Хранителната употреба на източници на метионин и Bacillus Amyloliquefaciens CECT 5940 влияе върху производителността на растежа, хепатопанкреатичната хистология, храносмилането, имунитета и храносмилателната микробиота на Litopenaeus Vannamei, хранени с намалено количество рибено брашно
Oct 30, 2023
Просто резюме: Ускореното разширяване на отглеждането на скариди изисква източници на протеини с висока хранителна стойност за формулиране на фуражи, които задоволяват хранителните изисквания на скаридите. Рибното брашно (FM) е основният източник на протеини за формулировките на Aquafeed. Ограниченото му предлагане и високата цена обаче насърчават изследванията на алтернативни източници на протеин за формулиране на по-печеливши фуражи, които допринасят за устойчивостта на аквакултурите. Соевото брашно (SBM) и брашното от странични продукти от домашни птици (PBM) са били използвани като протеинови източници за замяна на рибното брашно, но дисбалансът на основните им аминокиселини допринася за ниската производителност на растеж на скаридите и засяга здравето на скаридите. Следователно, целта на проучването беше да се оцени ефектът от заместването на FM с SBM и PBM в диети, допълнени с DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) и техните комбинации върху производителност на растеж и здраве на младите Litopenaeus vannamei. Резултатите показват, че FM може да бъде частично заменен с SBM и PBM във фуражи за скариди, допълнени с 0.19% MET-MET или 0.06% MET-MET плюс 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 без влияят неблагоприятно на растежа и благосъстоянието на Litopenaeus vannamei. Тези резултати могат да бъдат интересни за разработване на фуражи с ниско съдържание на рибно брашно и за принос към устойчивостта на аквакултурите.
ползи от добавката Cistanche-увеличаване на имунитета
Резюме:Едно {{0}}седмично изпитване на хранене изследва ефекта от замяната на рибно брашно (FM) със соево брашно (SBM) и брашно от птичи странични продукти (PBM) в диети, допълнени с DL-Met, MET-MET (AQUAVI ®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) и техните комбинации върху производителността на растежа и здравето на младите Litopenaeus vannamei. Бяха формулирани общо шест експериментални диети според хранителните изисквания на L. vannamei. Общо 480 скариди (0.30 ± 0.04 g) бяха произволно разпределени в 24 резервоара (4 повторения/всяка диета , 20 скариди/резервоар). Скаридите бяха хранени с контролна диета (CD; 200 g/Kg рибно брашно) и пет диети с 50% заместител на FM, допълнен с различни източници на метионин, пробиотик (B. amyloliquefaciens CECT 5940) и техните комбинации: D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET-MET), D3 ({{ 69}}.19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940). Скариди, хранени с D3 и D5, имаха значително по-високо крайно, седмично наддаване на тегло и крайна биомаса в сравнение със скариди, хранени с CD (p < 0,05). Скариди, хранени с D2 до D5, увеличават височината на епителните клетки на хепатопанкреаса (p < 0,05). (p <0,05). Междувременно скаридите, хранени с D1, имат значително понижаване на имуносвързаните гени (p <0,05). Освен това, скаридите, хранени с D3 и D5, увеличават изобилието от полезни прокариотни микроорганизми като Pseudoalteromonas и Demequina, свързани с въглехидратния метаболизъм и имунната стимулиране. Освен това скаридите, хранени с D3 и D5, увеличават изобилието от полезни еукариотни микроорганизми, тъй като Aurantiochytrium и Aplanochytrium са свързани с производството на ейкозапентаенова киселина (EPA) и докозахексаенова киселина (DHA), които играят роля в насърчаването на растежа или повишаването на имунитета на водните организми. Следователно рибното брашно може да бъде частично заменено до 50% от SBM и PBM в диети, допълнени с 0,19% MET-MET (AQUAVI®) или 0,06% MET-MET (AQUAVI®) плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) и подобряване на продуктивността, здравето и имунитета на белите скариди. Необходими са по-нататъшни изследвания, за да се проучат синергичните ефекти на аминокиселините и пробиотиците в диетите за отглеждани скариди, както и да се оцени как SBM и PBM влияят върху състава на мастните киселини на диети с намалено рибно брашно и качеството на мускулите на скаридите. Независимо от това, тази информация може да бъде интересна за разработване на фуражи с ниско съдържание на рибно брашно за аквакултури, без да се засяга растежа и благосъстоянието на водните организми.
Ползи от Cistanche tubulosa- укрепване на имунната система
Щракнете тук, за да видите продуктите Cistanche Enhance Imunity
【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Ключови думи: Litopenaeus vannamei; хранене на скариди; заместител на рибно брашно; метионин; пробиотици; производителност; здраве; микробиота
1. Въведение
Отглеждането на скариди даде почти 11,2 милиона тона през 2022 г., а тихоокеанската бяла скарида (Litopenaeus vannamei) беше най-представителният вид с 52% от общото производство [1]. Устойчивостта и рентабилността на производството на аквакултури изискват доставка на суровини с висока хранителна стойност за състава на фуража, който отговаря на хранителните нужди на отглежданите скариди [2,3]. Рибното брашно е основната съставка на аквафуража поради високата си хранителна стойност [4]. Ограниченото предлагане и високата цена на рибното брашно обаче изискват проучване на алтернативни източници на фуражи, които са по-рентабилни и допринасят за устойчивостта на аквакултурите [5,6]. Предишни проучвания, фокусирани главно върху продуктивността на скаридите, съобщават, че рибното брашно може да бъде частично заменено с различни животински и растителни източници [6]. Сред източниците на растителни протеини, соевият шрот има високо съдържание на протеин. Въпреки това, наличието на антихранителни фактори, лоша смилаемост и дисбаланс на незаменими аминокиселини (EAA), засягащи храносмилателната микробиота, причинява възпалителен отговор в храносмилателните органи, ниска производителност и засяга имунния отговор на водния организъм [5,7, 8]. Брашното от странични продукти от птиче месо е животински източник с високо съдържание на протеини с дефицит на метионин и лизин, поради което употребата му в храни с намалено количество рибно брашно може да повлияе на растежа и благосъстоянието на водните организми [9]. Метионинът е EAA, оскъден във водните храни с ниско съдържание на рибно брашно и е необходим за нормалния растеж [10], протеиновия синтез [11] и имунната функция [12] на водните организми. Поради това е необходима добавка на метионин във фуражи с ниско съдържание на рибно брашно, за да се балансират аминокиселините и да се намалят отрицателните въздействия върху растежа и метаболизма на отглежданите водни организми [13]. В търговската мрежа се предлагат различни ресурси на метионин, като рацемична смес от D-Met и L-Met изомери, наречена DL-метионин (DL-Met) и смес от четири различни стереоизомера на метионин (LD-Met-Met, DL-Met -Met, LL-Met-Met и DD-Met-Met), комерсиализирани като AQUAVI® (Met-Met) [10]. Въпреки това, AQUAVI® има по-добри физикохимични свойства като много ниска разтворимост във вода и по-висока абсорбция от DL-Met [10,14]. От друга страна, съобщава се, че добавянето на пробиотици (Bacillus subtilis) има положителен ефект върху растежа и здравето на бели скариди (L. vannamei) и жаби (Lithobates catesbeianus), хранени с храна с ниско съдържание на рибно брашно [15,16]. Пробиотиците са живи микроорганизми, използвани във водните фуражи поради способността им да подобряват усвояването на фуража, ензимното смилане, предотвратяването на патогени, имунния отговор и растежа [15]. Следователно включването на пробиотици в храни с намалено количество рибно брашно може да подобри здравето и благосъстоянието на водните организми [16]. Bacillus бактериите се използват широко в аквакултурата като пробиотици, тъй като имат способността да произвеждат антимикробни съединения и екзоензими, които подобряват храносмилането на хранителните вещества, инхибирането на патогените, модулирането на имунния отговор, поддържането на целостта на червата и следователно ефективността на растежа [17]. B. amyloliquefaciens има антибактериална активност и произвежда храносмилателни ензими, които подпомагат храносмилането [18].
Поради горното, алтернативни източници на рибно брашно, комбинирани с много добавки, са използвани във водните храни, за да се гарантира снабдяването с основни хранителни вещества, да се подобри продуктивността, да се запази физикохимичният състав на диетата и да се поддържа качеството на водната среда [19]. Следователно диетите с ниско съдържание на рибно брашно, допълнени с различни източници на метионин и B. amyloliquefaciens, са подобрили растежа и ефективността на хранене на отглежданите водни организми [3,7,8,20,21]. Също така, B. amyloliquefaciens CECT 5940 и неговите ефекти са докладвани върху производителността на растежа и здравето на пилета бройлери [22] и нилска тилапия (Oreochromis niloticus) [21]. Малко проучвания обаче потвърждават ефектите от диети с ниско съдържание на рибно брашно и добавки върху здравето на храносмилането и имунния отговор на скаридите. Следователно, основната цел на това проучване беше да се оцени ефектът от заместването на FM с SBM и PBM в диети, допълнени с DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) и техните комбинации върху растежа производителност, хепатопанкреатична хистология, храносмилателна ензимна активност, транскрипционен отговор на имунно-свързани гени и микробен състав на храносмилателната система на млади тихоокеански бели скариди (L. vannamei).
2. Материали и методи
2.1. Изготвяне на експериментална диета
Бяха формулирани общо шест експериментални диети в съответствие с хранителните изисквания на L. vannamei [23] и препоръките на производителя (групата Aqua R & D на Evonik). Контролната диета (CD) е формулирана така, че да съдържа смес от FM протеин (39%), SBM протеин (53%) и PBM протеин (8%) като типична търговска диета със скариди. SBM и PBM бяха основните алтернативни източници на протеини, които замениха FM, докато пшеничното брашно беше използвано като свързваща и пълнителна съставка. Рибеното масло се използва като основен източник на липиди за задоволяване на нуждите на скаридите от n-3 есенциални мастни киселини. CD имаше 2{{10}}0 g/Kg рибно брашно без никакви добавки. Останалите пет диети (D1–D5), при които SBM и PBM заместват FM при 50%, са допълнени с различни източници на метионин, B. amyloliquefaciens и техните комбинации. D1: 0.13% DL-MET, D2: 0.06% MET-MET (AQUAVI®), D3: 0,19% MET-MET (AQUAVI®), D4 : 0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) и D5: 0,06% MET-MET (AQUAVI®) плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). В допълнение, коефициентът на стабилност на водата беше оценен като физическа характеристика на диетата чрез описан по-рано метод [24]. Формулата, приблизителният състав и стойностите за стабилност на водата на експерименталните диети са показани в таблица 1.
Таблица 1. Съставки и приблизителен състав на експерименталните диети (g/kg сухо тегло).
Таблица 1. Прод.
2.2. Скариди, опит за хранене и вземане на проби
Младият L. vannamei е получен от ферма за скариди в Сонора, Мексико. Скаридите са свободни от патогени съгласно процедурите, описани в Ръководството за диагностични тестове за водни животни на Световната организация за здравеопазване на животните [25]. Преди опита за хранене всички скариди бяха аклиматизирани в лабораторията за аквакултури в 1500-L резервоари с морска вода при контролирани условия (температура 30 ± 0.5 ◦C, разтворен кислород По-голям от или равно на 4 mg/L, соленост 37 g/L, pH по-голямо или равно на 7 и фотопериоди от 12 светлинни часа) и хранени с търговска храна за 7 дни. В началото 480 здрави скариди с (0,30 ± 0,02 g) бяха гладни в продължение на 24 часа и произволно разпределени в 24 кръгли резервоара (обемът е 150 L) при плътност от 20 скариди на резервоар (еквивалентно на плътност от 133 скариди/m3). Имаше четири резервоара, които бяха разпределени на случаен принцип за всяко диетично лечение. Скаридите бяха хранени до насищане с първоначална дажба от 12% от тяхната биомаса, разделена на три дажби през деня (8:00, 13:00 и 16:00 h) за 56 дни, коригирани ежедневно в зависимост от наличието или липсата на остатъчен фураж. Записани са температура (27,84 до 28,36 ◦C), соленост (36,98 до 37,07 g/L), разтворен кислород (400 до 5,17 mg/L) и pH (7,41 до 7,84). Всеки ден се сменяха 30% от водата. Неизядените фуражи, изпражнения, линеене и мъртви скариди се отстраняват ежедневно. След опит с хранене и период на гладуване от 24 часа, три скариди бяха взети на случаен принцип от всяко повторение, за да се получат 400 µL хемолимфа за анализ на генната експресия [26]. Скаридите, които преди това са обезкървени, са асептично разрязани, за да се получат целите им черва и хепатопанкреас, след което са съхранявани при -80 ◦C до храносмилателна ензимна активност и анализ на микробиома. Освен това, дванадесет (три скариди/реплика) цели скариди бяха взети на случаен принцип от всяко третиране и фиксирани в разтвор на AFA Davidson за хистологичен анализ.
2.3. Ефективност на растежа
Всички скариди бяха претеглени и преброени, за да се изчисли производителността на растеж съгласно уравненията, докладвани от предишни проучвания [27–29].
Крайно тегло=(Σ Крайно индивидуално тегло)/Краен брой скариди. Седмично наддаване на тегло=(Крайно тегло − Първоначално тегло)/Брой седмици. Специфична скорост на растеж=100 × (ln крайно тегло − ln първоначално тегло)/дни от експеримента. Процент на оцеляване=100 × (Краен брой скариди/Първоначален брой скариди). Крайна биомаса=Крайно тегло × Краен брой скариди. Прием на фураж=Вложен фураж (сухо тегло) − Събран фураж (сухо тегло). Коефициент на преобразуване на фуража=Прием на фураж/Крайна биомаса.
2.4. Хистология на хепатопанкреаса
Пробите от хепатопанкреас на скариди, фиксирани в разтвора на Дейвидсън, се обработват съгласно метода, описан от Bell и Lightner [30]. Хистологични срезове с дебелина 4 µm бяха изрязани с помощта на ротационен микротом (LEICA RM2115RT). Оцветяването на тъканите, наблюдението на слайда и цифровизацията на изображенията бяха реализирани съгласно метода, описан от Casillas-Hernández [31]. Изображенията на тъканите бяха използвани за измерване на височината на клетките на хепатопанкреаса с помощта на цифрова система за изображения Image-Pro Premier софтуер v9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, USA).
cistanche tubulosa - подобряват имунната система
2.5. Дейност на храносмилателните ензими
Червата и хепатопанкреасът се хомогенизират поотделно до съотношение 10% с 0,9% физиологичен разтвор и се центрофугират при 3500 rpm за 10 минути при 4 ◦C, а супернатантата веднага се анализира за храносмилателни ензимни анализи с четец на микроплаки (био -Рад, Херкулес, Калифорния, САЩ). Протеазната и липазната активност бяха анализирани с търговски комплект (Sigma-Aldrich®, Louis, MO, USA). Амилазната активност се измерва с използване на разтворимо нишесте като субстрат [32]. Общата концентрация на разтворим протеин се определя по принципа на свързване на протеин-багрило, като се използва говежди серумен албумин като стандарт [33]. Всички анализи бяха проведени в три повторни проби. Храносмилателните ензимни активности се изразяват като U/mg протеин.
2.6. Транскрипционен отговор на имуно-свързани гени
Хемолимфата се центрофугира при 3500 rpm за 10 минути при 4 ◦C за отделяне на хемоцитите от плазмата. Общата РНК от хемоцитите се екстрахира с TRIzol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) и се третира с ДНКаза без РНК (Promega®, Madison, WI, USA). cDNA се синтезира с тотална РНК (500 ng), като се използва системата за обратна транскрипция ImProm-II™ (Promega®) и олиго d(T)20 (T4OLIGO). Синтезът на кДНК се осъществява чрез обратна транскрипция при 42 ◦C за 60 минути; след това обратната транскриптаза се инактивира при 70 °C за 15 минути, за да се спре реакцията. cDNA се разрежда с 80 µL свръхчиста вода и 5 µL се използват като матрица за количествената PCR реакция в реално време (qPCR). Транскрипционният отговор беше анализиран от пет имунно-свързани гена и -актин като референтен ген (Таблица 2) [34]. qPCR беше проведен на StepOne PCR система в реално време (Thermo Fisher Scientific), използвайки SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX Kit (Bioline™, Лондон, Обединеното кралство). Условията на qPCR бяха първоначална денатурация при 95 °C за 10 минути, последвана от 40 цикъла на денатуриране при 95 °C за 15 s и отгряване/удължаване при 60 °C за 1 min. За всяка двойка праймери беше извършен анализ на кривата на дисоциация (60–95 ◦C) при скорост на температурен преход от 0.5 ◦C/s. Относителният метод на количествено определяне беше използван за анализ на генната експресия съгласно Rodriguez-Anaya [35] и Casillas-Hernández [36].
Таблица 2. Специфични праймери, използвани за транскрипционен отговор на имунно-свързани гени на L. vannamei.
2.7. Екстракция на ДНК и секвениращ анализ
Геномната ДНК от хепатопанкреаса и червата на 12 скариди на третиране беше извлечена с помощта на Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe (Zymo Research, Irvine, CA, USA), следвайки инструкциите на производителя. Концентрацията на ДНК се определя количествено с помощта на спектрофотометър NanoDrop 2000 (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) и качеството на ДНК се оценява чрез електрофореза в агарозен гел (1%, w/v). След това пробите от геномна ДНК бяха възложени на лабораторията за микробна геномика (CIAD, Мексико) за подготовка и секвениране на ДНК библиотека, като се използват стандартни протоколи на Illumina за амплификация [37]. Накратко, V4 вариабилният регион на 16S rRNA и 18S rRNA гените бяха амплифицирани чрез PCR със следните праймери, използвайки Illumina адаптери: 16S-V4_515F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30 ), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30 ) и 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30 ). Накрая, ампликоните бяха количествено определени в Qubit, смесени в еквимоларен пул и секвенирани на платформата Illumina Miniseq при стандартни условия (300 цикъла, 2 × 150).
2.8. Биоинформационен анализ
Файловете FASTQ от четения от сдвоен край бяха анализирани с помощта на пакета DADA2 v1.24.0 [38]. Работният процес за анализ на последователностите включваше филтриране, дерепликация, извод за извадка, идентификация на химера и сливане на четения от сдвоен край (PE), за да ги групира в ASV (варианти на последователност на ампликони). DADA2 включва "наивния байесов" метод, използващ базите данни SILVA за региона 16S-V4 (silva_nr99_v138.1_train_set.fa) и регионът 18S-V9 (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). Таксономичната информация беше анализирана с Phyloseq V1.40.0 и пакета за микробиома v1.18.0, за да се получат стойности за алфа и бета разнообразие и ординация [37]. Бета разнообразието беше проведено въз основа на непретеглено разстояние UniFrac и визуализирано с помощта на PCoA, изграден с ggplot в R. Накрая, многовариантните разлики на ниво общност между групите бяха количествено определени чрез пермутационен многовариантен анализ на дисперсията (PERMANOVA) [39]. Окончателната таблица на ASVs от 16S последователности също беше използвана като вход за функционална метагеномна прогноза с помощта на PICRUSt [40]. Съдържанието на пътя на KEGG, получено от PICRUSt, беше нормализирано и след това използвано за получаване на метагеномни функционални прогнози на различни йерархични нива на KEGG (1, 2 и 3) [41]. Секвенирането на Illumina с използване на праймери за V4 хиперпроменлива област в 16S rRNA гена дава 976 065 PE прочитания от 150 bp, съответстващи на червата и хепатопанкреаса на L. vannamei със средно 81 338 прочитания на проба. След процеса на филтриране на качеството и елиминирането на химерите, средно 58 235 последователности на проба бяха поддържани, еквивалентни на 71,6%, и бяха присвоени на 709 ASV. От друга страна, от секвенирането на V9-18S rDNA са получени 871 699 PE прочитания от 150 bp със средно 72 642 на проба. След работния процес на анализ на последователността, показанията бяха намалени с приблизително 12,7%. Въпреки това, при извършване на таксономична идентификация и ASV групиране, повечето от последователностите съответстват на ДНК на гостоприемника (L. vannamei), елиминирайки пробите от хепатопанкреаса. Следователно представените данни за характеризиране на еукариотната микробиота съответстват на микроорганизмите, присъстващи в червата. Използваният набор от данни беше 12 970 последователности, които бяха присвоени на 43 ASV.
2.9. Статистически анализ
Резултатите от растежа, височината на клетките на хепатопанкреаса, храносмилателната ензимна активност и транскрипционния отговор на имунно-свързани гени бяха оценени чрез еднопосочен анализ на дисперсията (ANOVA). Ако се наблюдава някаква значимост, се извършва тестът на Tukey за сравнение на средните стойности. Статистическият анализ беше извършен със Statgraphics Centurion XVI. Значимостта беше определена на нива на вероятност от 95%.
3. Резултати
3.1. Ефективност на растежа
Стойностите на растежа са представени в таблица 3. В сравнение с CD, най-високите стойности на растежа (крайно тегло, наддаване на тегло и крайна биомаса) се наблюдават при скариди, хранени с D3 и D5, които са значително по-високи от скариди, хранени с D1 (p < 0.05), но без статистическа разлика със скариди, хранени с D2 и D4 и (p > 0.05). Най-ниската стойност на скоростта на преобразуване на фуража се наблюдава при скариди, хранени с D3, но не е открита значителна разлика в FCR сред всички диетични лечения (p > 0.05). Докато приемът на храна значително (p < 0,05) намалява при скариди, хранени с D1 и значително се увеличава (p < 0,05) при скариди, хранени с D5. Не е открита значителна разлика в степента на преживяемост сред всички диетични лечения (p> 0,05).
Таблица 3. Ефект на експерименталните диети върху растежа на Litopenaeus vannamei.
3.2. Хепатопанкреатична хистология
Хепатопанкреасът на скаридите има добре организирана структура (Фигура 1А). С изключение на скаридите, хранени с D1, всички скариди, хранени с намалено рибно брашно, имат по-висока (p < 0.05) височина на епителните клетки на хепатопанкреаса, отколкото скаридите, хранени с CD (Фигура 1B).
Фигура 1. Хистология на хепатопанкреаса на скариди L. vannamei, хранени с контролна диета и диети с 50% заместител на рибно брашно. (A) Светлинни микрографии на надлъжни срезове (4 µm) на хепатопанкреас, оцветени с хематоксилин и еозин, показват добре организирана структура. Стрелките показват нормални структури на тубулни епителни клетки, включително секреторни (В-клетки) клетки. Мащабна лента: 100 µm. (B) Епителни клетки на хепатопанкреаса по височина на скариди. Данните са представени като средно ± SE, стойностите с различни букви са значително различни (p < 0.05). Съкращения: Тубули (Tb), епителни клетки (EC) и B-клетки (HpB). CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13% DL-MET), D2 (0,06% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET) , D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.3. Храносмилателна ензимна активност
Ефектът от различни диетични източници на метионин и Bacillus amyloliquefaciens върху храносмилателните ензимни активности на червата и хепатопанкреаса от L. vannamei хранени с редуцирани диети с рибно брашно са показани в Таблица 4. Амилазната, протеазната и липазната активност на хепатопанкреаса от скариди, хранени с D3, са значително по-висок (p < 0.05) от скаридите, хранени с CD, докато активността на храносмилателните ензими на червата не е повлияна (p > 0.05). В хепатопанкреаса от скариди, хранени с D1, се наблюдава най-ниската стойност на амилазата и липазата, докато в червата храносмилателните ензимни активности са с най-ниски стойности, но не се наблюдават значими разлики (p> 0,05) в сравнение със скариди, хранени с CD.
Таблица 4. Ефект на експериментални диети върху храносмилателната ензимна активност на Litopenaeus vannamei.
3.4. Транскрипционен отговор на имуно-свързани гени
Транскрипционният отговор на имунно-свързани гени на бели скариди, хранени с редуцирани диети с рибно брашно и добавки, беше определен и сравнен с CD, хранени със скариди (Фигура 2). С изключение на скаридите, хранени с D1, всички имунно-свързани гени, анализирани в това проучване, имат по-висока експресия от CD, хранени със скариди. Hc и pPO бяха значително (p < 0.05) регулирани нагоре в скариди, хранени с D3 и D5. LGBP е значително (p < 0.05) регулиран нагоре при скариди, хранени с D2 и D3. MnSOD беше значително (p < 0,05) регулиран нагоре в скариди, хранени с D2, D3 и D5. HSP60 е значително (р <0,05) повишен в скариди, хранени с D5. Най-ниските стойности на транскрипционния отговор на имунно-свързаните гени са наблюдавани при скариди, хранени с D1, в сравнение с всички диетични лечения.
Фигура 2. Транскрипционен отговор на имунно-свързани гени на контролна диета, хранена със скариди, и 50% диети, заместващи рибно брашно. (A) хемоцианин (Hc), (B) профенолоксидаза (pPO), (C) липополизахарид и -глюкан-свързващ протеин (LGBP), (D) цитозолна манганова супероксиддисмутаза (MnSOD) и (E) протеин на топлинен шок 6{ {11}} (HSP60). Данните са представени като средно ± SE, стойностите с различни букви са значително различни (p < 0.05). Съкращения: CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13% DL-MET), D2 (0,06% MET-MET), D3 (0,19% MET- MET), D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.5. Анализ на храносмилателната микробиота и функционално прогнозиране
Анализът на кривата на разреждане показа, че наблюдаваните видове на проба са достатъчни както за 16S-V4 (Фигура 3A), така и за 18S-V9 последователности (Фигура 4A). По отношение на алфа разнообразието, резултатите от 16S показват, че индексите Chao1, Shannon и Simpsons на хепатопанкреаса са по-високи от червата (Фигура 3B). От друга страна, резултатите от 18S показват, че всички индекси на алфа разнообразие намаляват в червата на скариди, хранени с диети с ниско съдържание на рибно брашно в сравнение с контролата (Фигура 4B). Въпреки това, няма значителни разлики между диетичните лечения в резултатите както при 16S, така и при 18S.
Фигура 3. Генно секвениране на 16S rRNA на червата и хепатопанкреаса от контролна диета, хранена със скариди и 50% диети, заместващи рибно брашно. (A) Крива на разреждане, (B) Алфа разнообразие и (C) Структура на микробиотата, визуализирана с помощта на диаграми за анализ на главните координати (PCoA). Съкращения: черво (I) и хепатопанкреас (H). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 ).
Ефектите на експерименталната диета върху структурата на микробиотата бяха определени с помощта на UniFrac разстояние и визуализирани с помощта на PCoA графики. Резултатите показват ясно разделение между експерименталните диети, но без значителни разлики в прокариотните общности от червата или хепатопанкреаса (Фигура 3C), както и еукариотната микробиота от червата (Фигура 4C). Въпреки това, анализът на бета разнообразието показа ясно разделение между прокарийните ушни общности от червата и хепатопанкреаса (Фигура 3C).
Фигура 4. 18S rRNA генно секвениране на червата от контролна диета, хранена със скариди и 50% диети, заместващи рибно брашно. (A) Крива на разреждане, (B) Алфа разнообразие и (C) Структура на микробиотата, визуализирана с помощта на диаграми за анализ на главните координати (PCoA). Съкращение: Черво (I). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 ).
Въз основа на резултатите от прокариотната микробиота бяха идентифицирани общо 19 различни бактериални фили. Proteobacteria беше доминиращият тип в червата на скаридите, докато Pro teobacteria и Actinobacteria бяха доминиращият тип в хепатопанкреаса на скаридите. В червата на скариди, хранени с D3 и D5, се наблюдава увеличение на относителното изобилие на Actinobacteria, докато относителното изобилие на Bacteroidota е леко намалено. При хепатопанкреас на скариди, хранени с D1, D2 и D4, се наблюдава леко увеличение на относителното изобилие на Bacteroidota, докато при хепатопанкреас на скариди, хранени с D3 и D5 Actinobacteria, относителното изобилие се увеличава (Фигура 5А). На ниво род, Pseudoalteromonas е най-разпространен в червата на скариди, докато Demequina е най-разпространен в хепатопанкреаса на скариди. Demequina има слабо увеличение в червата на скариди, хранени с D3 и D5, докато Lysinimicrobium и Ruegeria са увеличени в хепатопанкреаса на скариди, хранени с D3 и D5 (Фигура 5B). Резултатите от функционалните категории (KEGG ниво 2) показват, че бактериалните последователности са свързани с клетъчни процеси и метаболитни пътища (Фигура 5C и допълнителна таблица S1). Метаболизмът на аминокиселините, метаболизмът на въглехидратите, кофакторите и метаболизмът на витамините са най-изобилни в метаболитните пътища, докато клетъчната подвижност е най-изобилна в клетъчните процеси. След отстраняване на показанията за секвениране от ДНК на гостоприемника, бяха наблюдавани три вида на еукариотната микробиота. Типът SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) е най-разпространеният във всички черва на скариди, но се наблюдава увеличение на типа Opisthokonta в червата на скариди, хранени с D5 (Фигура 6А). На ниво род, Aplanochytrium е най-изобилен в червата на скариди, хранени с D2 до D5, но изобилието е значително по-високо в D5. Некултивираният алвеолат е обогатен с CD, хранен с червата на скариди. Auranti ochytrium е най-разпространен в D2 до D4 с по-голямо изобилие в D3. И накрая, Ebria беше най-изобилна в червата на скариди, хранени с D1 (Фигура 6B).
Фигура 5. Прокариотна микробиота на червата и хепатопанкреаса от контролна диета, хранена със скариди, и диети с 50% заместители на рибно брашно. (A) Първите десет на изобилието на видовете. (B) Анализ на топлинна карта на най-добрите 40 рода и (C) Анализ на топлинна карта на прогнозиране на функции въз основа на анализ на пътища на KEGG. Съкращения: черво (I) и хепатопанкреас (H). CD (200 g/Kg FM), D1 ({{20}}.13% DL-MET), D2 (0.06% MET -MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
Фигура 6. Еукариотна микробиота на червата от контролна диета, хранена със скариди, и диети с 50% заместители на рибно брашно. (A) Изобилие на Phyla. (B) Анализ на топлинна карта на изобилието на родовете. Съкращение: черво (I). SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET -MET), D3 (0.19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) и D5 (0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
4. Дискусия
4.1. Ефективност на растежа
Предишни проучвания са оценили ефектите от намалени диети с рибно брашно, допълнени с различни диетични източници на метионин, върху растежа на L. vannamei, като храна за скариди с 5% до 10% рибно брашно и допълнена с ниво между {{15 }}.15% и 1,7% от MET-MET (AQUAVI®) или 3% от DL-MET [2,3,8,20,42,43]. Независимо от това, проучване при подобни условия на отглеждане, което използва млади скариди (L. vannamei) с първоначално тегло 0.98 ± 0.02 g, предполага 0 .20% MET-MET (AQUAVI®) за по-добро представяне на растежа, когато скаридите са хранени с намалена храна с рибно брашно [20]. DL-MET е доказано върху млади скариди с първоначално тегло 3.0 g, което предполага нива между 0.{{50}}6–0.3 0% за добър продуктивен отговор, когато скаридите са хранени с намалено количество рибно брашно [2]. От друга страна, ефектите на B. amyloliquefaciens (104 и 1{{90}}3 UFC/mL), разтворени във вода на биофлочна система за отглеждани L. vannamei, са били докладвани [44,45], но няма доклади за ефектите на този пробиотик, добавен в намалена храна с рибно брашно, върху ефективността на растежа на L. vannamei. Следователно това проучване оценява ефекта от заместването на FM с SBM и PBM в диети със скариди, допълнени с 0,13% DL-MET (D1), 0,06% MET-MET (D2), 0,19% MET-MET (D3) и според препоръките на производителя използвахме комбинации от 0,13% DL-MET плюс 0,1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (еквивалентно на 109 UFC/g) (D4) и 0,06% MET-MET плюс 0,1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (D5). Всички диети с намалено количество рибно брашно, допълнени с източници на метионин и пробиотици, показват добри стойности на стабилност във водата. Следователно диетите с намалено съдържание на рибно брашно, оценени в това проучване, са в съответствие с предишни доклади и всички диетични лечения показват добър отговор по отношение на растежа на скаридите. Независимо от това, скаридите, хранени с D1, имат по-ниски параметри на производителност, докато скаридите, хранени с D3 и D5, имат по-високи параметри на производителност. Значително ниската производителност на растеж при скариди, хранени с D1, може да бъде свързана с лош прием на храна, дължащ се на дефицит на метионин, причиняващ намаляване на вкуса на водните храни с намалено количество рибно брашно [20]. Високата производителност на растеж при скариди D3 в сравнение със скариди, хранени с D1 и D2, може да се дължи на дефицита и източника на метионин. Горното може да се дължи на факта, че е съобщено, че MET MET дипептидът има ниска разтворимост във вода и висока бионаличност, което може да бъде ефективно използвано от скариди, насърчавайки по-добри стойности на растеж [2,10,14]. Скаридите, хранени с D5, също имат висока производителност на растеж дори със същото ниво на метионин и източник в D2, но с добавянето на 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940. Високата производителност на растеж може да се дължи на полезните свойства на пробиотика, които включват антимикробна активност и производство на -амилаза, целулаза и протеаза, които повишават смилаемостта и усвояването на хранителните вещества [46]. Също така, предишно проучване съобщава, че B. amyloliquefaciens е производител на метионин [47] и това може да допринесе за поддържане на баланса на този EAA в D5. Освен това се съобщава, че смес от фуражни добавки може да подобри ефективността на растежа на водните организми [48–50] и бройлерите [51]. Следователно, заместването на 50% FM от SBM и PBM в диети, допълнени с 0,19% MET-MET и 0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940, може да подобри усвояването на хранителните вещества и следователно растежа на скаридите. Важно е да се отбележи, че SBM и PBM имат високи нива на мастни киселини, но n-3 дълговерижните полиненаситени мастни киселини имат дефицит в тези протеинови източници [52]. В този контекст са необходими по-нататъшни изследвания, за да се определи как употребата на SBM и PBM влияе върху състава на мастните киселини на намалените диети с рибно брашно и качеството на мускулите на скаридите.
Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система
4.2. Хепатопанкреатична хистология
Хепатопанкреасът на скаридите е храносмилателен орган и играе важна роля в секрецията на храносмилателни ензими, транспортирането на хранителни вещества, съхранението и усвояването, следователно неговата функция е ключова за растежа и здравето на скаридите [30,53]. Съобщава се обаче, че диетите с намалено рибно брашно могат да променят структурната морфология на храносмилателните органи и да влошат физиологичните условия във водните организми, което води до забавяне на растежа [54]. Хистологията на хепатопанкреаса беше анализирана като индикатор за растежа на скаридите, здравето и хранителния им статус. Не се наблюдава увреждане на структурата на хепатопанкреаса, В-клетките са най-разпространените хепатопанкреатични клетки и тяхната епителна височина се увеличава значително при всички диетични лечения с изключение на скариди, хранени с D1, които имат подобен отговор на този на контролната диета. Резултатите предполагат, че хепатопанкреасът е чувствителен към включването на различни диетични източници на метионин и B. amyloliquefaciens в диети с намалено количество рибено брашно, увеличаване на В-клетките, повлияване на секрецията на храносмилателни ензими, усвояване на хранителни вещества и асимилация и използване на храната, както се съобщава в други проучвания, когато се използва алтернативни източници и добавки на рибно брашно [53,55–58]. Освен това се съобщава, че добавянето на метионин може да намали промените в хепатопанкреаса поради дефицита му при диети с ниско съдържание на рибно брашно [8]. Следователно, според хистологичния анализ, няма доказателства за токсичност, причинена от намалени диети с рибно брашно, допълнени с различни хранителни източници на метионин и B. amyloliquefaciens в L. vannamei hepatopancreas.
4.3. Анализ на храносмилателни ензими
Храносмилателната активност на ензима е физиологичен процес, който подобрява храносмилането и усвояването на хранителните вещества и следователно е ключов фактор за насърчаване на растежа на скаридите [59]. Независимо от това, предишни проучвания съобщават, че активността на храносмилателните ензими е намаляла значително с намалени диети с рибно брашно без добавки [60,61]. Активността на храносмилателните ензими се използва като индикатор за храносмилателната функция на скаридите. В настоящото проучване, скариди, хранени с D3, подобряват (р <0,05) активността на хепатопанкреатичните храносмилателни ензими в сравнение между всички групи и не са открити значителни разлики в активността на чревните храносмилателни ензими. Като цяло са забелязани ниски активности на храносмилателни ензими и в двата органа на скариди, хранени с D1. В съгласие с тези резултати, добавянето на метионин повишава храносмилателните ензимни активности в червена морска ципура (Pagrus major) [62], бял амур (Ctenopharyngodon idella) [63], бели скариди (L. vannamei) [2,3,20] и риба роху (Labeo rohita) [59]. Ефектите на храна, допълнена с B. amyloliquefaciens, върху активността на храносмилателните ензими на скаридите не са докладвани при L. vannamei, но е известно, че пробиотиците повишават активността на храносмилателните ензими и подобряват усвояването и храносмилането на фуража [64]. В допълнение, няколко изследвания оценяват различни фуражи за аквакултури, допълнени с добавки, комбинирани с пробиотици, и показват повишаване на храносмилателния процес. [48,50]. Въпреки това са установени несъответствия в активността на храносмилателните ензими при пилета бройлери с органични киселини, пробиотици и комбинации, вероятно поради нивото на индукция на фуражните добавки и комбинации, които са на неоптимални нива [51]. Това проучване също съобщава за несъответствия в активността на хепатопанкреатичните храносмилателни ензими при скариди, хранени с D3, D4 и D5. Резултатите обаче показват, че споменатата по-горе добавка не засяга храносмилателната функция на скаридите.
4.4. Транскрипционен отговор на имуно-свързани гени
Транскрипционният отговор на свързаните с имунитета гени е много важен за получаване на данни относно здравословното състояние на скаридите [35]. Съобщава се обаче, че диетите с ниско съдържание на рибно брашно увреждат имунния и антиоксидантния отговор на скаридите поради небалансирани хранителни вещества, високи антихранителни фактори и съдържание на фибри, които влияят на приема на храна, вкуса и смилаемостта [56,65–67]. Преди това изследвахме ефектите на източника и нивото на протеин върху имунно-свързаните гени (Hc, pPO, LGBP), антиоксидантния капацитет (MnSOD) и толерантността към стрес (HSP60) и предположихме, че защитните механизми не са засегнати когато скаридите са били хранени с диети, съдържащи растителен протеин (30–35%) на средни нива [35]. От друга страна, съобщава се, че диетите с ниско съдържание на рибно брашно имат неблагоприятни ефекти върху имунния отговор на скаридите, когато рибното брашно се намали от 250 g/kg на 100 g/kg [68]. Независимо от това, антиоксидантният отговор е модулиран, без да се засяга оксидативният статус на черния дроб и червата, когато европейският лаврак (Dicentrarchus labrax) е хранен с ниско съдържание на рибно брашно, допълнено с ниво на DL-Met с 12% под установеното им изискване [69]. Също така, имунният отговор и антиоксидантният капацитет бяха подобрени, когато белите скариди (L. vannamei) [8] и нилската тилапия (O. niloticus) [14] бяха хранени с диета с ниско съдържание на рибно брашно с 0,15% MET-MET. Нещо повече, проучване показва, че нилската тилапия (O. niloticus), хранена с диети с ниско съдържание на рибно брашно, допълнени със Spirulina platensis и B. amyloliquefaciens, има засилен имунен отговор и антиоксидантен капацитет, но намалява толерантността към стрес [21]. Резултатите от това проучване установиха, че транскрипционните реакции на гените, свързани с имунитета, антиоксидантния капацитет и устойчивостта на стрес, са подобрени, когато скаридите са хранени с D2, D3, D4 и D5, което е интересно, защото това показва, че добавките с метионин и пробиотици могат положително да модулират защитните механизми, намалявайки уврежданията, причинени от храни с ниско съдържание на рибно брашно. Обратно, ниският транскрипционен отговор на имунно-свързани гени, наблюдаван при скариди, хранени с D1, може да се дължи на дефицит на метионин. Въпреки това, като се има предвид продуктивността, най-добрите диетични лечения могат да бъдат D3 и D5, без да се засяга растежа и здравето на скаридите.
4.5. Анализ на храносмилателната микробиота и функционално прогнозиране
Храносмилателната система на скаридите е домакин на съобщества от микроорганизми, доминирани от бактерии, но може да присъстват и еукариотни микроорганизми, изграждащи голяма микробна екосистема, наречена микробиота [70]. Микробиотата на храносмилателната система на скаридите влияе върху имунитета или устойчивостта, производството на полезни метаболити и храносмилането и асимилацията на хранителни вещества [71,72]. Диетата е един от основните фактори на околната среда, които влияят на микробиотата на храносмилателната система на скаридите [73]. Това проучване оценява ефектите от диети с ниско съдържание на рибно брашно върху разнообразието, структурата и относителното изобилие на прокариотни и еукариотни микроорганизми от червата и хепатопанкреаса на L. vannamei, използвайки 16S и 18S секвениране. Резултатите от проучването предполагат, че разнообразието и структурата на микробиотата (прокариотна и еукариотна) не се различават при различните диетични лечения. Въпреки това, сравнението на бета разнообразието установи, че чревната прокариотна микробиота е групирана отделно от хепатопанкреатичната прокариотна микробиота, което предполага уникална екологична ниша според храносмилателния орган на скаридите [74]. Следователно, специализирани микроорганизми както в червата, така и в хепатопанкреаса помагат за подобряване на енергията, която приемникът получава ефективно, и метаболитните процеси, необходими за растежа, имунния отговор, храносмилането и асимилацията [75]. Както ще бъде обяснено по-долу, резултатите от изследването предполагат, че изобилието както на прокариотни, така и на еукариотни микроорганизми може да се увеличи и да помогне на скаридите да използват ефективно хранителни вещества от диети с ниско съдържание на рибно брашно за метаболитни процеси, необходими за получаване на енергия, растеж, имунитет, храносмилане и хранене. Според изобилието на прокариоти във всички проби от червата и хепатопанкреаса, най-разпространеният тип е Proteobacteria, докато типът Actinobacteria има по-високо присъствие в пробите от хепатопанкреас. Тези резултати са в съответствие с предишно проучване [36] и също така е описано, че тези видове са доминиращи в млади и възрастни скариди (Penaeus monodon) [76]. Pseudoalteromonas, принадлежащ към Proteobacteria phylum, е храносмилателен ензим (протеази, амилази, -галактозидази и фосфолипази), произвеждащ микроорганизъм, който допринася за храносмилането на хранителните вещества в скаридите [77–79]; също така се съобщава, че той допринася за синтеза на полиненаситени мастни киселини (PUFA) и късоверижни мастни киселини (SCF) [80,81]. Ruegeria, принадлежаща към вида Proteobacteria, произвежда триестеразна активност, допринасяща за храносмилателните процеси на гостоприемника, както и антибактериална активност срещу Vibrio anguillarum [82]. Demequina, принадлежаща към вида Actinobacteria, може да произвежда -амилаза, ксиланаза и целулаза, които участват в абсорбцията и използването на въглехидрати [83–86]. Според хемотаксономични и геномни профили, Lysinimicrobium може да се счита за субективен синоним на Demequina [87] и следователно може да има същия принос към активността на храносмилателните ензими и смилането на въглехидратите. Ролята на прокариотните микроорганизми в храносмилателната система на скаридите е тясно свързана с функционалните прогнози в базата данни KEGG, които са аминокиселини, въглехидрати, кофактори и метаболизъм на витамини, както и клетъчна подвижност. Производството на храносмилателни ензими и синтеза на есенциални мастни киселини показват полезната роля на микробиотата за здравето и имунната стимулация на храносмилателната система на скаридите. Освен това процесите на клетъчна подвижност, като бактериален хемотаксис и сглобяване на флагела, могат да подкрепят прокариотните микроорганизми при адаптирането към храносмилателната среда на гостоприемника [88]. Следователно диетите с ниско съдържание на рибно брашно, допълнени с 0,19% MET-MET или 0,06% MET-MET плюс пробиотик (B. amyloliquefaciens) биха помогнали за полезната роля на прокариотните общности в храносмилателната система на скаридите.
Беше трудно да се характеризира изобилието на еукариотни микроорганизми с 18S генно секвениране, тъй като в това изследване беше открито голямо количество L. vannamei ДНК. Освен това при метабаркодирането на фекална ДНК е обичайно ДНК на микроеукариотите във фекалиите да се разгражда по-бързо от ДНК на гостоприемника и са необходими допълнителни стъпки като разцепване или блокиране на ДНК на гостоприемника с помощта на рестрикционни ензими или блокиращи праймери преди или след амплификация [89]. ]. Въпреки това, резултатите от проучването дават представа за микроеукариотните общности на храносмилателната система на скаридите. Типът SAR е най-изобилен в червата на скариди, хранени с ниско съдържание на рибно брашно. Aurantiochytrium има по-голямо изобилие в червата на скариди, хранени с D3, докато Aplanochytrium е най-изобилен в червата на скариди, хранени с D5. Освен това, Ebria е най-разпространената в червата на скариди, хранени с D1. Aurantiochytrium е производител на ейкозапентаенова киселина (EPA) [90], докато Aplanochytrium произвежда докозахексаенова киселина (DHA) [91]. Тези мастни киселини играят съществена роля за насърчаване на растежа или повишаване на имунитета на водните организми; също така EPA и DHA помагат на водните организми да намалят възпалителните фактори и да намалят възпалението [90]. От друга страна, Ebria има вътрешен твърд силициев скелет, което може да доведе до лошо храносмилане от водни организми [92], което може да намали растежа на скариди, хранени с D1. Еукариотните микроорганизми живеят като коменсали или мутуалисти в храносмилателната система и тъканите на морските безгръбначни, но е вероятно те да произхождат от крайбрежната вода, която е била използвана за напояване на езерото за скариди, както беше описано по-горе [93]. Въпреки това, използването на диети, които са екологични и допълнени с добавки и пробиотици, може да контролира растежа на вредните микроводорасли в храносмилателната система на скаридите и околната среда [94]. Това е в съгласие с резултатите от проучването, които показват, че диета с ниско съдържание на рибно брашно, допълнена с 0.13% DL-MET увеличава изобилието на Ebria, засягайки продуктивната производителност и здравето на скаридите, докато диети, допълнени с 0.19% METMET или 0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens биха помогнали за полезната роля на еукариотните общности в храносмилателната система на скаридите.
Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система
5. Изводи
Рибното брашно може да бъде частично заменено до 50% от SBM и PBM във фуражи за скариди, допълнени с MET-MET и/или B. amyloliquefaciens CECT 5940 без неблагоприятни ефекти върху растежа. В сравнение с контролната диета, скаридите, хранени с диети с намалено рибно брашно с 0.19% MTE-MET и 0,06% MET-MET плюс 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940, имат съответно 43% и 40% повече крайна биомаса. Освен това, скариди, хранени с намалени диети с рибно брашно, допълнени с MET-MET и/или B. amyloliquefaciens CECT 5940, имат по-добра височина на епителните клетки на хепатопанкреаса, активност на храносмилателни ензими, транскрипционен отговор на имунно-свързани гени и полезна микробиота за храносмилателната система. Необходими са по-нататъшни изследвания, за да се изследват степенуваните нива на източници на метионин и синергичните ефекти на аминокиселините и пробиотиците в диети с намалено количество рибно брашно за отглеждани скариди. Също така, би било интересно да се оцени как SBM и PBM влияят върху състава на мастните киселини на намалените диети с рибно брашно и качеството на мускулите на скаридите. Независимо от това, тази информация може да бъде интересна за разработване на фуражи с ниско съдържание на рибно брашно за аквакултури, без да се засяга растежа и благосъстоянието на водните организми.
Препратки
1. ФАО. Състоянието на световния риболов и аквакултури 2022 г. Към синя трансформация; ФАО: Рим, Италия. [CrossRef]
2. Xie, J.-J.; Lemme, A.; Той, J.-Y.; Ин, П.; Figueiredo-Silva, C.; Liu, Y.-J.; Xie, S.-W.; Niu, J.; Тиен, Л.-Х. Нивата на рибно брашно могат да бъдат успешно намалени в белите скариди (Litopenaeus vannamei), ако се добавят DL-метионин (DL-Met) или DL-метионилDL-метионин (Met-Met). Aquac. Nutr. 2017, 24, 1144–1152. [CrossRef]
3. Лу, Дж.; Джан, X.; Джоу, Q.; Cheng, Y.; Luo, J.; Masagounder, K.; Той, С.; Жу, Т.; Юан, Й.; Shi, B.; et al. Хранителната добавка на DL-метионил-DLметионин може да подобри ефективността на растежа при стратегии с ниско съдържание на рибно брашно чрез модулиране на TOR сигналния път на Litopenaeus vannamei. Aquac. Nutr. 2021, 27, 1921–1933. [CrossRef]
4. Чо, JH; Kim, IH Рибно брашно - хранителна стойност. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2011, 95, 685–692. [CrossRef] [PubMed]
5. Песен, X.; Йе, Х.; Джин, Ф.; Li, H.; Kim, Y.-S.; Xiao, J.; Guo, Z. Ефекти от ферментирало соево брашно и гуанозин 50 -монофосфат върху растежа, здравето на червата и антистресовата способност на Penaeus vannamei в диета с ниско съдържание на рибно брашно. Аквакултура 2022, 548, 737591. [CrossRef]
6. Яо, У.; Янг, П.; Джан, X.; Xu, X.; Zhang, C.; Ли, X.; Leng, X. Ефекти от замяната на диетичното рибно брашно с протеин Clostridium autoethanogenum върху растежа и качеството на плътта на тихоокеанската бяла скарида (Litopenaeus vannamei). Аквакултура 2022, 549, 737770. [CrossRef]
7. Джан, Дж.; Янг, Х.; Ян, Й.; Zhang, C.; Йе, Дж.; Sun, Y. Ефекти на пробиотици от рибен произход върху ефективността на растежа, имунния отговор и здравето на червата на диети, хранени със скариди (Litopenaeus vannamei) с рибно брашно, частично заменено със соево брашно. Aquac. Nutr. 2020, 26, 1255–1265. [CrossRef]
8. Джи, Р.; Wang, Z.; Той, Дж.; Masagounder, K.; Xu, W.; Май, К.; Ai, Q. Ефекти от добавянето на DL-метионил-DL-метионин върху производителността на растежа, имунните и антиоксидантните реакции на скариди с бели крака (Litopenaeus vannamei), хранени с диета с ниско съдържание на рибно брашно. Aquac. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]
9. Чакладър, Р.; Siddik, MAB; Fotedar, R. Пълната замяна на рибното брашно с брашно от странични продукти от домашни птици повлия на растежа, качеството на мускулите, хистологичната структура, антиоксидантния капацитет и имунния отговор на младите Barramundi, Lates calcarifer. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]
10. Ниу, Дж.; Lemme, A.; Той, J.-Y.; Li, H.-Y.; Xie, S.-W.; Liu, Y.-J.; Yang, H.-J.; Figueiredo-Silva, C.; Тиен, Л.-Х. Оценка на бионаличността на новия Met-Met продукт (AQUAVI®Met-Met) в сравнение с dl-метионин (dl-Met) в бели скариди (Litopenaeus vannamei). Аквакултура 2018, 484, 322–332. [CrossRef]
11. Скиба-Каси, С.; Гюрден, И.; Пансерат, С.; Seiliez, I. Дисбалансът на диетичния метионин променя транскрипционната регулация на гени, участващи в метаболизма на глюкоза, липиди и аминокиселини в черния дроб на дъгова пъстърва (Oncorhynchus mykiss). Аквакултура 2016, 454, 56–65. [CrossRef]
12. Мачадо, М.; Сера, CR; Олива-Телес, А.; Костас, Б. Метионинът и триптофанът играят различни модулаторни роли в вродения имунен отговор на европейския лаврак (Dicentrarchus labrax) и сигнализиране за апоптоза – изследване in vitro. Преден. Immunol. 2021, 12, 660448. [CrossRef]
13. Джоу, Й.; Той, Дж.; Су, Н.; Masagounder, K.; Xu, М.; Чен, Л.; Liu, Q.; Йе, Х.; Сън, З.; Ye, C. Ефекти на DL-метионин и метионин хидрокси аналог (MHA-Ca) върху растежа, аминокиселинните профили и експресията на гени, свързани с синтеза на таурин и протеин в обикновения шаран (Cyprinus carpio). Аквакултура 2021, 532, 735962. [CrossRef]
14. Guo, T.-Y.; Zhao, W.; Той, J.-Y.; Liao, S.-Y.; Xie, J.-J.; Xie, S.-W.; Masagounder, K.; Liu, Y.-J.; Tian, L.-X.; Niu, J. Диетичната добавка на dl-метионил dl-метионин повишава производителността на растежа, антиоксидантната способност, съдържанието на незаменими аминокиселини и подобрява разнообразието на чревната микробиота в нилска тилапия (Oreochromis niloticus). бр. J. Nutr. 2020 г., 123, 72–83. [CrossRef]
15. Лин, Дж.; Zeng, Q.; Zhang, C.; Песен, К.; Лу, К.; Wang, L.; Rahimnejad, S. Ефекти от добавянето на Bacillus subtilis в диети, базирани на соево брашно, върху производителността на растежа, смилаемостта на диетата и здравето на червата при жаба бик Lithobates catesbeianus. Aquac. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]
16. Тао, X.; Той, Дж.; Lu, J.; Чен, З.; Джин, М.; Jiao, L.; Masagounder, K.; Liu, W.; Zhou, Q. Ефекти на Bacillus subtilis DSM 32315 (Gutcare®) върху производителността на растежа, антиоксидантния статус, имунната способност и чревната функция за млади Litopenaeus vannamei, хранени с диети с високо/ниско съдържание на рибно брашно. Aquac. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]
17. Де Оливейра, MJK; Сакомура, NK; Доригам, JCDP; Доранали, К.; Soares, L.; Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 самостоятелно или в комбинация с антибиотични стимулатори на растежа подобрява производителността при бройлери при заразяване с чревни патогени. домашни птици. Sci. 2019, 98, 4391–4400. [CrossRef]
18. Силва, TFA; Петрило, TR; Юнис-Агинага, Дж.; Marcusso, P.; Клаудиано, GDS; де Мораес, Франция; de Moraes, JRE Ефекти на пробиотика Bacillus amyloliquefaciens върху производителността на растежа, хематологията и чревната морфометрия при нилска тилапия, отглеждана в клетки. лат. Am. J. Aquat. Рез. 2015, 43, 963–971. [CrossRef]
19. Бай, С.; Катя, К.; Yun, H. Добавки в aquafeed. Във фуражите и практиките за хранене в аквакултурата; Woodhead Publishing: Sawston, UK, 2015; стр. 171–202. [CrossRef]
20. Уанг, Л.; Йе, Л.; Hua, Y.; Джан, Г.; Li, Y.; Джан, Дж.; Той, Дж.; Лиу, М.; Shao, Q. Ефекти на dietarydl-metionyl-dl-metionine (Met-Met) върху производителността на растежа, състава на тялото и хематологичните параметри на бели скариди (Litopenaeus vannamei), хранени с диети, базирани на растителни протеини. Aquac. Рез. 2019, 50, 1718–1730. [CrossRef]
21. Al-Deriny, SH; Dawood, MA; Заид, ААА; Ел-Трас, WF; Парай, бакалавърска степен; Ван Доан, Х.; Mohamed, RA Синергичните ефекти на Spirulina platensis и Bacillus amyloliquefaciens върху производителността на растежа, чревната хистоморфология и имунния отговор на нилска тилапия (Oreochromis niloticus). Aquac. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]
22. Сън, Й.; Джан, Й.; Лиу, М.; Li, J.; Lai, W.; Geng, S.; Юан, Т.; Liu, Y.; Di, Y.; Джан, В.; et al. Ефекти от хранителните добавки Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 върху производителността на растежа, антиоксидантния статус, имунитета и храносмилателната ензимна активност на бройлери, хранени с диети с царевично-пшенично-соево брашно. домашни птици. Sci. 2022, 101, 101585. [CrossRef]
23. NRC (Национален съвет за научни изследвания). Изисквания за хранителни вещества на риба и скариди; National Academic Press: Вашингтон, окръг Колумбия, САЩ, 2011 г. [CrossRef]
24. Guo, J.; Дейвис, Р.; Старки, С.; Davis, DA Ефикасност на различни покрити материали за предотвратяване на измиване на хранителни вещества за търговски диети на тихоокеански бели скариди Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 52, 195–203. [CrossRef]
25. Международна служба по епизоотии; Комисия по здравни стандарти за водните животни. Ръководство за диагностични тестове за водни животни. Международна служба за епизоотици. 2022 г. Налично онлайн: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (достъп на 1 септември 2022 г.).
26. Мартинез-Порчас, М.; Ezquerra-Brauer, M.; Мендоса-Кано, Ф.; Higuera, JEC; Vargas-Albores, F.; Martinez-Cordova, LR Ефект от добавянето на хетеротрофни и фотоавтотрофни биофлоци върху производствения отговор, физиологичното състояние и качеството след прибиране на реколтата на скариди с бели крака, Litopenaeus vannamei. Aquac. Rep. 2020, 16, 100257. [CrossRef]
27. Пеня-Родригес, А.; Elizondo-González, R.; Нието-Лопес, MG; Рике-Мари, Д.; Cruz-Suárez, LE Практически диети за устойчиво производство на кафяви скариди, Farfantepenaeus californiensis, млади екземпляри в присъствието на зелено макроводорасло Ulva clathrata като естествена храна. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 413–421. [CrossRef]
28. Пиери, В.; Валтер-Северино, Д.; Goulart-De-Oliveira, K.; Manoel-Do-Espírito-Santo, C.; Nascimento-Vieira, F.; Quadros-Seiffert, W. Култивиране на морски скариди в система с биофлочна технология (BFT) при различна алкалност на водата. Браз. J. Biol. 2015, 75, 558–564. [CrossRef] [PubMed]
29. Гонзалес-Галавиз, JR; Касияс-Хернандес, Р.; Флорес-Перес, MB; Lares-Villa, F.; Bórquez-López, RA; Gil-Núñez, JC Ефект на генотипа и протеиновия източник върху производителността на тихоокеанската бяла скарида (Litopenaeus vannamei). итал. J. Anim. Sci. 2020, 19, 289–294. [CrossRef]
30. Бел, ТА; Lightner, DV A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology; Организация по прехрана и земеделие на Обединените нации: Рим, Италия, 1988 г.
31. Касияс-Хернандес, Р.; Arévalo-Sainz, KJ; Gonzalez-Galaviz, JR; Родригес-Харамильо, MDC; Bórquez-López, RA; Gil Núñez, JC; Флорес-Перес, MB; Lares-Villa, F.; Ibarra-Gámez, JC; Barrios, RMM Ефектите от висока концентрация на въглероден диоксид върху производителността и тъканната хистология на скариди Litopenaeus vannamei. Aquac. Рез. 2021, 52, 3991–3996. [CrossRef]
32. Сяо, З.; Бури, Р.; Tsang, A. Количествен нишестен-йоден метод за измерване на активността на алфа-амилазата и глюкоамилазата. анален Biochem. 2006, 351, 146–148. [CrossRef]
33. Брадфорд, М. М. Бърз и чувствителен метод за количествено определяне на микрограмови количества протеин, използващ принципа на свързване на протеин-багрило. анален Biochem. 1976, 72, 248–254. [CrossRef]
34. Джан, С.-П.; Li, J.-F.; Wu, X.-C.; Zhong, W.-J.; Xian, J.-A.; Liao, S.-A.; Miao, Y.-T.; Wang, A.-L. Ефекти от различни диетични нива на липиди върху растежа, оцеляването и експресията на гени, свързани с имунната система, в тихоокеанската бяла скарида, Litopenaeus vannamei. Риба Миди. Immunol. 2013, 34, 1131–1138. [CrossRef]
35. Аная, LR; Касияс-Хернандес, Р.; Флорес-Перес, MB; Lares-Villa, F.; Ларес-Хименес, LF; Luna-Nevarez, P.; Gonzalez-Galaviz, JR Ефект на генетична линия, източник на протеин и ниво на протеин върху растежа, оцеляването и свързаната с имунитета генна експресия на Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020 г., 51, 1161–1174. [CrossRef]
36. Касияс-Хернандес, Р.; Arévalo-Sainz, KJ; Флорес-Перес, MB; Гарсия-Кларк, JG; Родригес-Аная, LZ; Lares-Villa, F.; BórquezLópez, RA; Gil-Núñez, JC; Gonzalez-Galaviz, JR Транскрипционен отговор на имунно-свързани гени в Litopenaeus vannamei, култивирани в системи за рециркулация на аквакултури с повишен CO2. Преподобни сутиени. de Zootec. 2021, 50, 20200197. [CrossRef]
37. Guzmán-Villanueva, LT; Escobedo-Fregoso, C.; Барахас-Сандовал, ДР; Gomez-Gil, B.; Пеня-Родригес, А.; Мартинес-Диас, SF; Балказар, JL; Quiroz-Guzmán, E. Оценка на микробната динамика и генната експресия на антиоксидантен ензим след прилагане на пробиотик в отглеждани тихоокеански бели скариди (Litopenaeus vannamei). Аквакултура 2020, 519, 734907. [CrossRef]
38. Калахан, BJ; Mcmurdie, PJ; Росен, MJ; Хан, AW; Джонсън, AJA; Holmes, SP DADA2 : Проба с висока разделителна способност от данни за ампликони на Illumina. Нац. Методи 2016, 13, 581–583. [CrossRef]
39. Лахти, Л.; Shetty, S. Microbiome R пакет; Освобождаване (3.16); Биопроводник: Бостън, Масачузетс, САЩ, 2017 г. [CrossRef]
40. Langille, MGI; Zaneveld, J.; Caporaso, JG; Макдоналд, Д.; Рицари, Д.; Reyes, JA; Клементе, JC; Burkepile, DE; Вега Търбър, RL; Найт, Р.; et al. Предсказуемо функционално профилиране на микробни общности с помощта на 16S rRNA маркерни генни последователности. Нац. Биотехнология. 2013, 31, 814–821. [CrossRef]
41. Корнехо-Гранадос, Ф.; Лопес-Завала, АА; Gallardo-Becerra, L.; Мендоса-Варгас, А.; Санчес, Ф.; Вичидо, Р.; Brieba, LG; Виана, Монтана; Сотело-Мундо, RR; Ochoa-Leyva, A. Микробиома на тихоокеанската белонога скарида разкрива различен състав на бактериалната общност между диви, аквакултурни и условия на огнище на AHPND/EMS. Sci. Rep. 2017, 7, 1–15. [CrossRef]
42. Façanha, FN; Оливейра-Нето, AR; Figueiredo-Silva, C.; Nunes, AJ Ефект на гъстотата на отглеждане на скариди и степенуваните нива на хранителен метионин върху растежа на Litopenaeus vannamei, отглеждани в система със зелена вода. Аквакултура 2016, 463, 16–21. [CrossRef]
43. Нунес, AJP; Sabry-Neto, H.; Masagounder, K. Суровият протеин в диети с ниско съдържание на рибно брашно за млади Litopenaeus vannamei може да бъде намален чрез добре балансирана добавка на незаменими аминокиселини. J. World Aquac. Soc. 2019, 50, 1093–1107. [CrossRef]
44. Llario, F.; Falco, S.; Sebastiá-Frasquet, M.-T.; Escrivá, J.; Родила, М.; Poersch, LH Ролята на Bacillus amyloliquefaciens върху Litopenaeus vannamei по време на узряването на система Biofloc. J. Mar. Sci. инж. 2019, 7, 228. [CrossRef]
45. Llario, F.; Романо, Луизиана; Родила, М.; Sebastiá-Frasquet, MT; Poersch, LH Приложение на Bacillus amyloliquefaciens като пробиотик за Litopenaeus vannamei (Boone, 1931), култивиран в биофлочна система. Иран. Дж. Риба. Sci. 2020, 19, 904–920.
46. Гариб-Насери, К.; Доригам, JCDP; Доранали, К.; Kheravii, S.; Swick, RA; Чокт, М.; Wu, S.-B. Модулациите на гените, свързани с целостта на червата, апоптозата и имунитета, са в основата на благоприятните ефекти на Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 при бройлери, хранени с диети с различни нива на протеин в модел на предизвикване на некротичен ентерит. J. Anim. Sci. Биотехнология. 2020, 11, 104. [CrossRef]
47. Ajogwu, TMC; Ekwelor, CC; Mbah, AN; Madukwe, EJ; Ekwelor, IA Скрининг на метионин-продуциращи Bacillus видове от нигерийски ферментирали хранителни подправки и ефекти на някои културни параметри върху натрупването на метионин. Am. J. Food Nutr. 2020, 9, 16–22. [CrossRef]
48. Ю, М.-К.; Li, Z.-J.; Lin, H.-Z.; Wen, G.-L.; Ma, S. Ефекти на диетични Bacillus и лечебни билки върху растежа, активността на храносмилателния ензим и серумните биохимични параметри на скаридите Litopenaeus vannamei. Aquac. Вътр. 2008, 16, 471–480. [CrossRef]
49. Йълмаз, С.; Ергюн, С.; Йигит, М.; Çelik, E. Ефект от комбинацията от диетичен Bacillus subtilis и транс-канелена киселина върху вродените имунни отговори и устойчивостта на дъгова пъстърва, Oncorhynchus mykiss към Yersinia ruckeri. Aquac. Рез. 2020, 51, 441–454. [CrossRef]
50. Заре, Р.; Кенари, АА; Sadati, MY Влияние на диетична оцетна киселина, протеин (пробиотик) и тяхната комбинация върху производителността на растежа, чревната микробиота, храносмилателните ензими, имунологичните параметри и състава на мастните киселини в сибирска есетра (Acipenser baerii, Brandt, 1869). Aquac. Вътр. 2021, 29, 891–910. [CrossRef]
51. Роджан, П.; Soisuwan, K.; Thongprajukaew, K.; Theapparat, Y.; Khongthong, S.; Jeenkeawpieam, J.; Salaeharae, T. Ефект на органични киселини или пробиотици самостоятелно или в комбинация върху производителността на растежа, усвояемостта на хранителните вещества, ензимните активности, чревната морфология и чревната микрофлора при пилета бройлери. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2018, 102, e931–e940. [CrossRef] [PubMed]
52. Хонг, Й.; Чу, Дж.; Кирби, Р.; Шийн, С.; Chien, A. Ефектите от замяната на протеин от рибно брашно със смес от брашно от странични продукти от домашни птици и ферментирало соево брашно върху производителността на растежа и хранителния състав на тъканите на азиатския лаврак (Lates calcarifer). Aquac. Рез. 2021, 52, 4105–4115. [CrossRef]
53. Бури, Л.; Berge, K.; Чукам, С.; Jintasataporn, O. Ефекти от различни нива на включване на фураж на брашно от крил върху растежа и морфологията на хепатопанкреаса на Litopenaeus vannamei. Aquac. Рез. 2020 г., 51, 4819–4823. [CrossRef]
54. Мурашита, К.; Matsunari, H.; Фукада, Х.; Сузуки, Н.; Furuita, H.; Оку, Х.; Rønnestad, I.; Йошинага, Х.; Ямамото, Т. Ефект на растителна диета с ниско съдържание на рибено брашно върху физиологията на храносмилането в жълтата опашка Seriola quinqueradiata. Аквакултура 2019, 506, 168–180. [CrossRef]
55. Рахимнеджад, С.; Юан, X.; Wang, L.; Лу, К.; Песен, К.; Zhang, C. Добавяне на хитоолигозахариди в диети с ниско съдържание на рибно брашно за тихоокеански бели скариди (Litopenaeus vannamei): Ефекти върху растежа, вродения имунитет, хистологията на червата и експресията на свързаните с имунитета гени. Риба Миди. Immunol. 2018, 80, 405–415. [CrossRef]
56. Пеня-Родригес, А.; Pelletier-Morreeuw, Z.; García-Luján, J.; Родригес-Харамильо, MDC; Guzmán-Villanueva, L.; Escobedo regoso, C.; Товар-Рамирес, Д.; Reyes, AG Оценка на суровия екстракт от вторичен продукт на Agave lechuguilla като фуражна добавка за млади скариди Litopenaeus vannamei. Aquac. Рез. 2019, 51, 1336–1345. [CrossRef]
57. Рей, GW; Liang, D.; Янг, Q.; Тан, Б.; Донг, X.; Chi, S.; Liu, H.; Джан, С.; Rimei, L. Ефекти от замяната на рибното брашно с диетичен соев протеинов концентрат (SPC) върху растежа, серумните биохимични индекси и антиоксидантните функции за млади скариди Litopenaeus vannamei. Аквакултура 2020, 516, 734630. [CrossRef]
58. Амбасанкар, К.; Dayal, JS; Vasagam, KK; Sivaramakrishnan, T.; Sandeep, KP; Паниграхи, А.; Ананда Раджа, Р.; Burri, L.; Vijayan, KK Растеж, състав на мастни киселини, имуносвързана генна експресия, хистологични и хематологични индекси на Penaeus vannamei, хранени с градирани нива на брашно от антарктически крил при две различни концентрации на рибено брашно. Аквакултура 2022, 553, 738069. [CrossRef]
59. Нур, З.; Нур, М.; Хан, SA; Юнас, В.; Уалиева, Д.; Хасан, З.; Yousafzai, AM Диетичните добавки на метионин подобряват растежа, вродения имунитет, храносмилателните ензими и антиоксидантната активност на rohu (Labeo rohita). Fish Physiol. Biochem. 2021, 47, 451–464. [CrossRef]
60. Юн, Х.; Шахкар, Е.; Хамидогли, А.; Лий, С.; Уон, С.; Bai, SC Оценка на диетично соево брашно като заместител на рибно брашно за млади скариди с бели крака, Litopenaeus vannamei, отглеждани в система biofloc. Вътр. Aquat. Рез. 2017, 9, 11–24. [CrossRef]
61. Ху, X.; Yang, H.-L.; Ян, Y.-Y.; Zhang, C.-X.; Ye, J.-D.; Lu, K.-L.; Hu, L.-H.; Zhang, J.-J.; Руан, Л.; Сън, Ю.-З. Ефекти на фруктоолигозахарид върху растежа, имунитета и чревната микробиота на скариди (Litopenaeus vannamei), хранени с диети с рибно брашно, частично заменено със соево брашно. Aquac. Nutr. 2019, 25, 194–204. [CrossRef]
62. Мамауаг, REP; Гао, J.; Нгуен, BT; Рагаза, JA; Кошио, С.; Ишикава, М.; Yokoyama, S. Добавките на dl-метионин и метионин дипептид в диетите са ефективни за развитието и растежа на ларви и млада червеноморска платика, Pagrus major. J. World Aquac. Soc. 2012, 43, 362–374. [CrossRef]
63. Ву, П.; Танг, Л.; Jiang, W.; Ху, К.; Liu, Y.; Jiang, J.; Куанг, С.; Танг, В.; Джан, Й.; Джоу, X.; et al. Връзката между диетичния метионин и растежа, храносмилането, абсорбцията и антиоксидантния статус в чревните и хепатопанкреатичните тъкани на под-възрастен бял амур (Ctenopharyngodon idella). J. Anim. Sci. Биотехнология. 2017, 8, 1–14. [CrossRef]
64. Encarnação, P. Функционални фуражни добавки във фуражи за аквакултури. Във формула Aquafeed; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2016; стр. 217–237. [CrossRef]
65. Сие, С.; Wei, D.; Ин, П.; Zheng, L.; Гуо, Т.; Liu, Y.; Tian, L.; Niu, J. Диетична замяна на протеиновия синтез с нарушено рибно брашно и имунен отговор на млади тихоокеански бели скариди, Litopenaeus vannamei при ниска соленост. Comp. Biochem. Physiol. Част Б Биохимия. Mol. Biol. 2018, 228, 26–33. [CrossRef]
66. Айку, С.; Шен, Дж.; Тан, Б.-П.; Dong, X.-H.; Liu, H.-Y. Ефекти от намаляване на диетичното рибно брашно с добавки с дрожди върху растежа на Litopenaeus vannamei, имунния отговор и устойчивостта на болести срещу Vibrio harveyi. Microbiol. Рез. 2020, 239, 126554. [CrossRef]
