Етеричното масло от Camellia Japonica инхибира -MSH-индуцираното производство на меланин и тирозиназната активност в B16F10 меланомни клетки

Контакт: ali.ma@wecistanche.com

Si Young Ha, Ji Young Jung и Jae-Kyung Yang

Етеричните масла са ароматни масла, извлечени от листа, стъбла, кори, венчелистчета и корени на ароматни растения, отгледани в природата или отгледани по органични методи и имат различни медицински ефекти като естествени вещества. Етеричното масло, извлечено от семената на Camelliajaponica, показва различни функционални свойства; обаче ситирозиназаинхибиторната активност не е изследвана задълбочено. Изследването се провежда за изследване на химичния състав и инхибиторната активност на тирозиназатаЕтерично масло от семена на японска камелия(CJS-EO). Хексаметилциклотрисилоксан (42,36 процента) и октаметилциклотетрасилоксан (23,28 процента) са двата основни компонента на CJS-EO, както е идентифицирано чрез газова хроматография-масспектрометрия.The инхибиторни активности наCJS-EOи арбутин с положителна контрола се оценяват допълнително срещу тирозиназа от гъби.ThРезултатите показват, че CJS-EO и арбутинът инхибираттирозиназадейност. Освен това, CJS-EO значително инхибира меланогенезата в групата, лекувана с -меланоцит-стимулиращ хормон, и значително количество меланин се потиска. За установяване на причината за CJS-EOтирозиназаинхибиторен ефект и ефект на намаляване на меланина, извършват се генетични и протеинови анализи. Въз основа на нашите резултати, ние условно заключаваме, чеCJS-EOможе да инхибира меланоцитите от вредни фактори като протеин, свързан с тирозиназата. Тези резултати показват, че CJS-EO притежава мощна активност на тирозиназа и може да бъде добър коженизбелванеагент.

Кликнете, за даCistanche UK за инхибиторите на тирозиназата.

Въведение

Цветът на кожата се влияе от пигменти като меланин в епидермиса, хемоглобин в кръвоносните съдове на дермата и каротин в подкожната тъкан. Сред тях външният цвят на кожата се определя от количеството и разпределението на пигмента меланин [1]. Ензимите, участващи в синтеза на меланин, са добре известни катотирозиназа, протеин, свързан с тирозиназа-1 (TRP-1) и допахром тавтомераза (DCT, TRP-2) [2]. Сред тях тирозиназата е ензим, действащ в първоначалната реакция, която е определящата скоростта стъпка на синтеза на меланин, и окислява тирозиназата до DOPA хинон [3]. Следователно, вещества, които инхибираттирозиназа,TRP-1 и TRP-2 могат да инхибират синтеза на меланин и по този начин да имат кожнаизбелванефункция [4]. Меланинът играе важна роля в защитата на кожата от ултравиолетовите лъчи и външните вредни фактори в човешката кожа. Въпреки това, когато се произвежда в излишък и се натрупва върху кожата, той може да причини мелазма, лунички, кожни петна и т.н. и може да доведе до клетъчна смърт поради токсичността на прекурсорите на меланина и заболявания като рак на кожата [5–7].

L-аскорбинова киселина, арбутин и млечна киселина са разработени като представителни инхибитори на производството на меланин, но тяхната употреба е строго регулирана поради дразнене на кожата или проблеми с безопасността. Ето защо се провеждат активни изследвания за намиране на естествен избелващ агент, който е безопасен и ефективен [8].

Известно е, че растителните етерични масла проявяват различни функционални свойства, като силна антибактериална активност и ефекти против стареене и регенерация на кожата [9, 10]. Съобщава се, че етерично масло от канела от касия [4], етерично масло от Polygonum odoratum [11] и етерично масло от листа на Vitex negundo Linn [12] притежаваттирозиназаинхибиторни дейности.

Camellia japonica (японско име на "tsubaki") е популярно дърво като градинско растение и източник на масло и народна медицина в Япония [13]. В Корея C. japonica е вечнозелено дърво, принадлежащо към семейство Theaceae и род Camellia [14]. Маслото от семена на C. japonica има дълга история на употреба като козметичен протектор за осигуряване на здравето на кожата и косата и като успокояващо средство [15]. Съобщава се, че маслото от семена на C. japonica проявява различни биологични активности, включително антиоксидантна активност [16], антибактериална активност [17], противовъзпалителна активност [18] и кожна бариерна функция [19]. Въпреки широкото му използване, малко проучвания са изследвали ефектите на маслото от семена на C. japonica върху кожата.избелване- асоциирантирозиназадейност.

Следователно, в това изследване химичният състав на C. Етеричното масло от японско семе (CJS-EO) е изследвано с помощта на газова хроматография-масспектрометрия (GC-MS) итирозиназабеше изследвана инхибиторната активност на това етерично масло. За справяне с тази инхибираща активност, ефектите отCJS-EOвърху -MSH-стимулираната меланогенеза и инхибирането на тирозиназата в B16F10 меланомни клетки бяха оценени.

2. Материали и методи

2.1. Растителни материали.

Семената на C. japonica са закупени през март 2021 г. от Seohyeon Herbal Medicine Farming Association, Nonsan, Южна Корея. Растителните материали бяха идентифицирани от Hee-Gon Kang, представител на експерименталната гора на Националния университет Gyeongsang.

Cistanche е една от традиционните китайски лекарства

2.2. Реактиви.

Гъбатирозиназае закупен от T-3824 (Sigma–Aldrich, САЩ), а миша B16F10 меланома е закупена от CRL-6475 (AmericanType Culture Collection, Manassas, VA, USA). Средата и реагентите, необходими за клетъчната култура, бяха закупени от Invitrogen (САЩ), Sigma (САЩ) и Nunc (САЩ). За Western blotting бяха използвани Western blot комплект и полусуха трансферна система (Bio-Rad, САЩ) и резултатите бяха потвърдени с помощта на система за анализ на изображения (Bio-Rad, САЩ). Антителата бяха закупени от Santa Cruz Biotech (САЩ). Диметил сулфоксид (DMSO) е закупен от Sigma-Aldrich (Сейнт Луис, Мисури, САЩ).

2.3. Екстракция и подготовка на пробите.

Екстракцията беше извършена с помощта на метод, публикуван по-рано с леки модификации [4]. Накратко, семена от C. japonica (500 g) се поставят в съд и се екстрахират чрез дестилация с 2000 mL вода в продължение на 4 часа. Генерираната пара се охлажда с помощта на затворена охладителна система и получената течност се събира в контейнер. - маслото изплува към горната част на дестилираната течност, докато водата се утаи в долната фаза на течността; следователно,CJS-EOсе получава чрез отстраняване на горната фаза на течността, която съдържа желаното масло, и след това се съхранява при -20 градуса до употреба. За клетъчните експерименти се използва 500 ppm изходен разтвор на CJS-EO в DMSO.

2.4. GC-MS анализ.

Летливите компоненти наCJS-EOбяха анализирани с помощта на GC-MS (Clarus 600 GC-MS, PerkinElmer, Shelton, CT, USA). Използваната колона за анализ беше PerkinElmer Elite-5 ms (3{{10}} mm × 0.3 mm × 0,25 μm). Като подвижна фаза се използва хелиев газ (1.0 mL/min). Температурата на пещта се повишава от 40 градуса до 100 градуса със скорост 10 градуса/мин и след това се поддържа за 1,0 минута. След това температурата се повишава до 230 градуса със скорост 10 градуса /min и след това се поддържа в продължение на 5 минути. -e температурата на инжектора е настроена на 200 градуса, а температурата на детектора е настроена на 250 градуса. Анализираните резултати бяха идентифицирани с помощта на програмата за търсене на масов спектър NIST (Версия 2.0 g, Национален институт за стандарти и технологии, Gaithersburg, MD, САЩ).

2.5. Клетъчна култура.

B16F10 миши меланомни клетки бяха закупени от Korea Cell Line Bank. Клетъчната култура беше извършена с помощта на DMEM (WELGENE, Daegu, Корея), допълнен с 10 процента FBS (фетален говежди серум, WEL GENE, Daegu, Корея) и 1 процент пеницилин-стрептомицин (Gibco BRL) при 37 градуса и 5 процента CO2 условия. За да се разреши феноменът на свръхплътност, причинен от пролиферацията на броя на клетките, култивираните B16F10 клетки се поддържат при подходящ брой с помощта на трипсин (Hyclone, САЩ).

2.6. Анализ на клетъчната жизнеспособност.

Меланомни клетки B16F10 се посяват при 3 × 104/mL в 6-ямкова плака за клетъчна култура.CJS-EOсе третира при подходяща концентрация (31,25 ppm до 500 ppm) на ямка. -e средата беше отстранена след 72 часа и 200 μL разтвор на 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиев бромид (MTT) (Promega, Медисън, Уисконсин, САЩ) беше лекуван. МТТ реагентът беше чисто отстранен след инкубация в 37 градуса CO2 инкубатор за 2 часа. За оцветените клетки се третират 2 mL DMSO, за да се разтвори целият формазан, генериран в ямките. Клетъчната жизнеспособност се измерва чрез абсорбция при 540 nm с ELISA четец (SpectraMax190, Molecular Devices LLC, Сан Хосе, Калифорния, САЩ).

2.7. Анализ на тирозиназната активност.

Тирозиназаактивността се оценява чрез измерване на скоростта на окисление на L-DOPA [20]. B16F10 клетки (2 × 105 клетки/ямка) се третират с -меланоцит-стимулиращ хормон (-MSH) иCJS-EOи се култивират в продължение на 3 дни. Клетките бяха събрани, беше добавен лизисен буфер (1 процент Triton X-100, 0.1 М PMSF) и след това клетките бяха лизирани чрез реагиране при 4 градуса за 1 час. -e супернатантата се събира чрез центрофугиране при 12,000×g за 15 минути. След количествено определяне на протеина в събрания супернатант се добавят 10 mmol/mL L-DOPA. След това клетките се инкубират в CO2 инкубатор при 37 градуса за 30 минути и абсорбцията при 490 nm се записва с помощта на четец на микроплаки за абсорбция (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, Сан Хосе, Калифорния, САЩ). -e получените данни бяха изчислени с помощта на следната формула: тирозиназна активност (проценти) � (OD 490 на пробата/OD490 на контролата) ×100.

2.8. Анализ на съдържанието на меланин.

B16F10 клетки се посяват в асикс-ямкова плака (2 × 105 клетки/ямка) за 12 часа след подновяване на културалната среда на клетките, третирани с различни концентрации на CJS-EO и -MSH за 48 часа и промиване с PBS два пъти [21]. B16F10 клетки бяха третирани с -MSH иCJS-EOзаедно, култивирани в продължение на 3 дни и клетките бяха събрани и промити два пъти с фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS). След това се третира с 1N NaOH, съдържащ 10 процента DMSO, и реагира при 80 градуса за 1 час. За анализ на съдържанието на меланин, абсорбцията беше измерена при 475 nmus с помощта на четец за микроплаки за абсорбция (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, Сан Хосе, Калифорния, САЩ). -e процентната стойност на третирани с CJS-EO клетки се изчислява по отношение на отрицателната контрола. В детайли, BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, САЩ) беше използван за определяне на протеиновата концентрация на всяка проба. Съдържанието на емеланин се нормализира спрямо концентрацията на клетъчен протеин (абсорбция на меланин/ug протеин).

2.9. Изследване на гените.

B16F10 меланомни клетки бяха инокулирани в 100 mm блюдо при плътност от 1 × 106 клетки в DMEM (GIBCO, САЩ), допълнен с 10 процента говежди серум и 1 процента антибиотици; впоследствие те бяха инкубирани в 5 процента CO2 при 37 градуса. След смяна на нова 10 процента DMEM среда,CJS-EOсе добавя към културална плака и се култивира за 3 d и се добавя 1 процент Amisoft като повърхностноактивно вещество в количество, съответстващо на 1/1 000 от обема на средата. След 3 d, 1 mL TRIzol (Invitrogen, САЩ) ) се добавя към клетките, за да се изследва нивото на експресия на иРНКизбелване-свързани гени и РНК беше изолирана с помощта на метода за изолиране на РНК на Invitrogen. След количествено определяне на количеството РНК при 260 nm с помощта на ултравиолетов детектор, беше извършена полимеразна верижна реакция с обратна транскрипция (RT-PCR). За RT-PCR беше използван комплект "всичко в едно" RT-PCR (Super Bio, Корея), експериментът беше извършен въз основа на инструкциите на производителя и праймерите и реакционните условия бяха както следва: последователността на актина беше 5'- GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC-3';антисенс, 5′-GGC CAT CTC TTG CTC GAA GTC-3';обратна транскрипция при 50 градуса за 30 минути; инактивирана обратна транскриптаза при 96 градуса за 3 минути, 94 градуса за 30 секунди и 62 градуса за 1 минута, последвано от 25 цикъла при 72 градуса за 1 минута. Последователността натирозиназабеше 5'-GGC CAG CTT TCA GGC AGA GGT 3'; антисенс, 5'-TGG TGC TTC ATG GGC AAA ATC-3';денатуриран при 90 градуса за 30 s; обратна транскрипция при 60 градуса за 30 минути; обратна транскриптаза, инактивирана при 94 градуса за 1 минута. След това се извършва PCR за 30 цикъла при 94 градуса за 30 секунди, 56 градуса за 30 секунди и 72 градуса за 1 минута. -e последователността на протеин 1, свързан с тирозиназа (TRP-1) е 5'-GCT GCA GGAGCC TTC TTT CTC-3'; антисенс, 5′-AAG ACG CTG CACTGC TGG TCT-3'; денатуриран при 90 градуса за 30 s; обратна транскрипция при 60 градуса за 30 минути; обратна транскриптаза, инактивирана при 94 градуса за 1 минута. След това се извършва PCR за 30 цикъла при 94 градуса за 30 s, 56 градуса за 30 s и 72 градуса за 1 min. -e последователност оттирозиназа-свързан протеин 2 was5'-TGA CCG TGA GCA ATG GCC-3'; антисенс, 5′-CGGTTG TGA CCA ATG GGT GCC-3'; обратна транскрипция при 50 градуса за 30 минути; инактивиране на обратната транскриптаза при 96 градуса за 3 минути, 94 градуса за 1 минута и 60 градуса за 1 минута. Впоследствие бяха проведени 72 PCR реакции в 25 цикъла за 1 минута.

2.10. Изследване на протеиновата експресия.

Миши B16F10меланомни клетки се инокулират в 100 mm блюдо при плътност от 5 × 105 клетки в DMEM, допълнен с 10 процента FBS и 1 процент антибиотици и след това се култивират в 5 процента CO2 при 37 градуса за 1 d. Впоследствие те бяха разменени с нов носител иCJS-EOсе третира при различни концентрации и се култивира в продължение на 3 d. Беше добавен 1 процент воден разтвор на Amisoft като повърхностно активно вещество в обем, съответстващ на 1/1000 от обема на средата. -e култивираните клетки се промиват с PBS и се прехвърлят в 1,5 mL микроепруветка и след това в буфер за разрушаване на клетки (40 mM Tris-Cl [рН 7,4], 10 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0,1 процента NP-40, 1 mM PMSF и коктейл от протеазен инхибитор). След като клетките бяха унищожени чрез добавяне, беше извършено центрофугиране при 15,000 rpm при 4 градуса за 10 минути и супернатантата беше възстановена за отделяне на протеините. -e изолираните протеини се определят количествено с помощта на метода на Sigma'sBCA и се извършва SDS-PAGE. След прехвърляне на SDS-PAGE гел към PVDF мембраната, протеинът се белязва с помощта на вторично антитяло, конюгирано с първично антитяло и пероксидаза и след това се излага на рентгенов филм с помощта на комплект за откриване Western blot (Intron, Корея). Впоследствие нивата на експресия бяха анализирани.

3. Резултати

3.1. Химичен състав на CJS-EO.

CJS-EO се получава при добив от 18 процента w/w. Химичният състав на CJS-EO е анализиран с помощта на GC-MS (Таблица 1). -e пиковете бяха разделени в GC и 17 съединения бяха идентифицирани чрез MS, което съставлява 90 процента от общата пикова площ (Таблица 1). -основните химични компоненти наCJS-EOбяха хексаметилциклотрисилоксан (42,36 процента), октаметилциклотетрасилоксан (23,28 процента), декаметилциклопентасилоксан (5,81 процента), хександиова киселина (5,56 процента) и ванилин (2,96 процента). В предишни изследвания GC-MS анализ откри хексаметилциклотрисилоксан в екстракти от листа и стъбла на Bauhinia acuminataLinn [22]. -e летливите компоненти в Moringa oleifera са съставени главно от естери, киселини, алдехиди и въглеводороди, а въглеводородите са главно хексаметилциклотрисилоксан [23]. По същия начин, в нашето проучване, хексаметилциклотрисилоксанът беше потвърден като основен химичен компонент на CJS-EO. Един от основните химични компоненти на CJS-EO, ванилин, е открит в етеричното масло от Eugenia caryophyllata и Ocimum basilicum [24], етерично масло от Hyssopus officinalis L. (Lamiaceae) [25] и етерично масло от Calea clematidea [26]. В предишни проучвания инхибиторният ефект на ванилина върху активностите на монофенолазата и дифенолазата, съдържащи се втирозиназабеше съобщено по-рано [27]. Интересно е, че цикличните летливи метилсилоксанови съединения с ниско молекулно тегло, включително хексаметилциклотрисилоксан, са използвани в различни козметични продукти и продукти за лична хигиена и много други потребителски продукти [28]. В бъдеще съединението, отговорно за инхибирането на производството на меланин и активността на тирозиназата, ще бъде извлечено и може да се използва в натуралната козметика или медицина.

3.2. Клетъчна жизнеспособност на меланомни клетки, индуцирани от CJS-EO.

Нашите резултати показват, че клетките на миши меланом B16F10, третирани с концентрация от 31,25 до 500 ppm отCJS-EOза 24 часа не предизвиква никакви промени в жизнеспособността на клетките. При концентрация от 31,25 до 500 ppm жизнеспособността на клетките беше 90 процента до 100 процента, което показва ниска цитотоксичност (Фигура 1). Следователно всички концентрации (31,25 до 500 ppm) бяха подходящи за по-нататъшна оценка на ефектите на CJS-EO върхутирозиназаактивност и синтез на меланин в клетки B16F10.

3.3. Инхибиране на вътреклетъчната тирозиназна активност на CJS-EO.

Ефектът отCJS-EOвърху окислението на L-DOPA, катализирано от тирозиназа, както и това на арбутин, добре известентирозиназаинхибитор, беше изследван. Както е показано на Фигура 2, CJS-EO андарбутинът проявява мощни инхибиторни ефекти върху L-DOPA оксидазната активност по дозозависим начин. -e резултатите показват, че CJS-EO и арбутинът показват подобни инхибиторни активности на тирозиназата. Въз основа на статистически анализ, арбутинът има значително по-висока инхибиторна активност на тирозиназата от CJS-EO при 125 и 500 ppm. Въпреки това, при 31,25, 32,50 и 250 ррт, подобни инхибиторни ефекти (незначителни) са посочени върху тирозиназата, когато се сравняват с тирозиназната инхибиторна активност на CJS-EO върху добре известния тирозиназен инхибитор арбутин.

3.4. Ефект на CJS-EO върху съдържанието на меланин в B16F10 клетки.

За да се потвърди дали CJS-EO допринася за инхибирането на производството на меланин, разликата в секрецията на меланин след третиране с всяка концентрация на CJS-EO беше анализирана в среда, насърчаваща производството на меланин чрез -MSH стимулация.CJS-EOсе третира при концентрации от 31,25, 62,5, 125, 250 и 500 ppm, по същия начин както затирозиназадейност. CJS-EO значително инхибира меланогенезата в групата, третирана с -MSH, и значително количество меланин е потиснато (Фигура 3(b)). Това е подобно на наблюдението в положителната контрола, арбутин (Фигура 3(a)). По-специално, при най-ниската концентрация от 32,25 ppm в третираната група, съдържанието на меланин намалява значително в сравнение с нетретираната група (0 ppm). Следователно беше направено заключението, че CJS EO ефективно инхибира синтеза или секрецията на меланинин B16F10 клетки. В групите, третирани с 31,25, 62,5, 125, 250 и 500 ppmCJS-EO, съдържанието на меланин намалява съответно с 1,1, 1,5, 2,6, 2,7 и 4,3 пъти в сравнение с нетретираната група, което показва изразено инхибиране на секрецията на меланин ефект. -e тестът за цитотоксичност, тестът за инхибиране на тирозиназата и резултатите от теста за съдържанието на меланин показват, че CJS-EO е изключително ценен като естествен материал визбелванекозметика.

3.5. Генетично изследване.

За определяне на гена вCJS-EOкойто инхибира биосинтезата на меланин чрез повлияване на експресията на гени, участващи в пътя на биосинтеза на меланин, беше извършен експеримент с помощта на метода RT-PCR и резултатите са показани на фигура 4. -MSH беше използван като отрицателна контрола и CJS-EO показа инхибиторни ефекти върху експресията на тирозиназа, TRP-1 и TRP-2 при всички концентрации. По-специално, CJS-EO инхибира експресията на тирозиназа с повече от 50 процента при 125 ppm или по-висока. Ние открихме, че инхибиторната ефикасност натирозиназа, експресията на TRP-1 и TRP-2 намалява с нарастването на концентрацията на CJS EO. Резултатите от този експеримент предполагат, че инхибиторният ефект на меланогенезата на CJS-EO е допринесъл за инхибирането на експресията на тирозиназа, TRP-1 и TRP-2.

3.6. Изследване на протеиновата експресия.

Ефектът на CJS-EO върху експресията на протеини, участващи в биосинтезата на меланин, беше потвърден с помощта на Western blotting и резултатите са показани на Фигура 5. Когато CJS-EO беше сравнен с групата, третирана с -MSH, която беше отрицателна контролна група, беше потвърди товаCJS-EOпроявява инхибиторен ефект; всъщност, CJS-EO проявява най-видния инхибиторен ефект върху тирозиназата и TRP-2. -e степента на инхибиране е 46,6 процента и 40,7 процента при 500 ppm от тирозиназа и TRP-2, съответно, в сравнение с групата, лекувана с -MSH. Въпреки че TRP-1показва най-слаб инхибиторен ефект, той показва значително намаление в сравнение с групата, лекувана с -MSH. Следователно протеиновият анализ показа същата тенденция като генния анализ и беше потвърдено, че CJS-EO стимулиратирозиназа, TRP-1 и TRP-2 за предизвикване на намаляване на меланина.

4. Обсъждане

Тирозиназае ензим, участващ в производството на меланин чрез ензимен окислителен път, който определя цвета на кожата, косата и очите, както и покафеняването на определени храни [29]. Химически агенти, които демонстрират антитирозиназна активност, са използвани в клиничната медицина за лечение на дерматологични заболявания, свързани с хиперпигментация на меланин [30]. Производството на меланин може да допринесе за някои от хистопатологичните характеристики, изключителни за злокачествения рак [31]. Следователно, антитирозиназните вещества могат да улеснят лечението на рак на кожата. През последните години използването на естествени продукти вместо химични или синтетични съединения придобива все по-голям интерес, тъй като те са по-икономични, екологични и безопасни [32]. Освен това изследванията и развитието на екологични технологии и евтини суровини са важни за индустрията, както и за подобряване на използването на растителни ресурси. Напоследък се съобщава за антитирозиназната активност на някои растения [33]. Въпреки това данните, отнасящи се до етеричните масла от естествени растения, са оскъдни. Следователно идентифицирането на растителни етерични масла, които притежават висока антитирозиназна активност, предизвика значителен интерес. -е Етиологията на пигментацията не е добре разбрана. Биосинтезата на меланин се катализира от специфични за меланоцитите ензими като TRP-1 и TRP-2 [34].Тирозиназае жизненоважен за биосинтезата на меланин в меланоцитите и е известен от много десетилетия [34]. Следователно тирозиназата е важен показател за лечение на пигментация. В нашето проучване CJS-EO намалява синтеза на меланин и повлиява антитирозиназната активност; следователно заключихме, че антимеланогенезата от CJS-EO може да бъде свързана с други ензими (TRP-1 и TRP-2). Съобщава се, че летливите вещества проявяват висока антиоксидантна активност [35]. Като летливи, CJS-EO се характеризира с остра миризма. Синтезира се от растенията като вторични метаболити и се използва широко поради своите бактерицидни, вирулицидни, фунгицидни, противоракови, антиоксидантни и антидиабетни действия [36]. -e CJS-EO, изследван в това проучване, се състои основно от хексаметилциклотрисилоксан, който съставлява 42,36 процента от общото химично съдържание. Доказано е, че Toxicodendron vernicifluum, съдържащ хексаметилциклотрисилоксан, проявява различни биологични и фармакологични активности, включително централна, антимикробна и антитуморна активност [37]. В нашето изследване високите концентрации на CJS-EO показват само леки цитотоксични ефекти върху меланоцитите. Следователно се наблюдава инхибиторният ефект на CJS-EO върху -MSH-индуцираното размножаване на B16F10 клетки. -e-резултатите показват, че предварителната обработка с CJS-EO намалява -MSH-индуцираното клетъчно размножаване по дозозависим начин (Фигура 3) и тези резултати са сходни с purearbutin, използван като положителна контрола. В повечето естествени етерични масла, използвани в традиционната медицина, се използват екстракти, съдържащи сложни съединения, вместо чисти съединения. Тези естествени етерични масла обикновено не съдържат летливи съединения със силно специфична биоактивност, а летливи съединения с по-широки взаимодействия [38]. Следователно е трудно CJS-EO, който съдържа много компоненти, да има по-висок антимеланогенезен ефект от чистия арбутин. В бъдеще е необходимо да се отделят летливите компоненти, съдържащи се вCJS-EOи изследване на антимеланогенезния ефект върху отделения единичен компонент. Въз основа на нашите резултати можем да заключим условно, че CJS-EO може да инхибира меланоцитите от вредни фактори като TRP-1 (Фигури 4 и 5).ThЕто защо, ние предположихме, че хексаметилциклотрисилоксанът е основното биологично активно съединение в CJS-EO. Съществуващи проучвания относноизбелванеимуществото на CJS-EO е недостатъчно; следователно може да се използва като основна информация в бъдещи проучвания, отнасящи се до основните съставки, които проявяват избелваща ефикасност.

5. Изводи

Доколкото ни е известно, това е първото проучване, което съобщава за ефикасността на CJS-EO при инхибиране на производството на меланин в B16F10меланомни клетки. Нашите наблюдения показват, че CJS-EO инхибира -MSH-индуцираната меланогенеза чрезтирозиназаинактивиране и едновременното потискане на експресията на протеини, участващи в биосинтезата на меланин в B16F10 меланомни клетки.CJS-EOе известно, че е безопасно и ние потвърдихме, че е нецитотоксично в това проучване.Thследователно, CJS-EO може потенциално да се използва като ефективен коженизбелванеагент за бъдещото развитие на ароматерапия, базирана на допълнителна и алтернативна медицина.