Карведилол, адренергичен блокер, потиска синтеза на меланин чрез инхибиране на CAMP/CREB сигналния път в човешки меланоцити и Ex vivo човешка кожна култура

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Myoung Eun Choi 1,†, Hanju Yoo 1,2,†, Ha-Ri Lee 2,3, Ik Joon Moon 1, Woo Jin Lee 1, Youngsup Song 3,*,‡ и Sung Eun Chang 1

Резюме:Катехоламините функционират чрез G протеин-свързани рецептори, предизвиквайки повишаване на вътреклетъчните нива от 30 50-цикличен аденозин монофосфат (cAMP) в различни клетки. Биосинтезата на катехоламин и -адренергичният рецептор съществуват вмеланоцити; по този начин катехоламините могат да играят критична роля в пигментацията на кожата. Въпреки това, тяхното действие и механизми, медииращи меланогенезата в човешката кожа, все още не са изследвани. Затова изследвахме потенциалния антимеланогенетичен ефект на карведилол, неселективен -блокер със слаба 1-блокираща активност. Карведилол намалява съдържанието на меланин и активността на клетъчната тирозиназа, без да компрометира клетъчната жизнеспособност при нормален човекмеланоцитикакто и в Mel-Ab обезсмъртени миши меланоцити. Свързан с карведилол транскрипционен фактор, свързан с микрофталмия (MITF), тирозиназа, свързан с тирозиназа протеин (TRP)-1 и TRP-2. Лечението с карведилол доведе до понижаване на регулацията на фосфор-cAMPresponse елемент-свързващ протеин (CREB). Освен това повишаването на нивата на сАМР при лечение с форсколин обръща антимеланогенното действие на карведилол. В допълнение, карведилол забележително намалява индекса на меланин в ултравиолетово облъчени човешки кожни култури. Взети заедно, нашите резултати показват, че карведилолът ефективно потиска меланогенезата при хоратамеланоцитии ex vivo човешка кожа чрез инхибиране на cAMP/протеин киназа A/CREB сигнализиране. Антимеланогенните ефекти на карведилол имат потенциално значение за кожатаизбелванеагенти.

Ключови думи:карведилол; адренергичен блокер;синтез на меланин; cAMP/CREB сигнализиране

Цистанчее в състояние да инхибира синтеза на меланин

1. Въведение

Широка гама от пигментни кожни нарушения има значително психологическо и социално въздействие върху пациентите. Разработени са различни методи на лечение, включително системни и локални средства, както и лазерна терапия [1–3]. Резултатите обаче често са незадоволителни и нежелани реакции, като пост-възпалителна хиперпигментация (PIH) и хипопигментация, от лечението са често срещани. Освен това лечението е скъпо и отнема много време [4–6].

Катехоламините, които включват допамин, епинефрин и норепинефрин, са сигнални молекули, които действат като невротрансмитери и ендокринни хормони. В кожата биосинтезата и разграждането на катехоламините се извършват в човешки кератиноцити, но синтезът на катехоламини в меланоцитите е малко по-различен [7–9]. Катехоламините функционират чрез G протеин-свързани рецептори (GPCR). Свързването на катехоламини с GPCRs задейства активирането на вътреклетъчната аденилатциклаза, която синтезира 30, 50-цикличен аденозин монофосфат (cAMP) от АТФ [10]. Вторият месинджър сАМР проявява своята активност чрез свързване на R-субединица на протеин киназа А (РКА), което води до фосфорилиране на сАМР отговор елемент-свързващ протеин (CREB). GPCRs се активират от амини и пептиди, включително глюкагон, паратироиден хормон, секретин и калцитонин [10].

Адренергичните рецепторни антагонисти включват -рецептор и -рецепторни антагонисти. -рецепторните антагонисти се подкатегоризират на неселективни, 1-селективни и 2-селективни агенти, докато -рецепторните антагонисти се подкласифицират като неселективни, 1-селективни и 2-селективни агенти въз основа на техните селективни блокиращи дейности. За разлика от неселективните -рецепторни антагонисти от първо поколение, като пропранолол, тимолол и надолол, карведилолът е неселективен -блокер от трето поколение, който проявява вазодилататорно действие чрез блокиране на 1-адренорецепторите (1-ARs) [11]. Следователно карведилолът е неселективен -блокер със слаба 1-блокираща активност [12]. Използва се главно като перорално лекарство за контролиране на високо кръвно налягане и застойни сърдечни заболявания, подобно на други -блокери [12]. Въпреки това, β-блокерите от трето поколение проявяват ангиогенни, антиоксидантни, антипролиферативни, антихипертрофични и антиапоптотични дейности, които изискват допълнително изясняване [11]. В дерматологичната област, поради своите антиоксидантни и противовъзпалителни действия, карведилол често се използва в перорални форми за лечение на тематотелангиектатична розацея [13,14]. Нещо повече, антиоксидантната активност на карведилола води до предотвратяване на индуцирана от ултравиолетова (UV) карциногенеза на кожата, което го прави привлекателен агент за управление на кожни заболявания, свързани с UV [15–18]. Въпреки това, хемопревантивните ефекти на карведилолара не се медиират директно чрез AR. [19] Въпреки че точният механизъм е сравнително неизвестен, cAMP/PKA и PKC-δ сигнализиращият път може да бъде свързан със свойствата на карведилол срещу кожни метастази [20].

В ранните етапи на изследване на пигментацията, човешкатамеланоцитие установено, че експресират -1-AR сигнализиране след извънклетъчна индукция с норепинефрин. Въпреки това, -ARs не са открити след стимулация с адренергично сигнализиранемеланоцити[8]. Обратно, Cillbro et al. по-късно демонстрира, че специфичен функционален 2-AR сигнал съществува в човешките меланоцити и че 2-AR стимулацията води до пигментация през 2-AR/cAMP пътя [7]. Следователно се предполага ролята на катехоламините в контрола на пигментацията и cAMP се счита за основната ос за катехоламиновия контрол на меланогенезата.

Меланогенезата е сложен процес, който включва множество пътища. Тирозиназата, свързан с тирозиназата протеин 1 (TRP-1) и TRP-2, наричан също допахром таутомераза (DCT), са трите основни специфични за меланоцитите ензими, участващи всинтез на меланин[21]. Меланогенезата се индуцира или инхибира от множество фактори, включително хормони, цитокини, невротрансмитери, растежни фактори и микромолекули [21–23].

Най-важният положителен регулатор е рецепторът на меланокортин-1 и неговите лиганди, меланокортини и адренокортикотропен хормон [23]. Въпреки това, различни фактори, участващи в меланогенезата, са ендорфин, естрогени, андрогени, витамин D3 и катехоламини [23]. Кумулативните доказателства предполагат, че L-тирозин и L-DOPA, които са субстрати и междинни продукти на меланогенезата, действат като индуктори и положителни регулатори на меланогенния път, в допълнение към регулаторите на други клетъчни функции [24]. Освен това, Jeff Howe et al. предполагат, че индукцията и регулирането на меланогенезата от L-тирозин се медиира от директно активиране на адренергичните рецептори от L-тирозин, а не от неговите метаболитни продукти като катехоламини [25]. В техните проучвания норепинефринът и епинефринът стимулират активността на тирозиназата, но техният индуктивен ефект върхусинтез на меланине сравнително по-нисък от L-тирозин [25].

Катехоламините могат да играят важна роля в системата за пигментация на кожата; обаче техният ефект върху меланогенезата по отношение на действието на трето поколение неселективен β-блокер все още не е проучен. Ето защо, в настоящото проучване, ние имахме за цел да проучим дали карведилолът повлиява меланогенезата и проучихме механизмите му на действие при хорамеланоцитии ex vivo човешка кожа и нейната потенциална употреба катоизбелванепродукт.

инхибират образуването на меланин сherba cistanches

2. Резултати

2.1. Карведилол потиска меланогенезата

Цитотоксичността на карведилол срещу нормален човекмеланоцити(NHMs) и Mel-ab клетките бяха оценени чрез WST анализ на клетъчна пролиферация. Концентрация на карведилол от 10 µM започва да проявява цитотоксичност както срещу NHMs, така и срещу Mel-ab клетки (Фигура 1A, B). Следователно, в по-нататъшни оценки, използвахме 8 µM карведилол, който не е цитотоксичен за NHM.

Лечението с карведилол намалява съдържанието на меланин в зависимост от дозата, без да повлиява жизнеспособността на NHMs (Фигура 1C). Съдържанието на меланин е намалено с 28,36 процента след третиране с 96 h 8 µM карведилол (Фигура 1C). Добавянето на 100 mg/mL арбутин намалява съдържанието на меланин в по-малка степен от карведилол (Фигура 1C). След 4 дни лечение с карведилол, съдържанието на меланин намалява в зависимост от времето (Фигура 1D). Въпреки това, лечението с форсколин (FSK) в продължение на 4 дни след предварителното лечение с карведилол индуцира повишаване на съдържанието на меланин (Фигура 1E). FSK повишава транскрипцията на MITF в най-голяма степен на 2 часа в NHMs и се смята, че функционира чрез cAMP /PKA/CREB път (Фигура 1F).

2.2. Карведилол инхибира експресията на MITF и неговите целеви гени и намалява нивата на Phospho-CREB в NHMs

Тъй като карведилол намалява натрупването на меланин, ние изследвахме активността на клетъчната тирозиназа. Лечението с карведилол намалява активността на клетъчната тирозиназа по дозозависим начин в NHMs (Фигура 2А). Тирозиназната активност намалява с 28,48 процента след 96 часа лечение с 8 µM карведилол (Фигура 2А). След това установихме дали карведилолът влияе върху експресията на MITF, който играе решаваща роля в регулирането на тирозиназата и меланогенните гени надолу по веригата. Лечението с FSK повишава вътреклетъчните нива на cAMP и обръща антимеланогенните действия на карведилол. Карведилол значително намалява протеиновите нива на MITF, централен транскрипционен фактор на меланогенезата, на 72 h (Фигура 2B). Освен това, експресията на неговите целеви гени, като тирозиназа и TRP-1, е намалена след лечение с карведилол (Фигура 2B). Тези резултати показват, че карведилолът инхибира меланогенезата чрез понижаване на MITF сигнализирането.

След това изследвахме вътреклетъчните сигнални пътища на меланогенезата, които регулират транскрипцията на MITF, чрез измерване на нивата на експресия на фосфо-CREB и фосфо-ERK. Нивата на Phospho-ERK не се променят с времето след лечение с карведилол; нивата на фосфо-CREB обаче бяха понижени (Фигура 2B). В съответствие с предишни наблюдения, нашите резултати разкриха, че карведилолин инхибира меланогенезата чрез инхибиране на cAMP/PKA/CREB сигналния път. Освен това лечението с FSK обръща антимеланогенното действие на карведилол чрез повишаване на нивата на cAMP.

2.3. Меланинов индекс и имунохистохимично оцветяване в Ex Vivo човешка кожна култура

Плътността на епидермалните меланоцити и индексът на меланин в ex vivo срезове от тъкани на човешка кожна култура бяха открити съответно чрез оцветяване на Melan-A и Fontana-Masson. Карведилол не повлиява броя на Melan-A (плюс)меланоцитив пробата, третирана с карведилол плюс UV лъчение (UVR), в сравнение с тази в пробата, третирана само с UVR (Фигура 3A). HMB45(плюс)меланоцитите може да показват, че меланоцитната активност се е увеличила при UVR лечение и е била обратно регулирана надолу след лечение с карведилол (Фигура 3B). Съдържанието на меланин обаче е значително намалено в проби, третирани с карведилол плюс UVR, в сравнение с това в проби, третирани само с UVR (Фигура 3C). За изчисляване на меланиновия индекс беше изчислена и сравнена частта от оцветената площ на Fontana–Masson върху общата площ между образец, изложен на UVR, и този на карведилол плюс UVR (Фигура 3D). Клетъчните лизати на всеки образец бяха анализирани чрез Western blotassay, което разкри, че тирозиназата, TRP1 и DCT са повишени от UVR и понижени чрез лечение с карведилол (Фигура 3E). В резултат на това карведилол забележително намалява меланиновия индекс и свързаните с меланогенезата протеини, показвайки своя антимеланогенен ефект върху човешка кожа, третирана с UVR.

3. Дискусия

Меланинът е пигментът, отговорен за цвета на кожата и косата и се синтезира в меланозомите отмеланоцити. Въпреки че епидермалният меланин играе важна защитна роля срещу UVR, свръхпроизводството и натрупването на меланин в кожата причинява неприятни кожни хиперпигментни нарушения, като PIH, диспигментация, свързана с фотостареенето, мелазма и слънчеви лентигини [18,26]. Следователно, инхибирането на меланогенезата е в центъра на медицинските и козметични лечения за красота и здраве на кожата. Бяха положени значителни усилия за идентифициране на нови и ефективни средства против пигментация. Въпреки това, механизмите против меланогенеза на специфичните агенти понастоящем са несигурни и като цяло са оценени в миши клетки, които дават резултати, които не винаги са в съответствие с тези от опити върху човешка кожа [27,28]. Освен това, тъй като меланогенезата на меланоцитите е строго регулирана от кератиноцитите и други съседни клетки, кокултивираните човешки клетки или ех vivo човешката кожа са по-надеждни експериментални настройки за изследване на ефективниизбелванеагенти [29]. Повечето агенти за избелване на кожата, независимо дали естествено или химически получени, могат да причинят кожна токсичност или дразнене, което може да бъде предвидено до известна степен чрез in vitro тестове за клетъчна жизнеспособност с меланоцити. В нашето проучване карведилолът не показва цитотоксичност, когато се използва в умерени дози.

cistanche bienfaits

Локалните кремове с хидрохинон могат да доведат до нежелани нарушения на хипопигментацията и кожна токсичност [30–32]. Освен това някоиизбелванекозметиката има катастрофални последици чрез индуциране на хипопигментация чрез разграждането на тирозиназните протеини [33–35]. Избелващите агенти могат да се използват в по-високи дози в зависимост от потребителя, за да се увеличи максимално избелването на хиперпигментните лезии. Следователно усилията за откриване на безопасни и здравословни избелващи кожата агенти непрекъснато се проучват.

Следователно, настоящото изследване е предназначено да се проведе в нормални човешки клетки и ex vivo човешка кожа. Освен това, въз основа на установения механизъм на действие на катехоламините за G сигнализиране, което повишава клетъчното ниво на cAMP, ние вярвахме, че адренергичен блокер може да намали нивата на cAMP и да инхибира UVR/cAMP/CREB сигналния път, който е основният механизъм за UV-индуцирана хиперпигментация на кожата [36,37]. Следователно, ние предположихме, че адренергичните блокери, които намаляват нивата на сАМР, намаляватсинтез на меланин.

В допълнение, за да се развие безопасноизбелванеагенти, надеждни и възпроизводими механизми на антимеланогенеза трябва да се преследват успоредно. Най-физиологично значимият стимул е UV, а сред UVR сигналите към епидермисамеланоцитиCREB оста е най-утвърденият път за регулиране на меланогенезата в човешкия епидермис [29]. Излагането на UV последователно активира производството на scAMP, PKA и транскрипционния фактор CREB, което от своя страна индуцира експресията на MITF и надолу по веригата целеви меланогенни гени [38,39]. В допълнение към CREB фосфорилирането от PKA, скорошни проучвания показват, че набирането на CREB-регулиран транскрипционен коактиватор (CRTC) 3 към CREB транскрипционния комплекс също е необходимо за cAMP-стимулиран MITF. MITF изпълнява най-съществената роля в регулирането насинтез на меланини получената транскрипция на меланогенни ензими [26,40,41]. По време на този вътреклетъчен сигнален процес, меланогенезата се регулира от ключов ензим, тирозиназа, и допълнителни ензимни протеини, като TRP-1 и DCT [1–4]. В настоящото проучване карведилолът ефективно намалява фосфорилирането на CREB, което показва, че намалява MITF и тирозиназните протеини чрез инхибиране на транскрипцията на MITF (Фигура 4). Като се има предвид, че генната регулация на MITF иРНК е сложно контролирана и спасена от други вътреклетъчни сигнални молекули и коактиватори, регулирането на нивото на транскрипция на MITF е обещаваща стратегия за изследване на здравословни съставки за избелване на кожата, тъй като функцията за оцеляване на MITF е запазена и спасена [1,38,40]. Наистина, когато изследвахме FSK-индуцирана MITF транскрипция, бе установено, че MITF mRNA има своя собствена пикова крива на отговор за меланогенеза и клетъчно оцеляване за клетъчна хомеостаза. Биологичните функции намеланоцитиизглежда, че се регулира вътрешно от други сигнали за обратна връзка в човешките меланоцити. Нещо повече, карведилол има по-нисък риск от нежелани реакции на хипопигментация, тъй като намалява активността на клетъчната тирозиназа с течение на времето, а не внезапно.

Катехоламините включват допамин, епинефрин и норепинефрин и се синтезират от диетичен тирозин чрез действието на ензими [42]. Биосинтезата и разграждането на катехоламините се извършват в широк спектър от клетки, включително невроните на симпатиковите нерви и мозъка, адреномедуларните клетки, ендотелните клетки, неутрофилите и мононуклеарните клетки [43–45]. В човешката кожа катехоламиносинтезата се осъществява в кератиноцитите. Обратно, меланоцитите също експресират иРНК и ензими за автокринния синтез на норепинефрин, но не и на епинефрин [7,42]. В човешкимеланоцити, -1-AR може да бъде важен при реакцията към норепинефрин, носинтез на меланинсъщо се влияе от функционалното 2-AR сигнализиране [7,8]. Интересно е, че пациентите с витилиго имат повишена 2-AR плътност в кератиноцитите [46]. Повишени нива на норепинефрин се откриват в урината и плазмата на пациенти с несегментарно витилиго, което предполага, че метаболизмът на катехоламина може да бъде свързан с развитието и прогресията на витилиго [47]. Освен това, в допълнение към класическите стрес невротрансмитери, меланоцитите произвеждат невропептиди и хормони, като кортикотропин-освобождаващ фактор и проопиомеланокортин. Това производство се стимулира от UVR и други агенти, които действат в кожната невроендокринна система [48]. Следователно действието на катехоламините и меланоцитната функция са тясно свързани в различни сложни пътища. Освен това, карведилол може да повлияе на химичните реакции в меланогенния път и тази възможност трябва да бъде допълнително проучена. Карведилол може да има предимства, тъй като има едновременни противовъзпалителни ефекти, тъй като повечето хиперпигментни разстройства са клинично или субклинично PIH при пациенти с тъмна кожа. Тъй като проникването на карведилол през кожата е изследвано както in vitro, така и ex vivo, карведилол може да се разработи като локално средство.избелванеагент в бъдеще [49–51].

Системното приложение на карведилол може да причини брадикардия, замаяност, хипотония, главоболие и световъртеж. Локалното приложение на карведилол обикновено не причинява системни симптоми; обаче трябва да обърнем специално внимание на тези симптоми, когато го прилагаме при пациенти с дефектна кожна бариера, като тези с атопичен дерматит. Освен това в редки случаи се съобщава за екзема, пруритус и лихеноиден обрив при прием на карведилол. Тези дерматологични странични ефекти, както и контактен дерматит, също трябва да се вземат предвид при прилагане на карведилол като локално средствоизбелванеагент.

В заключение, ние показахме, че карведилолът ефективно намалява меланогенезата при хорамеланоцитии ex vivo човешка кожа чрез инхибиране на cAMP/CREB/MITF пътя, което предполага потенциалната му употреба като ефективен избелващ агент. Трябва да последва по-нататъшно изследване на функционалното участие на адренергичния рецептор от карведилол в човешки меланоцити.

4. Материали и методи

4.1. Материали

Карведилол, 3,4-дихидрокси-L-фенилаланин (L-DOPA), холерен токсин (CT) и 12-отетрадеканоилфорбол-13-ацетат (TPA) са закупени от Sigma-Aldrich Co. (Сейнт Луис, Мисури, САЩ). Модифицираната среда на Eagle на Dulbecco (DMEM) и буферираният с фосфат физиологичен разтвор на Dulbecco бяха закупени от WelGENE (Daegu, Корея). Фетален говежди серум (FBS), антибиотик-антимикотик и трипсин-EDTA бяха закупени от Gibco (Grand Island, NY, USA). Среда 254 (CascadeBiologicks, Портланд, Орегон, САЩ) и FSK ([3R-(3,4a,5,6,6a,10,10a,10b)]-5-(ацетилокси)-3-етенилдодекахидро{ {24}},10,10b-трихидрокси-3,4a,7,7,10a-пентаметил-1Н-нафто[2,1-b]пиран-1-он ) са закупени от Tocris Bioscience (Бристол, Обединеното кралство).

4.2. Клетъчни линии и клетъчна култура

Първичните NHM, получени от Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, САЩ), се поддържат в среда 254 (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA), допълнена с добавка за растеж на човешки меланоцити (Thermo Fisher). Mel-ab клетки, получена от мишка спонтанно обезсмъртена меланоцитна клетъчна линия, бяха получени от Корейската банка за клетъчни линии (KCLB, Сеул, Корея) и поддържани в DMEM, допълнен с 10 процента FBS, пеницилин-стрептомицин, 100 nM TPA и 1 nM CT. Всички клетки се поддържат рутинно при 37 ◦C във влажна среда с 5 процента CO2.

4.3. Антитела и Western Blots

Клетките се промиват веднъж със студен PBS и се лизират в протеинов лизисен буфер (1 процент SDS в 10 mMTris и 5 mM EDTA, рН 7.4), последвано от инкубиране при 98 °C за 10 минути. Протеиновите проби бяха разделени чрез електрофореза с 8 процента SDS-полиакриламиден гел, блотирани върху нитроцелулозни мембрани (GE Healthcare Life Sciences, Чикаго, Илинойс, САЩ) и след това блокирани с Tris-буфериран физиологичен разтвор, съдържащ 0,5 процента Tween 20 и 5 процента BSA, и подложени на имуноблотинг. Тирозиназа и TRP-1 антитела бяха закупени от Santa Cruz Biotechnology (Далас, Тексас, САЩ), а MITF беше закупен от Abcam (Кеймбридж, Обединеното кралство). -тубулин (Gentex, Холандия, MI, САЩ) се използва като вътрешен контрол на натоварването.

4.4. Съдържание на меланин

Цитотоксичният ефект на карведилол беше оценен с помощта на Ez-Cytox Cell Viability Assay Kit (Dogen-Bio Co., Ltd., Сеул, Корея) в съответствие с инструкциите на производителя. Mel-Ab клетките и NHM бяха посяти в шестямкови плаки при плътност съответно 6 × 105 и 3 × 105 клетки/ямка. Клетките се третират с карведилол, както е показано на фигурите, в продължение на 3 или 5 дни (d). Преди измерване на съдържанието на меланин, клетките се наблюдават под фазово-контрастен микроскоп и се фотографират (Olympus, Токио, Япония). Клетките се разтварят в 550 µL 1 N NaOH при 100 ◦C за 30 минути и се центрофугират при 13,000 rpm за 5 минути. Абсорбцията на супернатантите се измерва при 405 nm от четец на микроплаки. Вътреклетъчното съдържание на меланин беше представено като процент по отношение на нетретираната контрола на клетките. Като положителна контрола се използва арбутин (100 mg/mL).

4.5. Клетъчна тирозиназна активност

Тирозиназната активност се оценява чрез измерване на скоростта на образуване на допахром на L-DOPA. След инкубиране с карведилол, клетките се промиват в ледено студен PBS и се лизират в тирозиназен лизисен буфер (фосфатен буфер, рН 6,8, съдържащ 1% Triton X{ {5}}) с повтарящи се цикли на замразяване/размразяване. Лизатите се избистрят чрез центрофугиране при 15,000 rpm при 4 ◦C за 10 минути. След количествено определяне на протеиновите нива на лизата и коригиране на протеиновите концентрации с лизисен буфер, 90 µL от супернатанта, смесен с 10 µL от 10 mM L-DOPA в тирозиназен лизисен буфер, се инкубира при 37 °C. Клетъчната тирозиназна активност се измерва чрез отчитане на абсорбцията при 475 nm с помощта на четец на микроплаки на всеки 10 минути в продължение на поне 1 час. Като положителен контролен агент се използва арбутин (100 mg/mL).

herba cistanches

4.6. Имунохистохимичен анализ

Покрити с парафин тъкани на човешка кожа бяха нарязани на срезове с дебелина 6-µm и оцветени с Melan-A (Novocastra, Нюкасъл, Обединеното кралство), комплекти Fontana-Masson (ID labs, Лондон, Онтарио, Канада) и HMB45 (Santa Clara , Калифорния, САЩ), съгласно инструкциите на производителя. Индексът на меланин се определя чрез измерване на процента на оцветената площ към общата площ на тъканта с помощта на софтуер ImageJ 1.52a (Национални институти по здравеопазване, Bethesda, MD, САЩ).

4.7. Статистически анализ

Данните са представени като средна стойност ± стандартна грешка на средната стойност (SEM), а статистическата значимост е определена чрез несдвоен t-тест на Student с помощта на софтуер GraphPad Prism5 (Сан Диего, Калифорния, САЩ). В това проучване p < 0.05,="" p="">< 0.01="" и="" p="">< 0.001="" се="" считат="" за="" статистически="" значими="" и="" са="" представени="" с="" *,="" **="" и="" ***,="">

Препратки

1. Gillbro, JM; Olsson, MJ Меланогенезата и механизмите на агентите за изсветляване на кожата - Съществуващи и нови подходи. Вътр. J. Cosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef] [PubMed]

2. Лий, YJ; Шин, HJ; Не, TK; Choi, KH; Chang, SE Лечение на мелазма и пост-възпалителна хиперпигментация с пикосекунден 755-nm александритен лазер при азиатски пациенти. Ан. Dermatol. 2017, 29,779–781. [CrossRef] [PubMed]

3. Лий, YJ; Парк, JH; Лий, DY; Lee, JH придобита двустранна диспигментация на лицето и шията: клинично подходящи подходи. J. Korean Med. Sci. 2016, 31, 2042–2050. [CrossRef] [PubMed]

4. Kang, HJ; Na, JI; Лий, JH; Roh, MR; Ко, JY; Chang, SE Постинфламаторна хиперпигментация, свързана с лечението на слънчеви лентигини с помощта на Q-Switched 532-nm Nd: YAG лазер: Многоцентрово изследване.J. дерматолог. лечение. 2017, 28, 447–451. [CrossRef] [PubMed]

5. Като, Х.; Араки, Дж.; Eto, H.; Дой, К.; Хирай, Р.; Куно, С.; Хигашино, Т.; Yoshimura, K. Проспективно рандомизирано контролирано проучване на перорална транексамова киселина за предотвратяване на постинфламаторна хиперпигментация след рубинен лазер с Q-превключване. Dermatol. Surg. 2011, 37, 605–610. [CrossRef] [PubMed]

6. Тейлър, CR; Anderson, RR Неефективно лечение на рефрактерна мелазма и постинфламаторна хиперпигментация чрез Q-превключен рубинен лазер. J. Dermatol. Surg. Oncol. 1994, 20, 592–597. [CrossRef]

7. Gillbro, JM; Marles, LK; Hibberts, NA; Schallreuter, KU Автокринна биосинтеза на катехоламини и бета-адренорецепторен сигнал насърчават пигментацията в човешки епидермални меланоцити. J. Разследване. Dermatol.2004, 123, 346–353. [CrossRef]

8. Schallreuter, KU; Korner, C.; Pittelkow, MR; Swanson, NN; Гарднър, М. Л. Индукция на система за сигнална трансдукция на алфа-1-адренорецептор върху човешки меланоцити. Exp. Dermatol. 1996, 5, 20–23 [CrossRef]

9. Сивамани, РК; Shi, B.; Грифитс, Е.; Vu, SM; Лев-Тов, Х.А.; Dahle, S.; Чигброу, М.; La, TD; Mashburn, C.; Peavy, TR; et al. Острото нараняване променя бета2-адренергичните сигнални пътища и синтетичните пътища на катехоламините в кератиноцитите. J. Разследване. Dermatol. 2014, 134, 2258–2266. [CrossRef]

10. Emery, AC Катехоламинови рецептори: Прототипи за откриване на лекарства, базирани на GPCR. адв. Pharmacol. 2013, 68,335–356.

11. Do Vale, GT; Ceron, CS; Gonzaga, NA; Simplicio, JA; Padovan, JC Три поколения бета-блокери: история, класови разлики и клинична приложимост. Curr. Хипертоници. Rev. 2019, 15, 22–31. [PubMed]

12. Мактавиш, Д.; Campoli-Richards, D.; Sorkin, EM Carvedilol: Преглед на неговите фармакодинамични и фармакокинетични свойства и терапевтична ефикасност. Лекарства 1993, 45, 232–258. [CrossRef] [PubMed]

13. Hsu, CC; Lee, JY Изразено зачервяване на лицето и персистираща еритема на розацея, ефективно лекувани с карведилол, неселективен бета-адренергичен блокер. J. Am. акад. Dermatol. 2012, 67, 491–493. [CrossRef][PubMed]

14. Pietschke, K.; Schaller, M. Дългосрочно управление на отчетливо зачервяване на лицето и персистираща еритема на розацея чрез лечение с карведилол. J. Dermatolog. лечение. 2018, 29, 310–313. [CrossRef] [PubMed]

15. Чанг, А.; Yeung, S.; Thakkar, A.; Хуанг, KM; Liu, MM; Канасатега, RS; Parsa, C.; Орландо, Р.; Джаксън, ЕК; Andresen, BT; et al. Предотвратяване на карциногенезата на кожата чрез бета-блокера карведилол. РакПред. Рез. 2015, 8, 27–36. [CrossRef] [PubMed]

16. Чен, М.; Liang, S.; Шахид, А.; Andresen, BT; Huang, Y. Бета-блокерът Carvedilol предотврати ултравиолетово-медиирано увреждане на миши епидермални клетки и 3D човешка реконструирана кожа. Вътр. J.Mol. Sci. 2020, 21, 798. [CrossRef] [PubMed]

17. Хуанг, KM; Liang, S.; Yeung, S.; Oiyemhonlan, E.; Кливланд, KH; Parsa, C.; Орландо, Р.; Meyskens, FL, Jr.; Andresen, BT; Huang, Y. Локално приложен карведилол отслабва индуцираната от слънчева ултравиолетова радиация кожна карциногенеза. Рак Пред. Рез. 2017, 10, 598–606. [CrossRef]

18. Бренер, М.; Слух, VJ Защитната роля на меланина срещу UV увреждане на човешката кожа. Photochem.Photobiol. 2008, 84, 539–549.

19. Кливланд, KH; Liang, S.; Чанг, А.; Хуанг, KM; Чен, С.; Guo, L.; Huang, Y.; Andresen, BT Carvedilolin инхибира EGF-медиираното JB6 P плюс образуване на колония чрез механизъм, независим от адренорецепторите. PLoS ONE 2019, 14, e0217038. [CrossRef]

20. Дзонг, Г.; Zhongbing, М.; Qinye, F.; Zhigang, Y. Carvedilol потиска миграцията и инвазията на злокачествени клетки на гърдата чрез инактивиране на Src, включващ cAMP/PKA и PKCdelta сигнален път. J. Cancer Res. Ther.2014, 10, 998–1003.

21. Ржепка, З.; Бусман, Е.; Беберок, А.; Wrzesniok, D. От тирозин до меланин: Сигнални пътища и фактори, регулиращи меланогенезата. Postepy Hig. Med. Dosw. Онлайн 2016, 70, 695–708. [CrossRef]

22. Ким, Й.; Чо, JY; О, SW; Канг, М.; Лий, SE; Юнг, Е.; Парк, YS; Lee, J. Globular адипонектин действа като меланогенен сигнал в човешки епидермални меланоцити. бр. J. Dermatol. 2018, 179, 689–701. [CrossRef][PubMed]

23. Сломински, А.; Тобин, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Меланинова пигментация в кожата на бозайници и нейната хормонална регулация. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [PubMed]

24. Сломински, А.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-тирозин и L-дихидроксифенилаланин като хормоноподобни регулатори на функциите на меланоцитите. Pigment Cell Melanoma Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

25. Хоу, Дж.; Константино, Р.; Slominski, A. За предполагаемия механизъм на индуциране и регулиране на меланогенезата от L-тирозин. Acta Derm Venereol. 1991, 71, 150–152.

26. Д'Мело, SA; Финлей, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Сигнални пътища в меланогенезата. Вътр. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef]

27. Юнг, JA; Ким, BJ; Ким, MS; Ти, HJ; Yoon, ES; Донг, Испания; Парк, SH; Kim, DW Защитен ефект на ботулинов токсин срещу индуцирана от ултравиолетова пигментация на кожата. Пласт. Реконстр. Surg. 2019, 144, 347–356 [CrossRef]

28. Jeong, YM; О, WK; Тран, TL; Ким, WK; Sung, SH; Бае, К.; Лий, С.; Sung, JH Aglycone на Rh4 инхибира синтеза на меланин в B16 меланомни клетки: Възможно участие на пътя на протеин киназа A. Biosci. Биотехнология. Biochem. 2013, 77, 119–125. [CrossRef]

29. Ким, YH; Ким, Д.; Хонг, Арканзас; Ким, JH; Йоо, Х.; Ким, Дж.; Ким, И.; Канг, ЮЗ; Чанг, SE; Song, Y. Терапевтичен потенциал на Rottlerin за кожни хиперпигментни нарушения чрез инхибиране на транскрипционната активност на CREB-регулирани коактиватори на транскрипция. J. Разследване. Dermatol. 2019, 139, 2359–2367.e2 [CrossRef]

30. Дас, А.; Ghosh, A.; Kumar, P. Химическа левкодерма, дължаща се на хидрохинон: необичаен феномен. Индийски J.Dermatol. Venereol. Лепрол. 2019, 85, 567. [CrossRef]

31. Джоу, Т.; Hantash, BM Индуцирана от хидрохинон депигментация: Доклад за случай и преглед на литературата. Дерматит 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]

32. Керси, П.; Stevenson, CJ Витилиго и професионална експозиция на хидрохинон от обслужване на машини за самофотографиране. Свържете се с Дермат. 1981, 7, 285–287. [CrossRef] [PubMed]

33. Сасаки, М.; Кондо, М.; Сато, К.; Умеда, М.; Кавабата, К.; Takahashi, Y.; Сузуки, Т.; Matsunaga, K.; Inoue, S. Rhododendron, фенолно съединение, предизвикващо депигментация, упражнява меланоцитна цитотоксичност чрез зависим от тирозиназата механизъм. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 754–763. [CrossRef] [PubMed]

34. Йошикава, М.; Sumikawa, Y.; Хида, Т.; Камия, Т.; Касе, К.; Ishii-Osai, Y.; Kato, J.; Кан, Й.; Камия, С.; Сато, Й.; et al. Клиничен и епидемиологичен анализ при 149 случая на индуцирана от рододендрон левкодерма.J. Dermatol. 2017, 44, 582–587. [CrossRef] [PubMed]

35. Харис, JE Химически индуцирано витилиго. Dermatol. Clin. 2017, 35, 151–161. [CrossRef] [PubMed]

36. Ли-Ша, Г.; Yi-He, C.; На-Дан, З.; Teng, Z.; Yue-Chun, L. Ефекти от лечението с карведилол върху сърдечната cAMPresponse елемент-свързваща протеинова експресия и фосфорилиране при остър миокардит, индуциран от коксакивирус В3-. BMC Cardiovasc. Разстройство. 2013, 13, 100. [CrossRef] [PubMed]

37. Джан, Ф.; Steinberg, SF S49G и R389G полиморфизми на бета (1)-адренергичния рецептор влияят на сигнализирането чрез cAMP-PKA и ERK пътищата. Physiol. Геном. 2013, 45, 1186–1192. [CrossRef]

38. Лий, AY; Noh, M. Регулирането на епидермалната меланогенеза чрез cAMP и/или PKC сигнални пътища: Прозрения за развитието на хипопигментирани агенти. арх. Pharm. Рез. 2013, 36, 792–801. [CrossRef]

39. Гарсия-Борон, JC; Абдел-Малек, З.; Jimenez-Cervantes, C. MC1R, пътят на cAMP и реакцията към слънчевите UV: Разширяване на хоризонта отвъд пигментацията. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 699–720 [CrossRef]

40. Lin, CB; Babiarz, L.; Liebel, F.; Ройдън Прайс, Е.; Кизулис, М.; Gendimenico, GJ; Фишър, DE; Seiberg, M. Модулирането на свързаната с микрофталмия генна експресия на транскрипционен фактор променя пигментацията на кожата. J. разследване. Dermatol. 2002, 119, 1330–1340. [CrossRef]

41. Ким, JH; Хонг, Арканзас; Ким, YH; Йоо, Х.; Канг, ЮЗ; Чанг, SE; Song, Y. JNK потиска меланогенезата чрез намеса в CREB-регулирана транскрипционна коактиватор 3-зависима MITF експресия. Тераностика 2020, 10, 4017–4029. [CrossRef] [PubMed]

42. Риос, М.; Habecker, B.; Сасаока, Т.; Eisenhofer, G.; Tian, ​​H.; Landis, S.; Chikaraishi, D.; Roffler-Tarlov, S. Синтезът на катехоламин се медиира от тирозиназа в отсъствието на тирозин хидроксилаза. J. Neurosci. 1999, 19, 3519–3526. [CrossRef] [PubMed]

43. Косентино, М.; Марино, Ф.; Бомбели, Р.; Ферари, М.; Lecchini, S.; Frigo, G. Ендогенна катехоламиносинтеза, метаболизъм, съхранение и усвояване в човешки неутрофили. Life Sci. 1999, 64, 975–981. [CrossRef]

44. Марино, Ф.; Косентино, М.; Бомбели, Р.; Ферари, М.; Lecchini, S.; Frigo, G. Ендогенна катехоламиносинтеза, съхранение на метаболизма и усвояване в мононуклеарни клетки на периферната кръв на човека. Exp. Hematol.1999, 27, 489–495. [CrossRef]

45. Соренто, Д.; Santulli, G.; Del Giudice, C.; Анастасио, А.; Тримарко, Б.; Iaccarino, G. Ендотелните клетки са способни да синтезират и освобождават катехоламини както in vitro, така и in vivo. Хипертония 2012, 60, 129–136 [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Cucchi, ML; Фратини, П.; Santagostino, G.; Преда, С.; Orecchia, G. Катехоламините се увеличават в урината на несегментно витилиго, особено по време на активната му фаза. Pigment Cell Res. 2003, 16, 111–116. [CrossRef][PubMed]

47. Salzer, BA; Schallreuter, KU Изследване на структурата на личността при пациенти с витилиго и възможна връзка с нарушен метаболизъм на катехоламини. Дерматология 1995, 190, 109–115. [CrossRef][PubMed]

48. Slominski, A. Невроендокринна активност на меланоцита. Exp. Dermatol. 2009, 18, 760–763. [CrossRef]

49. Gannu, R.; Вишну, YV; Кишан, В.; Rao, YM In vitro проникване на карведилол през свинска кожа: Ефект на носители и подобрители на проникване. PDA J. Pharm. Sci. техн. 2008, 62, 256–263.

50. Kshirsagar, SJ; Бхалекар, MR; Mohapatra, SK Разработване и оценка на заредена с карведилол трансдермална система за доставяне на лекарства: In-vitro и in-vivo изследване за характеризиране. Drug Dev. Ind. Pharm. 2012, 38, 1530–1537. [CrossRef]

51. Tanwar, YS; Чаухан, CS; Sharma, A. Разработване и оценка на карведилол трансдермални пластири. Acta Pharm. 2007, 57, 151–159. [CrossRef] [PubMed]