Клетъчният екстракт от жасмин самбак като антиоксидантен бустер срещу стареенето на кожата, част 1
Jul 03, 2023
Резюме: Оксидативният стрес играе основна роля в процеса на стареене на кожата чрез производството на реактивни кислородни видове и образуването на напреднали крайни продукти на гликиране (AGEs). Ето защо антиоксидантните съставки са необходими на пазара за грижа за кожата и използването на молекули, идващи от растителни клетъчни култури, предоставя уникална възможност. В тази статия бяха изследвани характеристиките на хидроетанолов екстракт, получен от клетки на Jasminum sambac (JasHEx). Антиоксидантните и анти-AGE свойства са изследвани чрез мултидисциплинарен подход, съчетаващ масспектрометрични и биоинформационни in vitro и ex vivo експерименти. JasHEx съдържа производни на фенолна киселина, лигнани и тритерпени и е установено, че намалява производството на цитозолни реактивни кислородни видове в кератиноцитите, изложени на екзогенен стрес. Той също така показа способността да намалява образуването на AGE и да увеличава производството на колаген тип I в извънклетъчния матрикс. Данните показват, че антиоксидантните свойства на JasHEx са свързани с неговите активности на улавяне на свободни радикали и хелатиране на метали и активиране на пътя Nrf2/ARE. Това може добре да обясни противовъзпалителната активност на JasHEx, свързана с намаляването на нивата на NO в LPS-стимулираните макрофаги. По този начин JasHEx може да се счита за мощен антиоксидантен бустер срещу стареенето на кожата, предизвикано от оксидативен стрес.
Гликозидът на цистанхе може също така да повиши активността на SOD в сърдечните и чернодробните тъкани и значително да намали съдържанието на липофусцин и MDA във всяка тъкан, като ефективно улавя различни реактивни кислородни радикали (OH-, H₂O₂ и др.) и предпазва от увреждане на ДНК, причинено от ОН-радикали. Фенилетаноидните гликозиди Cistanche имат силна способност за пречистване на свободните радикали, по-висока редуцираща способност от витамин С, подобряват активността на SOD в сперматозоидната суспензия, намаляват съдържанието на MDA и имат известен защитен ефект върху функцията на мембраната на спермата. Полизахаридите Cistanche могат да повишат активността на SOD и GSH-Px в еритроцитите и белодробните тъкани на експериментално стареещи мишки, причинени от D-галактоза, както и да намалят съдържанието на MDA и колаген в белите дробове и плазмата и да увеличат съдържанието на еластин, имат добър очистващ ефект върху DPPH, удължава времето на хипоксия при стареещи мишки, подобрява активността на SOD в серума и забавя физиологичната дегенерация на белия дроб при експериментално стареещи мишки. С клетъчна морфологична дегенерация експериментите показват, че Cistanche има добра антиоксидантна способност и има потенциала да бъде лекарство за предотвратяване и лечение на заболявания, свързани със стареенето на кожата. В същото време, ехинакозидът в Cistanche има значителна способност да улавя свободните радикали DPPH и може да улавя реактивни кислородни видове, да предотвратява индуцираното от свободните радикали разграждане на колагена и също така има добър възстановителен ефект върху увреждането на аниона от свободните радикали на тимина.
Кликнете върху Къде мога да купя Cistanche
【За повече информация:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
Ключови думи: стареене на кожата; реактивни кислородни видове (ROS); крайни продукти на напреднало гликиране (AGEs); Хидроетанолов екстракт от жасмин самбак (JasHEx); масспектрометрия; метаболомика; Глобална социална молекулярна мрежа за естествен продукт (GNPS); еритроиден ядрен фактор 2-свързан фактор 2 (Nrf2)
1. Въведение
Генетичните вътрешни фактори и външните агенти като ултравиолетово облъчване, инфрачервено облъчване, ксенобиотици и замърсители на околната среда причиняват производството на реактивни кислородни видове (ROS). Те се генерират от активирането на митохондриалната дихателна верига, цитохром p450 и NADPH оксидазите [1]. ROS включват свободни радикали (супероксиден анион, хидропероксилен радикал, алкокси радикал и хидроксилен радикал) и нерадикални молекули (водороден пероксид и синглетен кислород) [2]. Когато антиоксидантните системи са претоварени, ROS се натрупват в клетките и генерират така наречения оксидативен стрес, който е основен фактор за стареенето на кожата [3].
Наистина, оксидативният стрес причинява както увреждане на ДНК, така и окисление на липиди и протеини, заедно със задействането на пътя на митоген-активирани протеин кинази (MAPK) (AKT, JNK, ERK и p38) [4]. Това, от своя страна, насърчава експресията на провъзпалителни цитокини, растежни фактори и адхезивни молекули чрез стимулиране на транскрипционните фактори AP-1 и NF-κB. Освен това, активирането на пътя на MAPK причинява промени в дермалната матрица чрез намаляване на нивата на колаген. Той ускорява разграждането на колагена чрез модулиране на експресията на матрични металопротеинази (MMPs) и техните тъканни инхибитори TIMPs и намалява синтеза на нов колаген, като блокира TGF-тип II рецептор/Smad сигнализация. В допълнение към това, оксидативният стрес променя състоянието на кожата, нарушавайки епидермалния калциев градиент, който е от съществено значение за целостта и функцията на вроговената обвивка, стимулирайки функцията на мастните жлези и предизвиквайки дегенерация на меланоцити [5].
Успоредно с това образуването на модифицирани биомолекули, известни като крайни продукти на напреднала гликация (AGEs), насърчава оксидативния стрес в клетките и тъканите [6]. Развитието на тези биомаркери за стареене се индуцира от различни фактори на околната среда като цигарен дим, високи нива на диети с рафинирани и прости въглехидрати, готвени храни при висока температура и заседнал начин на живот; AGE са стабилни и необратими продукти, получени от неензимната реакция между редуциращи захари и протеини, нуклеинови киселини или липиди, последвани от допълнителни пренареждания [7]. Наистина, началната точка на образуването на AGE е реакцията на Maillard, при която карбонилните групи на редуциращите захари реагират обратимо със свободни аминогрупи на протеини, нуклеинови киселини или аминофосфолипиди, за да образуват бази на Шиф. Тези имини спонтанно се пренареждат в по-стабилен кетамин, наречен продукти на Амадори. Те произвеждат реактивни дикарбонили (като глиоксал или метилглиоксал), които реагират с лизинови и аргининови функционални групи на протеини, давайки голямо разнообразие от AGEs [8,9]. Те се класифицират в различни групи въз основа на способността им да излъчват флуоресценция и да образуват напречни връзки.
Действието на AGE се медиира от рецепторите за AGEs (RAGEs), които са трансмембранни протеини, принадлежащи към суперсемейството на имуноглобулините от тип I клетъчно повърхностни молекули, експресирани в различни типове клетки, включително кератиноцити, фибробласти и макрофаги. Свързването на AGEs/RAGEs увеличава производството на ROS главно чрез активирането на NADPH оксидазите (NOXes) и митохондриалната респираторна верига, което води до оксидативен стрес и всички гореописани последващи ефекти [6,8].
Освен това протеините на извънклетъчния матрикс (ECM), особено колагенът, са силно чувствителни към гликирането. Наистина, нивата на AGE структурата пентозидин, получена от колаген, са значително по-високи при стари, отколкото при млади субекти [10]. Гликирането на колаген променя не само механичните свойства на самия колаген, който става по-твърд и по-крехък [11], но също и тези на извънклетъчния матрикс, засягайки поведението на резидентните клетки (растеж, диференциация, подвижност, генна експресия и отговор на цитокини) и взаимодействия матрица-клетка [12].
При този сценарий, антиоксидантните съставки са много търсени в козметичната област за намаляване на образуването на AGE и свързаната с тях окислителна каскада: екстракти, извлечени от вида Jasminum sambac, принадлежащ към семейство Oleaceae, са интересни с техните антиоксидантни свойства и съвместната им употреба в народната медицина лекарство за лечение на кожни заболявания [13]. Въпреки това, растителните екстракти показват няколко недостатъка, като лоша биоустойчивост, потенциално замърсяване с пестициди, торове или патогени и променливостта на техния качествен и количествен състав, повлиян от сезоните и условията на околната среда. Валидна алтернатива на растенията, като източник на биоактивни козметични съставки, са културите от растителни клетки, които предлагат няколко предимства: (i) висока устойчивост на производствения процес, тъй като не е необходима земеделска земя; (ii) непрекъснато снабдяване с естествени продукти без зависимост от географски, сезонен и репродуктивен цикъл на растенията; (iii) липса на рискове от заразяване с патогени, замърсители на околната среда и агрохимични остатъци; (iv) стандартизирани условия на отглеждане, които позволяват получаване на по-високи и по-възпроизводими нива на биомаса и добив на метаболит; (v) висока гъвкавост, тъй като концентрацията на съединенията може да бъде оптимизирана чрез промяна на условията на култивиране и (vi) по-лесни и отнемащи по-малко време протоколи за екстракция, намаляващи необходимостта от агресивни разтворители [14,15].
Тук е изследван хидроетанолов екстракт, получен от клетъчни култури от Jasminum sambac (JasHEx). Целта на нашето изследване е широка химическа и биологична характеристика на JasHEx, по-специално изследване на неговите свойства против гликиране и стареене. Първо, усъвършенствани подходи, базирани на масова спектрометрия, бяха използвани за получаване на подробна структурна характеристика на екстракта. След това бяха проведени in vitro и ex vivo експерименти, за да се докаже биологичната активност на JasHEx като антиоксидант.
2. Материали и методи
2.1. Култури от растителна тъкан и приготвяне на екстракти
Сертифициран арабски жасмин (Jasminum sambac) е получен от местен разсадник ("Ladre di Piante", Pistoia, регион Тоскана, Италия). Листата на Jasminum sambac се накисват в 70 процента етанол (Sigma Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ) за 1 минута и се стерилизират повърхностно с 1 процент (v/v) търговска белина, допълнена с Tween 2{{ 9}} (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) за 8 минути, последвано от три изплаквания със стерилна дестилирана вода. След това листата се изрязват на парчета 0.5–1.0 cm и се култивират върху MS среда с пълна концентрация [16], съдържаща 3 процента (w/v) захароза, 0 .2 mg/L 2,4D и 8 g/L фито-агар. Експлантите се субкултивират всеки месец върху свежа среда в продължение на три месеца. След като се получи жълто-зелен, ронлив и бързорастящ калус, растителните клетки се прехвърлят в течната MS среда, допълнена с 3 процента (w/v) захароза и 0,2 mg/L 2,4D. Суспензията се разбърква в ротационен шейкър при 110 pm и 27 ◦C в тъмна климатична стая. Тъмно отгледаните клетки се увеличават всяка седмица от малки до големи колби, докато се достигнат течни суспензионни култури от около 177 g/L. Приготвянето на хидроетанолов екстракт от клетъчна култура на Jasminum sambac (JasHEx) се извършва чрез добавяне на 2000 mL разтвор на етанол/вода (90/10, v/v) към 500 g клетки. Сместа се хомогенизира за 3 минути при 1500 rpm и 6 минути при 3800 rpm с помощта на ножова мелница Grindomix GM300 (Retsch GmbH, Haan, Германия). Получената суспензия се разбърква при 400 rpm в продължение на 2 часа при 25 ◦C, като се избягва излагането на светлина. След това суспензията се центрофугира при 6300 rpm за 10 минути при 4 ◦C. Супернатантата се отстранява, филтрува се и след това се концентрира под вакуум в ротационен изпарител (IKA RV8, IKA-Werke GmbH & Co., Staufen, Германия), настроен на 25 °C. Накрая рН се довежда до 7.0 с 10 N NaOH и след това се лиофилизира до получаване на фин прах.
2.2. UPLC–MS/MS анализ за JasHEx химическа характеристика
Беше постигната двуфазна екстракция бутанол/вода. Бутаноловата фракция се изсушава и размразява в метанол (10 mg/mL) преди UPLC–MS/MS анализ, извършен на Q-Exactive Classic Mass Spectrometer, оборудван със система UltiMate™ 3000 UPLC (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA ). Всички хроматографски серии бяха проведени, както вече е описано от Ceccacci et al. [17].
2.3. Глобални анализи на социалните молекулярни мрежи на природни продукти
За идентифициране на метаболити е използвана социална молекулярна мрежа на Global Natural Products [18]. Всички тези MS и MSMS сигнали, които не са присвоени от GNPS, бяха разумно проверени и присвоени съответно на литературата. Необработените файлове бяха преобразувани във формат mzXML от софтуера за общ потребителски интерфейс на MS Converter, преди търсенето в спектралната библиотека на GNPS. Извършено е с толеранс на йонна маса на прекурсора от 0.025 Da, толеранс на йонна маса на фрагмент от 0.02 Da, минимални съвпадащи пикове от 2 и праг на резултата от 0,7. Резултатите са потвърдени ръчно.
Предварителната обработка на данни е извършена от Mzmine (Версия 2.53, Softpedia, Букурещ, Румъния) [19] и е извършена задача за базирана на функции молекулярна мрежа (FBMN) [20], както е докладвано от Ceccacci et al. [17]. Получените мрежови файлове бяха импортирани в Cytoscape (Версия 3.9.1, Национален институт по общи медицински науки на САЩ (NIGMS), Bethesda, MD, САЩ) [21].
2.4. Количествен анализ на лигнани и тритерпени
Същите настройки на UPLC, посочени за качествените експерименти, бяха използвани за количествен анализ на лигнани, докато за този на тритерпените те бяха подобрени, за да се разделят две двойки изомери, арджунолова/азиатска киселина и олеанолова/урсолова киселина. Анализът беше извършен на Q-Exactive Classic масспектрометър, както е дефинирано по-горе. Разделянето се извършва с Phenomenex Kinetex (Torrance, CA, USA) EVO C18 300 Å (150 × 2.1 mm, размер на частиците 5 µm). Подвижната фаза се състои от A (5 mM воден разтвор на амониев ацетат, рН 9.00 коригирано с амониев хидроксид) и B (1{{40}}0 процента ацетонитрил), използвайки градиентно елуиране от 13–28 процента В при 0–20 минути, 28–65 процента В при 20–24 минути, 65–75 процента В при 24–28 минути, 75–95 процента при 28–28,5 минути, 95 процента при 28,5 –32 минути, 95–13 процента при 32–32,1 минути и 13 процента при 32,1–44 минути. Скоростта на потока е 0.450 mL/min и обемът на инжектиране е 5 µL. Както за лигнаните, така и за тритерпените, данните са получени с метода за маса, описан от Ceccacci et al. [17]. Закупихме нортахелогенин (#LCA52174) от Biosynth Carbosynth, матаирезинол (#80497) и маслинова киселина (#83209) от PhytoLab GmbH & Co.KG, секоизоларицирезинол (#60372) и арюнолова киселина (#SMB00119) от Sigma-Aldrich (Сейнт Луис) , Мичиган, САЩ), азиатска киселина (#0027), олеанолова киселина (#0041 S) и урсолова киселина (#0037 S) от Extrasynthèse (Genay, Франция). Кривите на калибриране бяха получени чрез инжектиране на стандарти в концентрация от 0,05 до 25 µM за лигнани и 0,1 до 25/250 µM за тритерпени. Границата на откриване (LOD) и границата на количествено определяне (LOQ) за стандартите бяха определени въз основа на съотношението сигнал/шум (S/N).
2.5. Кожни клетъчни култури и експланти
Обезсмъртени човешки кератиноцити (HaCaT), закупени от Addexbio Technologies (Сан Диего, Калифорния, САЩ), бяха запазени в Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA), която беше допълнена с 10 процента фетален говежди серум (FBS; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) в 95 процента въздух, 5 процента CO2 и овлажнена атмосфера при 37 ◦C. Човешки дермални фибробласти (HDF) бяха запазени в Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), допълнена с 10 процента фетален говежди серум (FBS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA ) в 95 процента въздух, 5 процента CO2 и овлажнена атмосфера при 37 ◦C. Кожни експланти, получени от кожата на здрави жени донори (на възраст 31 и 40 години) в хирургичния център Villa Cinzia (Неапол, Италия), бяха култивирани в 24-трансуелни плаки в DMEM/FBS плюс антибиотици в условия въздух-течност при 37 ◦C в овлажнен въздух с 5 процента CO2. Всички донори са дали своето писмено информирано съгласие за използването на кожните тъкани, съгласно Декларацията от Хелзинки.
2.6. Цитозолен ROS анализ в H2O2-стресирани HaCaT клетки
За този процес 1,8 × 104 HaCaT бяха посяти в 96-плаки с ямки и отгледани в продължение на 20 часа. След това клетките бяха третирани в продължение на 2 часа с различни концентрации на JasHEx (0.0006 процента, 0.002 процента и 0.006 процента p/v) или с 500 µM аскорбинова киселина, използвана като положителна контрола. След това те се промиват с PBS (фосфатно буфериран физиологичен разтвор) и се инкубират при 37 ◦C със 100 µL/ямка от разтвор, съдържащ: 10 mM Hepes, 1,3 mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 5 mM глюкоза и 5 mM глюкоза. µM CM-H2DCFDA (5-(и-6)-хлорометил-20,70 -дихлородихидрофлуоресцеин диацетат, Invitrogen). След 45 минути беше извършено промиване с PBS и базовият интензитет на флуоресценция на клетките беше измерен при 535 nm (възбуждане 485 nm), като се използва инструментът EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). След това окислителният стрес се индуцира чрез добавяне на 450 µM H2O2 и флуоресценцията на пробите се измерва след 30 минути.
2.7. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за откриване на AGE в стресирани с глиоксал човешки дермални фибробластни (HDF) клетки
За тази стъпка 1,5 × 104 HDF се посяват в 96-плаки с ямки и се отглеждат в продължение на 2 дни. След промиване с PBS, клетките се фиксират за 1{{10}} min със 100 µL 4 процента формалдехид в PBS. Впоследствие те бяха третирани с JasHEx (0,0006 процента и 0,002 процента p/v) или положителна контрола от 1 µM аминогуанидин в присъствието на 0,5 процента глиоксал при 50 ◦C за 1 седмица. След инкубация те бяха обработени за ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), използвайки специфично антитяло срещу AGE (Abcam ab23722).
2.8. Имунохистофлуоресцентен анализ върху стресирани с метил-глиоксал кожни експланти за откриване на фибрилин-1
Кожни експланти са получени от двама пациенти, на 31 и 4 0 години. От всяка кожна биопсия бяха генерирани три удара за всяко третиране, настъпващо на интерфейса въздух-течност. През първия ден ударите бяха третирани с JasHEx (0.002 процента и 0,006 процента p/v) или положителната контрола (1 mM аминогуанидин) и след 24 часа, 500 µM метил- беше добавен глиоксал. Обработките бяха обновявани на всеки два дни за общо седем дни. В края на периода щанцовете бяха обработени за хистологичен анализ, фиксирани в 4 процента PFA, инкубирани в 15 процента захароза, след това в 30 процента захароза и криосъхранени в OCT съединение (оптимална температура на рязане) при -80 ◦C . Криоразрез от 5 µm беше получен с криостат CM1520 Leica (Leica Biosystems, Buffalo, IL, USA). Слайдове с криосекции се хидратират за 30 минути в PBS и се поставят в "блокиращ" разтвор (6 процента BSA, 5 процента серум, 20 mM MgCl2, 0, 2 процента Tween) за 1 час. Впоследствие те бяха инкубирани с първичното анти-фибрилин 1 антитяло (MA5-12770, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). за 16 часа при 4 ◦C. Слайдовете се промиват с PBS в продължение на 30 минути и след това се инкубират с вторичното анти-заешко Alexa-Fluor 546 антитяло (A11035, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) в продължение на 1 час. Ядрата се оцветяват с DAPI (40, 6-5 диамидино-2-фенилиндол) 1 g/mL в PBS за 10 минути. Изображенията бяха получени с флуоресцентен микроскоп и анализирани със софтуера ImageJ (Версия 1.53a, Национални здравни институти, САЩ).
2.9. Тест AlphaLISA за измерване на съдържанието на проколаген тип I C-пептид (PIP)
В тази стъпка 8 × 103 HDF се посяват в 96-плака с ямки и се третират в продължение на 24 часа с JasHEx (0.0006 процента, 0,002 процента, и 0.006 процента p/v) или с TGF- (2.5 ng/mL). След третирането, клетките се обработват съгласно инструкциите на доставчика на комплекта за колаген alpha LISA hPIP (AL353HV, (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)).
2.10. Тест за активиране на транскрипция на базата на Nrf2 луцифераза
Тук 6 × 103 HaCaT клетки в 96-плака с ямки бяха посяти и отгледани в продължение на 16 часа. След това те бяха подложени на тест за активиране на транскрипция, базиран на Nrf2 луцифераза, като се използва ARE репортерният комплект BPS Bioscience (Сан Диего, Калифорния, САЩ, #60514). Готов за трансфекция ARE луциферазен репортерен вектор (съдържащ луциферазен ген на светулка под контрола на ARE реагиращи елементи, разположени нагоре по веригата на минимален промотор) заедно с вътрешна контрола (конститутивно експресиращ Renilla луциферазен вектор) бяха временно ко-трансфектирани в HaCaT клетки, използвайки Реагент за трансфекция на HP ДНК на ген X-TREME (Roche, Basilea, Швейцария, #6366244001). След трансдукция в продължение на 24 часа, клетките бяха третирани в продължение на 2 часа с екстракта (0,0006 процента, 0,002 процента и 0,006 процента p/v) или положителната контрола Resveratrol (50 µM). След това те бяха подложени на луциферазен анализ с Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega, Рим, Италия #E2920). Накратко, клетките се инкубират със субстрат на луцифераза на светулка за 10 минути преди измерване на луминесценцията в 96-четец на плака с ямки (Victor Nivo, Waltham, MA, USA). Съотношението на луминесценция от светулка и Renilla беше изчислено за нормализиране и сравняване на транскрипционната активност на Nrf2.
2.11. Анализ на експресията на SOD-1(NM_000454.5) и OH-1(NM_002133.3) гени в HaCaT клетки
За този процес 1,5 × 105 HaCaT клетки на ямка се отглеждат в 6-плаки с ямки в продължение на 16 часа и се инкубират в продължение на 6 часа с екстракта (0.002 процента и 0.006 процента p/v) или 50 µM Resveratrol като положителна контрола. В края на инкубацията общата РНК се екстрахира с помощта на комплекта "GenElute™ Total RNA Purification" (от Sigma-Aldrich (Saint Louis, MI, USA) и се третира с DNase I (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) при 37 ◦C за 30 минути, за да се отстрани замърсяването на геномната ДНК. 500 ng от общата РНК се транскрибират ретро с помощта на ензима обратна транскриптаза (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Полуколичествени RT-PCRs се провеждат с помощта на двойката универсални праймери 18S праймер/конкурент (Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) като вътрешни стандарти PCR продуктите се разделят на 1,5 процента агарозен гел и се разглеждат с помощта на iBright инструмент (Invitrogen Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Последователностите на праймерите, използвани за амплификация, са следните: HsSOD1Fw: GAAAGTAATGGACCAGTGAAGG; HsSOD1Rv: ATTGGGCGATCCCAATTACACC; OH-1Fw GAACTTTCAGAAGGGTCAGG; OH-1Rv GCTCAATGTTGAGCAGGAA.
2.12. Анализ на азотен оксид в LPS-стимулирана RAW 264.7
Концентрацията на NO се определя в миши макрофаги RAW 264.7, посяти в концентрация от 1,5 × 105 клетки/ямка в 96-плаки с ямки за 24 часа и предварително третирани с екстракт ({{1 0}}.0006 процента, 0,002 процента и 0,006 процента p/v) или с 10 µM TPCK (положителна контрола) за 2 часа, преди инкубацията с 2 µg/mL LPS за 18 часа. Количеството NO, превърнато в нитрит, се изчислява чрез добавяне на реактив на Griess (разтвор на N-(1-нафтил)етилендиамин и сулфанилова киселина, Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) и след 30 минути, абсорбцията е измерена при 540 nm от четец на многоямкови плаки (EnVision, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)
3. Резултати
3.1. Качествен и количествен анализ на хидро-етанолов екстракт от клетъчна култура на жасмин самбак (JasHEx)
Беше извършен UPLC-MS/MS анализ на JasHEx и спектрометричните данни с висока разделителна способност бяха анализирани с помощта на Global Natural Products Social Molecular Networking (GNPS), уеб-базирана система за масова спектрометрия, която подпомага анотацията на природни продукти (NP) [18] . По-специално, GNPS спектрална библиотека беше извършена за постигане на онлайн дерепликация. Химическите видове, които не са идентифицирани от GNPS, са определени в съответствие с литературата. Както е показано на фигури 1 и 2 и таблица 1, бяха идентифицирани повече от 50 съединения, принадлежащи към няколко класа вторични метаболити, главно полифеноли и терпени. Наистина, екстрактът от JasHEx съдържа производни на фенолна киселина, лигнани (секоизоларицирезинол, нортрахелогенин и матаирезинол) и тритерпеноиди (аржунолова киселина, аспарагинова киселина, маслинова киселина, олеанолова киселина и урсолова киселина).
【За повече информация:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
