Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Моля, щракнете тук за част 1

3. Наночастици и наномедицина

Използването на наномащабни частици в медицината, особено като носители на терапевтични средства, има голям потенциал за лечение на много заболявания, поради многото им благоприятни свойства като размер, форма и повърхностна морфология [56]. Освен това нанотехнологиите позволяват умишлени вариации на дизайна, осигурявайки възможност за контролиране на техните свойства [37]. Тази ковкост на наночастиците (NP) позволява прикрепването на различни биомолекули, като по този начин позволява ефективното и безопасно транспортиране на фармакологично активни агенти, като гени или лекарства. Средствата за доставяне на NP с размер 1–100 nm имат способността да проникват през значителни физиологични бариери като тези, открити в белите дробове, черния дроб, стомашно-чревната течност, кръвта, туморната васкулатура, лигавичните мембрани и кръвно-мозъчната бариера [57–59] . Различни NP са използвани в това отношение, като всеки описва своите уникални характеристики като терапевтичен, диагностичен или тераностичен инструмент. Способността за конюгиране на терапевтични нуклеинови киселини и лекарства с NPs отвори пътища в специфични за целтананомедицина. Освен в медицината, НЧ могат да се използват в козметиката, опаковките, електрониката и биотехнологиите. NPS могат да бъдат класифицирани като органични, базирани на въглерод или неорганични NP.

невропротективни ефекти на екстракта от цистанче

Биосъвместимостта разчита на физикохимичните свойства на NPS, като всеки NP показва отличителни свойства. Модифицирането на NPs с полимери и насочващи лиганди може да подобри афинитетите на свързване с гена или лекарството, което се конюгира [60], в допълнение към клетъчно-специфичното усвояване. Благородните метали, злато (Au), сребро (Ag), платина (Pt) и паладий (Pd), са често използвани поради техните благоприятни физикохимични, биологични и оптични свойства [58,61]. Физикохимичните свойства на AuNP са лесно регулируеми за клинично приложение [62]. Те демонстрират обещаващи резултати при различни заболявания, включително едра шарка, рак, сифилис, СПИН и кожни язви [63], и също така са използвани за откриване на индуцирани от медни йони агрегирани А пептиди [64]. AgNP притежават антимикробни и антивирусни свойства, които са били използвани като предварително лечение на инфекции на рани [65]. Използването на немодифицирани AgNPs като превозни средства за доставка е възпрепятствано от тяхната склонност към агрегиране и увеличаване на размера [66]. Pd се използва по-често в стоматологията, където е част от състава на електрическото оборудване [61,67]. Биметални Au-Pd NPS, модифицирани с кверцетин, са изследвани като възможни индуктори на автофагия вАлцхаймерзаболяване[68]. Pt е добър антиоксидант за намаляване на свободните радикали [58] и е част от противораковите лекарства цисплатин и оксалиплатин, за които се съобщава за известна невротоксичност [69].

cistanche phelypaes: предотвратяваБолест на Алцхаймер

Селенът (Se), основен микроелемент, е необходим на всички организми за различни биологични функции, като добавянето на Se се съобщава за намаляване на случаите на сърдечно-съдови заболявания, остеоартрит, диабет тип 2 иневродегенеративнизаболяваниякато AD [70,71]. Se NP притежават благоприятни свойства, включително противоракови и антиоксидантни свойства на Se, като същевременно показват по-ниска цитотоксичност, по-добра бионаличност, биосъвместимост и биоразградимост in vivo [71,72]. Поради техния потенциален синергичен ефект с терапевтичния ген или лекарство, тези NPs стават все по-популярни. Прилагането на мезопорест силициев диоксид NPs (MSNs) като нано-доставящи средства набра значителна скорост поради техните порести структури, които предлагат както вътрешни, така и външни увеличени повърхностни площи за терапевтичен товар [73,74]. Тази пореста природа на MSN позволява възможното комбинирано доставяне на терапевтични гени и лекарства, което може да подобри биологичната активност [75]. Капсулираните с кверцетин силициеви NP са показали потенциал срещу Cu-индуциран оксидативен стрес, наблюдаван приневродегенеративнизаболявания [76]

Железните оксиди, обикновено наричани магнитни NPs (MNPs), включително магхемит, магнетити и ферити, са широко изследвани внаномедицинапоради тяхната ниска цитотоксичност, биоразградимост, стабилност, магнетизация, биосъвместимост, ниска чувствителност към окисляване и реактивни повърхности, неканцерогенност и лесен синтез и модификация [77]. Специфичното за целта доставяне на MNP може да бъде постигнато чрез процеса на магниторецепция, който използва външно магнитно поле, за да ръководи тяхното доставяне. Тяхното приложение е разширено до магнитна хипертермия, магнитно резонансно изображение (MRI) и системи за доставяне [78,79]. Въпреки това, немодифицираните MNPs са хидрофобни и могат да агрегират и генерират реактивни кислородни видове, ограничавайки тяхната in vivo ефикасност [80].

Квантовите точки (QD) имат уникални оптични свойства, но поради техния състав, който често включва метали като кадмий и цинк, те са склонни да бъдат токсични. Това може да се преодолее с помощта на модифицирани КТ с ядро-обвивка или КТ с покритие [75]. Въглеродните нанотръби, едностенни или многостенни, могат лесно да навлязат в клетките. Въпреки това, без вътрешна или външна функционализация, те са неразтворими, цитотоксични, хидрофобни и имуногенни [81]. Използването на полимерни системи за доставяне се разви през годините, като катионните полимери се предпочитат поради способността им да свързват анионни молекули като нуклеинови киселини. В допълнение, избраните полимери трябва да бъдат биосъвместими, биоразградими и стабилни in vivo [75]. Следователно, полимери като дендримери са популярни поради многото си катионни групи. Те са допълнително използвани като подходящи стабилизатори на метални NPs като AuNPs [82,83]. Поли (млечна ко-гликолова киселина), полимер, одобрен от Администрацията по храните и лекарствата (FDA), показа добри свойства за използване при доставяне на лекарства в комбинация с Au [84], докато неговите ПЕГилирани производни са изследвани в AD [ 85]. От базираните на липиди NP, липозомите обикновено се използват за доставяне на биоактивни съединения, като някои положителни резултати са отбелязани при животински модели за AD [86,87].

Като цяло, неорганичните NPs в повечето случаи притежават предимство пред техните органични аналози, особено по отношение на лекотата на синтеза и подходите за функционализация, размера, стабилността и техния тераностичен потенциал. Всички споменати по-горе NP са показали потенциал внаномедицинаи може да се разшири до неврологични разстройства като AD и PD. Като цяло, за да бъдат тези наносистеми подходящи, предварително определените свойства на NP трябва да бъдат разгледани и приоритизирани [88], както е илюстрирано на фигура 3.

ползи за здравето на cistanche: Предотвратяваненевродегенеративнизаболявания

3.1. Предизвикателства пред наночастиците

Използването на NPS не идва без предизвикателства, особено когато се разглежда използването им като терапевтични средства за доставяне наневродегенеративнизаболявания. Освен BBB, който представлява най-голямото препятствие за терапевтичните средства, невротоксичността, дължаща се на нано-доставящи системи, също поражда опасения за безопасността [89]. Тази невротоксичност обикновено се отбелязва от генерирането на оксидативен стрес и зависи предимно от морфологията, размера, повърхностната площ, разтворимостта, концентрацията и продължителността и начина на нанотерапевтично приложение [90]. Въпреки че някои метали играят основна роля в човешкото тяло, натрупването и агрегацията на метални NP може да бъде причина за безпокойство. Използвайки невронния модел на PC12 клетки, по-рано беше съобщено, че железните НЧ предизвикват значителна цитотоксичност [91], докато мангановите и Cu НЧ генерират реактивни кислородни видове [92]. Използването на NPs от цинков оксид индуцира апоптоза в невронни стволови клетки [93], докато пероралното приложение на Ag NPs е токсично и се натрупва в бъбреците, черния дроб и мозъка при плъхове Sprague Dawley [94]. В допълнение, прилагането на NPs на железен оксид към модели на мишки предизвиква оксидативен стрес, невродегенерация [95], зависима от клетъчния цикъл невронална апоптоза [96] и невроповеденческа токсичност [97].

Въпреки тези предизвикателства, физикохимичните свойства на NP, както беше споменато по-рано, ги правят привлекателни кандидати внаномедицина. За да се преодолеят някои от тези предизвикателства, съставите на NP трябва да включват биосъвместими материали, които също са биоразградими и лесно се отделят от системата [98]. Способността им да пресичат BBB е описана допълнително в раздел 3.2. В допълнение, доказаната токсичност често зависи от вида на използвания NP, като повърхностните функционализации са път напред за намаляване на неблагоприятните ефекти и взаимодействия. Следователно няма „един размер за всички“ по отношение на избора на NP и неговото приложение. От съществено значение е да се идентифицират предимствата и недостатъците, свързани с използването предимно на метали и неметални носители, като се има предвид, че много метали са необходими в тялото, както беше споменато по-рано. Следователно, използваната концентрация ще бъде критична за поддържане на хомеостатичното равновесие. Използването на целенасочени подходи при лечението на AD и PD ще бъде от решаващо значение, тъй като клетъчно-специфичното насочване е от съществено значение за лечението на увредени или мутирали гени, като същевременно се поддържа целостта на нормално функциониращите гени и клетки. Въпреки това е ясно, че е необходимо по-задълбочено изследване на NPS при формулирането на терапевтични средства за ЦНС. Понастоящем има недостиг на информация за невротоксичността на NP, което предполага спешна необходимост от допълнителни изследвания както in vitro, така и in vivo, за да се осигури основа, около която могат да бъдат проектирани бъдещи проучвания. Използването на нововъзникващи технологии, особено в silico изследванията, компютърното и математическото моделиране, заедно с по-големите познания в областта на биоинформатиката, може да помогне при предизвикателствата, пред които е изправеннаномедицинапри формулирането на идеална НП.

екстракт от Cistanche deserticola

3.2. Преминаване на кръвно-мозъчната бариера

Кръвно-мозъчната бариера (BBB) ​​е динамична граница, която изпълнява самозащитна роля при модулирането на транспорта на биомолекули от кръвта в мозъка, като същевременно възпрепятства навлизането на токсични химикали и по-големи лекарства. Въпреки че тази роля е много полезна, тя служи като пречка за настоящите терапии. BBB, специализирана част от съдовата система, се състои от базална ламина, включваща извънклетъчни матрични протеини (ламинин, хепаран сулфат или колаген), заедно с ендотелни клетки, перицити, астроцитни крайни крака и интерневрони [99]. Известно е, че съдовите, невронните и глиалните клетки взаимодействат, образувайки клетъчна мрежа, подходящо наречена невроваскуларна единица, която участва в поддържането на тъканната хомеостаза [100]. BBB е най-голямата бариера в ЦНС и има повърхност от 20 m2. Счита се за критично място за обмен на молекули между кръвта и ЦНС [101]. Тъй като NPS са малки (най-вече<200 nm)="" molecules,="" they="" have="" the="" advantage="" of="" being="" able="" to="" traverse="" this="" bbb.="" apart="" from="" size,="" properties="" such="" as="" charge,="" especially="" a="" positive="" charge,="" suitable="" surface="" functionalizations,="" the="" addition="" of="" targeting="" ligands="" such="" as="" cell-penetrating="" peptides="" and="" polyethylene="" glycol="" for="" improved="" circulation="" time="" in="" vivo="" imbue="" nps="" with="" the="" capacity="" to="" successfully="" cross="" the="" bbb="" [99].="" it="" has="" been="" observed="" that="" molecules="" penetrate="" the="" brain="" via="" the="" carrier-mediated="" transporter="" (cmt)="" (figure="" 4),="" which="" includes="" the="" glucose="" transporter="" (glut1),="" adenosine="" transporters="" (cnt2),="" large="" neutral="" amino-acid="" transporters="" (lat1),="" and="" monocarboxylic="" acid="" (mct1)="" [8].="" drug="" delivery="" of="" chemo-nanotherapeutics="" in="" the="" treatment="" of="" brain="" diseases="" portrayed="" the="" use="" of="" circulating="" cells,="" such="" as="" exosomes,="" erythrocytes,="" neutrophils,="" and="" leukocytes,="" which="" possess="" the="" ability="" to="" spontaneously="" cross="" the="" bbb="">

Фигура 4. Общи механизми за преминаване през BBB. (A) Медииран от носител транспортер, (B) медиирана от рецептор трансцитоза и (C) медиирана от адсорбция трансцитоза.

Други начини за влизане могат да се видят при рецептор-медиирана трансцитоза (RMT) и адсорбционно-медиирана трансцитоза (AMT) (Фигура 4) [103]. Първата транспортна система разчита на способността на NPs да бъдат модифицирани, за да притежават лиганди, позволяващи ефективното свързване към рецепторите, присъстващи в BBB. Лигандите могат да бъдат насочени към цели като GLUT1 или албуминови транспортери [104], лактоферинови (Lf) рецептори, LRP1) [105] или трансферинови рецептори (TfR) (използвайки трансферинов лиганд) [106]. Установено е, че TfR понякога е свръхекспресиран в невронни [107] и глиомни клетки [108]. Нивата на мозъчния трансферин обаче намаляват с възрастта и се наблюдава драматично намаление приневродегенеративнизаболявания като AD или PD [109]. Въпреки това, TfR предлага голямо обещание при доставянето на терапевтични агенти през кръвно-мозъчната бариера към мозъка [110]. По този начин RMT използва ролята на повърхностно маркирани наноносители за ефективно навлизане на нанокомплексите в мозъка. Въпреки това, изборът и концентрацията на прикрепения лиганд ще бъдат ограничаващи фактори, които ще определят успеха на ендоцитозата. Златни наносфери [111] и златни нанозвезди, конюгирани с проникващ в клетката пептид, демонстрират способността да преминават през BBB [112].

AMT обаче описва леко разнообразен механизъм на действие, тъй като използва електростатични взаимодействия между отрицателно заредените BBB и положително заредените NP [91]. Съобщава се, че украсеният със злато NP аглутинин от пшеничен зародиш е поет от нервните терминали и ретроградно транспортиран от аксоните до ЦНС [113]. Всички тези преносители на носители позволяват отслабването на ВВВ повърхностноактивните вещества, като по този начин разрушават връзките на ендотелните клетки и позволяват навлизането на NPS в мозъка. Изследвания върху мишки модели съобщават за липса на увреждане на мозъка [114,115]. Беше отбелязано обаче, че изборът на in vivo модел на заболяване за тестване на способността на NPs да преминават през BBB е от решаващо значение, тъй като пропускливостта на BBB може да се различава от гризачи до хора [99]. Обширните проучвания върху транспортните молекули позволяват на изследователите да създават терапевтични средства, които могат да използват естествените физиологични бариери за безопасно и ефикасно доставяне на фармакологично активни агенти в мозъка. Оптималните параметри за нанокомпозита, за да може да премине през BBB, бяха предложени като ниско молекулно тегло (<400 da),="" a="" suitable="" charge,="" log="" p="" <="" 2,="" non-ionization,="" the="" presence="" of="" hydrogen="" bonds="" (8–10),="" and="" lipophilicity="">

Освен използването на NPs при доставяне на лекарства, което показва известна in vivo нестабилност и имунни реакции поради интравенозното приложение на наносистемата, може да се обмисли използването на генна терапия, използваща носители на NP.

екстракт от Cistanche Tubolosa: против Паркинсонова болест

3.3. Генна терапия

Идеята за генна терапия датира от 60-те години на миналия век и е лечението или превенцията на заболяване или генетично заболяване с помощта на терапевтични нуклеинови киселини [116]. Въпреки високите нива на трансфекция, получени при използване на средства за доставяне на вируси, недостатъците, свързани с ниския капацитет на натоварване, широкомащабното производство, размера на гена, който може да носи, и факторите на безопасност на потенциалната онкогенност и имуногенност подтикнаха разработването на невирусни методи . Невирусните системи за доставяне на гени имат по-голяма способност да се насочват към клетки/тъкани, значително намалена онкогенна и имуногенна природа, повишена ефикасност на препарата на ниска цена, без ограничение за размера на генетичния товар и податливост на структурни манипулации [117]. ]. От невирусните носители, катионните полимери и конструкциите на базата на липиди, особено катионните липозоми, са били най-изследвани досега, като използването на неорганични NP сега набира скорост.

NPS може да преодолее както вътреклетъчните, така и извънклетъчните бариери, които възпрепятстват доставянето на ген. Тези бариери включват ядрено поглъщане, избягване на клирънс от ретикулоендотелната система (RES), ендозомно и лизозомно бягство, защита на генетичния товар от разграждане, освобождаване на нуклеинова киселина и насочване към специфични клетки [118]. Благодарение на неорганичните NPs, изобразяващи по-голямо съотношение повърхностна площ към обем с регулируеми магнитни, оптични и биологични свойства, те могат да бъдат проектирани да доставят гени с повишена ефикасност чрез модифициране на формата, химичния състав и размера. Идеалното средство за доставяне на ген трябва да притежава свойства като способността да разрушава ендозомалната мембрана, да пресича плазмената мембрана, да свързва, кондензира и защитава товара от нуклеинова киселина, да гарантира специфично за целта доставяне, да има стабилност в циркулацията и да може да избягват имунната система [118,119].

Обширните изследвания на патогенетичните механизми наневродегенеративниразстройства е довело до идентифициране на специфични генетични дефекти, замесени в прогресията на заболяванията. Генната терапия позволява доставянето на геномен товар, който включва микроРНК (miRNA), малка интерферираща РНК (siRNA), направляваща РНК (gRNA) и информационна РНК (mRNA). Проучванията показват успех в стратегиите за заглушаване на гени чрез РНК интерференция (RNAi), която използва siRNA, miRNA и piwi-взаимодействаща РНК, за да намали синтеза на целевите иРНК молекули [120]. Когато синтетични двойноверижни siPHK (с размер 21-25 нуклеотида) се трансфектират в клетки на бозайници, те се насочват към специфичните mRNA последователности с висока степен на специфичност, което води до заглушаване на ген [75]. Революцията на RNAi отвори нов път за терапевтична интервенция при широк спектър от заболявания, от рак доневродегенеративнизаболявания [75,121]. Като цяло, успешното приложение на siRNA-медиирано генно заглушаване в медицината би изисквало подходящо доставящо средство, за предпочитане наноносител, което би осигурило безопасното и ефикасно доставяне на siRNA. Редактирането на генома наскоро беше въведено в генната терапия и предвещава техника, която може директно да се насочи към анормални генетични промени в болни места [122].

Потенциална цел в генната терапия е анормалното натрупване на неправилно нагънати протеини като амилоид -олигомери и -синуклеин (Фигура 1), които генерират свързано с ендоплазмения ретикулум (ER) разграждане и ER стрес [123]. Агрегацията на тези протеини в ER лумена впоследствие причинява дестабилизиране на ER калциевата хомеостаза и изкривяване в сигнализирането на разгънатия протеинов отговор (UPR), което води до невронна смърт чрез проапоптотични отговори [124,125]. Това може да бъде преодоляно чрез насочване на UPR сигнализирането за подобряване на сгъването на протеини, както се вижда, когато PD е лекуван чрез насочване към намаляване на апоптозата на допаминергичните неврони и подобряване на двигателната ефективност, като по този начин забавя прогресията на заболяването. Това беше разрешено чрез генна терапия, която включваше насочване към свръхекспресията на BiP (глюкоза-регулиран протеин 78) ген, който е свързан с намаляване на разгънатия протеинов отговор [126]. Следователно стратегиите за заглушаване на гените могат да бъдат успешни в такива случаи.

Освен това, митохондриална респираторна дисфункция е отбелязана при заболявания като болестта на Хънтингтън (HD), AD, PD и ALS, което води до ограничено регулиране на качеството на митохондриите, NAD плюс изчерпване, оксидативно увреждане, протеинови агрегации, нарушен синтез на АТФ и небалансирани митохондриални калциева хомеостаза [127–129]. Установено е, че генната терапия преодолява това явление чрез инхибиране на митохондриалното увреждане или чрез насърчаване на митохондриалната биогенеза. Алтернативно, невротоксичността при експериментална HD и PD може да се регулира чрез свръхекспресия на регулатори на митохондриален оксидативен стрес и динамика, включително PGC-1, HSP70, TFEB [130,131].

Други механизми на патогенеза се наблюдават при анормално сигнализиране на рапамицин (mTOR) при PD, AD и HD, заедно с епигенетична дисрегулация, аутофагия и микроглиална и астроцитна дисфункция [132]. Всеки механизъм проявява уникални режими на дисфункция, дължащи се на прогресията на заболяването, и следователно е важно да се разбере кой механизъм е включен в пациент с тези заболявания, за да се приложи подходящо лечение с максимална ефикасност. Освен това генната терапия е доказала своята ефикасност при различни други заболявания. Следователно е голям претендент заневродегенеративнитерапия, след изследване на генетични аберации при пациенти с PD и AD.

Таблица 3 подчертава няколко от NPs, използвани за генна терапия на ЦНС от 2017 до 2020 г. Успехът на такива експерименти разшири познанията зананомедицинавневродегенеративниразстройства, подпомагащи специфичното насочване на причиняващите гени или агрегирани протеини. Стратегиите за генна терапия, доставяни с помощта на вектори от наночастици, са привлекателни алтернативи, тъй като потенциално могат да задоволят много изисквания за безопасно и ефикасно доставяне през биологични бариери, особено кръвно-мозъчната бариера. Освен предимствата, описани в генната терапия, биологичният синтез на NPs се хвали със собствен набор от предимства по отношение на използваните специфични екстракти [133], които могат да работят синергично с терапевтичния ген.

3.4. Наномедицина в клинични изпитвания - актуализация

Проведени са няколко клинични изпитвания, използващи лекарства като инхибитори на секретазата и терапевтични антитела при AD, като само няколко са завършени, а повечето са прекратени [8]. Интересно е, че от 2003 г. насам има глобална липса на разработване на нови лекарства за AD [138]. Това беше очевидно и при скорошно търсене на библиотеката на NIH, като само две проучвания бяха свързани с доставката на NP. Един, озаглавен „Оценка на безопасността, поносимостта и ефикасността на интраназалните наночастици на APH-1105, нов алфа-секретазен модулатор за леко до умерено когнитивно увреждане, дължащо се наАлцхаймерзаболяване" трябва да започне едва през 2023 г. Второто изпитване, "Фаза 2, пилотно отворено, последователно групово, заслепено изследване на изследовател на магнитно-резонансна спектроскопия (31P-MRS) за оценка на ефектите на CNM-Au8 за биоенергийното подобрение на нарушено редокс състояние на невроните вПаркинсонзаболяване", започна през декември 2019 г. и беше планирано да приключи през юли 2021 г. [139]. Това проучване използва златни нанокристали. Въпреки че златните нанокристали бяха одобрени наскоро за лечение на множествена склероза [140], се очакват актуализации на настоящото проучване. Положително резултатите могат само да стимулират използването на NP в бъдещи разследвания.

цистанче тубулоза

4. Изводи

Наномедицинасе очертава като изключително ефикасно средство за преодоляване на бариерите, които все още са предизвикателство пред традиционната медицина. Комбинацията отнаномедицинаи генната терапия може да се използва за по-големи терапевтични ползи. Този преглед подчертава някои от гените, участващи в прогресирането на болестта на PD и AD, които могат да отворят перспективата за проучвания за генна терапия. По-доброто разбиране на причините за генетичните аберации и как те водят до невродегенерация може да доведе до персонализирани терапии в отговор на специфичен тип мутация, представен от индивид. Въпреки че лечението може да не е незабавно, такива изследователски проучвания формират стъпалото за създаване на стратегия за лечение, която един ден ще изкорени заболявания, свързани с увреждане на невроните, и ще помогне на милиони пациенти по света да живеят нормален и здравословен живот. Комбинацията отнаномедицинаи невронауката може потенциално да предостави нови решения за много заболявания, свързани с ЦНС, включително AD и PD. Масивът от налични в момента наночастици трябва да бъде подложен на строги тестове за токсичност и стабилност и трябва да бъде оптимизиран за доставяне на ген или лекарство в ЦНС.

Авторски принос:Концептуализация, KJ и MS; софтуер, KJ и MS; валидиране, MS; ресурси, MS; обработка на данни, KJ; писане - подготовка на оригинална чернова, KJ; писане—преглед и редакция, MS; надзор, MS; администриране на проекти, MS; придобиване на финансиране, MS Всички автори са прочели и са съгласни с публикуваната версия на ръкописа.

Финансиране:Изследванията в тази област са финансирани от Националната изследователска фондация на Южна Африка, безвъзмездни номера 120455 и 129263.

Изявление на институционалния съвет за преглед:Не е приложимо.

Декларация за информирано съгласие:Не е приложимо.

Декларация за наличност на данни:Не е приложимо.

Конфликт на интереси:Авторите декларират липса на конфликт на интереси.