Експеримент 4 Ефект на Cistanche Deserticola Phenylethanol Glycoside върху мишки Перименопаузален синдром Депресия Модел Материали и методи 1 Експериментални материали

1.1 Опитни животни

SPF клас мишки, порода Kunming, женски, 18~22g, предоставени от Shandong Lukang Pharmaceutical Co., Ltd., тази партида мишки номер на сертификат: 0016003; лабораторен сертификат номер SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 Експериментални лекарства

Cistanche фенилетанол гликозидсе получава съгласно метода от експеримент 1 и съдържанието достига 66,47%. Gengnian'an Capsule, съставки: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, кора от божур, Poria cocos, седеф, curculigo, Schisandra chinensis, магнетит, Polygonum multiflorum vine, Uncaria, плаваща пшеница, polygonum multiflorum . Функции и показания:Подхранвайте ин и покорявайте ян, облекчаване на проблемитеиуспокой ума. Използва се при менопаузални горещи вълни и изпотяване, световъртеж, шум в ушите, раздразнителност и безсъние. Спецификации: 0.3g на капсула. Употреба и дозировка: Перорално по 3 капсули наведнъж 3 пъти на ден. Производител: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. Производствен партиден номер: 121104. Номер на одобрението: Национално одобрение за лекарства № Z14021848.

КОЛКО ВРЕМЕ НЕОБХОДИМО НА CISTANCHE ЗА РАБОТА?

Соеви изофлавони и витамин Е меки капсули, списък на съставките: соеви изофлавони на прах, витамин Е, слънчогледово масло, желатин, глицерин, вода, тартразин, титанов диоксид. Емблематични съставки и съдържание: Всеки 100 g съдържа 55,2 mg соеви изофлавони (изчислени като генистеин) и 608,5 mg витамин Е. Здравословни функции: Увеличава плътността на костите. Начин на употреба и дозировка: Приемайте по 1 капсула 2 пъти дневно с топла вода. Спецификации: 500mg×100 капсули. Производител: Weihai Ziguang Biotechnology Development Co., Ltd. Производствен партиден номер: 13070302. Номер на одобрение: Guoshijianzi G20080032. 1.3 Експериментални реактиви

Натриева карбоксиметил целулоза, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., партиден номер: 20120418; пеницилин натрий за инжектиране, North China Pharmaceutical Co., Ltd., спецификация: 4 милиона единици, производствен партиден номер: c1206807; разтвор на формалдехид (аналитичен клас), Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd., номер на производствената партида: 20130902; 0,9% натриев хлорид за инжектиране, Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; спецификация: 250ml, производствен партиден номер: 1301265303;

Хлорал хидрат, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, партиден номер 20120827; мишка E2 ELISA комплект за откриване, R&D Company, партиден номер: 20140101A; комплект за откриване на мишка T ELISA, R&D Company, партиден номер: 20140101A; мишка LH ELISA комплект за откриване, R&D Company, партиден номер: 20140101A; Комплект за откриване на миши FSH ELISA, R&D Company, партиден номер: 20140101A;

Комплект за откриване на мишка DA ELISA, R&D Company, партиден номер: 20140101A; Мишка 5-Комплект за откриване HT ELISA, R&D Company, партиден номер: 20140101A. 1.4 Експериментални инструменти

Електронна везна, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., модел: JY601; електронна аналитична везна, Ohaus (Shanghai) Company, модел: AR1140/C; високоскоростна настолна центрофуга, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, модел: TGL-168 ; Електрическа термостатна водна баня, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., модел: HWS12; Тестер за автономна активност на мишката, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., модел: ZZ-6; Измервател за избягване на тъмнината на мишката, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., модел: BA-200; тестер за окачване на опашката, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., модел: TS-200; високоскоростна хладилна центрофуга, клон Zhongjia на HKUST Innovation Co., Ltd., модел: KDC-160HR; регулируем инструмент за пипетиране, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

Четец за микроплаки, American BIO-RAD Company, модел: 680;

Електрически микроскоп, Япония OLYMPUS Company, модел: BX61.

2 Експериментални методи

2.1 Моделиране и прилагане на лекарства

Бяха избрани 90 женски мишки Kunming с телесно тегло 23-25g и 10 бяха избрани на случаен принцип като празна група и бяха подложени на фиктивна операция, а останалите мишки бяха използвани за създаване перименопаузални модели. След претегляне, мишките се анестезират чрез интраперитонеално инжектиране на 10% хлоралхидрат (0.03ml/10g) и коремната позиция се фиксира. След това космите бяха отрязани от гърба на мишката под последното ребро, в пресечната точка на средната аксиларна линия и на около 1 cm от външната страна на гръбначния стълб, и след това бяха нарязани след дезинфекция. Кожата и мускулите на гърба са широки около 0.5-1cm. В полето на разреза се вижда млечнобяла лъскава мастна маса, в която е вграден яйчникът. Използвайте малки пинсети, за да хванете внимателно мастната маса и да я издърпате от разреза, отделете мастната маса и ще видите група тънки, неправилни, жълто-червени яйчници. Когато режете, първо лигирайте фалопиевите тръби (включително мазнините) под яйчниците с тънки конци и след това отстранете яйчниците. След операцията маточните рога се връщат обратно в коремната кухина, мускулите и кожата се зашиват и по същия начин се отстраняват двата яйчника. След операцията животните бяха внимателно отгледани и пеницилин 200,000 u/kg (0,1 mL всеки) беше инжектиран интрамускулно за предотвратяване на инфекция в продължение на 3 последователни дни, веднъж на ден. 5 дни след операцията се извършва вагинално изследване на всяка мишка една по една, веднъж на ден в продължение на 5 последователни дни, за да се определи дали яйчниците са напълно отстранени. Мишките, показващи еструсна реакция в цитонамазката, бяха изхвърлени и 60 напълно кастрирани мишки бяха произволно и равномерно разделени на 6 групи за експериментални цели, а именно моделна група, група Mengnianan, група соев изофлавон, голяма, средна иНиска доза Cistanche фенилетанол гликозидна група. На животните във всяка група бяха дадени съответните лекарства на 10-ия ден след операцията. След 6 дни на приложение, мишките в празната група се отглеждат по 5 на клетка, с нормална храна и вода, без никаква стимулация. Всички 6 моделни групи бяха отгледани при 1 мишка на клетка и им бяха дадени различни стимулации на случаен принцип всеки ден. Седем стрес фактора бяха приложени на случаен принцип в рамките на 18 дни: влажна постеля (1g постеля/1 ml вода); плуване в ледена вода (4 градуса, 5 минути); топлинен стрес (45 градуса, 5 минути); нощно осветление (24h); захващане на опашката (1 мин); лишаване от вода (24 часа); на гладно (24 часа). Стимулът се дава на случаен принцип всеки ден и всеки стимул не може да се появи непрекъснато в продължение на 18 дни.

Метод на приготвяне: 0.5% CMC Метод на приготвяне: Претеглете 4 g натриева карбоксиметил целулоза и я смесете с дестилирана вода, за да получите 800 ml.

Дозите на големи, средни и малки дози от Cistanche фенилетанол гликозидна група бяха 200mg/kg, 10{{20}}mg/kg и 50mg/kg съответно (приложен обем 0,1ml/10g). Метод на приготвяне: Претеглете съответно 2000 mg, 1000 mg и 500 mg Cistanche phenylethanoid glycoside, разтворете ги с малко количество 0,5% CMC, след това регулирайте обема до 100 ml, разбъркайте добре и това е. Gengniangan капсули (675 mg/kg, смесени с дестилирана вода до 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g, еквивалентни на 15 пъти клиничната доза); Метод на приготвяне: вземете 9 капсули Gengnianan, първо използвайте малко количество от 0,5% CMC Dissolve, след това регулирайте обема до 40 ml и разбъркайте добре, за да получите дозата суспензия на капсула Gengnianan (675 mg/kg). Соев изофлавон витамин Е мека капсула (250 mg/kg, използвайте дестилирана вода, за да направите 25 mg/ml, 0,1 ml/10 g, еквивалентно на 15 пъти клиничната доза); Метод на приготвяне: Вземете 2 соеви изофлавон витамин Е меки капсули, използвайте ги първо. Разтворете малко количество от 0,5% CMC, след това коригирайте обема до 40 ml и разбъркайте добре, за да получите дозата соев изофлавон витамин Е мека капсулна суспензия (250 mg/kg ). Начин на съхранение: съхранявайте в хладилник, съхранявайте на топло по време на употреба.

Метод на приложение: Животните във всяка група получават съответните лекарства на 10-ия ден след операцията. Групата Gengnian'an получава перорално приложение на Gengnian'an капсулна суспензия 675 mg·kg-1, групата на соев изофлавон получава перорално 250 mg·kg-1 соев изофлавон витамин Е суспензия на мека капсула и големи, среден ималки дози Cistancheфенилетанол. Гликозидната група получава перорално големи, средни и малки дози Cistanche фенилетанол гликозид 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{{ 5}}, съответно 0,1 ml/10 g. Групата с празна проба и групата с модела се дишат със сонда със същия обем от 0,5% разтвор на CMC веднъж дневно в продължение на 30 последователни дни.

2.2 Обекти за наблюдение и методи за откриване

Принудително плуване: На първия ден след края на хроничната стресова стимулация, времето на неподвижност на мишките във всяка група в рамките на 6 минути беше измерено за 2-6 минути. (Поставете мишките във всяка група в чаша от 2000 ml. Температурата на водата е 25 градуса. В допълнение към необходимото минимално движение, необходимо за поддържане на плаване, крайниците на животните спират да се движат и се записват като неподвижни. Запишете общото време на неподвижност от 2 до 6 минути в рамките на 6 минути) Тест за доброволна активност: На втория ден след края на хроничната стресова стимулация беше измерен броят на спонтанните активности на мишките в рамките на 5 минути.

Метод за избягване на тъмнината: На 3-тия ден след края на хроничната стресова стимулация, поставете опашката на мишката в кутията за измерване с лице към малкия отвор в тъмната стая и проведете обучение. След 24 часа измерете отново латентността на влизането на мишката в тъмната стая за първи път и времето, необходимо за влизане в тъмната стая в рамките на 5 минути. Брой електрически удари.

Тест за окачване на опашката: На 5-ия ден след края на хроничната стресова стимулация, времето на неподвижност на мишките във всяка група в рамките на 6 минути беше измерено за 2-6 минути.

2 часа след последната доза (12 часа без храна или вода), мишките се претеглят, очните ябълки се отстраняват, кръвта се събира, серумът се отделя и съдържанието на E2, T, LH и FSH в серума се определя измерено; след това мишките бяха убити чрез дислокация на шийните прешлени и мишките бяха дисектирани. , отстранете тимуса, далака и маточната тъкан, претеглете мокрото им тегло и изчислете индекса на органа (индекс на органа=мокро тегло на орган mg/тегло на мишката g), след това отстранете мозъка, отрежете половината и подгответе мозъка тъканен хомогенат. Използва се ензимен имуноанализ за определяне на съдържанието на моноаминови невротрансмитери 5-HT и DA в хомогената на мозъчната тъкан. Тимусът, далакът, матката и мозъчните тъкани бяха фиксирани в 10% разтвор на формалдехид, поставени в парафин, нарязани и оцветени с HE. Морфологичните промени на всяка група се наблюдават под светлинен микроскоп. 2.3 Метод за определяне на комплекта

Вземете серумни проби: Използвайте епруветки, които не съдържат пирогени и ендотоксини. Избягвайте каквато и да е клетъчна стимулация по време на операцията. След като вземете кръвта, центрофугирайте я при 3000 rpm за 10 минути, за да отделите бързо и внимателно серума и червените кръвни клетки. Вземете проби от тъканен хомогенат: Добавете подходящо количество физиологичен разтвор към тъканта и я разтрийте. Центрофугирайте при 3000 rpm за 10 минути и вземете супернатантата.

Методът за определяне на миши (Mouse) естрадиол (E2) ELISA комплект е същият като експеримент 2. Концентрациите на стандартните продукти (S0-55) са: 0, 4, 8, 16, 32 и 64 pmol/L.

Методът за определяне на миши тестостерон (T) ELISA комплект е същият като този на естрадиол (E2). Концентрациите на стандартните продукти (S0-55) са: 0, 50, 100, 200, 400, 800 pg/mL.

Методът за определяне на комплекта ELISA за миши фоликулостимулиращ хормон (FSH) е същият като този на естрадиол (E2). Концентрациите на стандартните продукти (S0-55) са: 0, 5, 10, 20, 40 и 8{{30} }mIU/mL. Методът за определяне на комплекта ELISA за миши (Mouse) лутеинизиращ хормон (LH) е същият като този на естрадиол (E2). Концентрациите на стандарта (S0-55) са: 0, 0,5, 1, 2, 4 и 8mIU/mL. Методът за определяне на миши 5-хидрокситриптамин (5-HT) ELISA комплект е същият като този на естрадиол (E2). Концентрациите на стандартните продукти (S0-55) са: 0, 15, 30, 60, 120, 240 ng/ml. Методът за определяне на комплекта за откриване на миши (Mouse) допамин (DA) ELISA е същият като този на естрадиол (E2). Концентрациите на стандартните продукти (S0-55) са: 0, 7,5, 15, 30, 60 и 120 pg/ml.

Може да се види от Таблица 21 и Фигура 25, че в сравнение с празната група, времето на неподвижност на мишките в моделната група се е увеличило значително при експериментите с принудително плуване и окачване на опашката (P<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).

2 Ефекти върху автономните дейности при мишки с модел на депресия в перименопауза

Резултатите от теста за автономна активност на мишки във всяка експериментална група са показани в Таблица 22 и Фигура 26.

Може да се види от таблица 23 и фигури 27 и 28, че в сравнение с празната група, периодът на латентност на мишките в моделната група е значително намален и броят на електрическите удари е значително увеличен (P<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).

4 Ефекти върху органния индекс при мишки с модел на депресия в перименопауза

Може да се види от Таблица 24 и Фигура 29, че в сравнение с празната група, индексът на тимуса, индексът на далака и индексът на матката на моделната група са значително намалени (P<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose Cistanche фенилетанол гликозидгрупа Индексът на тимуса и индексът на матката на мишките могат да бъдат значително увеличени (P<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).