Благоприятен ефект на Thymelaea Hirsuta върху дегенерация на панкреатични островчета, бъбречна фиброза и чернодробни увреждания

Санае Абид, Хасан Мехфифи, Абдеррахим Зийят, Абдехалек Легсиер, Мохамед Азиз и Мохамед Бнухам

Лаборатория по биоресурси, биотехнологии, етнофармакология и здраве, Катедра по биология, Факултет по природни науки,

University Mohamed Ist, Bd: Mohamed VI, BP: 717, Oujda 60000, Мароко

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Обективен. В Мароко плюс ymelaea hirsute (T. hirsute) (Thymelaeacea) е лечебно растение, широко използвано за лечение и профилактика на диабет. Настоящото проучване има за цел да оцени средносрочния антидиабетен ефект на водния екстракт (AqTh) и етилацетатната фракция (EaTh) на Th и да проучи техния предполагаем защитен ефект върху дегенерацията на панкреатични острови, диабетната нефропатия и увреждането на черния дроб при стрептозотоцин (STZ) - плъхове с диабет. Методи. Експериментален диабет при плъхове се индуцира чрез еднократно интраперитонеално инжектиране на 50 mg/kg STZ. По време на периода на лечение (4 седмици), 200 mg/kg AqTh и 50 mg/kg EaTh се прилагат перорално ежедневно на STZ-диабетни плъхове. Изследвани са група параметри, включително кръвна захар на гладно, биохимични параметри и инхибиране на чревната глюкозидаза. Освен това хистологичното изследване на панкреаса,бъбрек, черния дроб и аортата също беше реализиран. Резултати. В края на лечението и AqTh, и EaTh са нормализирали кръвната глюкоза на гладно съответно до 1,08 и 1,25 g/l. AqTh също намалява креатинина в урината и HbAc1. EaTh показва инхибиторна активност срещу чревна -глюкозидаза, докато AqTh няма този инхибиторен ефект. Освен това, оцветяването с хематоксилин и еозин на панкреаса показа, че AqTh или EaTh предотвратява дегенерацията на панкреасните островни клетки. Като същотобъбрек, трихромното оцветяване на Masson показва значително предотвратяване набъбречнафиброза при плъхове с диабет, третирани с AqTh или EaTh. От друга страна, чернодробното оцветяване с хематоксилин и еозин показва, че AqTh и EaTh предотвратяват увреждане на черния дроб. Заключение. Ние заключаваме, че средносрочното приложение на AqTh и EaTh упражнява значителен антихипергликемичен ефект при STZ-диабетни плъхове, вероятно чрез инхибиране на чревната -глюкозидаза и защита срещу увреждане на панкреатичните островни клетки. Освен това лечението с AqTh и EaTh предотвратява нефропатия и чернодробни усложнения при STZ-диабетни плъхове.

Cistanche herbaможе да лекувабъбречна фиброза

Въведение

Захарният диабет е най-често срещаното ендокринно заболяване. Честотата на това заболяване се увеличава с тревожна скорост (4-5 процента) [1]. Нелекуваният или неконтролиран инсулинонезависим диабет тип 2 (DM2) може да причини няколко усложнения като сърдечно-съдови заболявания и диабетна нефропатия и може да доведе до инсулинозависим диабет тип 1 (DM1).

Диабетната нефропатия е едно от важните усложнения на диабета и е основната причина за увеличения брой пациенти с краен стадий.бъбречназаболяване (ESRD) [2], които изискватбъбрекдиализа или абъбректрансплантация, за да може пациентът да живее.

Следователно управлението на диабета става много важно, за да се избегнат неговите сериозни метаболитни последици като нефропатия.

Днес лечението на диабета включва контрол на диетата, упражнения, употреба на инсулин и/или хипогликемични лекарства, както и използването на лечебни растения като допълнителна алтернативна медицина. Няколко лечебни растения са показали решаващ антихипергликемичен ефект с минимални странични ефекти [3–5], Поради тази причина Световната здравна организация (СЗО) обърна голямо внимание на рационалното използване на традиционни и природни лекарства за лечение на диабет [6].

В Мароко повече от 100 лечебни растения се използват за лечение и профилактика на диабет [7–10]. Антихипергликемичната и антидиабетната активност на множество екстракти и продукти от тези растения (Ammi visnaga Lam., Globularia alum, Nigella sativa и Olea europaea var.) са потвърдени [9].

T. hirsuta е лечебно растение, традиционно използвано за превенция и лечение на диабет в североизточно Мароко [8]. Предишни фармакологични проучвания са показали острия антихипергликемичен ефект на AqTh и EaTh [11–13]. Въпреки това, средносрочният антидиабетен ефект на тези два екстракта от T. hirsuta все още не е установен. Следователно, целта на настоящото изследване е да оцени за първи път средносрочната антидиабетна активност на AqTh и EaTh и да изследва техния предполагаем защитен ефект върху дегенерация на панкреатични острови, диабетна нефропатия, чернодробна стеатоза и аортни усложнения при STZ- плъхове с индуциран диабет.

2. Материали и методи

2.1.Химикали и реактиви.

Glucose Autokit е закупен от BioSystems (Испания). STZ е закупен от Sigma Aldrich (Китай). Акарбозата (Glucor 50) е получена от Bayer Schering Pharma (Казабланка, Мароко). Захарозата е закупена от Prolabo (група Rhone-Poulenc) (ЕИО). Пентобарбиталът е получен от CEVA Sante Animale (LaBallasti`ere). Антрон (C14H10O) е закупен от Organics. Парафифиновият восък е закупен от FlukaChemika (Швейцария). Еозин (C20H6Br4Na2O5) беше получен от Riedel-de Haen (Seelze), а хематоксилинът беше получен от BDH Chemicals Ltd. (Poole England). Фуксиновата киселина е закупена от Acros Organics (Ню Джърси, САЩ), фосфомолибденовата киселина е закупена от Sigma-Aldrich (PF, Steinheim), а светлозелената е закупена от Sigma-Aldrich (MO, САЩ).

2.2. Животни.

Плъхове Wistar от двата пола, първоначално тежащи 150–250 g (8-9 седмици), бяха получени от къщата за животни на Департамента по биология на Факултета по природни науки (Oujda, Мароко). Проучването е проведено в съответствие с „Принципите за грижа за лабораторните животни“ [14]. Те бяха поддържани при стандартни лабораторни условия (цикъл светлина/тъмнина от 12/12 часа и температура от 23 плюс 2 градуса с 3 плъха на клетка с достъп до храна и вода. За събиране на урина и определяне на приема на вода и храна, плъховете бяха държани в метаболитни клетки.

2.3. Индуциране на диабет.

След 14 часа гладуване, на плъховете се инжектира интраперитонеално единична доза STZ (50 mg/kg телесно тегло), приготвена в пресен и студен натриев цитратен буфер (0.1 М лимонена киселина и 0,1 М тринатриев цитрат дихидрат) при PH4,5, за индуциране на диабет [15]. След 1 седмица плъхове с диапазон на кръвната захар на гладно от 1,26–2 g/l се считат за диабет тип 2 и те са включени в проучването.

2.4. Приготвяне на растителна проба.

T. hirsuta е закупен от традиционен пазар в Oujda (Източно Мароко) и е удостоверен от ботаник в Департамента по биология (Факултет по природни науки, Oujda, Мароко), а екземпляр от ваучер (HUMPOM137) е депозиран в заводската част на университетът Herbarium Mohamed Premier от Ужда, Мароко (HUMPO).

Надземните части на T. hirsuta първо бяха почистени и измити с вода и след това изсушени при 40 градуса една нощ във фурната. За да се приготви AqTh, 140 g надземни части на T. hirsuta се вливат в 2 L дестилирана вода в продължение на 3 часа. Добивът на AqTh беше 4,53 процента. EaTh беше приготвен, както е описано в нашето предишно проучване [13].

2.5. Експериментален дизайн.

Плъховете бяха разделени на случаен принцип в пет групи (5 или 6 плъха на група): нормални контролни плъхове (приложени само с дестилирана вода), диабетни контролни плъхове (приложени само с дестилирана вода), диабетни плъхове, третирани с 10 mg /kg телесно тегло акарбоза (стандартно хипогликемично лекарство), диабетни плъхове, третирани с 50 mg/kg EaTh, и диабетни плъхове, третирани с 200 mg/kg телесно тегло AqTh. Оптималните дози бяха определени въз основа на нашите предишни проучвания [13] и от предварителни тестове. Всички плъхове са третирани веднъж дневно в продължение на 4 седмици. Телесното тегло се записва всеки ден. Приемът на вода и храна и обемът на урината са наблюдавани преди и след лечението, а глюкозурията е измерена в края на лечението. Кръвната захар на гладно е изследвана преди лечението (седмица 0) и след 1, 2, 3 и 4 седмици лечение. Инхибирането на -глюкозидазата in vivo беше изследвано в деня преди плъховете да бъдат умъртвени. След 4 седмици лечение, всички животни бяха анестезирани с 50 mg/kg пентобарбитал след 14 часа гладуване. След това кръвта се събира чрез сърдечна пункция и веднага се центрофугира при 3000 обиколки/мин за 10 минути. *e серумът след това се съхранява при -20 градуса до биохимичен анализ (общ холестерол и триглицериди). Theбъбрек, черен дроб, аорта, сърце и панкреас бяха отстранени, претеглени (бъбрекчерен дроб и сърце) и след това фиксирани (бъбреци, черен дроб, аорта и панкреас) в 10 процента формалин за хистологично изследване. Проба от черен дроб се съхранява при -20 градуса за анализ на съдържанието на гликоген.

цистахзабъбречна функция

2.6. Оценка на кръвната захар на гладно.

По време на периода на лечение, гликемията на гладно се определя количествено всяка седмица. След 14 часа гладуване, кръвта се отстранява от вените на опашката под лека етерна анестезия, като се използват микрокапиляри. След това се центрофугира при 5000 × g за 10 минути и се оценява гликемията в серума, като се използва търговски комплект за глюкоза (BioSystems, Испания), базиран на метода на глюкозооксидаза пероксидаза [16].

2.7. -Инхибиране на глюкозидаза, in vivo изследване.

В деня преди умъртвяването, плъховете, лишени от храна в продължение на 14 часа, бяха използвани за наблюдение на инхибирането на -глюкозидаза, in vivo. 30 минути преди орално натоварване със захароза (2 g/kg), на всяка група е приложена дозата, съответстваща на нейното лечение. Кръвта се събира от вената на опашката, като се използват микрокапиляри, точно преди прилагането на тестовата доза (-30 минути), непосредствено преди натоварване със захароза (0 минути) и на 30, 60 и 120 минути след натоварване със захароза. След центрофугиране при 5000 × g/10 минути, нивото на плазмената глюкоза се определя чрез метода на глюкозооксидаза пероксидаза [17].

2.8. Екстракция и определяне на чернодробен гликоген.

Претеглени проби от чернодробни тъкани ({{0}}.3–0.5 g) от всички групи бяха използвани за извличане на гликоген съгласно Ong и Khoo [18]. Пробите от черен дроб първо се натрошават, хомогенизират се с 2 ml 30 процента калиев хидроксид (KOH) и се варят при 100 градуса /30 минути. След това, за утаяване на гликоген, сместа се третира два пъти с 4 ml 95 процента етанол и всеки път сместа се съхранява при 4 градуса /30 минути. След центрофугиране при 3000 тура/мин/15 минути, пелетата се промива с 8 ml 95 процента етанол и след това се центрофугира при 3000 тура/мин/15 минути. Полученият гликоген се разтваря в 1 ml дестилирана вода. Концентрацията на гликоген се наблюдава с помощта на антронов реагент. Оптичната плътност се отчита при 625 nm.

2.9. Биохимични анализи.

Глюкозурията се измерва с търговски Autokit (BioSystems, Испания) на базата на метода на глюкозооксидаза пероксидаза. Гликозилираният хемоглобин (HbA1c) беше оценен с помощта на търговски комплект (Cal-tech diagnostics, INC, САЩ), а холестеролът беше определен с помощта на търговски комплекти за анализ (SGM-Italia, Roma, Италия). Триглицеридите и креатининът в урината бяха оценени с помощта на търговски комплекти за анализ (Bio Sud Diagnostic SRL, Ricerca, Италия).

2.10. Хистопатология.

След период от 3 ± 1 дни на фиксиране в 10 процента формалин, панкреасът,бъбрек, черния дроб и тъканите на аортата се промиват с дестилирана вода в продължение на 20 минути. След това те бяха дехидратирани с увеличаване на съдържанието на етанол (30 процента за 30 минути, 70 процента за 30 минути, 95 процента за 30 минути и 2 × 100 процента за 60 минути, съответно). След етап на просветление в толуен (2 × 120 минути), органите бяха включени от сместа парафинтолуен (1V/1V) за 90 минути, след това от парафин (2 × 120 минути). Накрая, органите бяха вградени в парафин преди нарязване на 7 μm (микротом Leitz 1512). Срезовете на панкреаса и черния дроб се оцветяват с хематоксилин и еозин.Бъбреки срезовете на аортата бяха оцветени с трихром на Masson, за да се покаже фиброза/колаген.

Преди оцветяване с хематоксилин и еозин, срезовете се депарафинизират и се инкубират в толуен (2 × 5 минути), след това се хидратират чрез намаляване на заглавието на етанол (съответно 100 процента, 95 процента и 70 процента) за 5 минути. След това, за оцветяване с хематоксилин и еозин, след 20 минути промиване, клетъчните ядра се оцветяват с потапяне в хематоксилин за 5 минути, последвано от 15 минути промиване с вода. За оцветяване на цитоплазмата срезовете се потапят в 1% еозин за 5 минути, след което се промиват за 2 минути. След оцветяване срезовете се дехидратират със 100 процента етанол (2 × 1/2 минути) и толуен (2 × 2 минути). Трихромно оцветяване на Masson след хидратация,бъбреки срезовете на аортата се фиксират отново в разтвор на Bouin за 1 час/56 градуса. След това, след 10 минути промиване, срезовете се оцветяват в железен хематоксилин на Weigert за 2 минути. След 10 минути изплакване, срезовете се потапят във фуксинова киселина за 3 минути и след 10 минути промиване, те се диференцират с фосфомолибденова киселина за 15 минути. За оцветяване на колаген срезовете се прехвърлят директно в светлозелено за 15 минути. След 2 min диференциация в 1% оцетна киселина, срезовете се дехидратират през 95% и 100% етанол за 1 min всеки и след това се изчистват в толуен (2 × 1 min) [19–21].

И накрая, секциите, оцветени върху ламели, бяха монтирани от първостепенно значение. След изсушаване, микроскопското наблюдение беше направено с помощта на 40x обективна очна система на светлинен микроскоп OlympusTokyo (Япония).

За да се определи ефектът на лекарството върху тъканта на панкреаса, бяха изчислени броят и диаметърът на панкреасните островни клетки. За количествено определяне на колаген вбъбрекраздели, резултатите бяха оценени от нула до три (0: без колаген, 1: слаб колаген, 2: умерен колаген и 3: силен колаген) [22]. Ефектът от лечението върху аортата беше оценен чрез измерване на диаметъра на аортата, а увреждането на черния дроб беше изяснено чрез развитието на липидни капчици.

2.11. Статистически анализ.

Всички стойности бяха изразени като средно ± SEM. Статистическият анализ и сравнението на средните стойности бяха извършени с помощта на несдвоения тест на Student за сравняване на средните стойности на две групи и сдвоения тест на Student за сравняване на две средни стойности в една и съща група. За определяне на защитния ефект на лекарството върхубъбреции черен дроб, беше използван тестът хи-квадрат. p стойности<0.05 were="" considered="">

3. Резултати

3.1. Ефект на лекарственото лечение върху кръвната захар на гладно при STZ-

Плъхове с индуциран диабет. При нелекувани диабетни контролни плъхове се наблюдава значително повишаване на кръвната захар на гладно в сравнение с нормалните контролни плъхове. Лечението с 200 mg/kg AqTh понижава нивото на кръвната захар от 1-вата седмица на прилагане и този ефект е значим на 3-та (p < 0.001)="" и="" 4-та="" седмица="" седмица="" (p=""><0,05) в="" сравнение="" с="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет.="" лечението="" с="" 50="" mg/kg="" eath="" намалява="" хипергликемията="" от="" 2-та="" седмица="" и="" този="" ефект="" е="" значителен="" (p=""><0,05) през="" 3-та="" и="" 4-та="" седмица.="" на="" 2-ра,="" 3-та="" и="" 4-та="" седмица="" ефектът="" на="" ea*="" е="" статистически="" подобен="" на="" този="" от="" 10="" mg/kg="" акарбоза="" (фигура="">

3.2. Ефект на лекарствата върху -глюкозидазната активност, in vivo изследване.

При нормални контролни плъхове кръвната глюкоза се повишава до 1,48 g/l,30 min след зареждане със захароза и след това се връща към нормалната стойност на 120 min, докато при нелекувани плъхове с диабет гликемията е била повишено до 2,76 g/l при 30 min натоварване със захароза, за да се достигне 2,85 g/l при 120 min. 50 mg/kg EaTh значително (p <0,05) предотвратява="" хипергликемията,="" предизвикана="" от="" натоварване="" със="" захароза="" на="" 30="" и="" 60="" min="" в="" сравнение="" с="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет.="" в="" групата="" с="" 200="" mg/kg="" aqth="" е="" показан="" антихипергликемичен="" ефект.="" нивата="" на="" кръвната="" захар="" достигат="" 2,63="" g/l="" и="" 2,70="" g/l="" съответно="" на="" 30="" и="" 60="" min="" и="" намаляват="" до="" 2,21="" g/l="" на="" 120="" min.="" 10="" mg/kg="" акарбоза="" значително="" (p=""><0,01) предотвратява="" хипергликемията,="" предизвикана="" от="" натоварване="" със="" захароза="" на="" 30,="" 60="" и="" 120="" min="" в="" сравнение="" с="" диабетна="" контрола.="" ефектът="" на="" акарбозата="" е="" статистически="" подобен="" на="" eaththeffffect="" (фигура="">

3.3. Ефект на лекарството

Лечение на телесно тегло, прием на храна и вода. Наддаването на телесно тегло при нелекувани плъхове с диабет е значително (p < {{0}}.05)="" намалено="" в="" сравнение="" с="" нормалните="" плъхове.="" aqth="" значително="" (p="">< 0.05)="" е="" предотвратил="" спад="" на="" телесното="" тегло="" в="" сравнение="" с="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет.="" плъховете,="" третирани="" с="" eath="" и="" акарбоза,="" не="" променят="" значително="" (p=""> 0.05) наддаването на телесно тегло в сравнение с нелекуваните плъхове с диабет. В края на лечението приемът на вода не се е променил при нелекувани плъхове с диабет, AqTh, EaTh и групата с акарбоза в сравнение с данните преди лечението, докато приемът на храна е значително увеличен при плъхове с диабет и плъхове, третирани с AqTh, EaTh и акарбоза (p <0,05, p=""><0,05, p=""><0,05, a="" dp=""><0,01, съответно)="" в="" сравнение="" с="" преди="" прилагането="" на="" лекарството="" (таблица="">

3.4. Ефект на лекарственото лечение върху параметрите на урината.

След {{0}}седмичен период на лечение креатининът в урината и глюкозурията са значително повишени (p < 0.05="" и="" p="">< 0,001,="" съответно)="" при="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет="" в="" сравнение="" с="" нормални="" плъхове.="" пероралното="" приложение="" на="" aqth="" е="" намалило="" значително="" (p=""><0,05) креатинина="" в="" урината="" в="" сравнение="" с="" нелекувани="" диабетни="" плъхове,="" но="" не="" е="" наблюдавана="" значителна="" разлика="" в="" глюкозурията="" в="" сравнение="" с="" нелекувани="" диабетни="" плъхове.="" лечението="" с="" eath="" е="" предотвратило="" повишаване="" на="" креатинина="" в="" урината="" в="" сравнение="" с="" нормални="" плъхове;="" въпреки="" това,="" eath="" не="" променя="" значително="" глюкозурията.="" от="" друга="" страна,="" ефектът="" на="" aqth="" и="" eath="" върху="" креатинина="" в="" урината="" и="" глюкозурията="" е="" статистически="" сходен="" с="" този="" на="" 10="" mg/kg="" акарбоза.="" и="" накрая,="" няма="" значителна="" разлика="" в="" обема="" на="" урината="" при="" сравняване="" на="" данни="" преди="" и="" след="" лечение="" с="" aqth,="" eath="" или="" акарбоза="" (таблица="">

3.5. Ефект на лекарственото лечение върху биохимичните параметри.

След {{0}}седмичен период на лечение, HbA1c е бил значително повишен (p < 0.05)="" при="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет,="" в="" сравнение="" с="" нормални="" плъхове.="" пероралното="" приложение="" на="" aqth="" е="" предотвратило="" повишаване="" на="" hba1c="" в="" сравнение="" с="" нормални="" плъхове.="" в="" края="" на="" периода="" на="" лечение,="" количеството="" на="" чернодробен="" гликоген="" е="" значително="" намалено="" (p=""><0,05) при="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет="" в="" сравнение="" с="" нормални="" плъхове.="" лечението="" с="" aq*="" и="" ea*="" не="" е="" показало="" значителен="" ефект="" върху="" чернодробния="" гликоген="" в="" сравнение="" с="" нелекуваните="" диабетни="" плъхове,="" докато="" лечението="" с="" акарбоза="" не="" променя="" количеството="" на="" чернодробния="" гликоген="" в="" сравнение="" с="" нормалните="" плъхове.="" и="" накрая,="" резултатите="" за="" общия="" холестерол="" и="" триглицеридите="" показват,="" че="" няма="" значителна="" промяна="" след="" лечение="" с="" aqth,="" eath="" или="" акарбоза="" в="" сравнение="" с="" нормални="" и="" диабетни="" плъхове="" (таблица="">

3.6. Ефект на лекарственото лечение върху теглото на органа.

Таблица 4 показва черен дроб,бъбрек, и сърдечно тегло в края на периода на лечение. Резултатите сочат товабъбректеглото е значително увеличено при нелекувани плъхове с диабет в сравнение с нормалните плъхове. Лечението с 200 mg/kg AqTh или 50 mg/kg EaTh не променя теглото на черния дроб, бъбреците и сърцето в сравнение с нелекуваните диабетни плъхове, докато има значително повишаване на теглото на черния дроб и сърцето на третирани с акарбоза плъхове в сравнение с нетретирани диабетни плъхове .

3.7. Хистопатологично наблюдение

3.7.1. Промени в панкреаса.

Светлинно микроскопско наблюдение на панкреатични островни клетки от нормални плъхове показва нормален хистологичен вид с голям диаметър и висока плътност на гранулиране (Фигура 3). При нелекувани плъхове с диабет значително намаляване на диаметъра и броя на островните клетки (p < 0.001="" и="" p="">< 0.01,="" съответно="" )="" бе="" наблюдаван.="" третирането="" с="" 200="" mg/kg="" aqth="" значително="" е="" предотвратило="" намаляването="" на="" диаметъра="" и="" броя="" на="" клетките="" на="" лангерхансовия="" остров="" (p=""><0,01 и="" p=""><0,05, съответно).="" в="" същото="" време="" 50="" mg/kg="" eath="" има="" значително="" (p=""><0,05) защитен="" диаметър="" и="" брой="" клетки="" срещу="" намаляване.="" третирането="" с="" 10="" mg/kg="" акарбоза="" е="" предотвратило="" значително="" (р=""><0,05) намаляването="" на="" броя="" на="" островните="">

3.7.2. Промени в бъбреците.

Оцветяването на Masson маркира в сини/зелени колагенови влакна, в кафяви ядра, в цитоплазма на червени мускулни влакна и в оранжеви кръвни клетки. Минимален тубулоинтерстициален колаген се наблюдава в нормалната група (Фигура 4). Значително увеличение (p < 0.01)="" на="" тубулоинтерстициалния="" колаген="" е="" установено="" при="" нелекувани="" плъхове="" с="" диабет.="" лечение="" с="" 20{{10}}="" mg/kg="" aqth="" и="" 50="" mg/kg="" eath="" са="" предотвратили="" значително="" (p="">< 0,001="" и="" p="">< 0,05,="" съответно)="" тубулоинтерстициалния="" колаген="" в="" сравнение="" с="" нелекувани="" диабетни="" плъхове,="" но="" лечението="" с="" 10="" mg/kg="" акарбоза="" не="" променя="" значително="" (p=""> 0,05) този тубулоинтерстициален колаген. От друга страна, гломерулен колаген се наблюдава при 33,3% от нормалните плъхове. При плъхове с диабет гломерулният колаген е открит при всички плъхове (100 процента). Лечението с 200 mg/kg AqTh е намалило значително (p < 0,05)="" гломерулния="" колаген="" до="" 40="" процента,="" но="" ea*="" и="" акарбозата="" не="" са="" (фигура="">

3.7.3. Промени в черния дроб.

Изследването на срезове, оцветени с хематоксилин и еозин, показва, че нормалните плъхове имат нормален хистологичен вид. При нелекувани плъхове с диабет се наблюдава важна дегенеративна промяна в чернодробната тъкан. Липидни капчици се появяват при всички плъхове (100 процента). Третирането с 200 mg/kg AqTh и 50 mg/kg EaTh значително (р <0,05) намалява="" този="" ефект.="" процентът="" на="" защита="" беше="" съответно="" 60="" и="" 50="" процента.="" обаче="" лечението="" с="" 10="" mg/kg="" акарбоза="" не="" намалява="" това="" чернодробно="" увреждане="" (фигура="">

3.7.4. Промени в аортата.

Светлинно микроскопско наблюдение показва, че нелекуваните диабетни плъхове имат нормален диаметър на аортата в сравнение с нормалните плъхове. Третирането с 200 mg/kg AqTh, 50 mg/kg EaTh или 10 mg/kg акарбоза не променя значително диаметъра на аортата в сравнение с нормални и диабетни плъхове (Фигура 6).

4. Обсъждане

В това проучване ние демонстрирахме за първи път антидиабетния ефект на средносрочното приложение на T. hirsuta (4 седмици) и неговата превенция набъбречнаи чернодробни усложнения при диабетни плъхове, предизвикани от STZ.

Нашите резултати показват, че средносрочното лечение с 200 mg/kg AqTh или 50 mg/kg EaTh намалява значително кръвната глюкоза на гладно при плъхове с диабет, третирани със STZ, в сравнение с нелекувани с STZ плъхове с диабет. EaTh показва подобна инхибиторна активност на -глюкозидаза в сравнение с 10 mg/kg акарбоза, но AqTh не инхибира активността на -глюкозидаза след натоварване със захароза. Тези резултати показват, че средносрочният антихипергликемичен ефект на Ea* е свързан с интестиналното инхибиране на -глюкозидазата. И така, това откритие потвърждава нашите предишни резултати [13], докато антидиабетният ефект на Aq* изглежда е свързан с друг механизъм, различен от пътя на -глюкозидазата. В допълнение, ние наблюдавахме намаляване на нивата на HbAc1 при плъхове с диабет, третирани с Aq*, докато лечението с Ea* не промени нивата на HbAc1 в сравнение с нетретирани плъхове с диабет. Това обяснява защо β-глюкозидазните инхибитори често се предписват с други антидиабетни лекарства при лечение на диабет.

Хистопатологично изследване на участъци от панкреаса показа, че прилагането на AqTh и EaTh в продължение на 4 седмици значително увеличава диаметъра и броя на клетките в Лангерхансовите острови. Подобни проучвания са доказали, че много растителни екстракти значително възстановяват диаметъра на островчетата и броя на клетките при плъхове с диабет [23–25].

Следователно вероятният механизъм на действие на AqTh при контролиране на нивото на кръвната глюкоза може да бъде усилването на секрецията на инсулин от клетките на панкреаса. Както при други възможни механизми, AqTh може да сенсибилизира инсулиновия рецептор към инсулин или да стимулира стволовите клетки на Лангерхансовите острови в панкреаса на STZ-индуцирани диабетни плъхове [25].

Следователно, ние заключаваме, че антихипергликемичните фитохимични съединения, присъстващи в AqTh, са различни от тези на EaTh.

Много проучвания доказват, че вторичните метаболити като флавоноиди, танини и терпеноиди имат потенциални инхибиторни ефекти върху алфа-глюкозидазата [26–28]. В предишно проучване на нашия екип, богата на полифенол фракция на T. hirsutahas демонстрира мощен антидиабетичен ефект при плъхове с диабет[29]. По този начин инхибиторното действие на -глюкозидазата на EaTh вероятно се дължи на наличието на флавоноиди.

Добре известно е, че диабетът е свързан с макроваскуларни и микроваскуларни усложнения като нефропатия. Статистиката показва, че от всички пациенти на диализа диабетиците представляват 20,6% през 2001 г. срещу 13,1% през 1995 г. и 6,9% през 1989 г. Смъртността на пациентите на диализа е незначително по-висока при диабетиците, отколкото при недиабетните (241,4/1000 спрямо 153,99/1000 човеко-години) [30]. Средната преживяемост на диабет тип 2 при навлизане на диализа е приблизително 3 години [31, 32]. Диабетната нефропатия се характеризира с натрупване на някои протеини като колаген в гломерулния мезангиум и в тубулоинтерстициалното пространство, което води добъбречнафиброза и т.нбъбречнанеуспех [33–35]. В това проучване ние показахме, че средносрочното перорално приложение на 200 mg/kg AqTh или 50 mg/kg EaTh предотвратява повишаването на креатинина в урината и тубулоинтерстициалния бъбречен колаген в сравнение с нелекувани плъхове с диабет, както е показано вбъбрекхистопатологични резултати. Тези открития показват, че AqTh и EaTh могат да предпазват от бъбречна фиброза чрез инхибиране на натрупването на протеини в извънклетъчния матрикс (ECM). Тези резултати са подобни на други етнофармакологични проучвания, които показват, че чесънът и Sclerocaryabirrea подобряват процеса на бъбречна фиброза при диабетна нефропатия [36, 37]. Защитният ефект срещу натрупването на бъбречен ECM протеин се дължи на инхибирането на протеин киназа B/мишена при бозайник на сигналния път на рапамицин (PKB/mTOR) [38]. Скорошни изследвания показват, че активирането на PKB причинява активирането на mTORC1 и неговия низходящ протеин p70S6K, които са критични регулатори на клетъчния растеж, клетъчната пролиферация и протеиновия синтез [39, 40].

Ефект нацистанчеподобрявамбъбречна функция

Следователно, управлението на захарен диабет с AqTh и EaTh съединения може да има полезни ефекти върхубъбречнафункция при пациенти с диабет

Доказателствата сочат, че при плъхове с диабет е наблюдавана комплексна промяна в активността на антиоксидантните ензими [41]. Тази промяна води до увреждане на тъканите и играе важна роля в патогенезата на диабетните усложнения. В настоящото изследване чернодробните хистопатологични резултати показват, че нелекуваните диабетни плъхове развиват чернодробна стеатоза, характеризираща се с липидни капчици. Други проучвания установяват, че черният дроб е некротизиран при диабетни плъхове, предизвикани от STZ [42]. STZ се счита за класически модел на индуциране на диабет, тъй като провокира токсичност към клетките на панкреаса и клетъчна смърт [43], което води до хипоинсулинемия и хипергликемия. Инсулинът играе важна метаболитна роля като супресор на липолизата в мастната тъкан [44]. По този начин хипоинсулинемията при диабет води до повишено освобождаване на свободни мастни киселини (FFA) в кръвния поток [45] и приток на киселини в черния дроб. Вътрехепаталното натрупване на триглицериди възниква, когато притокът на липиди към черния дроб превиши капацитета на черния дроб да изнася триглицериди в кръвния поток [45], което причинява развитието на чернодробна стеатоза като усложнение на диабета [46].

В настоящото проучване хистопатологичните данни показват, че средносрочното перорално приложение на 200 mg/kg AqTh или 50 mg/kg EaTh предпазва значително черния дроб при стеатоза чрез намаляване на натрупването на липидни капчици. Подобни констатации са докладвани от Eliza et al. [47] където Costus speciosus намалява чернодробното разстройство. В допълнение, други проучвания показват, че семената на Camellia oleifera облекчават чернодробната стеатоза чрез регулиране на свободните мастни киселини [48], а куркуминът намалява стеатохепатита и отлагането на липиди, като е антиоксидант и упражнява противовъзпалително действие и роля на улавяне на свободните радикали [49]. Въпреки това, лечението с акарбоза не е имало това свойство за защита на черния дроб. Това потвърждава страничния ефект на това лекарство върху черния дроб [50].

Освен това T. hirsuta съдържа стероли, кумарини, терпени, танини, алифатен алкохол, лактон, алкани и алканоли [51]. Интересното е, че AqTh и EaTh антихипергликемични и антидиабетни ефекти може да се дължат на присъствието на тези фитохимикали или други неизвестни съединения.

5. Изводи

В заключение, нашето проучване показа, че средносрочното приложение на AqTh и EaTh на T. hirsuta има потенциал да намали кръвната глюкоза при диабетни плъхове, предизвикани от STZ. Антихипергликемичният ефект на EaTh може частично да се обясни с инхибирането на активността на чревната -глюкозидаза. А антихипергликемичната активност на AqTh може да се припише на стимулирането на инсулиновата секреция от островните клетки на панкреаса. В допълнение, AqTh и EaTh са показали решаващ превантивен ефект срещубъбречнаусложнения от фиброза и чернодробна стеатоза. Следователно тези открития предполагат, че AqTh и EaTh могат да се считат за ефикасно перорално антидиабетно лечение. Понастоящем нашите проучвания са фокусирани върху изолирането и идентифицирането на активните съединения на EaTh и AqTh, които са отговорни за антидиабетния ефект на T. хирсута.

Съкращения

AqTh: Воден екстракт от плюс ymelaea hirsuta

DM1: Диабет тип 1

DM2: Диабет тип 2

EaTh: фракция от етил ацетат плюс ymelaea hirsuta

ECM: Извънклетъчен матрикс

ESRD: Краен стадийбъбречназаболяване

FFA: Свободна мастна киселина

mTOR: мишена на рапамицин при бозайници

PKB: Протеин киназа В

STZ: Стрептозотоцин

T. hirsuta: плюс ymelaea hirsuta

UMPO: Herbarium University Mohamed Premier of

Ужда, Мароко

СЗО: Световна здравна организация.

Наличност на данни

Данните, използвани в подкрепа на констатациите от това проучване, са достъпни при поискване от авторите.

Конфликт на интереси

Авторите декларират, че няма конфликт на интереси.

Благодарности

Авторите желаят да изразят своята признателност към Ramdaoui Karim и Badraoui Mustapha за тяхната техническа помощ.

cistanche bienfaitsзабъбрек

От: „Благоприятен ефект на Thymelaea hirsuta върху дегенерация на панкреатични островчета, бъбречна фиброза и чернодробни увреждания“ Sanae Abid

---The Scientific World Journal