Първото клинично изпитване при хора върху ефикасността на депигментацията на кожата на глицинамид хидрохлорид

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Резюме:Предишно проучване идентифицира някои нискомолекулни антимеланогенни пептиди, които споделят обща последователност с -меланоцит-стимулиращия хормон (MSH) и завършват с глицинамидна част. Самият глицинамид също показва антимеланогенна активност в клетъчно базирани анализи, но нито глицин, норацетил глицинамид е бил активен, което показва специална структура и връзка на дейността. Целта на това проучване беше да се изследва ефикасността на депигментацията на кожата на глицинамид хидрохлорид при хора. Потенциалът за първично дразнене на кожата на глицинамид хидрохлорид е оценен чрез тестване на пластири при 30 човека. Ефикасността на депигментацията на кожата на глицинамид хидрохлорид беше оценена в двойно-сляп клиничен тест при 21 човека. Тестовият продукт и контролният продукт се прилагат върху определени места от дясната или лявата страна на лицето два пъти дневно в продължение на осем седмици. Параметрите на цвета на кожата, т.е. индексът на меланин, L* стойността (представляваща светлотата на кожата), a* стойността (зачервяване) и b* стойността (пожълтяването) бяха измерени с помощта на инструменти. Индивидуалният топологичен ъгъл (ITAo, представляващ цвета на кожата) се изчислява от L* и b стойности. Степента на кожатапигментациябеше визуално оценен от двама тестери. Тестът за първично дразнене на кожата показа, че разтворът, съдържащ глицинамид хидрохлорид до 10 процента, не предизвиква никакви неблагоприятни кожни реакции. При теста за ефикасност тестовият продукт значително намалява индекса на меланин и повишава стойността на L* и ITAo след две седмици на прилагане спрямо базовата стойност в началото на теста. Той също така значително понижи степента напигментацияслед 6 седмици на приложение, спрямо изходната стойност. Разлики в меланиновия индекс, стойността на L*, ITAo и степента напигментациямежду тестовата и контролната група стават статистически значими след шест седмици или осем седмици на приложение. Не са наблюдавани признаци на кожно дразнене по време на теста за ефикасност. Настоящото проучване предполага, че глицинамид хидрохлоридът има голям потенциал да бъде използван при контрола на кожната хиперпигментация.

Ключови думи:меланин; глицинамид хидрохлорид; депигментиращи;пигментация; изсветляване на кожата;избелване; пептид

cistanche подобрява избелването

1. Въведение

Цветът на човешката кожа се определя главно от съдържанието и разпределението на различни пигментни вещества, като меланин, хемоглобин и каротеноиди [1]. Генетичните фактори определят предимно цвета на кожата, но той също е силно повлиян от придобити фактори. Меланинът се произвежда чрез процес, при който аминокиселина, наречена L-тирозин, се метаболизира в серия от ензимни реакции в меланозомите, които са органели на меланоцитите. Има различни видове меланин, като еумеланин и феомеланин, които придават различни цветове [2]. Меланозомите доставят меланин на околните кератиноцити и в резултат на това меланинът се разпределя в кожата и се експресира, за да произведе различни цветове на кожата [3]. В допълнение към ефектите си върху външния вид на кожата, меланинът играе важна роля в защитата на тялото от токсичността на ултравиолетовите (UV) лъчи [4]. Следователно метаболизмът на меланина в кожата се превърна във важна изследователска тема както от физиологична, така и от естетическа гледна точка [5,6].

Анормалният метаболизъм на меланин може да причини различни видове кожни пигментни заболявания, които се разделят на хиперпигментация и хипопигментация [7,8]. Хиперпигментация възниква, когато меланинът е прекомерно или неравномерно натрупан поради възпаление, стареене, UV лъчи, физическо увреждане и други вътрешни/външни стимулиращи фактори [9,10]. Междувременно генетични или епигенетични дефекти в производството на меланин могат да доведат до хипопигментация, като албинизъм или витилиго [11,12].

Стратегиите за превенция и лечение на хиперпигментация включват фотопротекция, фармакотерапия, хирургично лечение (химически пилинг и лазерно лечение) и козметичен камуфлаж [13–15]. Химическият пилинг и лазерното третиране се извършват често, но те имат странични ефекти, като дерматит и рецидивиращипигментация[16,17]. Хидрохинонът се използва предимно като фармакотерапевтично средство, но потенциално може да причини дразнене на кожата, алергии, мутации и рак [18]. В областта на козметиката,изсветляване на кожатафункционалната козметика, съдържаща арбутин, ниацинамид и производни на витамин С, доминира, но удовлетвореността на потребителите по отношение на тяхната безопасност и ефикасността на изсветляване на кожата е ниска [19]. Този изследователски екип е търсилизсветляване на кожатаагенти от различни природни източници и идентифицира множество природни съединения, като р-кумарова киселина, ресвератрол и лутеолин 7-сулфат, които инхибират клетъчния синтез на меланин чрез различни механизми [20–23].

Пептидите се използват все повече като активни съставки в дерматологията и продуктите за грижа за кожата [24, 25]. Колкото по-малък е пептидът, толкова по-евтин е производството му, толкова по-висока е неговата стабилност и толкова по-лесно се абсорбира от кожата.

Нашите скорошни проучвания идентифицираха някои нискомолекулни антимеланогенни пептиди [26,27]. В тези изследвания е използван специален алгоритъм за предсказване на последователностите на активните пептиди, използвайки библиотека за синтетични пептидни комбинации за позиционно сканиране [28,29]. Използвайки този метод, беше възможно да се идентифицират анти-меланогенни пептиди чрез оценка на активността на 80 тетра-пептидни групи, вместо да се оцени активността на всички 160 000 възможни вида тетра-пептиди [27]. Антимеланогенната активност на пептидите беше предварително оценена в B16-F10 меланомни клетки, третирани с -меланоцит-стимулиращ хормон (MSH). Последователността на активния тетра-пептид се предвижда да бъде R-(F/L)-(C/W)-(G/R)-NH2. От отделните тествани тетрапептиди, RFWG-NH2 и RLWG-NH2 показаха висока антимеланогенна активност. Тетра-пептидът FRWG-NH2, който има същата последователност като отделно от -MSH (ацетил-SYSMEHFRWGKPV-NH2), също показва подобна активност. Сред три-тестваните пептиди FWG-NH2, LWG-NH2 и RWG-NH2 са относително активни. Ди-пептидът WG-NH2 и G-NH2 (глицинамид) запазват своята антимеланогенна активност, докато нито ацетил-G-NH2, нито G (глицин) са активни. Смята се, че тези нискомолекулни антимеланогенни пептиди са насочени към рецептора на меланокортин 1 (MC1R), тъй като имат последователност, подобна на тази на -MSH. Тези нискомолекулни антимеланогенни пептиди могат да бъдат много полезни при изследването на MC1R-зависимите физиологични функции на меланоцитите [30].

Доказано е, че глицинамидът инхибира много ефективно клетъчното производство на меланин чрез намаляване на активирането на cAMP-реагиращия елемент-свързващ протеин (CREB) и генната експресия на свързан с микрофталмия транскрипционен фактор (MITF) и тирозиназа (TYR) в отговор на -MSH [27] .В настоящото изследване ние докладваме резултатите от първия тест за приложение на човешка кожа на глицинамид (под формата на хидрохлоридна сол), който е най-малкият от нискомолекулните антимеланогенни пептиди.

2. Материали и методи

2.1. Материали

Глицинамид хидрохлоридът е закупен от Sigma–Aldrich (Сейнт Луис, Мисури, САЩ), HangzhouDayangchem Co., Ltd. (Ханджоу, Китай) и Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Токио, Япония). Тестван продукт (Melapep) ), съдържащ 10 процента глицинамид хидрохлорид като активна съставка, беше предоставен от Ruby Crown. Co., Ltd. (www.rubycrown.com, Тегу, Корея). Контролният продукт съдържа същата формула без глицинамид хидрохлорид.

2.2. Високоефективна течна хроматография (HPLC)

Хроматографският анализ на продуктите се извършва с помощта на Waters Alliance HPLC System (Waters, Milford, MA, USA), състояща се от модул Waters e2695 за разделяне и Waters 2996Photodiode Array Detector. Стационарната фаза беше 5 µm, 4,6 mm × 25{{10}} mm колона Hector-M C18 (RS Tech Co., Daejeon, Корея), а подвижната фаза беше 20 mM фосфорна киселина, съдържаща 5.0 mM натриев 1-октан сулфонат (рН 3,0). Скоростта на потока на подвижната фаза е 0,6 mL min-1. Дължината на вълната на детекция е 210 nm. Продуктът се разрежда 10 пъти с подвижната фаза и се пропуска през филтър за спринцовка (0.2 цт, кат.#431219, Corning, Inc. NY, USA) преди инжектиране. Инжекционният обем на пробата беше 10 µL.

2.3. Тест за първично кожно дразнене

Беше проведен първичен тест за дразнене на кожата в съответствие с насоките на Съвета за продукти за лична хигиена (PCPC) (2014) и стандартните оперативни процедури (SOP) на Dermapro Co., Ltd. (www.dermapro.co.KR, Сеул, Корея), за да се определи дали тестовите продукти раздразниха човешката кожа. Тестовият проект (№ 1-220777-AN-02-DICN19165) беше одобрен на 1 август 2019 г. от комитета по биоетика на Dermapro Co., Ltd. и проведен в съответствие с етичните принципи, основани относно декларацията от Хелзинки.

Субектите бяха избрани от здрави доброволци, които отговарят на критериите за включване и изключване. Получихме писмено информирано съгласие от субектите.

2.3.1. Критерии за включване

(1) Здрави кандидати на възраст 20-60 години без кожни заболявания. (2) Кандидати, които доброволно са подписали формуляр за писмено съгласие преди теста, след като са били информирани за целта и съдържанието на теста. (3) Кандидати, които са били готови да сътрудничат с изискванията на теста и да докладват незабавно, ако има неочаквани ефекти. (4) Кандидати, които могат да бъдат проследени през целия изпитен период.

2.3.2. Критерии за изключване

(1) Жени, които са бременни, кърмят или има вероятност да забременеят. (2) Кандидати с анамнеза за кожни заболявания, включително атопичен дерматит, псориазис, екзема и сезонни алергии през последния месец преди теста. (3) Кандидати с абнормнипигментация, може да попречи на точкуването на тестовата площадка. (4) Кандидати, приемащи противовъзпалителни, антихистамини или имуносупресивни лекарства. (5) Кандидати, които са използвали локални противовъзпалителни лекарства на мястото на теста през последните две седмици преди теста. (6) Кандидати с кожни заболявания, които може да са попречили на целта на теста. (7) Кандидати с анамнеза за автоимунни заболявания или имунодефицитни разстройства. (8) Кандидати, които са получили имунотерапия през последната седмица преди теста или са планирани да бъдат лекувани по време на тестовия период. (9) Кандидати, които са били на лечение за хронични заболявания като астма и диабет. (10) Кандидати, които са участвали в други тестове или са участвали в подобен тест през последните четири седмици преди теста. (11) Кандидати, които са имали кожно дразнене или алергии в отговор на прикрепваща лента.

2.3.3. Условия за участие

(1) На субектите не е разрешена вода на тестовата площадка, докато поставят пластира. (2) Ако субектът е трябвало да приема или използва лекарства, служителят по тестването трябва да бъде уведомен. (3) Предметът беше спазване на графика за проверка. (4) Субектите трябваше да информират тестера за всички необичайни кожни симптоми, възникнали по време на тестовия период.

2.3.4. Критерии за отпадане на субекти по време на тестовия период

(1) Ако субектът доброволно се оттегли от теста поради внезапна злополука, заболяване, бременност и др. (2) Ако е имало сериозна нежелана кожна реакция, причинена от тестовия материал. (3) Ако субектът не е спазил протокола от теста. (4) Ако тестът не може да бъде извършен правилно поради специални обстоятелства, например ако не е възможно да се осъществи контакт с субекта.

2.3.5. Тестване на корекции

Тестовите материали (150 µL) бяха приложени към Finn Chambers® (Smart Practice, Hillerød, Дания) с помощта на пипета Microman M250 (Gilson, Villiers le bel, Франция). Камерите бяха прикрепени към гърба на субектите и защитени с Micropore лента (3M, St. Paul, MN, USA) за 24 часа. Изпитателите оцениха кожните реакции при субектите два пъти, първите 20 минути. след отстраняване на пластира и след това 24 часа по-късно, като се използва системата за класифициране на кожна реакция, описана от Frosch и Kligman [31] с леки модификации, както следва: 0, без видима реакция; 1, лек петнист или дифузен еритем; 2, умерено равномерна еритема; 3, интензивна еритема с оток; и 4, интензивен еритем с оток и везикули. Резултатът на отговора (R в проценти) се изчислява като R=(Σ (степен на наблюдавана реакция × честота на отговор)/(общо четири степени × общо два пъти наблюдения × общ брой субекти)) × 100 ( процент). Първичният потенциал за дразнене на кожата на тестовите материали беше описан въз основа на R, както следва: R < 0,87="" процента,="" недразнещо/леко="" дразнещо;="" 0,87="" процента="" по-малко="" или="" равно="" на="" r="">< 2,42="" процента,="" леко="" дразнещо;="" 2,42="" процента="" по-малко="" или="" равно="" на="" r="">< 3,44="" процента,="" умерено="" дразнещо;="" и="" r="" по-голямо="" или="" равно="" на="" 3,44="" процента,="" силно="">

2.4. Тест за ефикасност при депигментация на кожата

Беше проведен тест за оценка на ефикасността на тестовия продукт за депигментация на кожата. Тестовият проект (№ 1-220777-AN-02-DICN19168) беше одобрен на 16 август 2019 г. от комитета по биоетика на Dermapro Co., Ltd. и проведен в съответствие с етичните принципи, базирани на Хелзинкската декларация. Тестовите субекти бяха избрани от здрави доброволци, които отговарят на критериите за включване и изключване. Получихме писмено информирано съгласие от пациента (тестовите субекти).

2.4.1. Критерии за включване

(1) Мъже или жени на възраст 20-60 години с хиперпигментация, като мелазма или лентиго, по лицето. (2) Здрави хора без остри или хронични физически заболявания, включително кожни заболявания. (3) Тези, които попадат под тип II, III и IV от класификацията на кожата на Фицпатрик. (4) Кандидати, които са били информирани за целта, съдържанието и т.н. на теста и са подписали доброволно споразумението за теста. (5) Кандидати, които могат да бъдат проследени по време на теста.

2.4.2. Критерии за изключване

(1) Тези, които са бременни, кърмят или има вероятност да забременеят. (2) Тези с анамнеза за фотоалергия или фоточувствителност. (3) Тези, които са използвали външни препарати, съдържащи стероиди, повече от един месец за лечение на кожни заболявания. (4) Тези, които са участвали в подобни тестове през последните 6 месеца преди теста. (5) Тези с чувствителна и раздразнителна кожа. (6) Тези с кожни аномалии като петна, акне, еритема, капилярна дилатация и т.н. на тестовото място. (7) Тези, които са използвали същата или подобна козметика или лекарства на мястото за тестване в рамките на три месеца от началото на теста. (8) Тези, които са консумирали лекарства или храни заизсветляване на кожатаефекти. (9) Тези с атопичен дерматит или други инфекциозни кожни заболявания. (10) Тези, които са получили медицинско лечение (пилинг на кожата, ботокс, други грижи за кожата и т.н.) на мястото на теста в рамките на 6 месеца преди теста. (11) Тези, които са получили имунизации, антихистамини, противовъзпалителни средства и т.н. в рамките на три месеца преди теста. (12) Тези, които са получили системни стероиди, хормонална терапия или лъчева терапия в рамките на един месец преди теста. (13) Хора с хронични консумативни заболявания (астма, диабет, високо кръвно налягане и др.). (14) Тези с работа, включваща излагане на слънчева светлина за дълги периоди от време. (15) Тези, които са приемали лекарства, които предизвикват фоточувствителност. (16) Тези, които са оценени като негодни да участват в теста от тестер.

2.4.3. Условия за участие

(1) Субектите не трябваше да използват козметика или лекарства, които претендират за функционалност по време на тестовия период. (2) Субектите трябваше да избягват излагането на повече от нормалните нива на слънчева светлина в ежедневието си по време на тестовия период и трябваше да използват слънцезащитни продукти, когато излизат. (3) Субектите не трябваше да бъркат тестовите продукти и трябваше да ги прилагат, както е предписано. (4) Освен тестовите продукти, участниците не трябваше да променят козметичните продукти, които са използвали по време на тестовия период. (5) Субектите трябваше да докладват всички необичайни симптоми на тестера. (6) Субектите трябваше вярно да следват инструкциите относно употребата и ограниченията на продуктите. (7) Субектите трябваше да спазват графика за инспекция и да потвърдят употребата на продуктите пред тестера.

2.4.4. Критерии за отпадане на субекти по време на тестовия период

(1) Ако субектът доброволно се оттегли от теста поради внезапна злополука, заболяване, бременност и др. (2) Ако е имало сериозна нежелана реакция, причинена от тестовия материал. (3) Ако субектът не е спазил протокола от теста. (4) Ако тестът е възпрепятстван от специални обстоятелства, например ако не е било възможно да се проследи субектът. (5) Ако субектът е пиел или пушил прекомерно, или е бил изложен на прекомерно UV.

2.4.5. Приложение на тестови продукти

Тестовите и контролните продукти (0.6 mL) бяха напоени в 4 × 3 cm2 листове от нетъкан текстил (име на продукта, тип кожа тъкан памук), закупени от Blue and Pink (Gimpo-si, Корея), които след това бяха индивидуално опаковани за употреба от субектите.

Тестът беше двойно заслепен; нито на тестерите, нито на субектите беше казано кой продукт кой е. След получаване на тестовите продукти в същата опаковка от доставчика, мениджър на тестови продукти етикетира пакетите с тестови кодове в отделна стая, недостъпна за тестващите или субектите. Тестващите получиха тестовите продукти от продуктовия мениджър на теста в сляпо състояние и субектите също получиха продуктите от тестера в сляпо състояние.

Методът на блокова рандомизация беше използван за разпределяне на тестовите продукти на субектите. Блокова таблица за произволно разпределение (SSPP, SPSP, SPPS, PPSS, PSPS и PSSP) беше предоставена на субект, за да се определи редът на тестовите продукти, S или P, които да бъдат използвани от нея и от три други субекта в реда.

Субектите са използвали тестовите продукти след измиване на лицето и преди употребата на друга козметика два пъти на ден, сутрин и вечер, в продължение на осем седмици. Субектите прикрепиха тестовите и контролните продукти към определените места съответно от лявата и дясната страна на лицето (или обратно) за 30 минути, в съответствие с препоръката на доставчика.

2.4.6. Оценки на цвета на кожата

Субектите посещавали изследователския център на всеки две седмици за оценка на кожата си. След като измият лицата си, субектите почиват за 20 минути. преди оценка на кожата в лаборатория, поддържана при 22 ± 2°C и 50 ± 5 процента относителна влажност.

Индексът на меланин и индексът на еритема бяха измерени с помощта на Mexameter® MX18 (Courage plus Khazaka electronic GmbH, Кьолн, Германия). Сондата на мексаметъра излъчва три специфични дължини на вълната на светлината (зелена, λ=568 nm; червена, λ=660 nm; и инфрачервена, λ=880 nm), а приемникът измерва светлината, отразена от кожата . Измерванията бяха повторени три пъти и осреднени.

Цветът на кожата се изразява с помощта на цветовото пространство на Commission Internationale de l'Eclairage Lab въз основа на степента на светлота (L*), степента на зелено към червено (a*) и степента на синьо към жълто (b*) [32]. Параметрите на цвета на кожата L*, a* и b* бяха измерени с помощта на Spectrophotometer® CM-2500d (Minolta, Токио, Япония) [32]. Индивидуалният типологичен ъгъл (ITA◦), представляващ цвета на кожата, беше изчислен при използване на уравнението: ITA◦=(арктангенс [(L*−50)/b*])(180/3.14159) [33].

Визуалната оценка беше извършена от двама тестери. Те независимо оцениха степента на пигментация на кожата по скала от {{0}} до 9 (0, светло; 9, тъмно; стъпки, 0.5). Ако стойността на коефициента на вътрешнокласова корелация между двама тестери е по-голяма от 0,8, данните се приемат и се използват осреднени стойности. Снимки на кожата са направени при използване на VISIA® (Canfield Scientific, Inc., Феърфийлд, Ню Джърси, САЩ). За оценка на безопасността на кожата, тестерите изследваха кожата за дразнене и субектите извършиха самооценка на дразненето на кожата във всяка точка от времето за оценка.

2.4.7. Оценка на нежеланите реакции на кожата

По време на осемседмичния пробен период субектите посещаваха института на всеки две седмици. При всяко посещение тестерите оценяваха субективните симптоми, като питаха дали субектите са имали неблагоприятни кожни реакции, като сърбеж, боцкане, гъделичкане, парене, смъдене, скованост и стягане през последните две седмици. Субектите бяха помолени незабавно да докладват, ако се появят нежелани кожни реакции между интервалите на посещенията. Тестерите също изследваха всички неблагоприятни кожни реакции, като азеритема, оток, размер и папули, за да оценят обективните симптоми.

2.5. Статистически анализ

Данните бяха анализирани с помощта на софтуерния пакет SPSS (IBM, Чикаго, Илинойс, САЩ). Данните са изразени като средно ± стандартно отклонение (SD). Нормалното разпределение на данните беше потвърдено с помощта на теста на Shapiro-Wilks и нормалността беше приета, ако ексцесът и изкривеността са в рамките на ± Предварителната хомогенност на теста и контролните групи преди теста бяха проверени с помощта на pairedt-тест. Зависимите от времето промени в сравнение с базовата стойност и разликите между тестовите и контролните групи във всяка времева точка бяха анализирани с помощта на ANOVA на повторените измервания за параметрични стойности и Post-hoc Wilcoxon знаков рангов тест за непараметрични стойности. Степента на промяна (процент) от базовата стойност беше изчислена, както следва; скорост на промяна=[стойност след лечение−базова стойност преди лечение)/базова стойност преди лечение] × 100 (проценти).

3. Резултати

3.1. Тестови продукти

В това изследване са използвани тестов продукт, съдържащ 10 процента глицинамид хидрохлорид и контролен продукт от същата формула без глицинамид хидрохлорид. В допълнение към основната съставка, продуктите съдържат глицерин, 1,2-хександиол и вода. Таблица 1 показва състава на тестовия продукт и контролния продукт.

Типичните HPLC хроматограми на тестовите и контролните продукти са показани на Фигура 1. Тестовият продукт, но не и контролният продукт съдържа глицинамид хидрохлорид. Пикът на глицинамид хидрохлорид в HPLC хроматограмата е показан със стрелка. Освен това Фигура 1 показва химическата структура.

При HPLC натриевият 1-октансулфонат е включен в подвижната фаза като йонно сдвояващ агент, за да се подобри задържането на протонираната форма на глицинамид, който иначе се елуира много бързо от колоната с октадецил силициев диоксид с обърната фаза. Наличието на UV абсорбираща амидна връзка в глицинамид хидрохлорид позволява откриване при 210 nm.

3.2. Тест за първично кожно дразнене

в този тест 31 жени, които отговарят на критериите за включване и изключване, участваха в началните етапи на теста; един субект обаче отпадна (DSA-19046-10; доброволно оттегляне), така че общо 30 субекта завършиха целия тест. Средната възраст на субектите е 40,43 ± 7,13 години; най-възрастният участник е на 50 години, а най-младият е на 21 години.

Тестването с оклузивни пластири беше проведено с цел оценка на безопасността на продуктите за кожата. Както е показано в таблица 2, субектите, които са били третирани с теста, контролен продукт и референтен продукт, не показват неблагоприятни кожни реакции при две различни времена на наблюдение. Следователно оценката на отговора във всички случаи беше нула, което показва, че потенциалът за първично дразнене на кожата на тези продукти е много нисък и те могат да бъдат класифицирани като „недразнещ/леко дразнещ“.

3.3. Тест за ефикасност при депигментация на кожата

Тестът започна с 23 жени субекти, въпреки че две впоследствие бяха елиминирани (#16, доброволно оттегляне; #18, неспазване на протокола), така че крайният брой на участниците беше 21. Информацията за субектите беше събрана в проучване, базирано на въпросник. Средната възраст на субектите е 48.43 ± 4.14 години; най-възрастният участник е на 55 години; а най-младият е на 41 години. Таблица 3 показва характеристиките на кожата на изследваните лица.

Беше проведен двойно заслепен тест, за да се оцени ефикасността на депигментацията на тествания продукт. Нито тестващият, нито субектът са успели да направят разлика между тестовия продукт и контролния продукт и клиничното изпитване е проведено съгласно предписания метод. Субектите прилагаха тестовия продукт и контролния продукт върху лявата или дясната страна на лицето два пъти дневно в продължение на осем седмици и посещаваха института на всеки две седмици за оценка на кожата.

Използвани са два вида устройства за инструментална оценка на параметрите на цвета на кожата. Първо, индексът на меланин и индексът на еритема са измерени с помощта на хекзаметър. Както е показано в таблица 4 и фигура 2а, значителни намаления на меланиновия индекс се наблюдават на две, четири, шест и осем седмици както в тестовата, така и в контролната група в сравнение с изходните стойности преди началото на теста. Когато тестовият продукт е приложен за две, четири, шест и осем седмици е имало значително намаляване на меланиновия индекс в сравнение с базовата стойност. Степента на намаляване на меланиновия индекс беше 1,48 процента след две седмици, 2,87 процента след четири седмици, 3,92 процента след шест седмици и 5,88 процента след осем седмици. Бяха открити значителни разлики между тестовите и контролните групи на шест и осем седмици след началото на теста. От друга страна, няма промени в индекса на еритема нито в тестовата група, нито в контролната група в сравнение с изходните стойности, измерени преди начало на теста (Таблица 5 и Фигура 2b).

Използвахме също спектрофотометър за измерване на стойности на L*, a* и b*, които представляват съответно светлота на кожата, зачервяване и пожълтяване. Както е показано в Таблица 6 и Фигура 2c, значително увеличение на изсветлеността на кожата (L* стойност) се наблюдава на две, четири, шест и осем седмици както в тестовата, така и в контролната група в сравнение с базовите стойности преди началото на теста. В сравнение с базовите стойности тестовият продукт повишава стойността на L* с 0.88 процента след две седмици, 0.85 процента след четири седмици, 1.16 процента след шест седмици и 1.40 процента след осем седмици . Бяха открити значителни разлики между тестовия продукт и контролния продукт на шест и осем седмици след началото на теста. От друга страна, въпреки че имаше някои промени в стойностите* и b* както в тестовата група, така и в контролната група в сравнение с преди началото на теста, тези промени не бяха последователни (Таблици 7 и 8, Фигура 2d,e). Стойността* намалява временно през втората седмица в контролната група и през втората и осмата седмица в тестовата група. Стойността* на тестовата група беше по-ниска от тази на контролната група през осмата седмица. Стойността на b* намалява през осмата седмица само в контролната група и не се наблюдава разлика в стойността на b* между контролната и тестовата група.

ITA◦, изчислен от стойностите L* и b*, се използва за изразяване на цвета на кожата. Колкото по-висок е ITA◦, толкова по-светъл е цветът на кожата. Както е показано в Таблица 9 и Фигура 2f, бяха наблюдавани значителни промени в цвета на кожата на две седмици, четири седмици, шест седмици и осем седмици както в тестовата група, така и в контролната група в сравнение с базовите стойности преди началото на теста. В сравнение с базовите стойности, тестовият продукт повишава ITA◦ с 3,28 процента след две седмици, 4,43 процента след четири седмици, 6,48 процента след шест седмици и 8,07 процента след осем седмици. Значителна разлика в ITA◦ също беше открита между тестовия продукт и контролните продукти на осем седмици след началото на теста.

Както е показано в Таблица 10 и Фигура 3а, мястото на кожата, на което е приложен контролният продукт, не се е променило значително по отношение на степента напигментацияв продължение на осем седмици, но степента на пигментация на мястото на кожата, на което е приложен тестовият продукт, намалява значително след шест седмици и осем седмици. Когато тестовият продукт е прилаган в продължение на шест и осем седмици, степента на пигментация е намалена съответно с 1,42 процента и 3,45 процента спрямо базовата стойност преди началото на теста. През осмата седмица след началото на теста също имаше значителна разлика в степента напигментациямежду тестовия продукт и контролния продукт. Фигура 3b показва изображения на два представителни човешки субекта.

Няма нежелани реакции към тестовите и контролните продукти, докладвани от субектите или открити от тестерите през осемте седмици.

4. Обсъждане

Това проучване е първото, което съобщава за безопасността и ефикасността на депигментацията на глицинамид хидрохлорид, приложен върху човешката кожа на лицето. При първичния тест за дразнене на кожата тестовият продукт, съдържащ 10 процента глицинамидхидрохлорид, не е предизвикал никакви нежелани реакции при 30 човешки субекта. При двойно заслепения тест за ефикасност тестовият продукт и контролният продукт бяха използвани съответно от лявата и дясната страна на лицето на 21 субекта, разпределени на случаен принцип в различни групи. По време на осемседмичния тестов период местата на кожата, на които е нанесен тестовият продукт, стават по-светли от местата, на които е нанесен контролният продукт. И двете визуална оценка на степента напигментацияи инструменталната оценка на меланиновия индекс, опъването на кожата и цвета на кожата подкрепят ефикасността на депигментацията на тестовия продукт, съдържащ глицинамид хидрохлорид.

Ефикасността на продукта за депигментация на човешката кожа може да бъде оценена при използване на модели на изкуствен тен и естествена хиперпигментация [34–36]. В настоящото изследване, използвайки естественпигментациямодел, промените в параметрите на цвета на кожата в тестовите и контролните групи през осемте седмици на теста бяха проследени на двуседмични интервали. Контролният продукт, който не съдържа глицинамид хидрохлорид, също предизвиква значителни промени в индекса на меланин, L* стойността и ITA от две седмици след началото на теста. Точната причина за това в момента е неясна и няколко фактора може да са допринесли за промените. Съставките, съдържащи се в контролния продукт, като глицерин и 1,2-хександиол, може да са променили състоянието на повърхността на кожата, подобрявайки чистотата, блясъка и яркостта. Въпреки това, допълнителни промени в параметрите, споменати по-горе след две седмици, не са значими в контролната група. В допълнение, степента напигментация(оценен визуално) не е значително намален от контролния продукт в сравнение с преди началото на теста. Следователно се счита, че контролният продукт има много слабаизсветляване на кожатаефект, ако има такъв.

В случая на тествания продукт, в допълнение към значителната промяна в меланиновия индекс, L* стойността и ITAo две седмици след началото на теста, промяната има тенденция към постепенно нарастване след това. Освен това, степента напигментациядостигна значително по-ниско ниво от базовата стойност. Това предполага, че използването на тестовия продукт може да подобри цвета на кожата в сравнение с използването на никакъв продукт.

От шестата седмица от началото на теста имаше значителна разлика в меланиновия индекс и стойността на L* между тестовата група и контролната група, а на осем седмици също имаше разлика в ITAo и степента напигментация. Тези резултати подкрепят заключението, че разликата в ефикасността между тестовите и контролните продукти се дължи на наличието или отсъствието на глицинамид хидрохлорид; следователно, ефикасността на депигментацията на кожата на тестовия продукт се дължи на неговия основен компонент, глицинамид хидрохлорид.

В това проучване разтвор на глицинамид хидрохлорид, напоен с листове от нетъкан текстил, беше нанесен върху лицето и бяха получени положителни резултати по отношение на ефикасността му при депигментация на кожата. Този метод на приложение се оказа ефективен, но си струва да се проучи дали се променят формулата и методът на приложение ще подобри ефикасността на продукта. В допълнение към локалното приложение върху кожата, оралното приложение и методите на инжектиране трябва да бъдат изследвани, за да се определи тяхната клинична ефикасност в бъдещи проучвания.

Статистическият анализ за разликите между тестовите и контролните групи беше проведен с помощта на ANOVA с повтарящи се измервания с двойки сравнения. Освен това, междугруповите разлики на индекса на меланин, L* стойността, ITAo ипигментациястепен всички бяха статистически значими след 8-седмично лечение. В настоящото проучване нивата на намаляване на меланиновия индекс от тестовия продукт, съдържащ 10 процента глицинамид хидрохлорид, са 5,88 процента (базова линия, 184,03 ± 22,70; осма седмица, 173,30 ± 20,79). Watanabe et al. докладваниизбелване на кожатаефекти на локален окислен глутатион в двойно-сляпо и плацебо-контролирано клинично изпитване при тридесет здрави жени [36]. Локалното лечение на тестов продукт, съдържащ 2 процента окислен глутатион в продължение на 10 седмици, намалява индекса на меланин с 10,7 процента (базова линия, 272,77 ± 26,17; 10-та седмица, 243,47 ± 26,31) [36]. Въпреки че условията на теста, като изходен меланинов индекс, тестова доза и продължителност на теста, са различни едно от друго, косвеното сравнение на тези две проучвания предполага, че глицинамид хидрохлорид има потенциал да се използва като хипопигментиран агент. Допълнителни проучвания са необходимо за оптимизиране на дозата, формулировката и метода на приложение, за да се постигне по-добро представяне при депигментация на кожата.

Цветът на кожата в стабилно състояние отразява относителното съотношение на количеството меланин, доставяно от меланоцитите, към количеството меланин, загубен поради десквамацията на кератина на кожата. Следователно, инхибирането на синтеза на меланин или усилването на загубата на меланин са две възможни стратегии за терапия на хиперпигментация. Глицинамид хидрохлоридът е полезно вещество за първата стратегия, тъй като може да инхибира синтеза на меланин чрез намаляване на нивата на TYR и други ензими, които участват в синтеза на меланин в меланоцитите [27]. Ако е така, комбинирането на глицинамид хидрохлорид със средства за пилинг на кожата, като гликолова киселина [37,38], може да доведе до допълнително повишаване на ефикасността на депигментацията поради синергизъм между вещества с различни механизми на действие.

Много съществуващи депигментиращи агенти намаляват синтеза на меланин чрез инхибиране на процеса на вътреклетъчна сигнална трансдукция, отговорен за експресията на TYR ген или инхибиране на активността на TYR директно [39,40]. Въпреки това, глицинамид хидрохлоридът може да предотврати свързването на хормон с неговите рецептори и да блокира инициирането на процеси на вътреклетъчна сигнална трансдукция, като по този начин инхибира експресията на TYR [27]. Съответно, глицинамид хидрохлоридът може да действа чрез различен механизъм от много съществуващи депигментиращи агенти и се очакват синергични ефекти, ако се използва в комбинация с други депигментиращи агенти.

Пептидните хормони, получени от проопиомеланокортин, като -MSH, -MSH и адренокортикотрофикормон (ACTH), регулират кожатапигментация, възпаление и фиброза [8,30,41]. При свързването на тези агонисти с MC1R и последователните активации на аденилат циклаза (AC) и протеин киназа A (PKA) фосфорилира CREB транскрипционния фактор, който от своя страна индуцира експресията на MITF [42]. Експресията на MITF се индуцира и от други сигнални пътища, които включват Wnt/Frizzled/ гликогенсинтаза киназа 3 / -катенин каскада и фактор на стволови клетки/c-Kit/митоген-активирана протеин киназа каскада [43,44]. MITF насочва не само генната експресия на меланогенни ензими, но и биогенезата на меланозомите [2,45].

Нискомолекулните антимеланогенни пептиди, идентифицирани в предишното проучване, включват FRWG-NH2, RWG-NH2, WG-NH2 и G-NH2 (глицинамид), които споделят общи последователности с -MSH(ацетил-SYSMEHFRWGKPV-NH2) [27] . Предполага се, че тези нискомолекулни антимеланогенни пептиди могат да пречат на рецепторното свързване на -MSH по конкурентен начин, като по този начин блокират инициирането на процеси на вътреклетъчна сигнална трансдукция (Фигура 4). Ако нискомолекулните антимеланогенни пептиди действат като антагонисти на MC1R, те могат да инхибират активирането на MC1R от други агонисти, като -MSH и ACTH, и да повлияят на други физиологични събития, свързани с възпаление и фиброза, както ипигментация [30].

Въпреки че са необходими по-директни доказателства за механизма на действие, настоящото проучване демонстрира, че формата на хидрохлоридна сол на глицинамид, най-малката съществена част от антимеланогенните пептиди, показва ефикасност при депигментация на кожата, без да причинява дразнене на кожата при хора. Необходими са допълнителни проучвания, за да се изследва ефикасността на депигментацията на другите антимеланогенни тетра-пептиди, три-пептиди и ди-пептид, споменати по-горе.

В заключение, настоящото проучване предполага, че глицинамид хидрохлоридът има голям потенциал да бъде използван при контрола на кожната хиперпигментация.

Препратки

1. Костин, Г.Е.; Слух, VJ Пигментация на човешката кожа: Меланоцитите модулират цвета на кожата в отговор на стрес. FASEB J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef] [PubMed]

2. Schiaffino, MV Сигнални пътища в меланозомната биогенеза и патология. Вътр. J. Biochem. Cell Biol. 2010, 42, 1094–1104. [CrossRef] [PubMed]

3. Кардинали, Г.; Чекарели, С.; Ковач, Д.; Аспит, Н.; Лоти, LV; Torrisi, MR; Picardo, M. Факторът на растеж на кератиноцитите насърчава трансфера на меланозоми към кератиноцитите. J. Разследване. Derm. 2005, 125, 1190–1199. [CrossRef] [PubMed]

4. Epstein, JH Фотокарциногенеза, рак на кожата и стареене. J. Am. акад. Derm. 1983, 9, 487–502. [CrossRef]

5. Сломински, А.; Ким, TK; Брозина, АА; Janjetovic, Z.; Брукс, DL; Шваб, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.; Seagroves, TN Ролята на меланогенезата в регулирането на поведението на меланома: Меланогенезата води до стимулиране на експресията на HIF-1алфа и HIF-зависимите съпътстващи пътища. арх. Biochem. Biophys. 2014,563, 79–93. [CrossRef]

6. Сломински, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Ролята на меланиновия пигмент в меланома. Exp. Derm.2015, 24, 258–259. [CrossRef]

7. Fistarol, SK; Lin, PH Нарушения на пигментацията. J. Dtsch. Dermatol. Ges. 2010, 8, 187–201. [CrossRef]

8. Сломински, А.; Тобин, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Меланинова пигментация в кожата на бозайници и нейната хормонална регулация. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef]

9. Rose, PT Пигментни нарушения. Med. Clin. N. Am. 2009, 93, 1225–1239. [CrossRef]

10. Callender, VD; St Surin-Lord, S.; Дейвис, ЕК; Maclin, M. Постинфламаторна хиперпигментация: Етиологични и терапевтични съображения. Am. J. Clin. Derm. 2011, 12, 87–99. [CrossRef]

11. Ганджу, П.; Нагпал, С.; Мохамед, MH; Нишал Кумар, П.; Pandey, R.; Натараджан, VT; Mande, SS; Gokhale, RS Профилирането на микробната общност показва дисбиоза в кожата с лезии на пациенти с витилиго. Sci. Rep.2016, 6, 18761. [CrossRef] [PubMed]

12. Spritz, RA; Andersen, GH Генетика на витилиго. Derm. Clin. 2017, 35, 245–255. [CrossRef] [PubMed]

13. Павлич, В.; Бркич, З.; Марин, С.; Cicmil, S.; Гойков-Вукелич, М.; Aoki, A. Гингивална меланинова депигментация от Er: YAG лазер: Преглед на литературата. J. Cosmet. Laser Ther. 2018, 20, 85–90. [CrossRef] [PubMed]

14. Саксена, С.; Андерсен, RM; Maibach, HI Клопките в клиничните изпитвания разкриват необходимостта от добре поносими, по-ефективни депигментиращи агенти. J. Dermatol. лечение. 2015, 26, 440–450. [CrossRef] [PubMed]

15. Леви, LL; Emer, JJ Емоционална полза от козметичния камуфлаж при лечението на кожни състояния на лицето: личен опит и преглед. Clin. Козмет. разследване. Derm. 2012, 5, 173–182.

16. Чу, CH; Чоу, CY; Cheng, YP Незабавна пигментация след лазерно лечение. JAMA Derm. 2015, 151, 1021–1022. [CrossRef]

17. Борели, С.; Урсин, Ф.; Steger, F. Възходът на химическия пилинг в европейската дерматология от 19-ти век: Поява на агенти, формулировки и лечения. J. Eur. акад. Derm. Venereol. 2020. [CrossRef]

18. Джоу, Т.; Hantash, BM Индуцирана от хидрохинон депигментация: Доклад за случай и преглед на литературата. Дерматит 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]

19. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Преглед на агентите за избелване на кожата с поглед върху незаконния козметичен пазар в Европа. J. Eur. акад. Derm. Venereol.2016, 30, 943–950. [CrossRef]

20. Ким, М.; Парк, Дж.; Песен, К.; Ким, HG; Koh, JS; Boo, YC Скрининг на растителни екстракти за инхибиращи човешки тирозиназа ефекти. Вътр. J. Cosmet. Sci. 2012, 34, 202–208. [CrossRef]

21. Парк, Дж.; Boo, YC Изолиране на ресвератрол от Vinifera caulis на Viti и неговото мощно инхибиране на хуманна тирозиназа. Evid. Базирано допълнение. Алтернативен. Med. 2013, 2013, 645257. [CrossRef] [PubMed]

22. Kwak, JY; Seok, JK; Suh, HJ; Choi, YH; Хонг, SS; Ким, ДС; Boo, YC Антимеланогенни ефекти на лутеолин7-сулфат, изолиран от phyllospadix iwatensis makino. бр. J. Derm. 2016, 175, 501–511. [CrossRef] [PubMed]

23. Лий, SW; Ким, JH; Песен, Х.; Seok, JK; Хонг, SS; Boo, YC Luteolin 7-Sulfate намалява синтеза на меланин чрез инхибиране на CREB- и MITF-медиирана експресия на тирозиназа. Антиоксиданти 2019, 8, 87. [CrossRef] [PubMed]

24. Малерич, С.; Berson, D. Козмецевтични продукти от следващо поколение: Най-новите в пептидите, растежните фактори, цитокините и стволовите клетки. Derm. Clin. 2014, 32, 13–21. [CrossRef]

25. Джан, Л.; Falla, TJ Козмецевтика и пептиди. Clin. Derm. 2009, 27, 485–494. [CrossRef]

26. Seok, JK; Лий, SW; Choi, J.; Ким, YM; Boo, YC Идентифициране на нови антимеланогенни хексапептиди чрез позиционно сканиране на синтетична пептидна комбинаторна библиотека. Exp. Derm. 2017, 26, 742–744. [CrossRef]

27. Ким, JH; Seok, JK; Ким, YM; Boo, YC Идентифициране на малки пептиди и глицинамид, които инхибират синтеза на меланин с помощта на позиционно сканираща синтетична пептидна комбинаторна библиотека. бр. J. Derm. 2019, 181,128–137. [CrossRef]

28. Pinilla, C.; Appel, JR; Blanc, P.; Houghten, RA Бърза идентификация на пептидни лиганди с висок афинитет чрез позиционно сканиране на синтетични пептидни комбинаторни библиотеки. Biotechniques 1992, 13, 901–905.

29. Рано, ТА; Тимки, Т.; Питърсън, ЕП; Rotonda, J.; Никълсън, DW; Бекер, JW; Чапман, КТ; Комбинаторен подход на Thornberry, NAA за определяне на специфичността на протеазата: Приложение към интерлевкин-1бета конвертиращ ензим (ICE). Chem. Biol. 1997, 4, 149–155. [CrossRef]

30. Сломински, AT; Slominski, RM; Zmijewski, MA Насочване към меланокортин рецептор тип 1 с малки пептиди. Br. J. Derm. 2019, 181, 17–18. [CrossRef]

31. Frosch, PJ; Kligman, AM Тестът на сапунената камера. Нов метод за оценка на дразнещото действие на сапуни. J. Am.Acad. Derm. 1979, 1, 35–41. [CrossRef]

32. Pierard, Ръководство на GE EEMCO за оценка на цвета на кожата. J. Eur. акад. Derm. Venereol. 1998, 10, 1–11 [CrossRef]

33. Уилкс, М.; Райт, CY; du Plessis, JL; Reeder, A. Fitzpatrick тип кожа, индивидуален типологичен ъгъл и индекс на меланин в африканска популация: стъпки към универсално приложими оценки на фоточувствителността на кожата. JAMA Derm. 2015, 151, 902–903. [CrossRef] [PubMed]

34. Boo, YC р-кумарова киселина като активна съставка в козметиката: Преглед, фокусиран върху неговите антимеланогенни ефекти. Антиоксиданти 2019, 8, 275. [CrossRef] [PubMed]

35. Boo, YC Ефикасност на изсветляване на човешката кожа на ресвератрол и неговите аналози: От in vitro проучвания до козметични приложения. Антиоксиданти 2019, 8, 332. [CrossRef] [PubMed]

36. Уатанабе, Ф.; Хашизуме, Е.; Чан, GP; Kamimura, A. Ефекти за избелване на кожата и подобряване на състоянието на кожата на локален окислен глутатион: двойно-сляпо и плацебо-контролирано клинично изпитване при здрави жени. Clin. Козмет. разследване. Derm. 2014, 7, 267–274. [CrossRef]

37. de Villiers, MM; Нарсай, К.; van der Watt, JG Физикохимична стабилност на смесени кремове, съдържащи а-хидрокси киселини. Вътр. J. Pharm. Compd. 2000, 4, 72–75.

38. Sharad, J. Пилинг терапия с гликолова киселина - текущ преглед. Clin. Козмет. разследване. Derm. 2013, 6, 281–288. [CrossRef]

39. Pillaiyar, T.; Маниккам, М.; Namasivayam, V. Средства за избелване на кожата: гледна точка на медицинската химия на инхибиторите на тирозиназата. J. Enzym. инхиб. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

40. Золгадри, С.; Бахрами, А.; Хасан Хан, Монтана; Munoz-Munoz, J.; Гарсия-Молина, Ф.; Гарсия-Кановас, Ф.; Saboury, AAA изчерпателен преглед на инхибиторите на тирозиназата. J. Enzym. инхиб. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef]

41. Щайнхоф, М.; Stander, S.; Seeliger, S.; Ansel, JC; Шмелц, М.; Luger, T. Съвременни аспекти на кожно неврогенно възпаление. арх. Derm. 2003, 139, 1479–1488. [CrossRef] [PubMed]

42. Буска, Р.; Ballotti, R. Cyclic AMP е ключов посланик в регулирането на пигментацията на кожата. Pigment Cell Res.2000, 13, 60–69. [CrossRef] [PubMed]

43. Tachibana, M. MITF: Поток, течащ за пигментни клетки. Pigment Cell Res. 2000, 13, 230–240. [CrossRef][PubMed]44. Ebanks, JP; Wickett, RR; Boissy, RE Механизми, регулиращи пигментацията на кожата: Възходът и спадът на оцветяването на тена. Вътр. J. Mol. Sci. 2009, 10, 4066–4087. [CrossRef]

45. Саймън, JD; Пелеш, Д.; Wakamatsu, K.; Ito, S. Текущи предизвикателства в разбирането на меланогенезата: свързваща химия, биологичен контрол, морфология и функция. Pigment Cell Melanoma Res. 2009, 22, 563–579. [CrossRef]