Ехинакозид от цистанш тубулоза ефективно лекува остеопороза
Mar 08, 2022
За контакти: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com
Част I.: Ефикасност и безопасност на Ехинакозид в модел На Плъх Остеопения
Xiaolin Yang, 1 Фей Ли, 2 Янан Янг, 3 Джинян Шен, 2 Run Zou, 2 Панпан Жу, 2 Чунфън Джан, 2 Жонглин Янг, 2 и Пинг Ли
Това проучване има за цел да проучи ефикасността и безопасността наEкитайкозид(ECH), като се използва модел на остеопения плъх. Четиридесет и осем 6-месечни женски плъхове Sprague-Dawley са случайно разделени на една подгрупа, управлявана от измамници (SHAM) и пет OVX (овариектомизирани) подгрупи: SHAM с vehiCle 0,5% карбоксиметилцелулоза натрий (0,5% CMC-Na) и OVX с превозно средство (OVX), OVX със 17 естрадиол (E2), и OVX сECH(ехинакозид) на степенни дози (ECH(ехинакозид)ECH-L, ECH -M, и ECH-H). Ефектите на ECH(ехинакозид)и E2 върху серумните биохимични параметри, костната минерална плътност (КмП), костните биомеханични свойства, костната микроархитектура, и имунохистохимията са изследвани, а оценките на безопасността също са оценени. Резултатите показват, че ECH(ехинакозид)лечения подобрени обща бедрена кост BMD, костна микроархитектура, и биомеханични свойства и понижени нива на серумния маркер в сравнение с OVX групата. Нещо повече, ECH (ехинакозид)приложение значително повишава нивото на остеопротегерин (ОПГ), и намален рецепторен активатор на нивото на ядрения фактор лиганд (RANKL) в серума, както и в проксималната бедрена ВажноECH (ехинакозид)лечението амилиорира липидните параметри без общите разрези на нежеланите събития на матката и млечната жлеза в сравнение с OVX и SHAM групите. Това проучване доказва, че прилагането наECH (ехинакозид) продължение на 12 седмици може ефективно и безопасно да предотврати OVX индуциранаостеопорозапри плъхове чрез увеличаване на съотношението OPG/RANKL.
цистанш ехинакозид може да лекува Остеопороза
1. Въведение
Остеопорозае един вид скелет метаболитно разстройство характеризира с намаляване на костната маса и микроархитектурно влошаване на костната тъкан, което може да доведе до скелетна чупимост и фрактури. Тя вече се превърна в една от водещите заплахи за здравето на застаряването на населението [1, 2], доказана от приблизително разпространение на 200 милиона души по целия свят, а годишните съпътстващи разходи, за това заболяване, са надхвърлили приблизително 10 милиарда долара [3, 4]. Изчерпването на естрогена нарушава костната хомеостаза, като променя диференциацията и активността на остеобластите и остеокластите и следователно играе много важна роля в започването и развитието наостеопорозаи е доказано, че е основен рисков фактор за развитието на постменопаузалниостеопорозапри жени [5, 6]. Естрадиолните естери и конюгирани естрогени имат силни потискащи ефекти върхуостеопоротичнидейности в костта [7]. Понастоящем приложението на бис- фосфонати и естрогенозаместителна терапия (ERT) са две основни форми на лечение и профилактика наостеопорозаи дори да се намали честотата на фрактура при постменопаузалниостеопорозажени [8, 9]. Бифосфонатите обаче водят до атравматична фрактура на костта като следствие от адинамично състояние, подобно на описаното при пациенти на хронична поддържаща хемодиализа [10], И дългосрочни естрогенни лечения са придружени от нежелани странични ефекти, особено по-високата честота на коронарна болест на сърцето, инвазивен рак на гърдата, инсулт, белодробна емболия, рак на ендометриума, рак на дебелото черво, и фрактура на бедрото [11]. Така новите ефективни и безопасни стратегии за лечение наостеопорозаса силно необходими.
Паразитното растение Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight (паразитно растение Orobanchaceae)е широко разпространена в Северна Африка и азиатските страни, и стъблата на C. tubulosa обикновено се използват за лечение на бъбречен дефицит и невродегенеративни заболявания като насърчаващ агент [12].ECH(ехинакозид) (фигура 1) е един от основните съставки на известна традиционна китайска медицина HerbaЦистанши(стъблата наСистанчедезертикола,Систанчесалса, илиСистанчетубулоза) [13]. Изследванията доказаха, чеECH(ехинакозид), като естествено полифенолово съединение, има различни видове фармакологични дейности, като антиоксидантно, противовъзпалително, невропротективно, хепатопротективно, азотен оксид радикално-продухване [14], и вазодилативни такива [15]. Понастоящем няма налични доклади за терапевтичните ефекти наECH(ехинакозид) и неговото оку-ECH(ехинакозид) наостеопорозав моделите на OVX плъхове.
Фигура 1: Химична структура на ехинакозида от цистанче тубулоза
Предишното ни проучване показва, чеECH(ехинакозид)може да стимулира регенерацията на костите чрез увеличаване на съотношението OPG/RANKL в MC3T3-E1 клетки [16]. Това предполага, чеECH(ехинакозид)гарантира по-нататъшно разследване. За да проучим допълнително това, проведохме експерименти в модел OVX плъх [17], стандартен модел за разследване на морфологични иECH(ехинакозид)промени след различни лечения заостеопороза. В настоящия доклад Сметната закуска направи оценка на ефектите от 12 седмициECH(ехинакозид)лечения за биохимични параметри в серума, Качество на костите, костна микроархитектура, и имунохистохимия, както и показатели за безопасност, включително липидни параметри, канцерогенен антиген (CEA), и рак антиген 125 (CA-125) нива в серума и матката и млечната жлеза хистология при OVX плъхове. Най-важното е, че за първи път съобщихме за ефекта отECH(ехинакозид)върху системата OPG/RANKL чрез изследване на серумните и костните OPG/RANKL нива.
Цистанче тубулоза
2. Материали и методи
2.1. Растителни материали и животни.
Свежите стъбла наСистанчетубулоза(Schrenk) R. Wight, добит през ноември 2010 г. в Синдзян, Китай, са закупени от Института по екология и география Китайска академия на науките в Синдзян, Китай. Материалите са идентифицирани от професор Пинг Ли, Училище по традиционна китайска медицина, Китай фармацевтичен университет. Образецът на ваучера (No.02369433) е депозиран в нашата лаборатория в Китайския фармацевтичен университет.
Всички материали бяха изсушени при стайна температура до постоянно тегло.ECH(ехинакозид)е била отделена и пречистена от екстракт от етанол отСистанчетубулоза(Schenk) R. Wight от нашата лаборатория по метод, съобщен преди това [18] с лека модификация, и неговата структура е потвърдена от UV, IR, MS, и NMR спектроскопия. Чистотата му (98,5%) е определена от Серия Agilent 1260 HPLC с ДЕТЕКТОР DAD (Agilent Scientific, Co., САЩ). 17-естрадиол (E2, Sigma; чистота ≥ 98%) е използван като положителен контрол.
Ехинакозид от Цистанче тубулоза
2.2. Фармацевтично лечение.
Плъховете са разделени на случаен принцип на шест групи (8 плъхове във всяка група): шам-оперирани (SHAM), двустранно овариектомизирани (OVX), лечение с OVX и E2, и три други OVX и различни дозиECH(ехинакозид)групи на лечение. Всички плъхове са анестезирани чрез интраперитонеална (т.е.) инжектиране на 300 mg/kg хлорален хидрат (Sinopharm, Китай) и след това овариектомизирани на седмица 0 и групата sHAM претърпя измамни овариектомия. Хирургичната процедура е извършена при асептични условия след протокола университет на Китай фармацевтичен университет грижа за животните. Плъховете са оставени нелекувани за 4 седмици, за да позволят на плъховете да се възстановят и развият остеопения. След 4 седмици плъховете в групата на OVX и E2 получават дневни интрагастрик (т.е.) приложения на E2 (50g/kg/ден) в продължение на 12 седмици; измамните и OVX плъховете са били подложени на ежедневно интрагастриално приложение на 0,5% CMC-Na (Sinopharm, Китай) като превозно средство. E2 иECH(ехинакозид)са разтворени в превозно средство от 0,5% CMC-Na, а плъховете в OVX иECH(ехинакозид)групи, получавали ежедневно т.е. администрации наECH(ехинакозид)(ECH-L, 30 mg/kg/ден; ECH-M, 90 mg/kg/ден; и ECH-H, съответно 270 mg/kg/ден) за 12 седмици. Телесното тегло е измерено ежеседмично, аECH(ехинакозид)дозата е съответно коригирана.
2.3. Животинска евтаназия и колекция от образци.
При некропсията кръвта е събрана от сънната артерия под обща анестезия рано сутринта. Кръвта е позволено да се съсирва и центрофугира на 3000 ×g за 10 мин. Серумът е бил добит и съхраняван на −20∘C, докато не се използва за биохимични асиси. След животинска евтаназия фемора са изолирани за ОМУ, Micro-CT, и ECH (ехинакозид) и имунохистохимичен анализ, И млечната жлеза и матката са отстранени, освободени от мазнини, и фиксирани в натриев фосфат (PBS) 10% буфериран разтвор на формалдехид (PH 7.4) и след това се съхраняват на 4∘C, докато не се използва за хистологична и имунохистохимична оценка за оценка на безопасността наECH(ехинакозид)
2.4. Оценка на ефективността.
2.4.1. Серумен биохимичен анализ.
Известно е, че алкалната фосфатаза (ALP) е свързана с костния метаболизъм и диференциацията на остеобластите и неговата активност е един от най-честите показатели за остеобластна диференциация и остеогенни свойства [19]. По този начин нивото на серумния ALP е определено с помощта на alp комплект за оценка на активността (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute; Нанкин, Китай). Резистентната на тартарат киселина фосфатаза 5b (TRACP-5b), секретирана от остеокласти, корелира с активността на костната резорбция в абнормния костен метаболизъм [20]. За маркери на костната резорбция нивата на TRACP-5b са измерени с ензимно свързани имуносорбентни асай (ELISA) комплекти (R&D Systems Inc.) в серума. Серумните OPG и RANKL също бяха оценени с комплекти ELISA (R&D Systems Inc.). Всички измервания на комплектите ELISA са извършени съгласно протоколите, предоставени от производителите.
2.4.2.Измерване на костната минерална плътност.
Костната минерална плътност (BMD) на дясната обща фемора е измерена чрез използване на Discovery W двуенергийна рентгенова абсорбтиометрия (DEXA, Hologic Inc., Boston MA, САЩ), оборудвана с подходящ софтуер (издание 13.1.2) за оценка на костната плътност при малки лабораторни животни. След сканиране, BMD в правото общо femora е получен за статистически анализ. Изследователят, извършващ измерването, не е знаел за леченията, които плъховете са получили.
2.5. Статистика.
Всички резултати са представени като средни ± стандартно отклонение (SD). Статистически различия сред контрола на измамниците, OVX контрол, и различни групи на лечение бяха анализирани с помощта на еднопосочен анализ на варианс (ANOVA) последвано от пост hoc множество сравнения с помощта на най-малко значителна разлика на Fisher (LSD) t-тест. Всички изчисления са извършени с помощта на SPSS Версия 15.0 за Windows (SPSS, Чикаго, IL, САЩ). При всички анализи p-стойност на<0.05 was="" considered="" to="" be="" statistically="">
3. Резултати
3.1. Оценка на ефективността
3.1.1. Серумен биохимичен анализ.
Серумните alp нива и маркерите за костен оборот TRACP-5b са оценени в края на лечението, OVX води до значително повишаване на серумните нива на ALP и TRACP-5b в сравнение с групите, експлоатирани от измамници. След приложение на Echinacoside или E2 серумните ALP и TRACP-5b нива са значително намалени и в трите от групите echinacoside или E2 група. Освен това високата доза Echinacoside има значително най-ниски нива от 25,82% и 38,05% в сравнение с групата на OVX (P< 0.01).="" all="" three="" doses="" of="" echinacoside="" treatments="" had="" a="" similar="" effect="" as="" e2="" in="" changing="" bone="" turnover="" markers="">< 0.05).="" at="" the="" end="" of="" the="" protocol,="" assays="" for="" serum="" opg="" and="" rankl="" levels="" were="" performed.="" all="" doses="" of="" echinacoside="" treatment="" groups="" had="" significantly="" higher="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios,="" as="" well="" as="" significantly="" lower="" rankl="" levels="" than="" e2-treated="" or="" vehicle-treated="" ovx="" groups="" (table="" 1).="" the="" highest="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios="" were="" observed="" in="" the="" ech-h="">(Ехинакозид)групата на лечение, съответно 150,14%, и 197,64%, в сравнение с групата на OVX (P<0.01). however,="" no="" differences="" in="" rankl="" levels="" and="" the="" opg/rankl="" ratio="" were="" observed="" in="" the="" e2="" group,="" as="" compared="" with="" the="" ovx="">
3.1.2. Оценка на КМР.
Резултатите от общата КмП на бедрената кост от DXA са представени в таблица 2. Както се очакваше, общата земна кост BMD е намалена с OVX в сравнение с групата sHAM (P< 0.01).="" however,="" all="" the="" treated="" groups="" significantly="" increased="" bmd="" than="" the="" ovx="" group="" after="" 12="" weeks="" of="" treatment="">< 0.01),="" but="" no="" significant="" difference="" was="" found="" between="" treated="" groups.="" the="" three="">(Ехинакозид)-третираните групи повишават общата КмП на бедрената кост до 109,25%, 115,27%, съответно 124,53%, в сравнение с OVX групата. E2 увеличава общата кмп на бедрената кост до 113,82% в сравнение с OVX групата.
3.1.3. Микрокомпютри томография (Micro-CT).
Микро-КТ сканирането е много точен метод за измерване на гръбначната архитектура, защото количествено определя трабекуларната структура в три измерения. Количествените резултати от метафизиалния регион близо до растежната плоча на дисталната бедрена кост от micro-CT оценка бяха изразени като BV/TV, Tb. N, Tb.Sp, Tb.Th, и SMI в таблица 2. Трабекуларните Микро-КТ параметри в таблица 2 показват, че OVX причинява значителни понижения на BV/TV, Tb. N, и Tb.Th и увеличения на Tb.Sp и SMI (P< 0.01).="" furthermore,="" the="" indices="" bv/tv,="" tb.="" n,="" and="" tb.="" thin="" ech-h="">(Ехинакозид)групи са значително по-високи от тези в групата на OVX (P< 0.01="" for="" bv/tv,="" and="" tb.th,="">< 0.05="" for="" tb.n),="" and="" ech-h="">(Ехинакозид)лечението значително повишава стойностите на BV/TV с 169,23%, Tb.N с 157,73%, а Tb. Th с 148,23% в сравнение с групата на OVX. Освен това ECH-H също така предотврати повишаване, предизвикано от OVX, на нивата на Tb.Sp и SMI (P<0.01 for="" tb.sp,="">< 0.05="" for="" smi).="" the="" preventive="" effects="" of="" echinacoside="" on="" trabecular="" bone="" mass="" and="" microarchitecture="" deterioration="" are="" further="" proved="" by="" the="" 3d="" micro-ct="" images="" (ovx="" group="" presented="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" trabecular="" number="" and="" trabecular="" area="" when="" compared="" with="" the="" sham="" group.="" echinacoside="" and="" e2="" partially="" prevented="" ovx="" induced="" bone="" loss="" and="" significantly="" improved="" the="" trabecular="" bone="" mass="" and="">
3.1.4. Триточково огъване на бедрената шира.
Резултатите от биомеханичния триточков експеримент за огъване са показани в таблица 2. Значителни понижения на крайното натоварване, скованост и абсорбция на енергия са наблюдавани в групата на OVX в сравнение с групата на SHAM (P< 0.01).="" echinacoside="" treatment="" improved="" bone="" mechinacosideanical="" strength,="" evidenced="" by="" increased="" levels="" of="" ultimate="" load,="" stiffness,="" and="" energy="" absorption=""><0.01 for="" ultimate="" load="" and="" energy="" absorption,="">< 0.05="" for="" stiffness);="" however,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" the="" three="">ECH (Ехинакозид)-третирани групи. Стойностите на mEchinacosideanical на ECH-H(Ехинакозид)третираната група е увеличена с 55,51% за крайно натоварване, 34,05% за скованост, и 183,33% за енергопоглъщане в сравнение с третираната от превозното средство OVX група (P<0.01). e2="" increased="" ultimate="" load="" by="" 49.51%,="" stiffness="" by="" 28.63%,="" and="" energy="" absorption="" by="" 55.56%="" compared="" to="" the="" ovx="" group,="" respectively,="" but="" its="" effect="" on="" mechinacosideanical="" values="" was="" less="" than="" the="">ECH-H(Ехинакозид)група.
3.2. Оценка на безопасността
3.2.1. Серумен анализ.
Ефекти върху липидния профил са обобщени. На седмица 12, E2 показа увеличения от изходното ниво в нивата на TC и TG. Три дози ECH (Ехинакозид)(ECH-L,ECH-М, иECH-H) намалени нива на TC и TG в сравнение с OVX и SHAM групи. Освен това ECH-H(Ехинакозид)групата намалява нивата на TG значително с 30,87% спрямо OVX (P< 0.05),="" or="" by="" 19.07%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.05).="" moreover,="" the="" effects="" of="">ECH (Ехинакозид)-L иECH (Ехинакозид)-М на нивата на TG бяха маргинални. В края на протокола измерванията за серумните нива на CEA и CA-125 са събрани, както е показано в таблица 3. Групата на E2 повишава нивата на CEA и CA-125 значително с 54,38% и 59,58% спрямо OVX (P< 0.01),="" or="" by="" 49.53%,="" 28.87%="" versus="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" ech="">Ехинакозид) приложение води до забележително намаляване на серумните нива на CA-125 (P< 0.05)="" compared="" to="" the="" sham="" group,="" but="" echinacoside="" did="" not="" show="" any="" significant="" effect="" on="" the="" serum="" cea="" concentrations="" versus="" the="" sham="" group="" or="" ovx="" group.="" in="" addition,="" the="" ech-h="">Ехинакозид)групата намалява нивата на CA-125 значително с 29,31% в сравнение с групата на OVX (P<0.05), or="" by="" 42.91%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" echinacoside="" administration="" resulted="" in="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" serum="" ca-125="" and="" cea="" levels="">< 0.01)="" compared="" to="" the="" e2="" group.="" moreover,="" the="" ech-h="">Ехинакозид)групата намалява нивата на CA-125 и CEA значително съответно с 44,30 % и 64,70 %, в сравнение с групата E2.
3.2.2. Хистология и имунохистохимия на матката и млечната жлеза.
Най-честите нежелани събития на утери и млечна жлеза не са наблюдавани между всички групи, но не и Групата E2 (Таблица 3). E2 (50g/kg/ден) приложение за 12 седмици повишена дебелина на ендометриума и пролиферация на млечна жлеза в сравнение с OVX или SHAM група. Освен това в групата E2 биха могли да бъдат открити и три млечна жлеза на изразяване на CEA чрез имунохистохимичен анализ, но без матка. Групите на лечение с ехинакозид не са свързани с никаква необичайност на матката и млечната жлеза.
Препратки
[1]Т. Накамура, Т. Мацумото, Т. Сугимото, и М. Шираки, "Проучване на дозата-отговор на денозумаб върху костната минерална плътност и маркерите за костен оборот при японски жени в постменопауза состеопороза,"ОстеопорозаМеждународен, том 23, стр.
[2]Х. Л. Уанг, Л. З. Zhen, G. Zhang, M. S. Wong, L. Qin, и X. S. Yao, "Остеогенни ефекти на флавоноидни агликони от остеопротективна фракция на Drynaria in vitro проучване за ефикасност," Phytomedicine, том 18, no 10, стр. 868–872, 2011.
[3]J. Y. Регинстър и Н. Бърлет, "Остеопороза: все още нарастващо разпространение", Bone, т. 38, no 2, добавка 1, стр. S4–S9, 2006.
[4]А. Катрина и Б. Е. Макдоналд, Експериментално и крайно елементно разследване наЕхинакозидна вертебрални компресионни фрактури [Ph.D. дисертация], Куинсланд университет по TEchinacosidenology, 2009.
[5]S. C. Manolagas, "Раждане и смърт на костните клетки: основни регулаторниЕхинакозиди последици за патогенезата и лечението наостеопороза," Ендокринни ревюта, том 21, no 2, стр.
[6]B. L. Riggs, S. Khosla, и L. J. Мелтън, "Секс стероиди и изграждането и опазването на скелета за възрастни," Ендокринни ревюта, том 23, no 3, стр. 279–302, 2002.
[7]М. Тезвал, E. K. Stuermer, S. Sehmisch, и др., "Подобряване на качеството на трохантеричната кост в еднаостеопорозамодел след краткотрайно лечение с паратиреоиден хормон: нов mEchinacosideanical тест за трокантеровата област на тресавището,"ОстеопорозаМеждународен, том 21, no 2, стр.
[8]L. N. Li, Z. Zeng, и G. P. Cai, "Сравнение на нео и нарингин върху пролиферация и остеогенна диференциация в MC3T3-E1," Фитомедицин, том 18, стр. 985–989, 2011.
[9]W. Qi, Y. B. Yan, W. Lei, Z. X. Wu, Y. Zhang, и D. Liu, "Предотвратяване на злоупотребиостеопорозапри плъхове чрез екстракт от Кордицепс Синензис",ОстеопорозаМеждународен, том 9, стр.
[10]В. В. Одвина, Й. Е. Зервех, Д. С. Рао, N. Maalouf, F. A. Gottschalk, и C. Y. C. Pak, "Силно потиснат костен оборот: потенциално усложнение на терапията с алендронат", Вестник по клинична ендокринология и метаболизъм, том 90, no 3, стр. 1294–1301, 2005.
[11] Писмена група за следователите по здравна инициатива на жените, "Риск и полза от естроген плюс прогестин при здрави жени в постменопауза", Списание на Американската медицинска асоциация, том 288, стр.
[12]З. Кобаяши, Х. Огучи, Н. Такизава и др., "НовфенилетаноидГликозидиотСистанчетубулоза," Химически & фармацевтичен бюлетин, том 35, стр.
[13]Q. Zhao, J. Gao, W. Li, и D. Cai, "Невротрофични и неврорескуе ефекти наЕхинакозидв подостра MPTP мишка модел на болестта на Паркинсон," Brain Research, том 1346, стр.
[14]C. Q. Jia, H. Shi, X. M. Wu, Y. Z. Li, J. J. Chen, и P. F. Tu, "Определяне наЕхинакозидв серума на плъхове чрез обратна фаза високо- производителност течна хроматография с ултравиолетово откриване и прилагането му към фармакокинетиката и бионаличността," Вестник на хроматографияТа B, том 844, no 2, стр. 308–313, 2006.
[15]У. Дж. Той, Т. Х. Фанг, Х. Ма, К. Джан, З. З. Ма, и П. Ф. Ту, "Ехинакозиделицитира ендотелиево-зависима релаксация в аортните пръстени на плъховете чрез ПЪТ NO-cGMP", Planta Medica, том 75, no 13, стр. 1400–1404, 2009.
[16]F. Li, Y. N. Yang, P. P. Zhu et al., "Ехинакозиднасърчава регенерацията на костите чрез увеличаване на съотношението OPG/RANKL в MC3T3-E1 клетки", Fitoterapia, vol. 8, стр. 1443–1450, 2012.
[17]А. Ишихара, Т. Сасаки, К. Дебрари и др., "Ефекти на овариектомията върху костната морфология при максила от зрели плъхове", Вестник на електронна микроскопия, том 48, no 4, стр. 465–469, 1999.
[18]Л. Лей, З. Х. Сонг, П. Ф. Ту, Л. Дж. Ву, и Ф. К. Чен, "Разделяне наЕхинакозидчрез обратна фаза подготвителна високоефективна течна хроматография", Китайски вестник по хроматография, т. 19, no 3, стр.
[19]Л. Малавал, D. Modrowski, A. K. Gupta, и J. E. Aubin, "Клетъчно изразяване на протеини, свързани с костите по време на ин витро остеогенеза в плъхове костен мозък стромални клетъчни култури," Вестник на клетъчната физиология, том 158, no 3, стр. 555–572, 1994.
[20]W. Qi, Y. B. Yan, W. Lei, Z. X. Wu, Y. Zhang, D. Liu и др., "Предотвратяване на злоупотребиостеопорозапри плъхове чрез екстракт от Кордицепс Синензис",ОстеопорозаМеждународен, том 9, стр.
