активност на освобождаване от свободни радикали на 4-(3,4-дихидроксибензоилоксиметил)фенил-О- -d-глюкопиранозид от Origanum vulgare и неговата защита срещу окислително увреждане. J. Agric. Food Chem. 2012, 60, 7690−7696.

(52) Wang, H.-M.; Chen, C.-Y.; Уен, З.-Х. Идентифициране на инхибитори на меланогенезата от Cinnamomum SubGenius с in vitro и in vivo системи за скрининг чрез насочване към човешката тирозиназа. Exp.Dermatol. 2011, 20, 242−248.

(53) Wang, Y.-C.; Хуанг, X.-Y.; Chiu, C.-C.; Lin, M.-Y.; Lin, W.-H.; Чанг, W.-T.; Tseng, C.-C.; Wang, H.-MD Инхибиране на меланогенезата чрез прах от плодов екстракт Phyllanthus Emblica в B16F10 клетки. Food Biosci. 2019, 28, 177−182.

(54) Панчук, RR; Skorokhyd, NR; Козак, YS; Lehka, LV; Moiseenok, AG; Stoica, RS Тъканно-защитната активност на селенометионин и D-пантерин при мишки, носещи меланом B16, подложени на лечение с доксорубицин, не е свързана с техния потенциал за поглъщане на ROS. хърватин. Med. J. 2017, 58, 171.

(55) Wang, H.-MD; Chen, C.-C.; Huynh, P.; Chang, J.-S. Изследване на потенциала за използване на водорасли в козметиката. Биоресурс. Technol.2015, 184, 355−362