Етанолов екстракт от листа на Neem (Azadirachta Indica A. Juss) върху функцията на черния дроб и бъбреците на плъхове
Mar 05, 2022
Въведение
разработването на лекарства от естествени продукти привлича вниманието на света днес. естествените продукти имат уникална химическа структура, произвеждат разнообразие от биологични дейности и имат свойства, подобни на лекарства [1]. плюс практиката на медицината, използваща естествени продукти, съществува от праисторически времена за предотвратяване и лечение на различни заболявания. Естествените продукти предлагат много предимства по отношение на ефективността и селективността на молекулата-мишена, така че да могат да се използват многократно за ефективно задоволяване на спешната нужда от лекарства [2]. Естествените продукти съдържат активни съединения с имплантация [8, 9], антихипергликемични, противоязвени, противогъбични, антибактериални, противовъзпалителни, имуномодулиращи, антимутагенни, противоракови, антималарийни, антивирусни, антиоксидантни [10–12], антифертилни [13, 14] и контрацепция [9, 11]. Различни части от растението ним са успешно изолирани, съдържат повече от 140 химични съединения [10] и се използват като билкови лекарства от хиляди години [14]. Neem съдържа различни първични съединения, включително производни на мазнини, въглехидрати и протеини и вторични съединения като флавоноиди, стероиди, сапонини, терпеноиди, алкалоиди, гликозиди и танини [7–15]. Растенията Neem представляват световен интерес поради тяхната ефикасност, без да показват странични ефекти. плюс традиционното използване на растението нийм е доста безопасно и повече от 75 процента от традиционната медицина използва екстракт от листа на нийм. плюс историята на употребата му, от съществуващите доклади, не показва никакви странични ефекти от листата на нийм. Въпреки това, цялостна оценка на безопасността на употребата на състави от листа от нийм никога не е била извършена [11].
CISTANCHE ЩЕ ПОДОБРИ БЪБРЕЧНАТА/БЪБРЕЧНАТА ФУНКЦИЯ
Предишното проучване съобщава, че екстрактът от листата на нийм има токсични ефекти върху черния дроб ибъбрек [4, 11]; обаче, други доклади показват, че екстрактът от листата на нийм може да защити черния дроб ибъбрекот увреждане [16–18]. В района на Ачех Бесар, провинция Ачех, Индонезия, местните хора са използвали листата на ним като зеленчуци и са ги използвали за предотвратяване на бременност, без да знаят страничните ефекти. плюс e безопасността на листата на нийм до момента все още не е ясна. Досега, доколкото ни е известно, все още има ограничени проучвания, които оценяват ефекта на етанолния екстракт от листата на нийм върху черния дроб ибъбречна функция. В настоящото проучване целта беше да се проучи ефектът от прилагането на етанолов екстракт от листа на нийм върху черния дроб ибъбречна функциячрез изследване на концентрацията на AST, ALT, урея и креатинин и хистопатологичен черен дроб ибъбрекпри мъжки плъхове.
Ключови думи:бъбречна функция; Бъбречни тъкани; бъбречна недостатъчност; Заболяване на бъбреците; Бъбречна
Материали и методи
Колекция от проби от листа на Neem.Листата на нийм са събрани от село Kajhu, област Ачех Бесар, провинция Ачех, Индонезия, през септември 2019 г. Идентифицирането на листата на нийм е извършено в хербариума на Богориенсе, Биологичен изследователски център, Индонезийски институт на науките (LIPI), Богор, Индонезия (1454 /IPH.1.01/If.07/VII/2019), и е посочен като Azadirachta indica A. Juss.Приготвяне на етанолов екстракт от листа на Neem.Пресни листа от ним се събират, измиват, сушат на въздух и се смачкват, за да се получи суров прах. Освен това, суровият прах се мацерира с етанол 70 процента в продължение на 7 дни. plus en, филтратът се изпарява чрез използване на ротационен изпарител при 50 градуса за получаване на вискозни екстракти.Експеримент с животни.Експерименталните животни бяха 24 мъжки плъха Wistar с 150–250 g телесно тегло. Плъховете се аклиматизират в продължение на 7 дни и се разделят на случаен принцип в четири групи (T0, T1, T2 и T3), като всяка група съдържа 6 плъха. Т0 е контролната група без лечение, а Т1, Т2 и Т3 са групите за лечение, които са били
прилагали етанолов екстракт от листа на Neem съответно със 100, 200 и 300 mg/kg телесно тегло. екстрактът се прилага перорално с помощта на стомашна сонда в продължение на 48 дни, а на 49-ия ден се вземат кръвни проби за определяне на концентрациите на AST, ALT, урея и креатинин и след това черния дроб ибъбрекбяха събрани тъкани за оценка на хистопатологията. По време на изследването на плъховете се дава стандартна храна и вода ad libitum.
Биохимичен анализ.Кръвните проби (2–3 ml) се вземат от сърцето с помощта на стерилна спринцовка. plus en, кръвта се прехвърля в епруветката Eppendorf и се оставя на стайна температура (30 градуса) за 10 минути. Кръвта се центрофугира за 10 минути при 3000 rpm. plus e серумът се отделя и съхранява в хладилник (0 20 градуса). Освен това, AST, ALT, урея и креатинин в кръвта бяха изследвани с помощта на химичен анализатор (Rayto RT-1904C). plus e процедурата за определяне на концентрациите на AST, ALT, урея и креатинин се извършва съгласно протокола на производителя.
Хистопатологично изследване. Thд черен дроб ибъбрекплъхове се фиксират в 10% неутрален буфериран разтвор на формалин за 24 часа, дехидратират се в алкохолна серия и се изчистват в разтвор на ксилол, последвано от поставяне върху парафиновия блок. Тъканите, вградени в парафиновия блок, се нарязват с помощта на ротационен микротом на 4 µm дебелина, монтират се върху предметни стъкла, оцветяват се с хематоксилин и еозин и се изследват под светлинен микроскоп при увеличение 10 × 10 .Статистически анализ.Данните се анализират с помощта на дисперсионен анализ (еднопосочна ANOVA), последван от posthoc тест на Дънкан с помощта на SPSS 24. p-стойност<0.05 was="" considered="" statistically="">
CISTANCHE ЩЕ ПОДОБРИ БЪБРЕЧНАТА/БЪБРЕЧНАТА БОЛКА
Резултати и дискусия
6e Концентрация на AST и ALT. плюс e концентрацията на AST на T0, T1, T2 и T3 беше 290.9 ± 202,5 U/L, 277,2 ± 167,2 U/L, 421,3 ± 2{ {28}}1,5 U/L и съответно 366,3 ± 276,9 U/L. плюс e концентрацията на AST в Т2 и Т3 групите има тенденция да се повишава в сравнение с Т{{30}} (контролна група). Въпреки това концентрациите на AST в групите Т1, Т2 и Т3 не показват значителна разлика от групата Т0 (р > 0,05). плюс e концентрацията на ALT на Т0, Т1, Т2 и Т3 е съответно 108,6 ± 23,1 U/L, 116,3 ± 51,9 U/L, 105,9 ± 15,2 U/L и 95,9 ± 36,2 U/L. плюс концентрацията на ALT в Т2 и Т3 групите има тенденция към намаляване в сравнение с Т0 (контролна група).
Въпреки това концентрациите на ALT в групите Т1, Т2 и Т3 не показват значителна разлика спрямо групата Т0 (p > 0.05) (Таблица 1). Ензимът AST е един маркер, който се използва за оценка на наличието на увреждане на черния дроб. плюс е ензимът играе роля в процеса на глюконеогенеза за катализиране на превръщането на аминогрупата на аспарагиновата киселина в кетоглутарова киселина за получаване на оксалооцетна киселина. Ензимът AST се намира в цитозолните и митохондриалните изоензими на черния дроб, скелетните мускули, сърдечните мускули,бъбреци,мозък, панкреас, бели дробове, левкоцити и червени кръвни клетки. Този ензим AST обаче е по-малко чувствителен и специфичен за оценка на увреждането на черния дроб [19]. Въпреки че няма значителни разлики в концентрациите на AST в групите на лечение (T1, T2 и T3) в сравнение с контролната група (T0), концентрацията на AST има тенденция да се повишава в групите T2 и T3 в сравнение с T 0 (контролна група). plus e увеличението вероятно е било късно поради активните съединения на екстрактите от листата на нийм, като флавоноиди, танини, сапонини, алкалоиди и стероиди, но активните съединения на етаноловия екстракт от листата на нийм не са идентифицирани да повишават AST. Повишаването на ензима AST не е непременно последвано от увреждане на черния дроб, тъй като този ензим е специфичен не само в черния дроб, но и в други телесни тъкани.
Това проучване също установи, че ензимът ALT има тенденция към намаляване в групата на лечение (T1, T2 и T3) в сравнение с контролната група (T0), но намаляването на ензима ALT не е статистически значимо. Ензимите ALT са по-добър предиктор за увреждане на черния дроб от ензимите AST, тъй като този цитозолен ензим е открит в най-високи концентрации в черния дроб и е по-специфичен при оценката на увреждането на чернодробната функция [20]. плюс е ензимът, който играе роля в глюконеогенезата чрез катализиране на трансфера на аминогрупи от аланин към кетоглутарова киселина за получаване на пирогроздена киселина [19]. ALT се състои от 496 аминокиселини и се открива в цитозола на хепатоцитите. Ензимната активност на ALT в черния дроб е около 3000 пъти по-голяма от серумната активност, така че в случай на хепатоцелуларно увреждане или смърт, ALT, освободен от увредени чернодробни клетки, ще увеличи измерената активност на ензима ALT в серума [21].
CISTANCHE ЩЕ ПОДОБРИ БЪБРЕЧНАТА/БЪБРЕЧНАТА ДИАЛИЗА
Мохамед и др. [22] установяват, че етаноловият екстракт от листата на нийм причинява намаляване на ензимите AST и ALT при плъхове. Етаноловият екстракт от листата на нийм не е имал странични ефекти върху черния дроб и дори служи като защита на черния дроб. Проучването, проведено от Haque et al. [23] също установяват, че екстрактът от листа на нийм не предизвиква промени в нормалната серумна активност на ензимите AST и ALT при мъжки плъхове. Bhangra и др. [24] съобщават, че прилагането на 500 mg/kg телесно тегло екстракт от листа на нийм при индуцирани с парацетамол плъхове намалява увреждането на черния дроб, както се вижда от нормалните концентрации на AST и ALT и хистопатологичните наблюдения. Резултатите от изследването, проведено от Dkhil et al. [17] посочва защитен ефект на метаноловия екстракт от листата на нийм с доза от 500 mg/kg телесно тегло върху черния дроб на плъх, индуциран от цисплатин. Mallick и др. [25] съобщават, че метаноловият екстракт от листата на нийм няма токсичен ефект върху черния дроб на плъх дори при високи дози. Антиоксидантното съдържание на екстракта от листата на нийм има хепатопротективен ефект. Проучването, проведено от Hartono и Prabowo [26] установи, че администрираният етанолов екстракт от листата на нийм върху плъхове чрез индуциране на високи дози парацетамол в продължение на десет дни може също да намали активността на ензима ALT при експериментални животни. Намаляването на ензима ALT се дължи на активното съединение на екстракта от листата на нийм, което функционира като хепатопротекция чрез инхибиране на окислителното увреждане на черния дроб. Антиоксидантите могат да намалят образуването на свободни радикали чрез директно изчистване, което намалява образуването на реактивни кислородни видове (ROS), които имат токсични ефекти върху мембранните фосфолипиди и причиняват широк спектър от клетъчни увреждания. Антиоксидантите могат да намалят оксидативния стрес на чернодробните клетки и активността на ензима ALT в кръвта ще намалее.
Концентрация на урея и креатинин.Концентрацията на урея на T{{0}}, T1, T2 и T3 е 51,1 ± 7.0 mg/dl, 55,6 ± 8,5 mg/dl, 44,5 ± 5,4 mg/dl и 48,4 ± 3,4 mg/dl, съответно. Концентрациите на урея в групите Т1, Т2 и Т3 показват значителни разлики спрямо групата Т0 (p < 0.{{30}}5).="" концентрацията="" на="" креатинин="" на="" t0,="" t1,="" t2="" и="" t3="" беше="" 0.22="" ±="" 0.{{40}}4="" mg/dl,="" {{44="" }}.24="" ±="" 0.03="" mg/dl,="" 0,21="" ±="" 0,03="" mg/dl="" и="" 0,25="" ±="" 0,03="" mg/dl,="" съответно.="" концентрациите="" на="" креатинин="" в="" групите="" т1,="" т2="" и="" т3="" не="" показват="" значителна="" разлика="" от="" групата="" т0="" (р=""> 0,05) (Фигура 1). Theбъбрекима важна роля в отделянето на отпадъчни продукти и токсини като урея, креатинин и пикочна киселина; той също има функция в регулирането на обема на извънклетъчната течност, осмоларитета, концентрациите на електролити и производството на хормони. плюс e функционална единица набъбреке нефронът, състоящ се от гломерул, проксимални тубули, дистални тубули и събирателни канали [27]. plus e резултатите показват, че има значителни разлики в концентрациите на урея в групите на лечение (T1, T2 и T3) в сравнение с контролната група (T0), а концентрацията на урея намалява в групите T2 и T3 в сравнение към T0 (контролна група). Уреята е азотсъдържащо съединение, образувано в черния дроб като краен продукт на протеиновия метаболизъм и цикъла на урея. Около 85 процента от площта се отделя презбъбреци, а останалото се отделя през храносмилателния тракт. Серумната урея се повишава при състояния на прочистване на бъбреците, както при остри, така и при хроничнибъбречна недостатъчност. Уреята може да се повиши и при други състояния като кървене от горната част на стомашно-чревния тракт, дехидратация, катаболитен процес и диета с високо съдържание на протеини [27].В това проучване се наблюдава намаляване на концентрацията на урея в групата на лечение в сравнение с контролната група. е посочено, че етаноловият екстракт от листата на нийм не повлиявабъбречна функцияна мъжкия плъх. Според Guyton и Hall [28] общата урея в кръвта се определя от хранителния протеин и способността набъбрециза отделяне на урея. Ако бъбреците са увредени, уреята ще се натрупа в кръвта. Показано е повишена урея в плазматабъбречна недостатъчностпри изпълнение на филтриращата си функция. плюс д условие набъбречна недостатъчност, което се характеризира с много високи плазмени нива на урея, е известно като уремия.
Уреята е крайният продукт на азота, получен от катаболизма на протеини и аминокиселини, произведен от черния дроб и разпределен във всички вътреклетъчни и извънклетъчни течности. Вбъбрек, уреята се филтрира от кръвта от гломерулите и частично се реабсорбира от водата. Повишената урея е индикатор, че скоростта на гломерулна филтрация е лоша. Повишената концентрация на урея се свързва сзаболяване на бъбрецитеили недостатъчност, запушване на пикочните пътища отбъбреккамъни, застойна сърдечна недостатъчност, дехидратация, треска, шок и кървене в храносмилателния тракт.Проучването установи също, че няма значителни разлики в концентрациите на креатинин в групите на лечение (T1, T2 и T3) в сравнение с контролната група (T0). е посочено, че етаноловият екстракт от листата на нийм не е причинил увреждане на плъховебъбрек.Креатининът обикновено се използва като мярка забъбречна функция. Концентрацията на креатинин се влияе не само от продукта на мускулната маса, но и от мускулната функция, мускулния състав, активността, диетата и здравословното състояние. Повишени концентрации на креатинин се откриват и при мускулна дистрофия, анемия, левкемия и хипертиреоидизъм [29]. Креатининът е най-често използваният маркер за оценкабъбречна функция.концентрацията на креатинин осигурява индикатор за действието на гломерула. Креатининът е страничен продукт на креатин фосфата в мускулите и се произвежда с постоянна скорост от тялото. В по-голямата си част креатининът се изчиства от кръвта изцяло отбъбреци. Повишеният креатинин показва намалено прочистване отбъбреци. Серумният креатинин е по-точна оценка набъбречна функцияотколкото урея [27].
Moneim и др. [16] установяват, че прилагането на екстракт от листа на нийм в доза от 500 mg/kg телесно тегло за пет дни при плъхове не предизвиква промени в концентрациите на урея и креатинин при плъхове. Кепала и др. [30] също установяват, че плъхът, хранен с екстракт от листа на нийм в доза от 500 mg/kg телесно тегло в продължение на 14 дни, причинява намаляване на концентрациите на урея и креатинин при плъхове, предизвикано от цисплатин заувреждане на бъбреците. Етаноловият екстракт от листата на нийм действа като нефропротектор приувреждане на бъбреците.Проучването, проведено от Somsak et al. [18] установяват, че водният екстракт от листата на нийм в дози от 1000 и 2000 mg/kg телесно тегло няма токсичен ефект върху плъхове. Екстрактът от листа на ним може да се използва като кандидат за нефропротекция срещу увреждане набъбреци.
Хистопатология на черния дроб и бъбреците.Хистопатологичните наблюдения на черния дроб в контролната група (Фигура 2(а) и групата на лечение при дози от 100 mg/kg (Фигура 2(b)), 200 mg/kg (Фигура 2(c)) и 300 mg/kg (Фигура 2(d)) показва, че черният дроб, централните вени и хепатоцитните клетки изглеждат нормални (Фигура 2).бъбрекхистопатологични наблюдения в контролната група (Фигура 3(a)) и групата на лечение при дози от 100 mg/kg (Фигура 3(b)), 200 mg/kg (Фигура 3(c)) и 300 mg/kg ( Фигура 3 (d)) показва нормален вид на гломерула и проксималните и дисталните тубули. плюс това не е имало хистологична промяна вбъбрек(Фигура 3).
Черният дроб ибъбрециса органи, които играят важна роля в метаболизма и отделянето на лекарства или други вещества. В проучването е показано, че прилагането на етанолов екстракт от листата на нийм в дози от 100, 200 и 300 mg/kg не причинява аномалии и увреждане на черния дроб на плъхове. plus e черния дроб при третирани плъхове показва нормална обща структура на черния дроб и нормален вид на централните вени и хепатоцитните клетки. plus e чернодробната хистопатология следва резултатите от анализа на ензимите AST и ALT, които показват, че няма значителна разлика между контролната и лекуваната група. Въпреки че има увеличение на ензима AST в групата с 200 и 300 mg/kg в сравнение с контролната група, чернодробната хистопатология изглежда нормална. Ензимът AST не е специфичен за увреждане на черния дроб. AST се намира предимно в червените кръвни клетки, сърдечните и скелетните мускули ибъбреци. AST е по-малко чувствителен към черния дроб от ALT [19].
Theбъбрекхистопатологичните наблюдения след прилагане на етанолов екстракт от листа от нийм с дози от 100, 200 и 300 mg/kg не показват разлика в сравнение с контролата. Theбъбрекпри третирани плъхове показва нормално общоструктурата набъбреки нормален вид на гломерула и тубулите. Тази констатация се подкрепя от анализа на урея и креатинин в кръвта на плъхове, който не показва значителна разлика между контролната и третираната група. Уреята и креатининът са биохимични параметри, които са основните показатели забъбречна функция. Креатининът обаче е по-точна оценка набъбречна функцияотколкото урея [27]. Това е в съответствие с някои от предишните доклади, че екстрактът от листа на нийм има потенциални хепатопротективни и нефропротективни ефекти [31]. Кусума и др. [32] установиха, че етаноловият екстракт от листата на нийм не повлиява диаметъра на хепатоцитите, диаметъра на чернодробните лобули и теглото на черния дроб при плъхове. За разлика от това, изследването на Katsayal et al. [33] установяват, че прилагането на метанолов екстракт от листа от нийм в дози от 500, 1000 и 2000 mg/kg причинява аномалии в черния дроб и бъбреците на третирани плъхове в сравнение с контролите. Тази разлика в резултатите вероятно се дължи на различните дозировки на екстракта от листата на ним. Theрезултатите от това проучване показват, че етаноловият екстракт от листата на Нийм от Kajhu не причинява увреждане на черния дроб ибъбрецина мъжки плъхове. плюс това се дължи на активното съединение на етаноловия екстракт от листата на нийм, който е антиоксидант. Предишни проучвания показват, че етаноловият екстракт от листата на нийм от Kajhu съдържа флавоноиди, алкалоиди, танини, сапонини и стероиди [34]. plus e активните съединения, които действат като антиоксиданти, са флавоноидите. плюс етаноловият екстракт от листа на нийм има силна антиоксидантна активност [35]. плюс нас, етаноловият екстракт от листата на нийм от Kajhu е безопасен за черния дроб и бъбреците на мъжки плъхове.
CISTANCHE ЩЕ ПОДОБРИ БЪБРЕЧНАТА/БЪБРЕЧНАТА НЕДОСТАТЪЧНОСТ
Изводи
Етаноловият екстракт от листата на нийм не причинява увреждане на черния дроб ибъбрекна мъжкия плъх, както е показано от анализа на AST, ALT ензимите, концентрацията на урея и креатинин и хистопатологичен черен дроб ибъбрек. Въпреки това е необходимо по-нататъшно проучване за цялостна оценка на безопасността на екстракта от листа на нийм в различни дози, за да се получи ясна картина на безопасността на листата на нийм за медицината.
