Устойчивият цитотоксичен отговор на мононуклеарни клетки от периферна кръв от неваксинирани лица, приети в интензивно отделение поради критичен COVID-19, е от съществено значение за избягване на фатален изход
Nov 02, 2023
Резюме: Основната цел на това проучване беше да се определи влиянието на цитотоксичната активност на мононуклеарните клетки на периферната кръв (PBMC) върху изхода на неваксинирани лица с критичен COVID-19, приети в интензивното отделение. Кръвни проби от 23 индивида бяха събрани при приемане и след това на всеки 2 седмици в продължение на 13 седмици до смъртта (група Exitus) (n=13) или изписване (група за оцеляване) (n=10). Не открихме значителни разлики между групите в социодемографските, клиничните или биохимичните данни, които могат да повлияят на фаталния изход. Въпреки това, директната клетъчна цитотоксичност на PBMCs от индивиди от групата Exitus срещу псевдотипизирани SARS-CoV-2-инфектирани Vero E6 клетки беше значително намалена при приемане (-2.69-кратно; p=0). 0234) и след 4 седмици в интензивното отделение (−5.58-кратно; p=0.0290), в сравнение с индивиди, които са оцелели, и не се е подобрило по време на хоспитализацията. In vitro, лечението с IL-15 на тези клетки не възстанови ефективната цитотоксичност по всяко време до фаталния изход и се наблюдава повишена експресия на маркери за имунно изтощение при NKT, CD4+ и CD 8+ Т клетки. Въпреки това, лечението с IL-15 на PBMC от индивиди от групата за оцеляване значително повишава цитотоксичността на седмица 4 (6.18-кратно; p=0.0303). Следователно имуномодулаторните лечения, които могат да преодолеят имунното изтощение и да предизвикат устойчива, ефикасна цитотоксична активност, могат да бъдат от съществено значение за оцеляването по време на хоспитализация поради критичен COVID-19.
Ключови думи: SARS-CoV-2; COVID-19; имунен отговор; цитотоксичен отговор; IL-15
cistanche tubulosa - подобряват имунната система
1. Въведение
Няколко случая на атипична вирусна пневмония, свързана с огнище на пазар за морски дарове в град Ухан (провинция Хубей, Китай), бяха открити през декември 2019 г. Нов коронавирус, наречен коронавирус 2 на тежък остър респираторен синдром (SARS-CoV-2) бързо разпространен по света, причинявайки пандемията от коронавирусна болест 2019 (COVID-19) [1]. Оттогава около 626 милиона случая на COVID-19 и 6,5 милиона свързани смъртни случая са докладвани по света (актуализирано октомври 2022 г.) [2]. Различни рискови фактори и съпътстващи заболявания могат да повлияят на прогресирането на COVID-19 сред индивидите, което повлия на сравнението на клиничните данни между засегнатите страни от началото на пандемията [3]. Установено е обаче, че клиничните прояви на COVID-19 могат да варират от асимптоматична инфекция до синдром на остър респираторен дистрес (ARDS) [4]. Сред различните рискови фактори, които са свързани с по-голяма вероятност от развитие на тежка форма на COVID-19, са напреднала възраст, мъжки пол и предишни съпътстващи заболявания като диабет, хипертония и/или затлъстяване [5,6]. Тежкият и критичен COVID-19 също се свързва с цитопения, предимно на CD4+ Т лимфоцити, както и с прекомерно изтощение на естествени убийци (NK) и CD8+ Т клетки, което води до имунокомпрометирано състояние, което не е в състояние да изчисти инфекцията, в допълнение към развитието на сериозни усложнения като цитокинова буря и тромботични събития [7]. Основната причина за развитие на тежка форма на заболяването и смърт при пациенти с COVID-19 се счита за прекомерен възпалителен отговор, който може да насърчи развитието на шок и/или хиперцитокинемия с мултиорганна дисфункция [4]. Този синдром е известен като цитокинова буря [8] и е подобен на заболяването хемофагоцитна лимфохистиоцитоза (sHLH), което се състои от състояние на хипервъзпаление, предизвикано от вирусна инфекция [9,10]. Може да е свързано с факта, че SARS-CoV-2 използва рецептора на ангиотензин-конвертиращия ензим 2 (ACE2), за да зарази целевите клетки. Свързването на SARS-CoV-2 с ACE2 рецептора, който се експресира широко от клетки на различни тъкани [11], води до повишаване на ангиотензин II, който активира ядрения фактор-κB (NF-κB). Активирането на този основен транскрипционен фактор стимулира експресията на провъзпалителни цитокини, хемокини и адхезионни молекули [12]. Въпреки този прекомерен възпалителен отговор, изглежда неефективно да се изчисти инфекцията и, поради Т-клетъчно активиране, може да завърши с апоптоза [13]. Тази цитокинова буря може да бъде отговорна за лимфопения [12,14], а също и за понижени нива на NK и CD8+ Т клетки с изчерпан фенотип и повишена експресия на инхибиторни рецептори като NKG2A в NK клетки и PD{{47 }} в CD8+ Т клетки [15,16]. Освен това, експресията на маркери за дегранулация като CD107a обикновено е намалена на повърхността на тези клетки [15], което доказва наличието на увреждане в способността за елиминиране на заразени клетки при индивиди с тежък и критичен COVID-19 [17 ]. Въпреки бързия глобален отговор за разработване и прилагане на ефективни ваксини, появата на нови варианти, които могат да избягат от индуцирания от ваксината имунен отговор, доведе до бърз спад в защитата срещу симптоматично заболяване [18]. Следователно е необходимо да продължим изследванията за ефективни терапии срещу COVID-19. Тествани са няколко лечения за подобряване на състоянието на лица, хоспитализирани поради тежко и критично заболяване, но все още не е доказано, че нито едно от тях е специфично за елиминиране на заразените клетки или намаляване на процента на инфекция [15,19]. Следователно, поддържащото лечение като кислородна и флуидна терапия все още е сред най-важните стратегии, прилагани за управлението на тези индивиди [2,4,16,20]. Неспецифичните лечения като кортикостероиди също са били полезни за контролиране и намаляване на прекомерния възпалителен отговор [21,22]. Наскоро няколко лекарства бяха разрешени от FDA за лечение на лица с лек до умерен COVID -19, като молнупиравир, нирматрелвир и ритонавир, но само в случай на спешност за лица с висок риск да прогресира до тежко заболяване [23–26]. Молнупиравир показва широкоспектърна антивирусна активност поради способността си да индуцира РНК мутагенеза чрез интерференция с няколко вирусни РНК-зависими РНК полимерази (RdRp), включително RdRp, използван от SARS-CoV-2 за репликация и транскрипция на неговия РНК геном [27]. Доказано е също, че комбинацията от нирматрелвир и ритонавир може да спре разпространението на инфекцията при животински модели чрез инхибиране на основната вирусна протеаза 3CLpro на SARS-CoV-2- 2 [28]. Въпреки това, тези антивирусни лекарства трябва да се прилагат заедно с други мерки като ваксини, за да предизвикат мощен цитотоксичен имунен отговор, способен да елиминира заразените клетки. Повечето клетки с цитотоксична активност, като CD8+ Т лимфоцити и NK и NKT клетки, изискват наличието на интерлевкин-15 (IL-15) за тяхната функция и хомеостатична регулация [29]. IL-15 подготвя CD8+ Т клетките за тяхното активиране от специфични антигени и също така подобрява цитотоксичността и пролиферацията на NK клетките. Следователно, IL-15 може да подобри както вродените, така и адаптивните клетъчни имунни отговори срещу заразените клетки [22,25]. IL-15 също предотвратява апоптозата на NK и Т клетките чрез регулиране на антиапоптотични фактори като Bcl-2 и понижаване на проапоптотичните фактори като GSK-3 [26], като по този начин се избягва цитопенията. Съответно, IL-15 е предложен като нов имуномодулиращ цитокин в имунотерапията на рак и се счита за адювант в режимите на ваксина [26,30]. Клинични изпитвания фаза 1 с човешка болус интравенозна инфузия IL-15 (rhIL-15) или IL{101}} суперагонист N-803 показват, че този цитокин може да индуцира значително разширяване и/или активиране на CD4+, CD8+ и NK ефекторни клетки in vivo и следователно се прилага за лечение на рак или вирусни инфекции като HIV [31–35]. Следователно използването на имуномодулиращи агенти като IL{107}}, които могат да възстановят цитотоксичната активност при индивиди, хоспитализирани поради критичен COVID-19, може да бъде полезно за изчистване на вируса от организма. В това наблюдателно, надлъжно проучване характеризирахме еволюцията на цитотоксичния имунен отговор срещу SARS-CoV-2 в мононуклеарни клетки на периферната кръв (PBMCs), изолирани от индивиди, диагностицирани с COVID-19, които са били приети в интензивно отделение за грижи (ICU) поради тежки усложнения, както и влиянието на този отговор върху крайния резултат в сравнение с други основни рискови фактори. Ние също така оценихме капацитета на тези клетки да реагират на лечение с IL-15 и да засилят техния цитотоксичен антивирусен отговор. Резултатите, получени в това проучване, могат да допринесат за по-добро разбиране на ролята на цитотоксичния отговор при фаталния изход на COVID-19 и за напредък към разработването на ефективни имуномодулиращи лечения, които насърчават изчистването на вируса.
cistanche tubulosa - подобряват имунната система
Щракнете тук, за да видите продуктите Cistanche Enhance Imunity
【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2. Материали и методи
2.1. Учебни предмети
Двадесет и трима лица с критичен COVID-19, приети в интензивното отделение на болница Universitario Ramón y Cajal (Мадрид, Испания) от октомври 2020 г. до април 2021 г., бяха наети за това проучване. Този период обхваща както втората, така и третата пандемична вълна на COVID-19 в Испания (съответно от юни до декември 2020 г. и от декември 2020 г. до март 2021 г.). Участниците бяха избрани на случаен принцип при хоспитализация съгласно следните критерии: разрешение за информирано писмено или устно свидетелско съгласие за участие в проучването, хоспитализация в интензивното отделение поради критичен COVID-19, положителен SARS-CoV-2 RT-qPCR анализ в назофарингеална цитонамазка, извършен при постъпване в болница съгласно вътрешни валидирани протоколи, на възраст над 18 години и неваксинирани срещу SARS-CoV-2 по време на инфекцията. Проби от периферна кръв и клинични данни бяха събирани на всеки 2 седмици за общо 13 седмици, а кръвните проби бяха обработени и криоконсервирани до момента на анализа. Този период беше изчислен, като се взе предвид, че продължителността на болничния престой в Испания по време на първите пандемични вълни беше оценена средно на 35 дни [36], така че можехме да извършим поне два пълни кръга на набиране и проследяване. След 13 седмици участниците бяха разделени на две групи според крайния изход: фатален изход (n=13), оттук нататък Exitus; или изписване от болница (n=10), оттук нататък Преживяване.
2.2. Етична декларация
Лицата, участвали в това проучване, бяха наети от болница Universitario Ramón y Cajal (Мадрид, Испания). Всички те дадоха информирано писмено съгласие за участие в проучването или свидетелстваха за устно съгласие с писмено съгласие от представител, за да избегнат работа със замърсени документи. Настоящите испански и европейски закони за защита на данните гарантират поверителността и анонимността на всички участници. Протоколът за това проучване (CEI PI 32_2020-v2) е изготвен в съответствие с Хелзинкската декларация и е прегледан и одобрен преди това от Комитетите по етика на Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) и участващата болница.
2.3. клетки
Пет милилитра цяла кръв бяха събрани в EDTA Vacutainer епруветки (Becton Dickinson, Мадрид, Испания) и незабавно обработени за изолиране на PMBCs и плазма чрез центрофугиране с градиент на плътност на Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) и след това бяха криоконсервирани до анализа. Клетъчната жизнеспособност след размразяване се оценява чрез оптична микроскопия и поточна цитометрия. Клетъчната линия Vero E6 (бъбрек на африканска зелена маймуна) (ECACC 85020206) беше любезно предоставена от д-р Антонио Алками (CBM Severo Ochoa, Мадрид, Испания) и тези клетки бяха култивирани в DMEM, допълнен с 10% FCS, 2 mM L- глутамин и 100 единици/ml пеницилин и стрептомицин (Lonza, Basel, Switzerland).
Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система
2.4. Тест за псевдотипна SARS-CoV-2 инфекция
Цитотоксичната активност срещу SARS-CoV-2 на PBMCs от участниците беше анализирана с помощта на Vero E6 клетки, заразени с едноцикличен псевдотипен вирус pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_Ren. Този вирус кодира шипов гликопротеин SARS-CoV-2 с мутация D614G в генома на HIV-1, както и гена на Renilla луцифераза, генериран, както е описано по-рано [37,38]. Варианти на SARS-CoV-2, съдържащи мутацията D614G в шиповия (S) протеин, започнаха да циркулират в началото на пандемията и бързо станаха доминиращи в много региони [39,40]. Накратко, монослой от Vero E6 беше заразен с pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/ямка ) за 48 часа. След това клетките се промиват и се култивират съвместно в продължение на 1 час с РВМС от участниците (съотношение 1:1), предварително третирани или не с IL-15 (13 ng/mL) в продължение на 48 часа. Дозата на IL-15, използвана за това проучване, беше избрана, като се взе предвид описаната по-рано доза, която причинява най-висок ефект върху пролиферацията на NK (10–25 ng/mL) [41], както и преференциалното разширяване на цитотоксичността на паметта CD8+ Т клетки (По-малко или равно на 5 ng/mL) [42]. Цитотоксичната активност на РВМС върху монослоя на Vero E6 се определя след отстраняване на супернатанта с клетките в суспензия и дисоциация на Vero E6 клетки от плаката с разтвор на трипсин-EDTA (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Германия) и последващо количествено определяне на активността на каспаза-3 в отделените клетки чрез луминесценция с помощта на Caspase-Glo 3/7 система за анализ (Promega, Madison, WI, USA). За да се определи кои цитотоксични клетъчни популации са отговорни за тази активност, PBMCs се събират от супернатантата и след това се анализират чрез поточна цитометрия.
2.5. Анализ с поточна цитометрия
За оцветяване на фенотипни маркери на клетъчната повърхност бяха използвани следните конюгирани антитела: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC и CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, закупен от BD Biosciences (Сан Хосе, Калифорния, САЩ). За оцветяване на маркери за изтощение бяха използвани следните конюгирани антитела: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC и PD1-BV650, закупени от BD Biosciences, както и CD4-PE, закупен от Immunostep SL (Саламанка, Испания) и TIGIT-AlexaFluor700, закупен от Thermo Fisher (Waltham, MA, САЩ). Пробите бяха получени с помощта на BD LSRFortessa X-20 поточен цитометър със софтуер FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) и след това анализирани с помощта на софтуер FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, OR , САЩ).
2.6. Откриване на SARS-CoV-2 РНКемия
Общата РНК се екстрахира от плазмени проби с помощта на QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia, Мадрид, Испания) в автоматизиран екстрактор QIAcube (Qiagen, Hilden, Германия). Откриването на SARS-CoV-2 РНК беше извършено чрез RT-qPCR анализ с мишени в гените на обвивката (E) и нуклеокапсида (N), както беше описано по-рано [43], което е част от Временните насоки на Световното здравеопазване Организация (СЗО) за диагностично изследване на SARS-CoV- 2 [44]. Пробите се считат за положителни за анализа, когато стойността на цикъла на количествено определяне (Cq) е под 45 цикъла.
Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система
2.7. Статистически анализ
Всички статистически анализи и графики бяха извършени с помощта на софтуер GraphPad Prism версия 8.4.3 (GraphPad Software Inc., Сан Диего, Калифорния, САЩ). Груповите сравнения бяха извършени с помощта на U-теста на Mann-Whitney, теста за ранг със знак на съпоставени двойки на Wilcoxon, еднопосочен ANOVA и теста за множество сравнения на Tukey. Точният тест на Fisher е използван за оценка на разликите в клиничните характеристики между двете групи. Стойностите на p < 0.{{10}}5 (двустранно) се считат за статистически значими. Средната стойност и стандартното отклонение бяха използвани за изчисляване на d статистиката на Коен с помощта на калкулатор за размер на ефекта на Excel [45]. Размер на ефекта от 0.2, 0,5, 0,8 или по-голям или равен на 1,2 беше индикация съответно за малки, средни, големи и много големи размери на ефекта [46].
3. Резултати
3.1. Характеристики на участниците
Това наблюдателно, надлъжно проучване включва 23 пациенти, диагностицирани с COVID-19, които са приети в интензивното отделение поради тежки усложнения. Кръвни проби са събирани на всеки 2 седмици за общо 13 седмици или до окончателния резултат. За нито един от участниците в това проучване не се съобщава, че е ваксиниран срещу COVID-19 по време на заразяването и хоспитализацията. Основните социално-демографски и клинични характеристики на всички участници са обобщени в таблица 1.
Таблица 1. Демографски и клинични данни на всички участници от групата Exitus и групата Survival, които бяха наети за това проучване.
Средната възраст на групата Exitus е 65.{1}} години (IQR 62.0–69.0), докато средната възраст на групата Survival е 63.{{7} } години (IQR 59.0–68,5). Повечето участници (73,9%) са мъже, а 65,2% са имали поне едно съпътстващо заболяване. Основните съпътстващи заболявания са дислипидемия (52,2%), хипертония (39,1%) и захарен диабет (26,1%). Повечето пациенти са получавали кортикоиди (82,6%), антибиотици (82,6%) и антикоагуланти (82,6%) като стандартно лечение. Те са получили и други лечения като тоцилизумаб (17,4%) и ремдесивир (8,7%). Най-честите признаци и симптоми са били пневмония (100%), кашлица и експекторация (87.0%), диспнея (87,0%) и треска (87,0%). По време на престоя си в интензивното отделение 12 пациенти (92,3%) от групата Exitus и 10 пациенти (100%) от групата Survival се нуждаят от инвазивна механична вентилация. Не открихме значителни разлики между двете групи в социодемографските и клиничните данни. Ние също анализирахме данните за биохимията на кръвта на изходно ниво (първа проба) между двете групи и не открихме значителни разлики между групите. По-подробна информация за клиничните данни, хоспитализацията и данните за биохимията на кръвта на всеки участник е показана в допълнителни таблици S1 и S2.
3.2. Продължителност на болничния и интензивния престой
Средната продължителност на болничния престой е 59.{1}} (IQR 36.0–100.0) дни в групата Exitus и 73. 0 (IQR 44,5–90.{{20}}) дни в групата за оцеляване (Фигура 1A). Средната продължителност на престоя в интензивното отделение е 49,0 (IQR 25,5–82,0) дни в групата Exitus и 44,0 (IQR 25,0–66,5) дни в групата за оцеляване (Фигура 1B). Не са установени значими разлики в тези параметри между двете групи.
Фигура 1. Продължителност на болничния и интензивния престой. Продължителност на престоя в болница (A) и интензивно отделение (B) (дни) при лица с критичен COVID-19, които са разделени на две групи според крайния резултат: фатален изход, група Exitus (запълнени точки); или възстановяване и изписване от болницата, група за оцеляване (празни точки). Всяка точка съответства на един индивид, а вертикалните линии представляват средната стойност ± стандартна грешка на средната стойност (SEM). Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-теста на Mann-Whitney.
3.3. Нива на лимфоцитите в периферната кръв
Индивидите от групата Exitus показват лимфопения (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.
Фигура 2. Брой лимфоцити в периферната кръв по време на хоспитализация поради критичен COVID-19. Броят на лимфоцитите (клетки/mm3) се определя на всеки 2 седмици за общо 13 седмици или до крайния резултат в кръвни проби от участниците в групите Exitus (запълнени точки) и Survival (празни точки). Прагът за лимфопения е показан при 1000 клетки/mm3 с пунктирана линия. Всяка точка съответства на средната стойност на данните, а вертикалните линии представляват SEM. Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-теста на Mann-Whitney, а в рамките на групите беше използван U-тестът на Wilcoxon.
3.4. Цитотоксична активност на PBMC срещу Vero E6 клетки, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2
Ние оценихме цитотоксичната активност на РВМС на хоспитализираните пациенти в надлъжните проби чрез количествено определяне на активирането на каспаза-3 в монослой от Vero E6 клетки, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2 след съвместно култивиране за 1 час ( съотношение 1:1). Цитотоксичният капацитет на PBMCs, изолирани от индивиди от групата Exitus, не се променя значително по време на хоспитализацията и остава стабилно нисък до фаталния изход (Фигура 3). Тази цитотоксична активност не се повишава значително, когато тези клетки се стимулират с IL-15 в продължение на 48 часа. В групата за оцеляване, цитотоксичната активност на РВМС е увеличена 2.69-пъти (p=0.0234; d=1.12 на Коен) в базалната проба (t {{17} }) в сравнение с групата Exitus и постоянно се увеличава до 6-та седмица от хоспитализацията. Това увеличение показва статистическа значимост в сравнението между групите на седмица 4 (5.58-кратно; p=0.0290; d=1.28 на Коен). От седмица 6 нататък цитотоксичната активност намалява в групата за оцеляване до изписването от болницата, което е в съответствие с намаляването на броя на лимфоцитите през същата седмица на хоспитализация (вижте Фигура 2). Лечението с IL-15 повишава средно 2.30-пъти цитотоксичната активност на PBMCs на индивиди от групата за оцеляване във всички проби по време на проследяването. След 4 седмици хоспитализация, IL-15-индуцираната цитотоксична активност се повишава 618-пъти (p=0.0303; d на Cohen=1.05) в PBMCs на лица от групата Survival.
Фигура 3. Директна клетъчна цитотоксичност на PBMCs, изолирани от хоспитализирани пациенти с критичен COVID-19. Цитотоксичният капацитет на PBMCs от индивиди от групите Exitus (запълнени точки) и Survival (празни точки) беше измерен чрез количествено определяне на активността на каспаза-3 в монослой от клетки Vero E6, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2 след съвместно култивиране (1:1) за 1 час при основни условия (сиви линии) или след третиране с IL-15 за 48 часа (черни линии). Всяка точка съответства на средната стойност на данните, а вертикалните линии представляват SEM. Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-теста на Mann-Whitney, а в рамките на групите беше използван U-тестът на Wilcoxon.
3.5. Нива на NK и NKT клетки
Нивата на клетки с цитотоксични фенотипове бяха анализирани в PBMCs, които бяха съвместно култивирани с Vero E6 клетки, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2. Не открихме значителни разлики между нивата на клетките с NK фенотип (CD3-CD56+) между двете групи индивиди, дори след лечение с IL-15 (Фигура 4А). Експресията на дегранулационния маркер CD107a върху повърхността на тези клетки остава непроменена при индивидите от групата Exitus. Въпреки че тази експресия непрекъснато нараства от седмица 4 до изписването от болницата в групата за оцеляване, тази разлика не постига статистическа значимост в сравнение с групата Exitus (Фигура 4B). Третирането с IL-15 не променя значително експресията на CD107a в тези клетки. От седмица 4 PBMCs от индивиди от двете групи показаха увеличение на нивата на клетки с NKT фенотип (CD3+CD56+), което беше 4.{17}}пъти по-високо в PBMCs от индивидите от групата Exitus на седмица 6, въпреки че тази разлика не е постигнала значимост (p=0.0571; d=3.15 на Cohen) (Фигура 5A). Това увеличение беше малко по-високо, когато клетките бяха третирани с IL-15 и в двете групи, въпреки че данните също не достигнаха статистическа значимост (Фигура 5А). Експресията на CD107a не се променя значително между двете групи или след лечение с IL-15 (Фигура 5В).
Фигура 4. Нива на NK клетки в PBMC от лица, хоспитализирани с критичен COVID-19. (A) Общи нива на NK клетки (CD3-CD56+) и (B) експресията на маркера за дегранулация CD107a в тези клетки беше оценена в PBMCs в основни условия (сиви линии) или след третиране с IL-15 за 48 часа (черни линии) след съвместно култивиране (1:1) с Vero E6 клетки, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2 за 1 час. Всяка точка съответства на средната стойност на данните, а вертикалните линии представляват SEM. Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-тест на Mann-Whitney, а в рамките на групите беше използван U-тест на Wilcoxon.
Фигура 5. Нива на NKT клетки в PBMC от лица, хоспитализирани с критичен COVID-19. Общите нива на NKT клетки (CD3+CD56+) (A) и експресията на маркера за дегранулация CD107a в тези клетки (B) бяха оценени при основни условия (сиви линии) или след третиране с IL{ {5}} за 48 часа (черни линии) след съвместно култивиране (1:1) за 1 час с клетки Vero E6, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2. Всяка точка съответства на средната стойност на данните, а вертикалните линии представляват SEM. Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-теста на Mann-Whitney, а в рамките на групите беше използван U-тестът на Wilcoxon.
3.6. Нива на CD8+ Т клетки
Броят на CD8 беше повишен 207-пъти (p=0.0409; d=0.94 на Коен) в базалната проба (t=0) на групата Exitus в сравнение с групата за оцеляване и тези нива остават стабилни до фаталния изход (Фигура 6А). IL-15 не дава значителен благоприятен ефект върху нивата на тази клетъчна популация. В групата за оцеляване, CD8+ Т клетките са намалени средно 1.51-пъти в сравнение с групата Exitus (Фигура 6А). Експресията на CD107a намалява 153-пъти (p=0.0313) на седмица 4 в CD8+ Т клетки от индивидите от групата Exitus и остава непроменена до фаталното резултат. Лечението с IL-15 показва лека полза в експресията на този маркер за дегранулация, но тази разлика не е значима (Фигура 6B). В групата за оцеляване също имаше намаление в експресията на CD107a в CD8+ Т клетки на седмица 4, а след това имаше увеличение нататък, но не беше постигнато значение преди или след лечението с IL{{26 }} (Фигура 6B).
Фигура 6. Нива на CD8+ Т клетки в PBMC от лица, хоспитализирани с критичен COVID-19. (A) Общи нива на CD8+ Т клетки (CD3+CD8+) и (B) експресията на маркера за дегранулация CD107a в тези клетки беше оценена в PBMCs в основни условия (сиво линии) или след третиране с IL-15 за 48 часа (черни линии) след съвместно култивиране (1:1) с Vero E6 клетки, заразени с псевдотипизиран SARS-CoV-2 за 1 час. Всяка точка съответства на средната стойност на данните, а вертикалните линии представляват SEM. Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-теста на Mann-Whitney, а в рамките на групите беше използван U-тестът на Wilcoxon.
3.7. Маркери за нива на изтощение
Нивата на експресия на маркерите за имунно изтощение PD-1 (протеин на програмирана клетъчна смърт) и TIGIT (Т клетъчен имунорецептор с Ig и ITIM домени) бяха анализирани чрез поточна цитометрия в CD4+ Т клетки и цитотоксични клетки от всички участници. Анализирани са проби, получени по време на приемане в болница (t=0) до 6-та седмица от хоспитализацията, поради липсата на налични проби след този момент. CD4+ и CD8+ Т клетки от индивиди от групата Exitus показват нива на PD-1, които са значително повишени с 1,72 (p=0.0095; d {{ на Cohen 11}}.87)- и 2.92-кратно (p=0.0317; d на Коен=2.07) след 4 седмици хоспитализация, съответно, в сравнение с индивиди от Група за оцеляване (Фигура 7A, B, леви графики). В NKT клетки нивата на TIGIT значително се повишават от момента на приемане в болница до 6 седмици на хоспитализация при индивиди от групата Exitus и тези нива се повишават 176-пъти (p=0.0357 d=0.33) на Коен след 2 седмици хоспитализация, в сравнение с групата за оцеляване (Фигура 7C, дясна графика).
Не са наблюдавани значителни разлики между групите в нивата на експресия на тези маркери за изчерпване в NK клетки (Фигура 7D).
Фигура 7. Нива на експресия на маркери за изтощение в PBMC от лица, хоспитализирани с критичен COVID-19. Нива на експресия на PD-1 и TIGIT в CD4+ Т клетки (A), CD8+ Т клетки (B), NKT клетки (C) и NK клетки (D). Всяка точка съответства на средната стойност на данните, а вертикалните линии представляват SEM. Статистическата значимост между групите беше изчислена с помощта на U-теста на Mann-Whitney, а в рамките на групите беше използван ANOVA.
3.8. Количествено определяне на SARS-CoV-2 РНКемия в плазмата
Наличието на РНК от SARS-CoV-2 беше анализирано в плазмата на всички индивиди в базалната проба (t=0) и не бяха получени положителни резултати при нито един участник със стойности на Cq под границата на положително откриване на 45 цикъла.
4. Дискусия
Инфекцията със SARS-CoV-2 може да причини няколко клинични прояви на COVID-19, които варират от асимптоматична инфекция до тежко, критично или дори фатално заболяване [4]. Въпреки че общата ваксинация на населението значително намали тежките форми на заболяването, появата на нови варианти на SARS-CoV-2 увеличава броя на хората, които развиват критичен COVID-19 и трябва да бъдат хоспитализирани поради пробив на инфекции [47,48]. Следователно все още е приоритет да се разработят превантивни и терапевтични стратегии, които могат да избегнат развитието на критични форми на COVID-19 и фатални изходи при хоспитализирани пациенти. Описано е, че възрастните хора със съпътстващи заболявания представляват по-висок риск от развитие на тежък и критичен COVID{{1{{30}}}} [49]. В Испания най-значимите независими предиктори за смърт поради COVID-19 са мъже на възраст над 50 години със свързани съпътстващи заболявания като хипертония и диабет [36]. В нашето проучване повечето от участниците в двете групи представиха тези характеристики, без значителни разлики между тях в социодемографски, клинични или биохимични данни, които могат да повлияят на тежестта на заболяването или фаталния изход. Всъщност и двете групи показват повишени нива на биохимични параметри, които са свързани с по-висок риск от лош изход от COVID-19, като С-реактивен протеин (CRP) и лактат дехидрогеназа (LDH) [50–56 ]. От друга страна, въпреки че е съобщено, че лица с тежка форма на COVID-19 може да имат откриваема SARS-CoV-2 РНКнемия [54], което е свързано с повишен риск от смъртност [55], нито един от участниците в нашето проучване не представи откриваема РНК в серума, така че не можахме да установим корелация между откриваема виремия и фатален изход. И накрая, COVID-19 показва по-висока продължителност на болничния престой и смъртност в сравнение с други инфекциозни заболявания, които изискват приемане в интензивно отделение, като пневмония, придобита в обществото (CAP) или сепсис [56], и е оценено в 35 дни средно за онези лица, които са били хоспитализирани в Испания по време на първите пандемични вълни [36]. В нашето проучване средната продължителност на болничния престой е сходна между групите Exitus и Survival (съответно 59,0 и 73,0 дни), а 50% от всички участници са останали повече от 40 дни в интензивното отделение. Следователно трябва да се вземат предвид други различни фактори, за да се обясни фаталния изход в групата Exitus и възстановяването в групата Survival.
Ползи от Cistanche tubulosa- укрепване на имунната система
Лимфопенията също се счита за рисков фактор за тежестта на заболяването, което е свързано с по-дългата продължителност на болничния престой [57]. В нашето проучване 73,9% от участниците в двете групи Exitus и Survival показват нисък брой лимфоцити. Въпреки това нивото на общите лимфоцити е средно по-високо при участниците в групата за оцеляване в сравнение с групата Exitus. Това е в съответствие с предишното наблюдение, че тези индивиди, които са починали поради COVID-19, развиват по-тежка лимфопения с течение на времето в сравнение с тези, които оцеляват [58] и че тези лимфоцити обикновено показват изтощен фенотип, което води до постепенен имунен дефицит [15,16]. Тъй като ефективният цитотоксичен антивирусен отговор е от съществено значение за контрола на вирусни инфекции, включително SARS-CoV-2 [17], възстановяването на имунната система е от решаващо значение за възстановяването от COVID-19. Ускоряването на това имунно възстановяване до голяма степен зависи от хомеостатичното периферно разширяване на лимфоцитите, което може да бъде добра стратегия за подобряване на изхода на лица, хоспитализирани поради тежка форма на COVID-19 [58]. IL-15 е цитокин, необходим за функцията и хомеостазата на CD8+ Т клетки, NK и NKT клетки [29], и е предложен като ново имуномодулиращо лечение за няколко заболявания като рак и HIV инфекция [26,30,35,59]. Следователно в това проучване ние оценихме дали лечението in vitro с IL-15 може да подобри цитотоксичния отговор в PBMCs на хоспитализирани лица с тежък и критичен COVID-19 с напредването на инфекцията, за да определим неговата валидност като кандидат за стимулиране на възстановяването на имунната система по време на COVID-19. С анализираната доза наблюдавахме цялостно повишаване на цитотоксичния отговор срещу прицелни клетки, заразени с псевдотип SARS-CoV-2 в PBMCs на онези индивиди, които са преживели COVID-19 след средно 44 дни хоспитализация в интензивното отделение. Този цитотоксичен отговор беше ефективно увеличен 23-пъти средно при лечение с IL-15 във всички проби, събрани по време на проследяването, като седмица 6 от хоспитализацията беше повратната точка, от която както броят на лимфоцитите и цитотоксичната активност започва да намалява до изписването от болницата. Въпреки че споделят сходни социално-демографски, клинични и биохимични характеристики и са били хоспитализирани за почти същия период от време (общо 59 дни, от които 49 дни са били в интензивното отделение), групата от лица, които не са преживели COVID{{34} } показва PBMCs, които не реагират в присъствието на заразените целеви клетки, дори когато са били стимулирани с IL-15. Общите нива на лимфоцитите са били над прага на лимфопения при лицата от тази група след седмица 2 от хоспитализацията. Въпреки това, тези нива не се повишиха значително по време на хоспитализацията и не беше открит ефективен антивирусен отговор, дори в присъствието на IL-15 в тестваната доза. Липсата на отговор към IL-15 е описана за други хронични инфекции като вирус на човешка имунна недостатъчност (HIV), вирус на хепатит C (HCV), вирус на хепатит B (HBV) и човешки Т лимфотропен вирус (HTLV), при които имунното изтощение може да засегне експресията на специфичния рецептор на IL-15, CD122, в CD8+ Т клетки [60], правейки ги неотзивчиви към този хомеостатичен стимул. Имунното изтощение, което е характерно за COVID-19, не е наблюдавано само в CD8+ Т клетки, но и в други типове цитотоксични клетки, като NK и NKT клетки [15,16]. Следователно липсата на отговор към IL-15 в PBMC от групата Exitus може да е свързана с повишено имунно изтощение, което не може да бъде преодоляно само с лечение с IL-15 при изследваната доза. Това също е наблюдавано във фаза I клинични проучвания, при които монотерапията с IL-15 е неефективна въпреки огромното разрастване на цитотоксичните клетки [31,32]. Следователно, други костимулиращи лечения биха били необходими за предизвикване на ефективен отговор при тези индивиди, като инхибитори на имунологични контролни точки или моноклонални антитела, насочени към заразените клетки, за да се подобри зависимата от антитялото клетъчна цитотоксичност (ADCC).
Ние също така определихме типовете клетки, които са участвали главно в развитието на този засилен цитотоксичен отговор в групата от индивиди, преживели COVID-19. Доказано е, че наличието на функционални CD8+ Т клетки е от съществено значение за защита на животинските модели от развитието на тежък COVID-19 [61,62]. Освен това липсата на ефективен цитотоксичен отговор, медииран от CD8-, е определен като основен фактор за повишената чувствителност на възрастните хора към развитие на тежък или критичен COVID-19 [63]. Изненадващо, нивата на CD8+ Т клетки бяха 2.07-пъти (p=0.0409) по-високи в групата Exitus по време на хоспитализацията (t=0). , и те остават подобрени до фаталния изход, в сравнение с групата за оцеляване. Въпреки че индивидите от групата Exitus показват брой лимфоцити малко над прага на лимфопения, тези нива остават почти непроменени през цялото време, през което са били хоспитализирани. Освен това е описано, че лимфопенията може да доведе до модел на съпътстващо потискане и активиране, при който има периферна загуба на Т клетки едновременно с интензивната пролиферация на CD8+ Т клетъчния пул [64,65]. Това би обяснило леко повишените нива на CD8+ Т клетки, наблюдавани в PBMC на участниците от групата Exitus от 6-та седмица на хоспитализацията нататък, въпреки че общите нива на лимфоцитите остават непроменени и над прага на лимфопения, което също показва потенциално намаляване на CD4+ Т клетките. Въпреки това, тези CD8+ Т клетки показват ниска цитотоксична активност, както се определя от ниската експресия на маркера за дегранулация CD107a върху клетъчната повърхност, докато експресията на този маркер се увеличава в CD8+ Т клетките от участниците в групата за оцеляване от седмица 4 нататък. Експресията на CD107a се счита за биомаркер за оценка на цитотоксичния капацитет [66] и е описано, че е намалена в повърхността на клетки, изолирани от индивиди с COVID-19, в сравнение с неинфектирани, здрави донори [15] ].
Следователно, повишената експресия на CD107a на повърхността на CD8+ Т клетки може поне частично да обясни приноса на тези клетки към повишената цитотоксична активност, наблюдавана в PBMCs на участниците от групата за оцеляване. В допълнение, наблюдавахме повишена експресия на маркера за изчерпване PD-1 както в CD4+, така и в CD8+ Т клетки от индивиди от групата Exitus, което също може да допринесе за намалената цитотоксичност активност и отговор към IL-15 на тези клетки. Други клетъчни популации могат да бъдат включени в цитотоксичната активност срещу псевдотипизирани SARS-CoV-2-инфектирани клетки, като NK и NKT клетки. Както се случва при други тежки остри инфекции, NK клетките могат да бъдат привлечени към мястото на инфекция със SARS-CoV-2 [67], което би обяснило намаления брой циркулиращи NK клетки, наблюдаван при всички участници. Освен това, цитокинова буря, която се развива по време на тежък и критичен COVID-19, може да доведе до дисфункционално състояние на NK клетки, които биха изразили високи нива на инхибиторни рецептори на контролни точки като NKG2A или PD-1 [68]. В нашето проучване нивата на NK клетките бяха сходни между двете групи до седмица 6, в която участниците в групата за оцеляване показаха прогресивно увеличение до изписването от болницата. Това корелира с повишена експресия на CD107a, което е свързано в NK клетките с повишена секреция на цитокини и подобрен лизис на таргетните клетки [7,69], въпреки че процентът на NK клетки, експресиращи маркери за активиране като CD107a, е описан като по-ниски при индивиди с COVID-19 в сравнение със здрави контроли [70]. Обратно, въпреки че нивата на NKT клетките бяха значително повишени в групата за оцеляване от седмица 6 нататък, експресията на CD107a остана почти непроменена, докато те показаха повишени нива на маркера за изтощение TIGIT на клетъчната повърхност, които стабилно се повишават до седмица 6 от хоспитализацията . Едно от най-важните ограничения на нашето проучване беше намаленият размер на извадката. Независимо от това, беше постигната статистическа значимост между групите в няколко съществени параметъра, които също показаха голяма или много голяма величина на ефекта, когато бяха изчислени сборните разлики между групите.
cistanche tubulosa - подобряват имунната система
5. Изводи
В заключение, най-важният принос на това проучване в борбата срещу имунопатологията, причинена от SARS-CoV-2 инфекция, е потвърждението, че нарушеният антивирусен капацитет на PBMCs изглежда е критичен фактор за прогресирането до фатален COVID{ {2}}, дори над други социодемографски, клинични и биохимични фактори. Следователно използването на имуномодулиращи лечения, които могат да подобрят цитотоксичността, може да допринесе за положителен резултат по време на хоспитализация поради критичен COVID-19. Повишената цитотоксична активност, медиирана от IL-15 при индивиди от групата за оцеляване, вероятно не разчита на повишени нива на цитотоксични клетки, а на имунокомпетентността на тези клетки да реагират на такъв стимул. Следователно, наблюдението на експресията на маркери за изтощение и реакцията към хомеостатични стимули като IL-15 на тези клетъчни популации при хоспитализирани индивиди може да бъде полезно като предикторен маркер за фатален изход, за да се предприемат допълнителни мерки за предотвратяване на то. Следователно, това наблюдателно проучване е доказателство за концепцията, че употребата на IL-15 при индивиди, хоспитализирани с COVID-19, може да подобри антивирусния имунен отговор, въпреки че този стимул сам по себе си не би бил ефективен при тези лица с неотговарящи клетки поради имунно изтощение или нарушен IL-15R сигнален път, което е от съществено значение за превенцията на изтощението [71], дори когато те показват броя на лимфоцитите над прага на лимфопения. Необходими са повече проучвания с по-голяма популация, за да се оценят комбинации от увеличаващи се дози IL-15 с други имуномодулиращи агенти, като инхибитори на имунни контролни точки или моноклонални антитела, насочени към заразените клетки, за да помогнат за възстановяване и подобряване на антивирусния отговор по време на критични форми на COVID -19.
Препратки
1. Atzrodt, CL; Макноджия, И.; Маккарти, RDP; Oldfield, ТМ; Po, J.; Ta, KTL; Степ, HE; Clements, TP Ръководство за COVID-19: Глобална пандемия, причинена от новия коронавирус SARS-CoV-2. FEBS J. 2020 г., 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]
2. Коронавирус на СЗО (COVID-19) Табло за управление. Налично онлайн: https://covid19.who.int/ (достъп на 18 октомври 2022 г.).
3. Capalbo, C.; Ацети, А.; Simmaco, М.; Бонфини, Р.; Роко, М.; Ричи, А.; Наполи, C.; Роко, М.; Алфонси, В.; Teggi, A.; и др. Експоненциалната фаза на пандемията от COVID-19 в Централна Италия: Пътека за интегрирана грижа. Вътр. J. Environ. Рез. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]
4. Huang, C.; Wang, Y.; Ли, X.; Рен, Л.; Zhao, J.; Hu, Y.; Джан, Л.; Фан, Г.; Xu, J.; Гу, X.; и др. Клинични характеристики на пациенти, заразени с новия коронавирус от 2019 г. в Ухан, Китай. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef] [PubMed]
5. Хейбар, Х.; Каземния, К.; Рахим, Ф. Подлежащо хронично заболяване и инфекция с COVID-19: преглед на най-съвременното състояние. Jundishapur J. Chronic Dis. Грижа 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Хамед, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM Глобална динамика на SARS-CoV-2 класове и тяхната връзка с епидемиологията на COVID-19. Sci. Rep. 2021, 11, 8435. [CrossRef]
7. Ердинч, Б.; Сахни, С.; Gotlieb, V. Хематологични прояви и усложнения на COVID-19. адв. Clin. Exp. Med. 2021, 30, 101–107. [CrossRef]
8. Ху, Б.; Хуанг, С.; Ин, Л. Цитокинова буря и COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93, 250–256. [CrossRef]
9. Рамос-Касалс, М.; Brito-Zerón, P.; Лопес-Гийермо, А.; Khamashta, MA; Bosch, X. Хемофагоцитен синдром при възрастни. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [CrossRef]
10. Мехта, П.; McAuley, DF; Браун, М.; Санчес, Е.; Tattersall, RS; Менсън, Джей Джей; от името на HLH Across Specialty Collaboration, Обединеното кралство. В цялата специалност. COVID-19: Помислете за синдроми на цитокинова буря и имуносупресия. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [CrossRef]
11. Ли, М.-Й.; Li, L.; Джан, Й.; Уанг, X.-S. Експресия на SARS-CoV-2 клетъчния рецепторен ген ACE2 в голямо разнообразие от човешки тъкани. заразявам. дис. Бедност 2020, 9, 45. [CrossRef]
12. Jiang, Y.; Рубин, Л.; Пенг, Т.; Лиу, Л.; Xing, X.; Лазаровичи, П.; Zheng, W. Цитокинова буря при COVID-19: От вирусна инфекция до имунни отговори, диагноза и терапия. Вътр. J. Biol. Sci. 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]
13. Жан, Й.; Carrington, EM; Джан, Й.; Heinzel, S.; Lew, AM Живот и смърт на активирани Т клетки: Как се различават от наивните Т клетки? Отпред. Immunol. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]
14. Хуанг, И.; Праната, Р. Лимфопения при тежка коронавирусна болест-2019 (COVID-19): Систематичен преглед и мета-анализ. J. Интензивно лечение 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]
15. Джън, М.; Гао, Й.; Wang, G.; Песен, Г.; Лиу, С.; Сън, Д.; Xu, Y.; Tian, Z. Функционално изчерпване на антивирусни лимфоцити при пациенти с COVID-19. клетка. Mol. Immunol. 2020, 17, 533–535. [CrossRef]
16. Ра, М.-С.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Чой, SJ; Seo, I.-H.; Лий, JS; Sa, M.; Ким, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; и др. PD-1-експресиращи SARS-CoV-2-специфични CD8+ Т клетки не са изтощени, но функционират при пациенти с COVID-19. Имунитет 2021, 54, 44–52. [CrossRef]
17. Вигон, Л.; Фуертес, Д.; García-Pérez, J.; Торес, М.; Родригес-Мора, С.; Матеос, Е.; Корона, М.; Саез-Марин, AJ; Мало, Р.; Navarro, C.; и др. Нарушен цитотоксичен отговор в PBMC от пациенти с COVID-19, приети в интензивното отделение: биомаркери за прогнозиране на тежестта на заболяването. Отпред. Immunol. 2021, 12, 665329. [CrossRef]
18. КОЙ. Междинна декларация относно съображенията за вземане на решения за използването на актуализирани варианти на ваксини срещу COVID-19. Налично онлайн: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variant-updated-covid{{15} }vaccines (достъп на 15 август 2022 г.).
19. Мишра, Словакия; Трипати, Т. Едногодишна актуализация на пандемията от COVID-19: Къде сме сега? Acta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, М.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. Молекулярна имунна патогенеза и диагностика на COVID-19. J. Pharm. анален 2020, 10, 102–108. [CrossRef]
21. TRC Group. Дексаметазон при хоспитализирани пациенти с COVID-19. Н. англ. J. Med. 2021, 384, 693–704. [CrossRef]
22. Джоу, X.; Ю, Дж.; Cheng, X.; Джао, Б.; Manyam, GC; Джан, Л.; Schluns, K.; Устна.; Wang, J.; Sun, S.-C. Деубиквитиназата Otub1 контролира активирането на CD8+ Т клетки и NK клетки чрез регулиране на IL-15-медиирано праймиране. Нац. Immunol. 2019, 20, 879–889. [CrossRef]
23. Parums, DV Текущо състояние на пероралните антивирусни лекарства за SARS-CoV-2 инфекция при нехоспитализирани пациенти. Med. Sci. Монит. 2022, 28, e935952-1. [CrossRef] [PubMed]
24. Couzin-Frankel, J. Антивирусните хапчета могат да променят хода на пандемията. Am. ст.н.с. адв. Sci. 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]
25. Мунтасел, А.; Очоа, MC; Cordeiro, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; Кабо, М.; Лопес-Ботет, М.; Melero, I. Насочване към NK-клетъчни контролни точки за имунотерапия на рак. Curr. мнение Immunol. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]
26. Патидар, М.; Ядав, Н.; Dalai, SK Интерлевкин 15: Ключов цитокин за имунотерапия. Cytokine Growth Factor Rev. 2016, 31, 49–59. [CrossRef]
27. Kabinger, F.; Stiller, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Кокич, Г.; Хилън, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. Механизъм на индуцирана от molnupiravir SARS-CoV-2 мутагенеза. Нац. Структура. Mol. Biol. 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]
28. Hung, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Цай, П.-Ж.; Hsu, I.-L.; Ко, W.-C. Орална терапия с нирмателвир/ритонавир за COVID-19: Зората в мрака? Антибиотици 2022, 11, 220. [CrossRef]
29. Guo, Y.; Луан, Л.; Патил, НК; Sherwood, ER Имунобиология на комплекса IL-15/IL-15R като противотуморно и антивирусно средство. Cytokine Growth Factor Rev. 2017, 38, 10–21. [CrossRef]
30. Джан, С.; Zhao, J.; Бай, X.; Хендли, М.; Shan, F. Биологични ефекти на IL-15 върху имунните клетки и неговия потенциал за лечение на рак. Вътр. Имунофармакол. 2021, 91, 107318. [CrossRef]
31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovic, MD; Conlon, KC IL-15 в комбинираната имунотерапия на рака. Отпред. Immunol. 2020, 11, 868. [CrossRef]
32. Дюбоа, SP; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Брайънт, BR; Петрус, MN; Перера, LP; Мюлер, JR; Shih, JH; и др. Кратък курс на IL-15, прилаган като непрекъсната инфузия, доведе до масивна експанзия на ефективни NK клетки: Последици за комбинирана терапия с антитуморни антитела. J. Immunother. Рак 2021, 9, e002193. [CrossRef]
33. Conlon, KC; Потър, ЕЛ; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Dubois, S.; Брайънт, BR; Петрус, М.; Перера, LP; и др. IL15 чрез продължителна интравенозна инфузия на възрастни пациенти със солидни тумори във фаза I на изпитване, предизвикана от драматична подгрупа от NK-клетки. Clin. Cancer Res. 2019, 25, 4945–4954. [CrossRef]
34. Роми, Р.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, MR; Wagner, JE; Вайсдорф, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; и др. Първо при хора фаза 1 клинично проучване на IL-15 суперагонистичен комплекс ALT-803 за лечение на рецидив след трансплантация. Blood Am. J. Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]
35. Милър, JS; Дейвис, ZB; Хелгесън, Е.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Андерсън, Дж.; Лима, NS; Джорстад, С.; Харт, GT; Лий, JH; и др. Безопасност и вирусологично въздействие на суперагониста на IL-15 N-803 при хора, живеещи с ХИВ: Проучване фаза 1. Нац. Med. 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]
36. Berenguer, J.; Райън, П.; Rodríguez-Baño, J.; Ярин, И.; Carratalà, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Ариба, JR; Muñoz, EA; Гил Дивасон, П.; и др. Характеристики и предиктори на смърт сред 4035 последователно хоспитализирани пациенти с COVID-19 в Испания. Clin. Microbiol. заразявам. 2020, 26, 1525–1536. [CrossRef]
37. Гарсия-Перес, Дж.; Sanchez-Palomino, S.; Перес-Олмеда, М.; Фернандес, Б.; Alcami, J. Нова стратегия, базирана на рекомбинантни вируси като инструмент за оценка на лекарствената чувствителност на човешкия имунодефицитен вирус тип 1. J. Med. Virol. 2007, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]
38. Оу, X.; Liu, Y.; Лей, X.; Устна.; Ми, Д.; Рен, Л.; Guo, L.; Guo, R.; Чен, Т.; Hu, J.; и др. Характеризиране на пиковия гликопротеин на SARS-CoV-2 при навлизане на вируса и неговата имунна кръстосана реактивност със SARS-CoV. Нац. Общ. 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]
39. Волц, Е.; Хил, В.; McCrone, JT; Цена, А.; Йоргенсен, Д.; О'Тул, А.; Саутгейт, Дж.; Джонсън, Р.; Джаксън, Б.; Nascimento, FF; и др. Оценяване на ефектите на пиковата мутация D614G на SARS-CoV-2 върху преносимостта и патогенността. Cell 2021, 184, 64–75. [CrossRef]
40. Корбер, Б.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Юн, Х.; Theiler, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Георги, Е.Е.; Бхаттачаря, Т.; Фоли, Б.; и др. Проследяване на промените в пика на SARS-CoV-2: Доказателство, че D614G повишава инфекциозността на вируса COVID-19. Cell 2020, 182, 812–827. [CrossRef]
41. Нандагопал, Н.; Али, AK; Комал, Аляска; Лий, С.-Х. Критичната роля на пътя на IL-15–PI3K–mTOR в ефекторните функции на естествените клетки убийци. Отпред. Immunol. 2014, 5, 187. [CrossRef]
42. Розентал, Р.; Groeper, C.; Брачи, Л.; Адамина, М.; Feder-Mengus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Боли, М.; Weber, WP; Frey, DM; и др. Диференциална реакция към IL-2, IL-7 и IL-15 цитокини от общата рецепторна верига от антиген-специфични периферни кръвни наивни или паметови цитотоксични CD8+ Т клетки от здрави донори и Пациенти с меланом. J. Immunother. 2009, 32, 252–261. [CrossRef]
43. Корман, В.М.; Landt, O.; Кайзер, М.; Molenkamp, R.; Meijer, A.; Чу, DKW; Bleicker, T.; Brünink, S.; Шнайдер, Дж.; Schmidt, ML; и др. Откриване на нов коронавирус 2019 (2019-nCoV) чрез RT-PCR в реално време. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]
44. КОЙ. Диагностично изследване за SARS-CoV-2: Временни насоки, 11 септември 2020 г.; Световна здравна организация: Женева, Швейцария, 2020 г.
45. Becker, LA Effect Size (ES); Университет на Колорадо Колорадо Спрингс: Колорадо Спрингс, Колорадо, САЩ, 2000 г.
46. Коен, Дж. Статистически анализ на мощността за поведенческите науки; Routledge: Abingdon, UK, 1988. [CrossRef]
47. Морено-Перес, О.; Рибес, И.; Boix, V.; Мартинес-Гарсия, М.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Санчес-Мартинес, Р.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Хоспитализирани пациенти с пробив на COVID-19: Клинични характеристики и лоши предиктори на изхода. Вътр. J. Инфектирайте. дис. 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]
48. Лий, CM; Лий, Е.; Парк, WB; Choe, PG; Песен, К.-Х.; Ким, ES; Парк, S.-W. Пробивна COVID-19 инфекция по време на доминиращия период на Делта варианта: Необходима е индивидуална грижа въз основа на статуса на ваксинация. J. Korean Med. Sci. 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]
49. Еджаз, Х.; Alsrhani, A.; Зафар, А.; Javed, H.; Джунейд, К.; Абдала, АЕ; Абосалиф, KO; Ахмед, З.; Younas, S. COVID-19 и съпътстващи заболявания: Вредно въздействие върху заразените пациенти. J. Инфектирайте. Обществено здраве 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]
50. Азеведо, РБ; Ботело, БГ; de Hollanda, JVG; Ферейра, LVL; де Андраде, LZJ; Oei, SSML; Mello, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 и сърдечно-съдовата система: цялостен преглед. J. Hum. Хипертоници. 2021, 35, 4–11. [CrossRef]
51. Джан, JJ; Лий, Канзас; Ang, LW; Лео, YS; Young, BE Рискови фактори за тежко заболяване и ефикасност на лечението при пациенти, заразени с COVID-19: систематичен преглед, мета-анализ и мета-регресионен анализ. Clin. заразявам. дис. 2020, 71, 2199–2206. [CrossRef]
52. Кермали, М.; Халса, РК; Пилай, К.; Исмаил, З.; Харки, А. Ролята на биомаркерите при диагностицирането на COVID-19–систематичен преглед. Life Sci. 2020, 254, 117788. [CrossRef]
53. Малик, П.; Пател, У.; Мехта, Д.; Пател, Н.; Келкар, Р.; Акрмах, М.; Габрилове, JL; Sacks, H. Биомаркери и резултати от хоспитализации с COVID-19: систематичен преглед и мета-анализ. BMJ Evid. Въз основа Med. 2021, 26, 107–108. [CrossRef]
54. Ли, Й.; Шнайдер, AM; Мехта, А.; Саде-Фелдман, М.; Kays, KR; Джентили, М.; Чарланд, Северна Каролина; Gonye, AL; Гущерова, И.; Khanna, HK; и др. Виремията на SARS-CoV-2 е свързана с различни протеомни пътища и предсказва резултатите от COVID-19. J. Clin. разследване. 2021, 131, e148635. [CrossRef]
55. Родригес-Серано, DA; Roy-Vallejo, E.; Круз, NDZ; Ramírez, AM; Родригес-Гарсия, SC; Аревалило-Фернандес, Н.; Галван-Роман, JM; Гарсия-Родриго, LF; Вега-Пирис, Л.; Llano, MC; и др. Откриването на РНК на SARS-CoV-2 в серума е свързано с повишен риск от смъртност при хоспитализирани пациенти с COVID-19. Sci. Rep. 2021, 11, 13134. [CrossRef]
56. Серафим, Р.Б.; Póvoa, P.; Соуза-Дантас, В.; Калил, AC; Salluh, JI Клиничен курс и резултати от критично болни пациенти с COVID-19 инфекция: систематичен преглед. Clin. Microbiol. заразявам. 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]
57. Лю, X.; Джоу, Х.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Тан, В.; Юан, М.; Динг, X.; Zou, J.; и др. Рискови фактори, свързани с тежестта на заболяването и продължителността на болничния престой при пациенти с COVID-19. J. Инфектирайте. 2020, 81, e95–e97. [CrossRef]
58. Луо, XH; Zhu, Y.; Мао, Дж.; Ду, RC Т-клетъчна имунобиология и цитокинова буря на COVID-19. Сканиране. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]
59. Харууд, О.; O'Connor, S. Терапевтичен потенциал на IL-15 и N-803 при HIV/SIV инфекция. Вируси 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]
60. Шин, Х.; Wherry, EJ CD8 Т клетъчна дисфункция по време на хронична вирусна инфекция. Curr. мнение Immunol. 2007, 19, 408–415. [CrossRef]
61. Макмехан, К.; Ю, Дж.; Меркадо, NB; Loos, C.; Тостаноски, Л.Х.; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Питър, Л.; Atyeo, C.; Жу, А.; и др. Корелати на защита срещу SARS-CoV-2 при макаци резус. Nature 2021, 590, 630–634. [CrossRef]
62. Джуанг, З.; Лай, X.; Sun, J.; Чен, З.; Джан, З.; Dai, J.; Лиу, Д.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; и др. Картографиране и роля на Т-клетъчния отговор при SARS-CoV-2-инфектирани мишки. J. Exp. Med. 2021, 218, e20202187. [CrossRef]
63. Westmeier, J.; Панискаки, К.; Каракьосе, З.; Вернер, Т.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, М.; Лимър, А.; Liu, J.; Джън, X.; и др. Нарушен цитотоксичен CD8+ Т-клетъчен отговор при пациенти в напреднала възраст с COVID-19. MBio 2020, 11, e02243-20. [CrossRef]
64. Laing, AG; Лоренц, А.; дел Барио, IDM; Das, A.; Риба, М.; Монин, Л.; Муньос-Руис, М.; Маккензи, DR; Хейдей, TS; Франкос Кихорна, И.; и др. Динамичният имунен подпис на COVID-19 включва асоциации с лоша прогноза. Нац. Med. 2020, 26, 1623–1635. [CrossRef]
65. Кури-Сервантес, Л.; Пампена, MB; Meng, W.; Rosenfeld, AM; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Матю, Д.; Бакстър, AE; Вела, Луизиана; и др. Изчерпателно картографиране на имунните смущения, свързани с тежка форма на COVID-19. Sci. Immunol. 2020 г., 5, eabd7114. [CrossRef]
66. Актас, Е.; Kucuksezer, UC; Билгич, С.; Erten, G.; Deniz, G. Връзка между експресията на CD107a и цитотоксичната активност. клетка. Immunol. 2009, 254, 149–154. [CrossRef]
67. Бьоркстрьом, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Естествени клетки убийци в антивирусния имунитет. Нац. Rev. Immunol. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]
68. Bi, J. NK клетъчна дисфункция при пациенти с COVID-19. клетка. Mol. Immunol. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]
69. Алтер, Г.; Malenfant, JM; Altfeld, M. CD107a като функционален маркер за идентифициране на активността на естествените клетки убийци. J. Immunol. Методи 2004, 294, 15–22. [CrossRef] [PubMed]
70. Густин, JN; Джоунс, Д. Имунопатология на хипервъзпалението при COVID-19. Am. J. Clin. Патол. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]
71. Той, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Фарук, Масачузетс; Аджмал, И.; Джан, Х.; Джан, Л.; Тао, Л.; Яо, Дж.; Du, B.; и др. Ко-експресията на IL-7 подобрява базираната на NKG2D CAR Т клетъчна терапия при рак на простатата чрез засилване на разширяването и инхибиране на апоптозата и изтощението. Ракови заболявания 2020, 12, 1969. [CrossRef]
