Имунни отговори на гостоприемника към протеини на повърхностния S-слой (SLP) на Clostridioides Difficile

Резюме:

Clostridioides difficile, нозокомиален патоген, е нововъзникващ чревен патобионт, причиняващ свързана с антибиотици диария. Инфекцията с C. difficile включва чревна колонизация и разрушаване на чревната епителна бариера, което води до индуциране на възпалителни/имунни реакции. Експресията на два основни екзотоксина, TcdA и TcdB, е основната причина за патогенността на C. difficile. Прикрепването на изобилни протеини на бактериална клетъчна стена или протеини на повърхностния S-слой (SLPs) като SlpA с епителните клетки на гостоприемника е критично за вирулентността. Освен че са токсини, е доказано, че тези повърхностни компоненти са силно имуногенни. Последните проучвания показват, че C. difficile SLPs играят важна роля в адхезията на бактериите към чревните епителни клетки, разрушаването на плътните връзки и модулирането на имунния отговор на клетките гостоприемници. Тези протеини могат да служат като нови цели за ваксини и нови терапевтични средства. Този преглед обобщава нашето текущо разбиране за имунологичната роля на SLP в индуцирането на имунитета на гостоприемника и тяхното използване при разработването на ваксини и нови терапевтични средства за борба с инфекцията с C. difficile.

cistanche tubulosa - подобряват имунната система

Щракнете тук, за да видите продуктите Cistanche Enhance Imunity

【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Ключови думи:

диария, свързана с антибиотици; протеини на клетъчната стена; терапевтици; S-слой протеини; ваксина

1. Въведение

Clostridioides difficile, анаеробна бактерия, произвеждаща токсини, е важен опортюнистичен и вътреболничен патобионт в червата, който причинява симптоми на заболяване в резултат на смущения в здравия микробиом, дължащи се на множество фактори, включително употреба на антибиотици, генетични, експозиционни, микробни, и други фактори на гостоприемника [1]. Селекцията и пролиферацията на C. difficile предизвикват животозастрашаващо състояние на псевдомембранозен колит [2,3]. Според последните оценки от доклада на Центъра за контрол и превенция на заболяванията от 2019 г., C. difficile е причинил 223 900 инфекции и 12 800 смъртни случая през 2017 г. със загуба от 1 милиард долара само в Съединените щати [4]. Лечението на първия епизод на инфекция с C. difficile (CDI) се постига с антибиотици. Заболяването обаче има високо ниво на рецидиви - 20-30% след първото лечение на първоначален CDI и повече от 50% след първия рецидив [5]. Следователно е необходима спешна терапевтична интервенция за борба с CDI в световен мащаб. Един от основните молекулярни фактори за патогенезата на C. difficile е експресията и секрецията на два основни токсина, TcdA и TcdB, кодирани от гените, разположени в рамките на 19.6-kb патогенен локус (PaLoc) в C. difficile геном [6]. Регулирането на производството на токсини и различните транскрипционни фактори, участващи в производството на токсини, са разгледани подробно от Chandra et al. другаде [6].

Патогенезата на CDI започва с поглъщане/поникване на спори на C. difficile във вегетативни клетки, които покълват в червата, където пролиферират и колонизират чревната лигавица [1,6]. Чревната мукозна бариера (IMB) е първата линия на вродена защита срещу патобионтите. IMB гостоприемникът се състои от различни видове епителни клетки, които са здраво свързани една с друга чрез тесни връзки и са покрити с дебел защитен слой слуз, секретиран от бокалисти клетки [1]. Разрушаването на IMB позволява на C. difficile да се прикрепи към повърхността на епителните клетки, където разработването на неговите вирулентни фактори води до увреждане и проява на патогенност на C. difficile [1,6]. Бактериалната клетъчна стена в много грам-положителни и отрицателни видове, включително C. difficile, е свързана с обилен повърхностно изложен слой от протеинови молекули, наречени протеини на повърхностния слой (протеини на S-слоя или SLPs), съставени предимно от изобилен протеин SlpA, състоящ се от домен с ниско и високо молекулно тегло, които са подредени като паракристален правилен двуизмерен масив, както се вижда чрез електронна микроскопия [7]. Други компоненти на протеина на клетъчната стена (Cwp) на SLP слоя са по-малко изобилни и слабо характеризирани, но също играят важна роля в патогенността на CD. През последните години изследванията върху SLP привличат повишено внимание, тъй като е доказано, че тези протеини играят ключова роля в повърхностната адхезия, активирането на Toll-подобни рецептори, индуцирането на производството на цитокини и активирането на инфламазома като част от имунния отговор на гостоприемника, освен техните роля в растежа и оцеляването на бактерията [7–9].

В този преглед ние обсъждаме имунния отговор на гостоприемника към основните компоненти на SlpA и други по-малко изобилни Cwps в светлината на последните познания за SLPs на C. difficile и подчертаваме техния потенциал за използване като нова ваксина и терапевтична цел, изключително релевантна в патогенезата на CDI.

cistanche tubulosa - подобряват имунната система

2. Вродени имунни отговори на гостоприемника срещу CDI

Доказано е, че нетоксигенните щамове на C. difficile (NTCD) при колонизация в животински модели осигуряват защита срещу патогенните щамове на C. difficile. В началото на 1980 г. Wilson и Sheagren съобщават, че хамстери, колонизирани от щам NTCD след стерилизация с антибиотик цефокситин, са били защитени, когато са заразени с токсигенен щам C. difficile (TCD) [10]. Въпреки това, лечението с други видове, като C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes и убит от топлина нетоксигенен щам C. difficile NTCD, не успя да защити срещу CDI. Освен това, защитата беше загубена, когато колонизиращият NTCD беше стерилизиран чрез лечение с ванкомицин преди предизвикателството [11]. Окуражени от тези открития, спорите на щама NTCD-M1 са използвани при ограничен брой клинични пациенти, страдащи от рецидивиращ CDI (rCDI) със значителен успех (около 50%) [12]. Понастоящем възможностите за лечение на CDI са ограничени и силно разчитат на употребата на антибиотици, като ванкомицин, фидаксомицин и метронидазол [13,14]. Прекомерната употреба на антибиотици води до дисбиоза на здравия микробиом и допълнително подпомага селекцията на патобионти като C. difficile, които могат да рецидивират по-късно [1,15]. За да се заобиколят ефективно тези предизвикателства, алтернативните методи на лечение се нуждаят от незабавно внимание. Някои от тези възможности за лечение включват неутрализиране на токсините на C. difficile с помощта на моноклонални антитела срещу TcdB, като инфузия на безлотоксумаб, която предотвратява медиираното от токсина увреждане на чревния епител [16]. Друг завладяващ метод е възстановяването на здрав микробиом чрез трансплантация на фекална микробиота (FMT) от здрав донор сред най-близките членове на семейството. FMT показа обещаващи резултати срещу повтарящи се CDI с успеваемост до 90% [17,18]. За съжаление, тези проучвания не разглеждат ролята на имунния отговор на гостоприемника в защитата на тези пациенти. Следователно може да се твърди, че живият NTCD секретира някои антигени/компоненти на клетъчната стена, които предизвикват силен имунен отговор срещу токсигенния TCD. По същия начин FMT защитата е слабо дефинирана. Следователно разбирането как въвеждането на FMT индуцира отговорите на гостоприемника може да помогне при идентифицирането на ключови антигени, което от своя страна може да помогне за по-доброто разбиране на имунния отговор и разработването на нови ваксини срещу CDI.

В червата вродената имунна система на гостоприемника е първата линия на защита срещу нахлуващ патоген, който играе решаваща роля в оформянето и монтирането на здрав адаптивен имунен отговор на гостоприемника [1]. Вроденият отговор се състои основно от три части: (i) чревен епител и лигавичен слой (физическа бариера), (ii) антимикробни пептиди, които са екскреторен продукт на епителните клетки, клетките на Панет и някои членове на чревната микробиота (хим. бариера) и (iii) клетъчни отговори чрез набиране на вродени имунни клетки като неутрофили, еозинофили, макрофаги, вродени лимфоидни клетки (ILC) и дендритни клетки (DC), които са оркестрирани от множество вродени сигнални пътища за борба с нахлуващия патоген [ 1]. Клетките гостоприемници носят рецептори за разпознаване на образи (PRRs), като TLRs, на тяхната повърхност, които разпознават определени запазени бактериални сигнатури върху микроби, наречени патоген-асоциирани молекулярни модели (PAMPs). Тези PRR са известни също като Toll-подобни рецептори (TLR). При разпознаване на тези сигнали за опасност (PAMP) от TLR, клетката гостоприемник предизвиква имунен отговор. В това отношение е доказано, че Toll-подобен рецептор 4 (TLR4) разпознава сигнали за опасност от C. difficile, действие, което участва в инициирането на възпалителния отговор на гостоприемника. В този контекст е показано, че SLP на C. difficile взаимодействат с TLR на гостоприемника-4, докато флагелите на C. difficile взаимодействат чрез TLR5 [19,20].

Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система

3. S-слой протеини (SLPs) в C. difficile

През последното десетилетие протеините на повърхностния слой (S-слой) на C. difficile са получили значително внимание. SLP бяха идентифицирани за първи път от Kawata et al. през 1984 г. и представляват около 15% от общата клетъчна маса [21,22]. SLP се срещат в много различни прокариотни видове. По-голямата част от SLP са подредени на най-външната повърхност на клетките като единичен протеин в двуизмерен паракристален масив [7]. В C. difficile S-слоят се състои главно от хетеродимерни SlpA протеини. SlpA е хетеродимер, състоящ се от протеин с високо молекулно тегло (HMW) и протеин с ниско молекулно тегло (LMW), кодиран от един slpA ген; LMW SLP образува открития горен слой, докато HMW SLP образува долния слой. LMW SLP е уникален в C. difficile. В щама C. difficile 630 slpA локусът е 36,6 kb област, която съдържа 11 slpA паралога. Освен това има допълнителни 17 паралога, които са разпръснати из целия геном [23,24]. Тези паралогични гени сега се наричат ​​протеини на клетъчната стена на клостридиите (CwpX), където X обозначава идентифицирания номер на паралог (X=1–29) и са описани в Таблица 1. Въпреки това, четири характеризирани преди това Cwps, известни като SlpA, Cwp66, Cwp84 и CwpV са именувани преди тази нова конвенция за именуване да бъде приета [23]. Всички Cwps са типични протеини, които съдържат N-терминален сигнален пептид и три предполагаеми домена на свързване на клетъчната стена със значително сходство с HMW SLP [25,26]. Различни щамове на C. difficile са показали вариации в slpA локуса и са документирани около 12 различни типа S-слой касети. Другите 28 Cwps действат като спомагателни компоненти, които са закотвени в полимеризирания паракристален слой, който представлява ~ 5–20% от S-слоя [7].

Таблица 1. Предполагаеми функции на 29 чашкови гени, открити в генома на Clostridium difficile 630.

Таблица 1. Прод.

4. Експресия и щамови вариации на протеини от клетъчна стена

В C. difficile щам 630 се съобщава, че се експресират около девет Cwps кодиращи гена [25]. Докато гените cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 и cwp25 се експресират на повърхността на клетката при нормални условия на растеж [44], гените cwp66 и cwp5 се експресират, но не се откриват в екстракти от клетъчна повърхност. В отделно проучване Biazzo et al. анализирани чаши, които са разпръснати из генома на C. difficile. Те наблюдават, че гените cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 и cwp25 се експресират и имат добре запазени последователности, докато гените cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 и cwp29 имат значителни вариации в нивата на експресия между риботипове и са по-малко запазени [45]. Много slpA локусни гени показват значителна вариация между щамовете, особено повърхностно изложените региони. Например, slpA, cwp66, secA2 и cwp2, е показано, че имат голяма вариация в slpA локуса (който образува 10-kb касета); досега са открити 12 различни варианта на тази касета в резултат на хомоложна рекомбинация между различни генотипове [46]. Според Karjalainen et al., cwp66 показва само 33% идентичност между щамовете [26]. Вариантът cwp2 е заменен от 23,8 kb прогнозиран генен клъстер за гликозилиране на S-слой в slpA локуса [46]. SlpA е най-изобилният SLP, открит в екстрактите от клетъчната повърхност на C. difficile и е основната съставка на SLP на C. difficile. Зрелият протеин се разцепва след секреция на HMW и LMW протеинови форми чрез действието на протеаза Cwp84 за образуване на хетеродимерния комплекс H/L комплекс, който полимеризира за образуване на S-слой [47] (Фигура 1). Инактивирането на гена cwp84 в C. difficile 630∆erm доведе до S-слой, състоящ се само от незряла единична верига SlpA с променена морфология на колонията, което предполага важна роля на Cwp84 във формирането на зрелия S-слой [32]. Наличието на secA2 гена в slpA локуса е важно за транспортирането на SlpA и други Cwps през цитоплазмената мембрана [48].

Фигура 1. SLP на C. difficile медиират адхезията и активирането на имунните клетки. Зараждащият се SlpA пептид се разцепва от протеазата Cwp84 в LMW и HMW субединицата, която образува зрелия SlpA комплекс на SLP слоя на клетъчната стена [31–33]. SLP медиират адхезията чрез TLR4, нарушават плътното свързване на чревните епителни клетки и допълнително активират дендритни клетки/макрофаги, които от своя страна произвеждат различни цитокини и хемокини, водещи до индукция на Th1/Th2 и хуморален отговор [9,27]. Интерлевкин (IL), дендритни клетки (DC), нискомолекулно тегло (LMW), високомолекулно тегло (HMW), Toll-подобен рецептор 4 (TLR4).

5. Функции на протеините от S-слоя

SLPs участват в различни функции в биологията на C. difficile (вижте таблица 1), като клетъчна цялост, транспорт, образуване на пори и котви, разграждане, адхезия/инвазия на клетка гостоприемник, избягване на имунната система и защита от конкурентни микроорганизми [22] . Pechineet al. откри антитела срещу N-терминалните и С-терминалните домени на антигена Cwp66 в серума на пациенти, свързани със заболяване, свързано с Clostridium difficile (CDAD) [49]. В друго проучване Wright et al. разделиха Cwps с помощта на 2D-PAGE и идентифицираха няколко Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), които реагираха със серуми на пациенти, инфектирани с C. difficile риботип 017 щам, което предполага индукция на силен имунен отговор срещу SLPs [50]. Наскоро Kirk et al. идентифицира два щама C. difficile, които нямат S-слой и които не са податливи на бактериоцин, който образува пори и деполяризира конкуриращите се бактериални клетки. Въпреки това, тези щамове на C. difficile показват значително повишена чувствителност към лизозим и антимикробния пептид LL-37 и не предизвикват симптоми на заболяване на CDI в модел на инфекция на хамстер [51]. Скорошно проучване изследва ефектите на SlpA, изолиран от три токсикогенни щама (RT126, RT001, RT084) върху експресията на протеини с плътна връзка (TJ) и индуцирането на провъзпалителни цитокини в клетъчната линия на човешкия карцином на дебелото черво HT-29 . Лечението със SlpA значително намалява нивата на експресия на семейството claudins и JAM-A плътно свързващи протеини (Фигура 1) [9]. Освен това протеинът SlpA повишава нивата на експресия на TLR-4 и индуцира секрецията на TNF-, IL-1 и IL-8. Тези резултати показват, че медиираната от SlpA протеин патогенеза и индуцирани възпалителни реакции в червата [9]. Следователно е разумно да се твърди, че SLP са от съществено значение за патогенността и имунните отговори на C. difficile.

cistanche tubulosa - подобряват имунната система

6. Имунен отговор към SLPs

Последните изследвания изтъкнаха важната роля на SlpA не само за оцеляването и растежа на бактериите, но и за оформянето на имунния отговор на гостоприемника. Имунопротеомичните подходи показват наличието на анти-SLP антитела в серума на шест пациенти, заразени с C. difficile риботип 017, което предполага, че SLP протеините са имунодоминантни и се експресират по време на инфекция [50]. Проучване, ръководено от Bruxelles et al. показаха повишено ниво на анти-SlpA антитела при пациенти с CDI в сравнение със здрави пациенти [52]. В друго проучване Negm et al. откриха IgG антитела в серуми от общо 327 индивида с CDI срещу SLP екстракти от различни щамове на C. difficile [53]. В допълнение към SlpA, откритият С-терминален домен на втория най-изобилен протеин Cwp66 е силно променлив, докато N-терминалният домен е добре запазен. Доказано е, че вариабилните С-терминални домени на Cwp66 и Cwp84 са имуногенни при хора [49,54]. В допълнение, при пациенти с CDI, средните общи нива на анти-Cwp66 и анти-Cwp84 са по-ниски от здравата контролна група, което предполага защитната природа на антителата. Следователно, SLP, по-специално SlpA, и други компоненти имат важна роля в имунната защита и са потенциални цели за имунотерапевтично развитие и разработване на ваксини, както е описано в следващите раздели.

7. SLPs посредничат при адхезия на C. difficile

C. difficile инициира инфекция чрез прилепване към чревните епителни клетки, което води до колонизация. В това отношение бактериалните SLP като SlpA и Cwp66 играят критична роля в адхезията. Съобщава се, че вариациите в SLPs, специално SlpA в изолирани щамове на C. difficile, показват промени в прилепването [55]. Доказано е, че SLPs свързват различни клетъчни линии, като човешки стомашно-чревни клетъчни линии на Hep-2 и Vero клетки, и много протеини от извънклетъчния матрикс. Освен това, лечението с анти-HMW-SLP антитела инхибира прилепването на C. difficile. В допълнение, предварителното третиране на клетките гостоприемници или с пречистени SlpA субединици, или с анти-SlpA антитела също предотвратява прилепването на C. difficile [55]. Най-големият член-хомолог на семейството протеини SlpA е протеинът CwpV, който се експресира по фазово променлив начин. В отделно проучване беше показано, че С-терминалният повтарящ се домен на протеина CwpV медиира агрегацията на C. difficile. Освен това, този домейн варира между щамовете и са идентифицирани пет антигенно различни типа повторения [40].

Доказано е, че друг имуногенен протеин, наречен Cwp66, има адхезионни свойства. Пречистен Cwp66 и антитела срещу N-терминалните и С-терминалните домени инхибират адхезията на C. difficile към култивирани Vero клетки, което предполага адхезионните свойства на Cwp66 [29].

8. Индуциране на възпалителни реакции

Бианко и др. демонстрира ролята на SLPs в процеса на възпаление. В това проучване SLPs от хипервирулентни и епидемични (H/E) или не-H/E щамове на C. difficile бяха пречистени и изследвани в човешки моноцити и дендритни клетки, получени от моноцити (MDDCs) по отношение на индукция на имуномодулаторни цитокини [интерлевкин (IL)-1 , IL-6 и IL- 10] [56]. Проучването демонстрира, че SLPs не само индуцират узряването на MDDCs, с повишена антиген-представяща активност, но също така индуцират секрецията на високи нива на IL-10. Въпреки това, не са открити значителни разлики в активирането на моноцити и MDDC от SLP препарати от H/E и не-H/E щамове, което предполага, че SLP не допринасят за повишената тежест на заболяването [56]. В друго проучване Ausiello et al. екстрахира SLP от клиничния изолат C253 и показа, че SLP индуцира секрецията на повишени нива на IL-1 и IL-6 провъзпалителни цитокини в моноцити в покой и индуцира съзряване на човешки MDDCs и засилена пролиферация на T клетки [57]. Освен това, тези третирани MDDC също освобождават повишени количества IL-10 и IL-12p70 и индуцират смесен Th1/Th2 имунен отговор. TLR -4 играе важна роля в SLP-медиираното активиране на DC. Беше демонстрирано, че SLPs не могат да активират DCs, изолирани от TLR4-мутантни C3H/HeJ мишки и не успяха да индуцират последващ Th имунен отговор, което предполага, че SLPs активират вродения и адаптивен имунитет, медииран от TLR4 рецептора [19]. В друго проучване беше демонстрирано в макрофаги, че SLP от C. difficile индуцират отговор на изчистване по отношение на секреция на провъзпалителни цитокини и хемокини с повишена миграция на макрофаги и фагоцитозна активност [58]. Лечението с инхибитор на р38 обърна тези отговори, което предполага ролята на сигналните молекули в SLP-медиираните отговори [58]. Съвсем скорошно проучване съобщава за активиране на инфламазома от C. difficile SLPs по дозозависим начин. Освен това беше доказано, че богатите на холестерол микродомени (липидни салове) върху клетъчните мембрани спомагат за свързването на SLP към клетъчната мембрана. Това се основава на флуоресцентна микроскопия, където е показано, че лечението с метил- -циклодекстрин (M CD), което изчерпва мембранния холестерол, намалява свързването на SLP, което предполага, че SLPs набират липидните салове, критични за колонизацията на C. difficile и активирането на инфламазома [59 ]. Тези проучвания твърдят, че C. difficile SLPs могат да активират вродените и адаптивни имунни отговори, които се медиират отчасти от TLR4, което предполага важна роля на SLPs в предизвикването на имунен отговор. Следователно, тези резултати също предполагат потенциала на SLP като кандидати за ваксина срещу CDI.

9. Отговори на антитела срещу CDI

Няколко имунологични проучвания показват, че инфекцията и резултатът от C. difficile зависят от интензивността на имунния отговор на гостоприемника, ключов фактор за патогенността на CDI. По този начин невъзможността да се развие силен отговор на антитела може да бъде прогноза за тежестта и рецидива на заболяването [60]. В тази връзка, нивата на антитела срещу основните токсини са корелирани с рецидивите и тежестта на заболяването [61,62]. Антитела срещу повърхностните компоненти на C. difficile са докладвани в серума на пациенти с CDI и в по-ранни проучвания [63]. Drudy и др. оценяват хуморалните имунни отговори към екстракти от SLP на C. difficile в група от 146 пациенти, включваща 55 пациенти с диария, свързана с C. difficile (CDAD), 34 пациенти с асимптоматични носители и 57 контролни субекта [64]. Проучването изолира екстракция на фракции с високо и ниско MW на SLPs, които съдържат главно изобилния протеин SlpA. Те измерват серумните антитела с помощта на ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) в тази кохорта и не откриват значителни разлики в серумните нива на IgM, IgA или IgG антитела. Интересното е, че пациентите с повтарящи се епизоди на CDAD имат значително по-ниски нива на IgM-anti-SLP, отколкото пациентите с единични епизоди. Проучването заключава, че трябва да се направят допълнителни проучвания за определяне на отговорите на специфични анти-SLP антитела и проучвания за защита, използващи C. difficile SLP [64].

Пасивната и активна имунизация с използване на изолирани екстракти от HMW и LMW SLPs показаха окуражаващи резултати с повишени нива на оцеляване при смъртоносни модели на хамстери. O'Brien и др. демонстрират защитния отговор на анти-SLP антитела върху инфекция с C. difficile при хамстери, където преживяемостта е значително удължена в групите, третирани с анти-SLP, в сравнение с контролните групи [65]. Показано е, че защитният ефект на антисерума е чрез усилване на фагоцитозата на C. difficile [65]. Eidhin et al., използвайки активна имунизация, тества суров екстракт от SLP, съдържащ еквимоларни количества от компонентите LMW и HMW пептиди на SlpA като ваксина с различни системни и лигавични адюванти в златни сирийски хамстери и модели на мишки BALB/c. Проучването съобщава за умерена до слаба стимулация на антитела в рамките на различни режими и миши модели показват по-силни отговори на антитела към SLP в сравнение с хамстери [66]. В друго проучване Brunet al. изследва in vivo адювантната активност на два пептида, състоящи се от рецептор-свързващия домен на токсин А (TxA (C314)) и фрагмент от SLP-36 kDa от C. difficile щам C253 срещу фибронектин-свързващ протеин А (FnbpA ), защитен антиген на ваксина срещу Staphylococcus aureus [67]. Те оценяват отговора, използвайки интраназални и подкожни пътища и откриват, че и двата фрагмента повишават производството на циркулиращи анти-FnbpA IgG и IgA. Те заключават, че тези фрагменти, когато се използват като адюванти, различно влияят и поляризират имунната система [67]. В друго проучване Shirvan et al. генерира и експресира специфични рекомбинантни антитела срещу SLPs като Cwp66 и SlpA от C. difficile 630 протеини, използвайки фагов дисплей и показа, че тези рекомбинантни антитела реагират на SLPs и техните компоненти по щам-специфичен начин с висока специфичност [68].

Имунният отговор и защитата в модел на хамстер, използващ Cwp84 протеаза като антиген, са оценени чрез няколко имунизационни пътя [69]. Проучването установи диференциални титри на антитела въз основа на пътищата на имунизация. Най-добрата защита се наблюдава чрез ректалния път на имунизация. Освен това, имунизираните групи хамстери доведоха до 26% по-слаба и по-бавна чревна колонизация с C. difficile след заразяване с C. difficile със значително по-висок процент на оцеляване (33% по-висок) в сравнение с неимунизираните групи [69].

растение цистанче, повишаващо имунната система

10. SLP-базирани анти-C. difficile Therapeutics

Специфични терапевтични средства, базирани на антитела, за неутрализиране на C. difficile могат да бъдат ефективна стратегия. Kandalaft и др. използва антитела с единичен домейн за насочване към SLP [70]. Групата подготви панел от SLP-специфични еднодомейнови антитела (VHH) от хипервирулентен щам C. difficile QCD-32g58 (027 риботип). Техните резултати демонстрират редица VHHs, свързани с QCD-32g58 епитопи, разположени върху LMW субединицата на SLP с висок афинитет. Освен това те съобщават, че тези VHH имат специфичност на свързване към 001 и 027 риботипове и подгрупа от тези VHH антитела са широко реактивни на кръстосано към 012, 017, 023 и 078 риботипове. Показано е също, че тези VHH инхибират подвижността на C. difficile QCD-32g58 in vitro [70].

Разработването на друг прецизен антибактериален агент Av-CD291.2 от Kirk et al. се съобщава, че специфично убива C. difficile и предотвратява колонизацията при мишки [51]. Доказано е, че Av-CD291.2 убива различни изолати на C. difficile въз основа на наличието на SLP последователности в щамовете на C. difficile. Авторите твърдят, че са идентифицирали SLP нулеви мутанти, съдържащи точкова мутация в slpA гена, които са резистентни към Av-CD291.2 агенти. Тези мутанти също имаха спорулационни дефекти, но успяха да колонизират чревния тракт въпреки отслабването на вирулентността в модел на хамстер [51]. Освен това, те конструираха панел от Avidocin-CDs, който убива различни щамове на C. difficile по начин, зависим от последователността на SLP, което предполага важна роля на тези антибактериални базирани на SLPs за предотвратяване на CDI [51].

11. Заключителни бележки и критични въпроси без отговор

Приемникът развива силен специфичен имунен отговор срещу токсините и повърхностните компоненти на C. difficile. Доказано е, че SLP имат роля в клетъчната адхезия, индуцирането на различни цитокини чрез активиране на TLR4 и активирането както на вродените, така и на хуморалните имунни отговори. Необходими са обаче проучвания върху активирането на Т-клетъчните отговори от SLPs за по-нататъшно анализиране на ролята на CD4 и CD8 клетките. Въз основа на активирането на хуморалния отговор, тези неутрализиращи антитела срещу токсините и повърхностните компоненти могат да предотвратят клиничните признаци на CDI. Проучванията, използващи активна или пасивна имунизация срещу SLP, показват обещаващи резултати, което показва, че стратегията може да бъде доразвита в нови терапевтични средства срещу патогенността на CDI. Обърнато е голямо внимание на SlpA като кандидат за ваксина; въпреки това, поради високата променливост на последователността на SlpA между щамовете, ваксината може да не е ефективна срещу всички риботипове. Следователно може да са необходими ваксини, базирани на епитоп, за да се заобиколи този проблем. В това отношение еднодомейновите антитела (VHHs) срещу SLPs са жизнеспособни варианти, които свързват LMW-SLP субединицата на C. difficile с висока специфичност и е доказано, че инхибират подвижността на щамовете C. difficile. Понастоящем разбирането на механистичната роля на SLPs и техните паралози в CDI патогенезата, адхезията и Т-клетъчния отговор е все още в начален етап и до голяма степен остава неизследван. Необходими са по-нататъшни проучвания за дисекция на молекулярните функции и специфичните имунни отговори на SLPs, за да се подпомогне бързото разработване на нови цели за ваксина/лекарство и терапевтични средства за борба с инфекциите с C. difficile.

Препратки

1. Чандра, Х.; Sharma, KK; Туовинен, Охайо; Слънце, X.; Shukla, P. Pathobionts: Механизми на оцеляване, разширяване и взаимодействие с гостоприемника с фокус върху Clostridioides difficile. Чревни микроби 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Лоусън, Пенсилвания; Citron, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Прекласифициране на Clostridium difficile като Clostridioides difficile (Hall and O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Орен, А.; Garrity, GM Известие за промени в таксономичното становище, публикувано преди това извън IJSEM. Вътр. J. Syst. Еволюция Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Центрове за контрол и превенция на заболяванията. Заплахи от резистентност към антибиотици в Съединените щати, 2019 г. 2019 г. Налично онлайн: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (достъп на 8 септември 2022 г.).

5. Шийлдс, К.; Араухо-Кастило, RV; Теетира, TG; Алонсо, CD; Kelly, CP Повтаряща се инфекция с Clostridium difficile: От колонизация до излекуване. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Чандра, Х.; Sorg, JA; Хасет, DJ; Sun, X. Регулаторни транскрипционни фактори на патогенезата на Clostridioides difficile с фокус върху регулирането на токсините. Крит. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Банерджи, О.; Wilson, J.; Барвинска-Сендра, А.; Кърк, JA; Ваз, Ф.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; Ел Омари, К.; Вагнер, А.; et al. Структура и сглобяване на S-слоя в C. difficile. Нац. Общ. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Мори, Н.; Такахаши, Т. Характеристики и имунологични роли на протеини на повърхностния слой в Clostridium difficile. Ан. лаборатория. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Нури, М.; Азимирад, М.; Eslami, G.; Луха, Масачузетс; Ядегар, А.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Протеин А на повърхностния слой от хипервирулентни риботипове на Clostridioides difficile индуцира значителни промени в генната експресия на плътни връзки и възпалителна реакция в човешки чревни епителни клетки. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Уилсън, KH; Sheagren, JN Антагонизъм на токсигенен Clostridium difficile от нетоксигенен C. difficile. J. Инфектирайте. дис. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Бориело, SP; Barclay, FE Защита на хамстери срещу Clostridium difficile илеоколит чрез предварителна колонизация с непатогенни щамове. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Сийл, Д.; Borriello, SP; Баркли, Ф.; Уелч, А.; Пайпър, М.; Bonnycastle, M. Лечение на рецидивираща диария от Clostridium difficile чрез прилагане на нетоксигенен щам. Евро. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Джонсън, С.; Lavergne, V.; Скинър, AM; Gonzales-Luna, AJ; Гари, KW; Кели, CP; Насоки за клинична практика на Wilcox, MH от Американското дружество по инфекциозни болести (IDSA) и Американско дружество за здравна епидемиология (SHEA): 2021 г. Фокусирани актуализирани насоки за управление на инфекция с Clostridioides difficile при възрастни. Clin. заразявам. дис. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. Ван Прен, Й.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Христеа, А.; Guery, B.; Крутова, М.; Норен, Т.; Allerberger, F.; Coia, JE; et al. Европейско дружество по клинична микробиология и инфекциозни болести: Актуализация за 2021 г. на документа с насоки за лечение на инфекция с Clostridioides difficile при възрастни. Clin. Microbiol. заразявам. 2021, 27 (Допълнение 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Вардакас, KZ; Polyzos, KA; Патуни, К.; Рафаилидис, PI; Самонис, Г.; Falagas, ME Неуспех на лечението и рецидив на инфекция с Clostridium difficile след лечение с ванкомицин или метронидазол: систематичен преглед на доказателствата. Вътр. J. Antimicrob. Агенти 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: Нова терапия с моноклонални антитела за предотвратяване на рецидивираща инфекция с Clostridium difficile. Биология 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Систематичен преглед с мета-анализ: Дългосрочни резултати от трансплантация на фекална микробиота за инфекция с Clostridium difficile. Храна. Pharmacol. Там. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Курайши, Минесота; Видлак, М.; Бхала, Н.; Мур, Д.; Цена, М.; Шарма, Н.; Iqbal, TH Систематичен преглед с мета-анализ: Ефикасността на трансплантацията на фекална микробиота за лечение на рецидивираща и рефрактерна инфекция с Clostridium difficile. Храна. Pharmacol. Там. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Райън, А.; Линч, М.; Smith, SM; Аму, С.; Nel, HJ; McCoy, CE; Даулинг, JK; Дрейпър, Е.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; et al. Роля на TLR4 при инфекция с Clostridium difficile и разпознаване на протеини на повърхностния слой. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Джоливот, Пенсилвания; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagella активира предимно TLR5-свързан NF-κB път в епителните клетки. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Кавата, Т.; Такеока, А.; Такуми, К.; Masuda, K. Демонстрация и предварителна характеристика на правилен масив в клетъчната стена на Clostridium difficile. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Сара, М.; Sleytr, UB S-слой протеини. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Покстън, IR; Fairweather, NF Предложена номенклатура за протеини на клетъчна стена на Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Моно, М.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Мартин-Верстраете, И.; Dupuy, B. Реанотация на геномната последователност на Clostridium difficile щам 630. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Калаби, Е.; Уорд, С.; Рен, Б.; Пакстън, Т.; Панико, М.; Морис, Х.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Молекулярна характеристика на протеините на повърхностния слой от Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Карялайнен, Т.; Waligora-Dupriet, AJ; Черкети, М.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Маури, П.; Mastrantonio, P. Молекулярен и геномен анализ на гени, кодиращи повърхностно закотвени протеини от Clostridium difficile. заразявам. имунна. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Уилинг, SE; Кандела, Т.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Fagan, RP; Fairweather, повърхностните протеини на NF Clostridium difficile са закотвени към клетъчната стена, използвайки CWB2 мотиви, които разпознават анионния полимер PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Брадшоу, WJ; Kirby, JM; Робъртс, Аляска; Шон, CC; Acharya, KR Cwp2 от Clostridium difficile проявява разширена тридомейнова гънка и клетъчна адхезия in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Характеризиране на протеин на клетъчната повърхност на Clostridium difficile с адхезивни свойства. заразявам. имунна. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Джоу, Q.; Рао, Ф.; Чен, З.; Cheng, Y.; Джан, К.; Джан, Дж.; Гуан, З.; Хей.; Ю, В.; Cui, G.; et al. Генът cwp66 влияе върху клетъчната адхезия, устойчивостта на стрес и антибиотичната резистентност при Clostridioides difficile. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Данг, TH; де ла Рива, Л.; Fagan, RP; Storck, EM; Излекувай, WP; Janoir, C.; Феъруедър, NF; Tate, EW Химични проби на биогенезата на повърхностния слой в Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Кърби, JM; Ahern, H.; Робъртс, Аляска; Кумар, В.; Фрийман, З.; Ачаря, КР; Shone, CC Cwp84, свързана с повърхността цистеинова протеаза, играе роля в узряването на повърхностния слой на Clostridium difficile. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, свързан с повърхността протеин на Clostridium difficile, е цистеинова протеаза с разграждаща активност върху протеини на извънклетъчния матрикс. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Усеник, А.; Ренко, М.; Михелиц, М.; Линдич, Н.; Боришек, Й.; Пердих, А.; Претнар, Г.; Мюлер, У.; Turk, D. Модулът за закрепване на клетъчната стена CWB2 се разкрива от кристалните структури на протеините на клетъчната стена на Clostridium difficile Cwp8 и Cwp6. Структура 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Вероятностен модел на локално подравняване на последователности, който опростява оценката на статистическата значимост. PLoS компютър. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Луо, Й.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Хейнс, Калифорния; Финлей, BB; Strynadka, NC Кристална структура на ентеропатогенен интимин-рецепторен комплекс Escherichia coli. Nature 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. де ла Рива, Л.; Уилинг, SE; Тейт, EW; Fairweather, NF Роли на цистеинови протеази Cwp84 и Cwp13 в биогенезата на клетъчната стена на Clostridium difficile. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 домейни: сложност в умереност. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Сипеки, С.; Koprivanacz, K.; Такач, Т.; Kurilla, A.; Ласло, Л.; Вас, В.; Buday, L. Нови роли на SH2 и SH3 домейни в липидното свързване. Клетки 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Рейнолдс, CB; Емерсън, JE; де ла Рива, Л.; Fagan, RP; Fairweather, NF Протеинът на клетъчната стена на Clostridium difficile CwpV е антигенно променлив между щамовете, но проявява запазена функция за насърчаване на агрегацията. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Брадшоу, WJ; Kirby, JM; Робъртс, Аляска; Шон, CC; Acharya, KR Молекулярната структура на гликозид хидролазния домен на Cwp19 от Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Джу, Д.; Бълок, Дж.; Хей.; Sun, X. Cwp22, нов пептидогликанов омрежващ ензим, играе плейотропна роля в Clostridioides difficile. Environ. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Фин, РД; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Еди, SR; Mistry, J.; Мичъл, Алабама; Потър, SC; Пунта, М.; Куреши, М.; Санградор-Вегас, А.; et al. Базата данни на Pfam протеинови семейства: Към по-устойчиво бъдеще. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Райт, А.; Чакай, Р.; Бегум, С.; Crossett, B.; Nagy, J.; Браун, К.; Fairweather, N. Протеомен анализ на протеини на клетъчната повърхност от Clostridium difficile. Протеомика 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Биацо, М.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Теде, В.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Пица, М.; Barocchi, MA; Скарсели, М.; Galeotti, CL Разнообразие от cwp локуси в клинични изолати на Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Дингъл, К.Е.; Диделот, X.; Ансари, Масачузетс; Eyre, DW; Vaughan, A.; Грифитс, Д.; Ip, CL; Batty, EM; Голубчик, Т.; Боудън, Р.; et al. Рекомбинационно превключване на S-слоя на Clostridium difficile и нов клъстер на ген за гликозилиране, разкрит чрез мащабно секвениране на целия геном. J. Инфектирайте. дис. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Кази, О.; Svergun, DI; Браун, Калифорния; Fairweather, NF Структурни прозрения в молекулярната организация на S-слоя от Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile има две паралелни и основни секреторни системи Sec. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Пешине, С.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmée, М.; Collignon, A. Имунологични свойства на повърхностните протеини на Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Райт, А.; Друди, Д.; Kyne, L.; Браун, К.; Fairweather, NF Имунореактивни протеини на клетъчната стена на Clostridium difficile, идентифицирани от човешки серуми. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Кърк, JA; Гебхарт, Д.; Бъкли, AM; Лок, С.; Шол, Д.; Douce, GR; Говони, GR; Fagan, RP Нов клас прецизни антимикробни средства предефинира ролята на S-слоя на Clostridium difficile във вирулентността и жизнеспособността. Sci. Превод Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Брюксел, JF; Мизрахи, А.; Хойс, С.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Имуногенни свойства на прекурсора на повърхностния слой на Clostridium difficile и тестове за ваксинация при животински модели. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Негм, Охайо; Хамед, MR; Dilnot, EM; Шон, CC; Маршаловска, И.; Линч, М.; Loscher, CE; Едуардс, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; et al. Профилиране на хуморални имунни отговори към Clostridium difficile-специфични антигени чрез протеинов микрочипов анализ. Clin. Ваксина Имунол. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Пешине, С.; Janoir, C.; Collignon, A. Променливост на повърхностните протеини на Clostridium difficile и отговор на специфични серумни антитела при пациенти с болест, свързана с Clostridium difficile. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Мериган, ММ; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Малози, MJ; Roxas, BA; Гердинг, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Протеин А на повърхностния слой (SlpA) е основен фактор за прилепването на клетката гостоприемник на Clostridium difficile. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Бианко, М.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Барбанти, Ф.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Имуномодулаторни активности на протеини от повърхностния слой, получени от епидемични и хипервирулентни щамове на Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Черкети, М.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Палацо, Р.; Насо, М.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Протеините на повърхностния слой от Clostridium difficile индуцират възпалителни и регулаторни цитокини в човешки моноцити и дендритни клетки. Микробите заразяват. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Колинс, LE; Линч, М.; Маршаловска, И.; Кристек, М.; Rochfort, K.; О'Конъл, М.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Протеините на повърхностния слой, изолирани от Clostridium difficile, предизвикват реакции на изчистване в макрофагите. Микробите заразяват. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Чен, Й.; Хуанг, К.; Чен, LK; Wu, HY; Хсу, Кипър; Цай, YS; Ко, WC; Tsai, PJ Мембранният холестерол е от решаващо значение за Clostridium difficile свързване с протеини на повърхностния слой и задействане на активиране на инфламазома. Преден. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Можем ли да идентифицираме пациенти с висок риск от рецидивираща инфекция с Clostridium difficile? Clin. Microbiol. заразявам. 2012, 18 (Допълнение 6), 21–27. [CrossRef]

61. Уулт, М.; Норен, Т.; Ljungh, A.; Åkerlund, Т. Отговор на IgG антитела към токсини А и В при пациенти с инфекция с Clostridium difficile. Clin. Ваксина Имунол. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Блеър, Б.; Лени, М.; Кнаубер, М.; Reilly, C.; Lowy, I.; Гердинг, DN; Кели, CP; Katchar, K.; Бакстър, Р.; et al. Серумното антитяло срещу токсин В корелира със защитата от рецидивираща инфекция с Clostridium difficile (CDI). Vaccine 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Пантости, А.; Черкети, М.; Вити, Ф.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Имуноблот анализ на реакцията на серумен имуноглобулин G към повърхностните протеини на Clostridium difficile при пациенти с диария, свързана с антибиотици. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Друди, Д.; Калаби, Е.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Кели, Е.; Феъруедър, Н.; Kelly, CP Отговор на човешки антитела към протеини на повърхностния слой при инфекция с Clostridium difficile. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. О'Брайън, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Макдоналд, GS; DB, NE; Kelleher, DP Пасивна имунизация на хамстери срещу инфекция с Clostridium difficile с помощта на антитела срещу протеини на повърхностния слой. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; О'Брайън, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Активна имунизация на хамстери срещу инфекция с Clostridium difficile с помощта на протеин от повърхностния слой. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Брун, П.; Скарпа, М.; Грило, А.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 и SLP-36kDa засилват имунния отговор към едновременно прилаган антиген. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Изолиране на рекомбинантни антитела, насочени срещу повърхностни протеини на Clostridium difficile. Браз. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Пешине, С.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Хойс, С.; Janoir, C.; Collignon, A. Имунизация на хамстери срещу инфекция с Clostridium difficile, използвайки протеазата Cwp84 като антиген. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Кандалафт, Х.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Насочване към протеини на повърхностния слой с антитела с един домейн: потенциален терапевтичен подход срещу заболяване, свързано с Clostridium difficile. Приложение Microbiol. Биотехнология. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]