Възстановяване на вродени имунни клетки и персистиращи промени в адаптивния имунитет в периферната кръв на реконвалесцентни донори на плазма осем месеца след SARS-CoV-2 инфекция Част 1

Резюме:

Постоянни промени и уникални имунни сигнатури са били открити преди това в периферната кръв на донори на реконвалесцентна плазма (CP) приблизително два месеца след първоначалната SARS-CoV-2 инфекция. Тази статия представя резултатите от последователния анализ на 47 CP донори за средно време от осем месеца (диапазон 7,5–8,5 месеца) след инфекцията, както е оценено чрез поточна цитометрия.

С избухването на новата епидемия от коронарна пневмония все повече и повече хора започват да обръщат внимание на въздействието на реконвалесцентната плазма върху имунитета. Реконвалесцентната плазма понастоящем е ефективно средство за лечение на нова коронарна пневмония. Може да подобри имунитета на пациентите, да повиши устойчивостта на организма и да помогне на пациентите да се възстановят възможно най-скоро.

Реконвалесцентната плазма е вещество, извлечено от плазмата на възстановени пациенти с нова коронарна пневмония, което съдържа голям брой антитела и имунни клетки, които могат да помогнат на имунната система да разпознае и атакува вируса, като по този начин играе антивирусна роля. Следователно реконвалесцентната плазма може да подобри до известна степен имунитета и да повиши устойчивостта на организма.

Понастоящем много болници са започнали да използват реконвалесцентна плазма за лечение на пациенти с нова коронарна пневмония и са постигнали определени лечебни ефекти. Проучванията показват, че реконвалесцентната плазмена терапия може значително да съкрати времето за хоспитализация на пациентите, да облекчи състоянието и да намали смъртността. Ето защо ние трябва активно да подкрепяме и да участваме в лечението с реконвалесцентна плазма, за да помогнем на повече пациенти да се възстановят възможно най-скоро.

Освен това в ежедневието трябва да обърнем внимание и на укрепването на имунитета си, за да предотвратим появата на заболявания като нова коронарна пневмония. Например, обърнете внимание на балансирана диета и яжте по-питателни храни като зеленчуци, плодове и риба; укрепване на упражненията за подобряване на физическата форма и имунитета; обръщайте внимание на хигиената, мийте ръцете често и намалете риска от инфекция.

Накратко, реконвалесцентната плазма има положително въздействие върху имунитета, което може да повиши до известна степен устойчивостта на организма и да помогне на пациентите да се възстановят възможно най-бързо. Трябва активно да подкрепяме и участваме в лечението на реконвалесцентната плазма и да обръщаме внимание на грижата за здравето в ежедневието, за да бъдат телата ни по-здрави и пълни с жизненост! И така, накратко, трябва да подобрим имунитета си. Cistanche може значително да подобри имунитета, тъй като полизахаридите в месото могат да регулират имунния отговор на човешката имунна система, да подобрят стресовата способност на имунните клетки и да засилят бактерицидния ефект на имунните клетки.

Кликнете върху добавката Cistanche deserticola

Интересното е, че нашите резултати показват значителна вариация в състава на съответната имунна подгрупа сред донорите на CP. По отношение на вродения имунитет както некласическите моноцити, така и CD11b-гранулоцитите са се възстановили напълно осем месеца след инфекцията с COVID-19. Междинните моноцити и клетките естествени убийци (NK) вече са били възстановени при двумесечната оценка и са останали стабилни. По отношение на адаптивния имунитет, свързаната с COVID-19-изкривена Th1 и Th2 клетъчна поляризация остана на същите нива както през два месеца. Въпреки това, ниски нива на общите В клетки бяха открити дори след осем месеца от инфекцията.

Постоянното намаляване на CD8 плюс Tregs и промените в NKT клетъчното отделение също бяха забележителни. Донорите на CP имат уникален имунен пейзаж осем месеца след инфекцията с COVID-19, който се характеризира със забележимо възстановяване на компонентите на вродения имунитет заедно с персистиращ отпечатък на SARS-CoV-2 в клетките на адаптивния имунитет.

Ключови думи:

SARS-CoV-2; COVID-19; донори на реконвалесцентна плазма; имунно профилиране; възстановяване на имунитета; 8 месеца.

1. Въведение

Коронавирусната болест 2019 (COVID-19) се причинява от потенциално фатално и силно заразно предаване по въздушно-капков път на тежък остър респираторен синдром коронавирус 2 (SARSCoV-2). Тежестта на COVID-19 варира до голяма степен сред заразените хора, варирайки от случаи, напълно асимптоматични [1], до по-леки състояния, характеризиращи се с температура, кашлица и умора, и до по-сериозни случаи, страдащи от пневмония, водеща до синдром на остър респираторен дистрес и необуздана полиорганна недостатъчност, която често е фатална [2].

Симптоматичните случаи на COVID-19 се характеризират със системен хипервъзпалителен имунен отговор и вече има достатъчно доказателства, че вариациите в тежестта на симптомите след инфекция със SARS-CoV-2 са пряко свързани с предходната имунен статус на гостоприемника [3–5]. Фактори, свързани с по-дисфункционални имунокомпрометирани имунни профили и следователно по-висок риск от смъртност, включително повишена възраст и някои основни хронични заболявания, като диабет тип 2, кардиомиопатия, затлъстяване, хронична обструктивна белодробна болест и хронично бъбречно заболяване [6,7] .
Обширно изследване на COVID-19 разкри важна информация за имунните каскади и конкретни промени в различни имунни подгрупи, придружаващи SARS-CoV-2 инфекцията [3,4,8,9]. Все още обаче има ограничена информация относно промените, които могат да се запазят в имунната система на гостоприемника с течение на времето след пълното разрешаване на инфекцията.

Наскоро беше показано, че различни компоненти на имунологичната памет към SARS-CoV-2 могат да имат различна кинетика във времето [9,10]. Например анти-SARS-CoV-2 паметта и цитотоксичните Т-клетки изглежда намаляват по-бързо в сравнение с В-клетъчния имунитет, докато нивата както на В-клетките на паметта, така и на имуноглобулин (Ig)G срещу пиковия протеин на SARS-CoV{ {8}} продължават най-малко шест месеца след началото на COVID-19 [10].

В различна кохорта, Breton et al. показват, че CD4 плюс и CD8 плюс Т клетките на централната памет намаляват, но антиген-специфичните Т клетки персистират шест месеца след инфекцията [11]. Що се отнася до клетките на вродения имунитет, техният профил изглежда зависи от възрастта и промените в моноцитите и неутрофилите са наблюдавани до приблизително. два месеца след инфекцията [12].

Наскоро докладвахме също за специфични персистиращи промени и уникални имунни сигнатури в периферната кръв (PB) на донори на реконвалесцентна плазма (CP) приблизително два месеца след първоначалната инфекция със SARS-CoV-2. Тези имунни сигнатури корелират както със способността на пациентите да изградят защитен хуморален отговор, т.е. да произведат достатъчно и откриваеми анти-SARS-CoV-2 IgG и/или IgA антитела, но също така и с тежестта на изпитваните симптоми , като преди това хоспитализираните донори на CP са по-малко имунокомпетентни от донорите на CP, които са имали по-леки симптоми [13].
Следвайки същия подход и за да проучим дългосрочните отпечатъци върху имунния профил на донори на CP, възстановени от COVID-19-, тук представяме резултатите от последователния анализ на 47 донори на CP за средно време от осем месеца (диапазон 7,5– 8,5 месеца) след инфекцията.

2. Материали и методи

2.1. Избор на участници

Настоящият доклад включва последователно тестване на CP донори, които са участвали във фаза 2 проучване (NCT04408209) и са предоставили сдвоени PB проби за анализ на техния имунен профил на два и осем месеца, след заразяване със SARS-CoV-2. Всички участници са били заразени от SARS-CoV-2 и са били диагностицирани след положителни назофарингеални и/или орофарингеални тампони с RT-qPCR, както е описано по-рано [14].

Преди даряването на КП те са с два отрицателни PCR теста с интервал от минимум седем дни. Вторият отрицателен тест е направен 1-7 дни преди плазмаферезата. Те също така разработиха откриваеми анти-SARS-CoV-2 IgG антитела срещу шиповия домен 1 (S1) протеин на SARS-CoV-2 при изследване с чувствителен наличен в търговската мрежа и одобрен от Администрацията по храните и лекарствата ензим -свързан имуносорбентен анализ (Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG, Любек, Германия), описан подробно по-рано [14].

Критериите за включване също включват най-малко 14 дни след пълно възстановяване от SARS-CoV-2 инфекция (без симптоми, пълно отзвучаване на органната дисфункция, причинена от SARS-CoV-2), мъже донори без история на кръвопреливане , и жени без анамнеза за кръвопреливане или бременност, нормална пълна кръвна картина, отрицателни серологични тестове за вирус на хепатит B (HBV), вирус на хепатит C (HCV), вирус на човешка имунна недостатъчност (HIV), изследователска лаборатория за венерически заболявания (VDRL), човешки Т-клетъчен лимфотропен вирус (HTLV)-1 и отрицателен за ХИВ, HBV, HCV с тест за амплификация на нуклеинова киселина и донорите отговарят на всички общи критерии за кръводаряване по отношение на възраст, общо състояние, нива на хемоглобин и жизнени знаци.

Десет здрави индивида с подобна възраст (средно 47 години, диапазон - 45 до 73 години) и пол (6 мъже/4 жени) също бяха оценени и използвани като нормални контроли. Тези субекти не са имали известни здравословни проблеми и са имали отрицателен PCR тест за SARS-CoV-2 от назофарингеални тампони по време на вземането на кръвна проба.

Всички участници бяха информирани за това проучване и предоставиха подписано информирано съгласие съгласно декларацията на Хелзинки и местната комисия по етика.

Всички процедури на изследване са извършени съгласно декларацията от Хелзинки (18-та асамблея на Световната медицинска асоциация), нейните последващи изменения, насоките на гръцката регулация, както и насоките за добра клинична практика (GCP), определени от Международната конференция за хармонизация. Протоколът е одобрен от Комитета по етика на Многопрофилна болница „Александра“, Атина, Гърция (Реф. № 245/16 април 2020 г.).

2.2. Анализ с поточна цитометрия

PB проби бяха събрани в покрити с EDTA епруветки за събиране на кръв (BD Vacutainer, BD Biosciences, Сан Хосе, Калифорния, САЩ; #367841) и бяха обработени в рамките на един час след събирането, следвайки протокола Stain-Lyse-no-Wash (BD Biosciences ). По-конкретно, за всяка PB проба, 100 µL от общата антикоагулирана кръв се прехвърля в 12 × 75 mm полистиролова FACS епруветка с кръгло дъно и се оцветява с панел, състоящ се от подходящи флуорофорно-конюгирани анти-човешки антитела срещу повърхностните маркери CD{{ 12}}PerCP, CD4-BV510, CD8-PE, CD14-BV605, CD16-APC, CD25-PECF594, CD{{21} }APCH7, CD56- APCR700, CD183-BV421, CD194-BV650, CD196-BB515 и CD11b-BV786 (всички от BD Biosciences), при стайна температура (RT ) за 20 минути на защитено от светлина място. Освен това се добавят 450 µL от 1 × FACS лизиращ разтвор и клетките се инкубират за още 10 минути при RT, защитени от светлина. Всички проби бяха анализирани с 3-лазер BD FACSCelesta (BD Biosciences) и бяха получени 100000 събития на проба.

12-Цветният панел, посочен тук, се състоеше от нашия референтен панел за фенотипен анализ на CP донори два месеца след инфекцията и позволяваше идентифицирането и анализа на 24 отделни имунни популации, включително В клетки, CD3 плюс Т клетки , клетки естествени убийци (NK), моноцити, гранулоцити и техните подгрупи, следвайки описаната по-рано стратегия за стробиране [13].

За да бъдем в съответствие с нашите предишни партидни анализи, следвахме редовна и обширна настройка. Настройката на цитометъра беше извършена с помощта на неоцветени контролни клетки за конфигурацията на подходящите PMT напрежения и с BD CompBeads Set анти-миши Igκ (BD Biosciences) за междуканална компенсация на преливане на флуоресценция. Освен това, CS&T ежедневна производителност беше приложена преди всяко придобиване, за да се провери стабилното състояние на цитометъра.

И накрая, допълнителна стъпка на стандартизация се прилага ежедневно, като се използват мъниста на дъгата (Spherotech Inc, Lake Forest, IL, САЩ), за да се провери стабилността на лазера чрез контрол на флуктуациите на PMT за откриване на целевите флуоресцентни интензитети на перлите.

2.3. Статистически анализ

Данните бяха анализирани с помощта на софтуер GraphPad Prism 8.0.2 (Сан Диего, Калифорния, САЩ). Резултатите са изразени като средна стойност ± стандартно отклонение (SD). За статистически анализ беше използван t-тест на Student за сравняване на контролите и донорите на CP осем месеца след инфекцията със SARSCoV-2, докато промените в донорите на CP на два и осем месеца след инфекцията бяха сравнени с помощта на сдвоен t-тест на Student. p-стойности < 0.05 се считат за статистически значими.

3. Резултати

3.1. Характеристики на CP донорите

Настоящият анализ включва 47 CP донори със сдвоени PB проби, събрани при средно два и осем (диапазон 7,5–8,5) месеца след инфекцията с COVID-19. Клиничните характеристики на участниците са представени в таблица 1.

3.2. Имунният профил осем месеца след инфекцията със SARS-CoV-2 не корелира с клиничните характеристики на донорите на СР

В съответствие с предишния ни анализ два месеца след инфекцията със SARS-CoV-2 [13], на осем месеца наблюдавахме значителна вариация на състава на съответната имунна подгрупа сред донорите на СР. Тази вариация надхвърли демографските и клиничните характеристики на нашата кохорта, тъй като не могат да бъдат свързани значителни разлики с пола, възрастта, броя на изпитаните симптоми или стойностите на серумните анти-SARS-CoV-2-специфични антитела срещу S1 вирус антиген.

Трябва да се отбележи, че не са получени значителни разлики в имунното профилиране на донори на СР, които преди това са били хоспитализирани, и тези, които са имали по-леки симптоми и не отговарят на критериите за прием в интензивни отделения (интензивни отделения) (данните не са показани). Следователно, ние не разделихме допълнително донорите на CP на повече категории в нашия последващ анализ на динамиката на имунното профилиране във времето (Таблица 2).

3.3. Възстановяване на вроден имунитет осем месеца след COVID-19

Освен това направихме оценка, за да оценим динамиката на конкретни имунни профили чрез сравняване на съответните състави на различните имунни подгрупи във времето. Анализът на основните имунни популации, принадлежащи към вродените и адаптивните рамена на имунитета и техните субпопулации, са представени на фигури 1 и 2. Като цяло, нашите резултати показват, че до осем месеца след инфекцията, по-голямата част от подгрупите от вродени имунни клетки се възстановяват до нива, подобни на тези на контролната група, за разлика от клетките на адаптивния имунитет, в които специфични подгрупи лимфоцити показват доказателства за персистиращо дългосрочно активиране.

По отношение на моноцитните подгрупи, по-рано докладвахме за {{0}}кратно увеличение на междинните моноцити и 2.2-кратно увеличение на некласическия компартмент (за сметка на класическите моноцити) по време на активно заболяване COVID-19 [11]. До два месеца след инфекцията нивата на междинните и класическите моноцити показаха доказателства за възстановяване и практически бяха напълно възстановени до осем месеца след инфекцията. Процентите на некласическите моноцити, които остават повишени два месеца след инфекцията (среден процент—1,16% спрямо 0,27% в контролната група, p=0.01), също се възстановяват напълно до осем месеца и достигат нивата на контролната група.

Подобни наблюдения са регистрирани за гранулоцити. Въпреки че техният общ процент на осем месеца беше леко намален в сравнение с контролите, на осем месеца след инфекцията, разпространението на подгрупите CD11b plus и CD11b- значително намаля и съответно се увеличи, което доведе до сходно съотношение на гранулоцити CD11b plus /CD11b- спрямо тази на нормални здрави донори, в сравнение с дерегулираната гранулоцитна експанзия при двумесечната оценка [13].

Що се отнася до NK клетките, нашите анализи не показват значителни колебания между два и осем месеца след инфекцията. Процентите на общите NK клетки и техните подгрупи бяха почти възстановени на два месеца след разрешаване на заболяването и същият профил беше наблюдаван и на осем месеца, като процентите останаха на почти нормални нива.

For more information:1950477648nn@gmail.com