Проучване върху естрогенните ефекти на ехинакозид и актеозид от Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Тиендзински университет по традиционна китайска медицина, Тиендзин 300193, Китай
Резюме: В това проучване естрогенните ефекти наехинакозидиактеозидна Herba Cistanche са изследвани. За откриване на естрогенните ефекти на е използван закон за луцифериращ репортерен плазмидехинакозидиактеозид. Експериментите за конкурентно свързване на естрогенния рецептор бяха използвани за откриване на техния конкурентен ефект с естроген. Резултатите показаха товаехинакозидиактеозидможе да увеличи активността на ERE. Когаехинакозидилиактеозидсе добавя в действието на естрогена, управляваната от ERE репортерна генна активност може да бъде стимулирана като естрогенен агонист. Следователно се стигна до заключението, чеехинакозидиактеозидима фитоестрогена активност чрез стимулиране на активността на репортерния ген на ERE.Ехинакозидиактеозидбяха потенциални SERM.
Ключови думи: ехинакозид; актеозид; фитоестрогени ;
Herba Cistanche е растение от рода Cistanche (Orobanchaceae) от рода Cistanche (Cistanche). Представлява сухо месесто стъбло с люспести листа. Той има функциите на подхранване на бъбреците Ян, подхранване на есенция и кръв и овлажняване на червата. Използва се при дефицит на бъбречен ян, дефицит на есенция и кръв, импотентност и безплодие, болки в кръста и коленете, слабост на мускулите и костите, сухи черва и запек ¨. 2J. Понастоящем основните химични компоненти, изолирани и идентифицирани от Cistanche, са фенил гликозиди, иридоиди, лигнани, флавоноиди, полизахариди, олигозахариди, галактитол, летливи компоненти, алкалоиди и др. Сред тях гликозидите на фенетилов алкохол са основните активни съставки в Cistanche cistanche, и също така са основните индикатори за откриване за контрол на качеството на Cistanche и са представени отехинакозид и вербаскозид. Съвременните фармакологични изследвания показват, че Cistanche има функциите на имунна регулация, анти-оксидация, против стареене, против умора, невропротекция и защита на черния дроб. Някои фармакологични проучвания показват също, че Cistanche може да насърчи костната регенерация -1"J, да инхибира образуването на остеопороза и фитоестрогени при жени след менопауза."]. В този експеримент избрахме ехинакозид и вербаскозид, които са основните индикатори за контрол на качеството в Cistanche, и тествахме естрогенаефекти на ехинакозиди вербаскозид чрез луциферазен репортерен плазмиден метод и експеримент за конкурентно свързване на естрогенен рецептор. Разгледайте механизма на ехинакозид и вербаскозид естроген
1 Материал и методи
1.1 Материал Hela клетки (човешки ракови клетки на шийката на матката), закупени от Шанхайския институт по клетъчна биология;ехинакозидбеше отделен и пречистен от Cistanche deserticola от нашата лаборатория и беше тестван чрез HPLC-ELSD. Theехинакозидреферентно вещество (Китайски национален институт за контрол на фармацевтични и биологични продукти, партиден номер: 111670) е използвано като контрола и измерената чистота е 95,1 процента. Theактеозидбеше отделен и пречистен от пустинята Cistanche от нашата лаборатория и беше получен чрез HPLC. ELSD тест с референтна субстанция Verbascum гликозид (Китайски институт за контрол на фармацевтични и биологични продукти, партиден номер: 111530) като контрола, измерената чистота е 96,4 процента; плазмиди ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (екстрахирани от нашата лаборатория); Estradiol (E), Sigma Company; Фетален говежди серум (FBS), PAA Company; Обработен с активен въглен фетален говежди серум (CS-FBS), PAA Company; DMEM без фенолно червено, Sigma Company; Диметил сулфоксид (DMSO), Amresco Company; LB среда, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; PassiveLysis5X буфер, Promega Company; Lipofectamine2000, Promega Company; Комплект за екстракция на плазмид, TIANGEN Company; Комплектът за откриване на луциферазен репортерен ген е продукт на Promega Company.
1.2 Клетъчна култура Hela клетки се култивират в DMEM културална среда, съдържаща 10 процента фетален говежди серум. Най-малко едно поколение преди експеримента беше заменено с DMEM културална среда, съдържаща 1% обработен с активен въглен фетален говежди серум.
1.3 Трансфекция и определяне на луциферазната активност Клетките Hella се посяват в 24-плака с ямки при плътност от 70 процента до 80 процента. След като клетките се залепят за стената и клетъчната плътност достигне 90 процента, следвайте инструкциите в lipo. Инструкциите за трансфекционен реагент Feetamine2000 трансфектират ERa, ER[3 експресионни плазмиди и ERE, Renila репортерни плазмиди, сменете средата след 8 часа и добавете тестови лекарства с различни концентрации. След инкубиране за една нощ, използвайте многофункционален четец на плаки, за да откриете естрогенния отговор. Компонент ERE луциферазна активност, изчисляване на относителното влияние на лекарствата върху луциферазната активност.
1.4 Обработка на данни и статистически анализ
Използвайки SPSS18.{1}} статистически софтуер, данните се изразяват като средно±стандартно отклонение (x±S). Еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA) и t-тест за множествено сравнение на Dunnett бяха използвани за анализиране на данните между групите. П<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Актеозид
2 Експериментални резултати
2.1 Ефектът на вербаскозид върху активността на елемента на естрогенния отговор ERE луцифераза Резултатите показват, че в сравнение с контролната група, когато се медиира от ERa и ER[3, E (10nmol) може значително да регулира нагоре елемента на естрогенния отговор ERE луцифераза. Активността на вербаскозид може регулират нагоре активността на елемента на естрогенния отговор ERE луцифераза при 10, 100, 1, 10 и 50 txmol. Когато концентрацията достигне 50 I~mol, повишената регулация на ERE луциферазната активност е еквивалентна на тази на естрадиола. Това зависи от дозата, но селективността за естрогенните рецептори ERa и EP~ не е очевидна (Фигура 2).
2 Ефекти от различни концентрации наактеозидвърху луциферазната активност на ERE
Забележка: В сравнение с контролната група, P
2.2 Ефектът отехинакозидвърху активността на ERE луциферазната реакция на естрогенния елемент Резултатите показват, че в сравнение с контролната група, когато се медиира от ERa и ER[3, E(10nmol) може значително да регулира нагоре елемента на естрогенния отговор ERE флуоресценция Echinacoside може да регулира нагоре естрогенния отговор елемент ERE луциферазна активност при 10, 100, 1, 10 и 50 Ixmol. Когато концентрацията достигне 50 Ixmol, повишената регулация на ERE луциферазната активност е малко по-ниска от тази на естрогена. Диолът също е зависим от измервателния уред, но има малка разлика в селективността за естрогенните рецептори ERa и E (Фигура 3).
2.3 Конкурентно свързващ ефект на Verbascum гликозидите и естрадиола върху естрогенните рецептори Резултатите показват, че Verbascum гликозидите могат конкурентно да се свързват с естрогенните рецептори с естрадиола и да противодействат на активността на естрадиола върху естрогенния отговорен елемент ERE луцифераза. Ефектът на регулиране нагоре. В сравнение с групата E (10nmo1), вербаскозидите могат да регулират надолу луциферазната активност на естрадиола върху елемента на естрогенния отговор ERE в различна степен при 1, 10 и 50p, mol, и вербаскозидите показват зависимост от дозата. Когато концентрацията достигне 50 Ixmol, антагонистичният ефект върху естрадиола е най-очевиден (Фигура 4).
2.4 Конкурентният обвързващ ефект наехинакозиди естрадиол върху естрогенните рецептори. Резултатите показват товаехинакозидможе също конкурентно да се свърже с естрадиола към естрогенните рецептори и да антагонизира отговора на естрадиола към естрогена. Повишаване на ERE луциферазната активност. В сравнение с групата Е (10nmol), вербаскозидът може да регулира надолу луциферазната активност на естрадиола върху елемента на естрогенния отговор ERE в различна степен при 1, 10 и 50 mol, иехинакозидпроявява мързелива доза. Секс, когато концентрацията достигне 50lxmol, антагонистичният ефект върху естрадиола е най-очевиден (Фигура 5)
3 Дискусия
Този експеримент показа за първи път, че ясни данни показват товаехинакозиди вербаскозид, основните активни съставки в Cistanche, може да се свърже с естрогенните рецептори ERa и EP~, да регулира нагоре луциферазната активност на ERE и да упражнява естрогенни ефекти, показвайки SERMs активност. Анализът на горните експериментални данни показва, че в системата ERa, регулирането на вербаскозид върху луциферазната активност на елемента на естрогенния отговор ERE при 50 lxmol е еквивалентно на 0.977 пъти по-голямо от това на E2 (1 0nmol), което е еквивалентно на това в системата ERI3. 0,970 пъти; по подобен начин, в системата ERa, регулиращият ефект на ехинакозида върху естрогенната отговорна активност на ERE луцифераза при 50 lxmol е еквивалентен на този на E (10nmol), което е еквивалентно на 0 в ERI3 системата. 937 пъти, регулирането на вербаскозид върху активността на елемента ERE луцифераза в отговор на естроген е малко по-високо от това наехинакозиди селективността за естрогенните рецептори ERa и ER[3 не е очевидна, докато гликозидите на ехинацея имат слаби разлики в селективността за естрогенните рецептори ERa и ERI3. Тези разлики може да са свързани с различните групи, свързани с позицията R4 на вербаскозид и ехинакозид. Естрогенът действа главно чрез естрогенния рецептор. Има два основни подтипа естрогенен рецептор, ERa и ER [3, естрогенът и естроген-действащите вещества се комбинират с естрогенния рецептор, за да образуват димер и след това се димеризират. Тялото се комбинира с естрогенния отговорен елемент ERE и след това упражнява естрогенен ефект [2л,. Фитоестрогените и естрогените имат подобни структури и функции. Проучванията показват, че фитоестрогените могат да регулират костния метаболизъм и играят изключително важна роля в поддържането на баланса на костната резорбция и костното образуване. Ефективен е при остеопороза при пациенти със сенилна хипофункция. Има определен клиничен профилактичен и лечебен ефект¨. Поради това се спекулира, че ефектът на Cistanche за насърчаване на костната регенерация и инхибиране на образуването на остеопороза при жени в постменопауза е чрез неговите фитоестрогени. Този експеримент също така показва, че ехинакозидът и вербаскозидът могат конкурентно да се свързват с естрогенните рецептори с естрадиола и да противодействат на повишената регулация на естрадиола върху ERE луциферазната активност. Механизмът на това действие е известен на ресвератрола. Ефектът на фитоестрогените е подобен на J. Допълнително е обяснено, че ехинакозидът и вербаскозидът упражняват естрогенни ефекти чрез свързване с естрогенните рецептори ERa и ER3. Горните проучвания върху фитоестрогенната активност на Cistanche и механизма на неговия естрогенен ефект показват, че Cistanche може да забави образуването на постменопаузална остеопороза при жени чрез подобряване на нивото на естроген в организма или лечение на лечението, причинено от спада на нивото на естроген в тялото. Остеопорозата предлага възможността и предоставя теоретична основа за разширяване на обхвата на клиничната медицинска употреба на Cistanche.
справка
1 Китайска фармакопейна комисия（(国家药典委员）). Фармакопея на Китайската народна република. Пекин: Chemical Industry Press, 2010. Том 1:126.
2 Li SZ（李时珍）. Компендиум на Materia Medica. Пекин: People * s Medical Publishing House （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）,Zheng YF（郑一凡）,Lv ZL（吕志良）. Имунобиологичната активност и нейният механизъм на действие на цистанховите полизахариди. J Zhejiang Univ, Med Ed （浙江 大学学报, 医学版）, 2002, 31:284-287.
